白头翁皂苷D体外抗肝癌作用及其机制研究

目的探讨白头翁皂苷D体外抗肝癌作用及其相关机制。方法采用MTT法考察白头翁皂苷D对人肝癌细胞BEL-7402增殖的影响,同时观察BEL-7402细胞形态的变化,采用集落形成实验考察白头翁皂苷D对BEL-7402细胞集落形成的影响;Hoechest 33342染色观察BEL-7402细胞凋亡的形态变化;流式细胞术检测BEL-7402细胞凋亡率和线粒体膜电位的变化;采用Western blotting法检测BEL-7402细胞Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达。结果 MTT结果显示白头翁皂苷D对BEL-7402细胞增殖有抑制作用;集落形成实验结果显示白头翁皂苷D能明显抑制BEL-7402细胞集落的形成,白头翁皂苷D(25.00μg/m L)能显著诱导BEL-7402细胞凋亡;白头翁皂苷D(18.75、25.00μg/m L)能显著降低BEL-7402细胞线粒体膜电位;白头翁皂苷D(12.50、18.75、25.00μg/m L)可显著上调BEL-7402细胞中Caspase-3的表达;白头翁皂苷D(25.00μg/m L)可显著下调Bcl-2的表达。结论白头翁皂苷D有良好的体外抗肝癌作用,其机制与调节线粒体途径凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase-3的表达有关。     

吴茱萸碱通过Hippo-YAP通路诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡的实验研究

目的探讨吴茱萸碱对人肝癌细胞株BEL-7402凋亡的影响并阐明其发挥作用的可能机制。方法 CCK-8法检测吴茱萸碱对BEL-7402细胞增殖的影响;Hoechst 33258染色观察吴茱萸碱对BEL-7402细胞凋亡现象的影响;流式细胞术观察吴茱萸碱对BEL-7402细胞凋亡和周期的影响;实时荧光定量PCR(q RT-PCR)和Western blotting实验检测Hippo-YAP通路中哺乳动物STE20样蛋白激酶1(MST1)、MST2、大肿瘤抑制因子1(LATS1)和Yes相关蛋白(YAP)在正常人肝细胞株HL-7702与BEL-7402细胞中的表达差异及吴茱萸碱对BEL-7402细胞这些关键基因表达水平的影响;免疫荧光实验观察吴茱萸碱对BEL-7402细胞中YAP表达水平的影响。结果吴茱萸碱对BEL-7402细胞增殖活力具有明显的抑制作用(P0.05),呈浓度和时间依赖性;Hoechst 33258染色显示吴茱萸碱能够引起BEL-7402细胞出现核固缩、核边集等凋亡的典型形态学改变。流式细胞术结果提示吴茱萸碱能够诱导BEL-7402细胞出现凋亡数目增多和G2/M期阻滞(P0.01);q RT-PCR和Western blotting检测结果提示,与HL-7702细胞相比,MST2和LATS1在BEL-7402细胞中的表达明显下调(P0.05),YAP则明显升高(P0.05);吴茱萸碱能够激活Hippo信号通路,分别上调MST2、LATS1和抑制YAP在BEL-7402细胞中的表达水平(P0.05)。免疫荧光结果显示吴茱萸碱能够显著抑制BEL-7402细胞中过表达的YAP荧光强度(P0.01)。结论吴茱萸碱能诱导BEL-7402细胞的凋亡,其机制可能是通过激活Hippo信号通路,进而抑制下游关键基因YAP的表达。     

