p38MAPK在地塞米松诱导的人乳腺癌MCF-7细胞系凋亡中的作用

目的 研究地塞米松对人乳腺癌MCF-7细胞株增殖及凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法 MTT方法检测