蜂毒素对人肝癌细胞裸鼠移植瘤的生长抑制作用

目的 探讨蜂毒素对人肝癌细胞移植瘤在BALB/C裸鼠体内生长的影响.方法 建立人肝癌BEL-7402细胞裸鼠皮下移植瘤模型,观察瘤内注射蜂毒素对肝癌细胞移植瘤在裸鼠体内生长的影响.应用HE染色观察肿瘤组织形态学变化,采用免疫组织化学法检测肝癌组织微血管密度(MVD),酶联免疫吸附法检测裸鼠血清白细胞介素-8(IL-8)的水平,Western blotting法检测裸鼠肝癌组织中血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达情况.结果 荷瘤裸鼠瘤内注射蜂毒素剂量为40、60、80μg/kg时的抑瘤率分别为44.64%、62.86%、73.73%,药物处理组肿瘤体积明显小于模型组(P<0.01).光镜下见蜂毒素各组肿瘤组织出现片状坏死,肿瘤间质内可见肿瘤血管,并有血管破坏现象.蜂毒素可明显降低裸鼠肝癌组织微血管密度,药物处理组IL-8和VEGF的表达显著低于模型组(P<0.01).结论 蜂毒素能够明显抑制人肝癌细胞裸鼠移植瘤的生长,其作用机制可能与下调IL-8和VEGF的表达,抑制肿瘤血管生成有关.     

蒺藜皂苷对人肝癌细胞BEL7402生长抑制和诱导凋亡作用的研究

目的 :探讨蒺藜皂苷 (STT)对体外培养的人肝癌细胞BEL-7402的增殖抑制作用及诱导凋亡作用。方法 :应用MTT与SRB法检测蒺藜皂苷对人肝癌细胞BEL-7402的抑制作用 ,采用形态学观察以及流式细胞术 (FCM)检测了STT诱导人肝癌细胞BEL-7402凋亡的效应 ,采用流式细胞术检测BEL-7402细胞Bcl-2蛋白表达。结果 :①STT能够剂量依赖地抑制人肝癌细胞BEL-7402的增殖 ;②细胞显现典型的凋亡形态学改变 ,FCM出现凋亡峰 ;③STT能降低BEL-7402细胞的Bcl-2蛋白表达。结论 :STT在体外能抑制BEL-7402细胞的增殖并能诱导细胞凋亡 ,其诱导凋亡作用的途径之一是下调Bcl-2蛋白表达。     

人参多糖注射液对肝细胞癌的增殖抑制作用及机制探讨

目的:观察人参多糖注射液对人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2增殖抑制作用,并探讨其机制。方法:将不同浓度的人参多糖注射液与人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2作用,采用cell counting kit-8(CCK8)检测细胞的增殖抑制,通过倒置显微镜观察用药前后细胞形态、数量变化,透射电镜观察细胞坏死、凋亡等形态学变化,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)蛋白表达情况。结果:人参多糖注射液对人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2的增殖有明显抑制作用(P0.05),并且与浓度和时间呈正相关。60,80,100 g·L~(-1)人参多糖注射液作用于人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2 24,48,72h后,可显著抑制其增殖(P0.01),40 g·L~(-1)人参多糖注射液作用于人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2 24,48,72 h后可明显抑制其增殖(P0.05)。人参多糖注射液作用人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2 48 h后,细胞出现细胞核边集、凋亡小体等凋亡形态变化,72 h后部分细胞出现空泡样变等形态学变化。与空白组比较,40,60,80 g·L-1人参多糖注射液组作用人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2后,TNFR1蛋白相对表达量明显升高(P0.05,P0.01)。结论:人参多糖注射液对人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2的增殖有明显的抑制作用;诱导细胞凋亡可能是抑制作用的机制。     

裂果薯皂苷对人肝癌BEL-7402细胞自噬的影响

目的:探讨裂果薯皂苷中化合物Ⅰ(SPHSⅠ)和化合物Ⅱ(SPHSⅡ)对人肝癌BEL-7402细胞自噬的影响,并对其分子机制进行初步探究。方法:采用MTT、Western blotting、Lyso-Tracker Red染色、Magic Red Cathepsin B染色、流式细胞仪分析分别检测SPHSⅠ和SPHSⅡ对人肝癌BEL-7402细胞增殖、自噬和凋亡的影响。结果:SPHSⅠ和SPHSⅡ可抑制BEL-7402细胞增殖并诱导细胞凋亡,同时可抑制细胞自噬,引起自噬标志性蛋白LC3-Ⅰ转变为LC3-Ⅱ,p62蛋白表达无明显变化;加入溶酶体抑制剂氯喹后,SPHSⅠ和SPHSⅡ未能进一步提高用氯喹处理的细胞中的LC3-Ⅱ水平。Lyso-Tracker Red染色、Magic Red Cathepsin B染色及Western blotting检测结果表明,SPHSⅠ和SPHSⅡ可阻断自噬体-溶酶体融合,并通过改变溶酶体酸化和下调溶酶体组织蛋白酶的表达来抑制溶酶体蛋白水解活性。利用Earle′s平衡盐溶液(EBSS)饥饿处理细胞后,SPHSⅠ和SPHSⅡ诱导的细胞凋亡进一步增加。结论:SPHSⅠ和SPHSⅡ可抑制自噬并诱导细胞凋亡,饥饿显著增加人肝癌BEL-7402细胞对SPHSⅠ和SPHSⅡ诱导的细胞凋亡的敏感性。     

冬凌草甲素对人肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制作用及其作用机制

目的:探讨冬凌草甲素对肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制作用及其作用机制。方法:以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的BEL-7402细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪检测细胞凋亡,Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡时的形态学变化。应用PCR-ELISA及RT-PCR法检测细胞凋亡前后端粒酶活性及端粒酶hTERTmRNA表达水平的变化。结果:冬凌草甲素可显著的抑制BEL-7402细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系。冬凌草甲素作用48~60h后在Hoechst33258荧光染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征,同时端粒酶hTERTmRNA的表达水平及端粒酶活性均明显降低。结论:冬凌草甲素能抑制BEL-7402细胞的生长及诱导细胞发生凋亡;降低端粒酶hTERTmRNA的表达水平及端粒酶活性可能是其重要作用机制之一。     

沙棘籽渣黄酮类化合物诱导人肝癌细胞凋亡研究

目的：探讨沙棘籽渣黄酮类化合物(FSH)对人肝癌细胞BEL-7402的抑制和诱导凋亡作用。方法：采用SRB观察FSH对人肝癌细胞BEL-7402的生长抑制作用，采用wright染色、透射电镜和流式细胞术检测FSH对BEL-7402细胞的促凋亡作用。结果：200～1200μg／ml FSH能够剂量依赖性地抑制BEL-7402细胞的增殖，wright染色观察到凋亡小体，透射电镜下发生染色质边集，流式细胞术检测出现亚二倍体峰。结论：FSH能够抑制BEL-7402的生长并能诱导细胞凋亡。     

大蒜多糖对人体肝癌BEL-7402的体外抑制作用

目的 探讨大蒜多糖(Garlic Polysaccharide,GP)对人肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制效果和诱导凋亡的作用.方法 以10,30,100,300 μg/ml 的 GP 作用于体外培养的BEL-7402 细胞,并作用不同时间,通过 MTT 法检测 GP 对细胞生长的抑制作用,倒置显微镜下观察细胞的形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 MTT 实验显示 GP可抑制 BEL-7402 细胞的生长,呈时间及浓度依赖性,显微镜下可观察到细胞肿胀、破裂、呈坏死状,流式细胞仪可检测到 BEL-7402 细胞凋亡率明显增加.结论 GP 能通过诱导细胞凋亡的方式有效地抑制人肝癌 BEL-7402 细胞的生长.     

WIN55,212-2对肝癌细胞BEL-7402增殖和凋亡的影响

目的探讨大麻素WIN55,212-2(WIN)对肝癌细胞BEL-7402增殖和凋亡的影响,并对其机制进行初步研究。方法将细胞分成对照组和WIN处理组,处理细胞后,利用MTT法分析WIN对BEL-7402细胞增殖的影响;DAPI染色分析各组细胞中细胞核的形态学改变;流式细胞术检测各实验组的细胞凋亡率;利用荧光探针JC-1检测细胞线粒体膜电位的变化;Western blot检测WIN处理细胞后Bcl-2蛋白的表达;分光光度法检测Caspase-3、-8和-9的活性。结果WIN抑制了BEL-7402细胞增殖并诱导其凋亡,两者都具有剂量依赖性;WIN处理细胞后,Caspase-3、-8和-9活性总体上呈时间依赖性升高,而且Bcl-2蛋白表达下降。结论 WIN能抑制BEL-7402细胞增殖和诱导其凋亡,WIN诱导的BEL-7402细胞凋亡可能与线粒体途径和死亡受体途径都有关。这些结果为应用WIN来治疗肝癌奠定了一个基础。     

黄芩甙对人肝癌BEL-7402细胞恶性行为的影响及分子基础研究

目的：研究黄芩甙对人肝癌BEL-7402细胞系凋亡、侵袭转移的影响及其分子基础。方法：应用细胞培养技术培养BEL-7402细胞，流式细胞术、TUNEL法测定肝癌细胞凋亡，通过Boyden小室模型测定其侵袭力，细胞迁移实验测定细胞运动能力，扫描、透射电镜观察细胞形态，Western-blot检测RhoA、RhoC和ROCK-1表达。结果：黄芩甙能明显诱导肝癌细胞凋亡，抑制侵袭力及运动能力。黄苓甙处理组细胞形态较圆，伪足数目较少，并发现凋亡细胞。RhoA在对照组和黄芩甙各剂量处理组之间无显著差异，Rhoc和ROCK-1表达在黄芩甙处理后显著下降。结论：黄芩甙能诱导肝癌BEL-7402细胞凋亡，抑制其侵袭与转移，其机制可能与直接抑制细胞迁移运动、抑制RhoC和ROCK-1表达有关，与RhoA表达无关。     

脱氢枞胺对氟苯甲醛对人肝癌细胞的抑制作用

 目的 观察脱氢枞胺对氟苯甲醛对人肝癌细胞的抑制作用及其分子机制。方法 运用四甲基偶氮唑蓝、倒置显微镜、流式细胞仪、Western blot、荧光分光光度法等分别检测脱氢枞胺对氟苯甲醛对肝癌细胞增殖的抑制作用、观察凋亡细胞细胞核的形态变化、检测细胞凋亡和线粒体膜电位变化、凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、p53、cyt-c的表达和caspase-3活性的影响。建立H22小鼠体内移植实体瘤模型,观察脱氢枞胺对氟苯甲醛对瘤体质量的影响。结果 四甲基偶氮唑蓝法显示脱氢枞胺对氟苯甲醛能显著抑制肝癌细胞株（SMMC-7721、HepG2和BEL-7402细胞）的增殖,IC₅₀值分别为SMMC-7721 (44.47±2.15)μmol·L^-1、HepG2（52.83±2.25）μmol·L^-1和BEL-7402 (48.64±1.76) μmol·L^-1。倒置显微镜下发生细胞皱缩变圆等变化,细胞凋亡率明显增加,线粒体膜电位降低,Bcl-2表达减少,Bax、p53 和Cyt c表达增加,caspase-3活力增加,且均具有浓度依赖性。小鼠 H22 肝癌模型中,脱氢枞胺对氟苯甲醛对肿瘤的生长也有一定的抑制作用。结论 体内外实验显示脱氢枞胺对氟苯甲醛能明显抑制肿瘤细胞的生长,诱导肿瘤细胞凋亡,可能是通过凋亡线粒体信号通路而实现的。     

冬凌草甲素抑制人肝癌BEL-7402细胞生长及诱导细胞凋亡的机制研究

目的探讨冬凌草甲素体外对肝癌BEL-7402细胞生长抑制作用及诱导细胞凋亡作用机制。方法以8、16、24、32μmol/L冬凌草甲素作用于体外培养的BEL-7402细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪检测细胞凋亡,Hoechst33258荧光染色法和DNA凝胶电泳观察细胞凋亡时的形态学变化。应用Westernblotting观察caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达变化。结果冬凌草甲素可显著地抑制BEL-7402细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系。冬凌草甲素作用60h后,在Hoechst33258荧光染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征,同时Westernblotting显示32000的caspase-3酶原蛋白的激活,出现20000的亚单位,凋亡过程中伴有Bcl-2蛋白表达的降低和Bax蛋白上调。结论冬凌草甲素能通过降低Bcl-2蛋白表达和上调Bax蛋白诱导细胞发生凋亡,抑制BEL-7402细胞的生长;冬凌草甲素可能成为一种潜在的抗肝癌药物。     

白藜芦醇抗肝癌Bel-7402及调节荷瘤鼠IL-8分泌机制的研究

目的：探讨白藜芦醇离体与在体对肝癌细胞Bel-7402的抑制作用及可能的效应机制。方法：MTT比色法测定Bel-7402细胞生长抑制率,Western blotting测定Bel-7402细胞Bcl-2水平,流式细胞术分析细胞周期,流式细胞染色检测细胞内IL-8,半定量RT-PCR与双抗体夹心ELISA法检测荷瘤小鼠IL-8 mRNA表达与含量。结果：白藜芦醇可以时间-剂量依赖性抑制Bel-7402细胞增殖,诱导凋亡,影响细胞周期分布。此外,白藜芦醇还能剂量依赖性抑制荷瘤小鼠细胞内IL-8产生及其mRNA与蛋白含量。结论：白藜芦醇离体与在体均能发挥有效的抗肝癌生物学活性和免疫调节作用。     

刺头复叶耳蕨总黄酮体内抗肿瘤作用初探

目的研究刺头复叶耳蕨(Arachniodes exilis Ching)总黄酮的体内抗肿瘤活性。方法应用Hep G2细胞裸小鼠异位移植瘤模型,通过测定抑瘤率及检测相关生化指标、HE染色、免疫组化等方法了解其抗肿瘤作用及作用机制。结果刺头复叶耳蕨总黄酮能够抑制肝癌异位移植瘤模型动物体内肿瘤生长,对实验动物的体质量、血液系统无明显影响,肿瘤组织中促凋亡蛋白Bax表达水平明显升高,抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平明显下调。结论体内抗肿瘤活性的研究显示刺头复叶耳蕨总黄酮抗肿瘤作用可能与其诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

冬凌草甲素可抑制肝癌细胞增殖

中山大学第三附属医院研究人员以人肝癌细胞株BEL-7402细胞为研究对象，观察了不同浓度的冬凌草甲素对BEL-7402细胞的生长抑制作用及诱导凋亡作用。结果发现，冬凌草甲素可显著抑制BEL-7402细胞的生长，诱导细胞发生凋亡，并呈现出明显的量-效与时-效关系：冬凌草甲素作用48～60h后，在BEL-7402细胞荧光染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征：同时，端粒酶hTERT mRNA的表达水平及端粒酶活性明显降低。研究人员介绍，端粒酶是一种特殊的核糖蛋白多聚酶，大量的临床资料表明，肝脏肿瘤细胞普遍表现出端粒酶活性，端粒酶活性的高低对于判断肝癌的疗效、     

黄芪总苷对肝癌BEL-7402细胞株的抑制作用

目的研究黄芪总苷对肝癌BEL-7402细胞增殖的抑制作用及探讨作用机理。方法肝癌BEL-7402细胞与不同浓度的黄芪总苷培养12,24,48 h,应用MTT和流式细胞术分析黄芪总苷对细胞的作用。结果黄芪总苷对肝癌BEL-7402细胞增殖具有明显的抑制作用并呈剂量、时间依赖性。黄芪总苷对肝癌BEL-7402细胞具有促进凋亡作用,并且上调p53基因表达。结论黄芪总苷可抑制肝癌BEL-7402的增殖,其抑制肝癌BEL-7402作用与其促进肿瘤细胞凋亡、上调p53基因表达有关。     

冬凌草甲素对肝癌BEL-7402/5-FU细胞增殖、凋亡、细胞周期及Hippo信号通路的影响

目的:探讨冬凌草甲素对人肝癌BEL-7402/5-FU细胞增殖、凋亡和细胞周期及Hippo信号通路的影响。方法:采用不同浓度的冬凌草甲素作用于人肝癌BEL-7402/5-FU细胞,细胞计数法(CCK-8)检测细胞增殖抑制率,CCK-8法测定细胞耐药逆转指数,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,实时荧光定量PCR法检测各组细胞Yes相关蛋白(YAP)、转录共激活因子(TAZ)的mRNA表达水平,Western Blot法检测各组细胞中细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、结缔组织生长因子(CTGF)、生存素(Survivin)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)的蛋白表达水平。结果:不同浓度冬凌草甲素对人肝癌BEL-7402/5-FU细胞具有不同程度增殖抑制作用,确定最适逆转浓度,即4μmol/L冬凌草甲素用于后续实验。冬凌草甲素能够阻滞细胞周期至G₂期,诱导细胞发生凋亡,抑制YAP、TAZ mRNA表达以及Survivin、Bcl-2蛋白表达。结论:冬凌草甲素能阻碍BEL-7402/5-FU细胞周期进程,诱导细胞凋亡,其抗肿瘤机制可能与干预Hippo信号通路有关。     

斑蝥素酸镁诱导BEL-7402人肝癌细胞凋亡的机制

目的探讨斑蝥素酸镁诱导BEL-7402人肝癌细胞凋亡的机制。方法磺酰罗丹明B(SRB)染色法检测不同浓度(1.668、3.336、5.004、6.672μmol/L)斑蝥素酸镁对BEL-7402人肝癌细胞增殖的抑制作用,将细胞随机分为空白对照组、斑蝥素酸镁组(2.43、4.86、9.72μmol/L)、冈田酸组(0.072 nmol/L)。作用24 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率、活性氧(ROS)、线粒体膜电位变化,Western blot检测细胞色素c、Caspase-3、Cleaved Caspase-3、ERK1/2蛋白磷酸化表达。结果斑蝥素酸镁能明显抑制BEL-7402人肝癌细胞的增殖,呈剂量-效应关系,其IC_(50)为4.86μmol/L;与对照组比较,斑蝥素酸镁组凋亡率、细胞内活性氧(ROS)水平、Cyt-C、Caspase-3、Cleaved-Caspase-3蛋白表达显著增加(P0.01),线粒体膜电位、ERK1/2蛋白磷酸化表达显著降低(P0.01)。结论斑蝥素酸镁可能通过抑制ERK1/2磷酸化水平来反向调节线粒体凋亡途径,最终诱导BEL-7402人肝癌细胞发生凋亡。     

姜黄素调控STAT3诱导人肝癌BEL-7404细胞凋亡的内质网应激作用机制

目的探讨姜黄素通过抑制STAT3诱导人肝癌BEL-7404细胞凋亡的内质网应激作用机制。方法采用MTT法检测姜黄素对人肝癌BEL-7404细胞增殖的影响。流式细胞术检测细胞凋亡、CRISPR/Cas9技术敲除STAT3基因、Western blot技术检测STAT3、p-STAT3、内质网应激及凋亡相关蛋白的表达水平。结果姜黄素能够抑制人肝癌BEL-7404细胞的增殖,诱导细胞凋亡,上调GRP78、p-elF2α、p-JNK、CHOP、caspase4的表达,下调p-STAT3的表达。敲除STAT3后,细胞凋亡率上升,GRP78、CHOP表达同时上调。结论姜黄素可以通过抑制STAT3诱导人肝癌BEL-7404细胞发生凋亡,其作用机制与内质网应激相关。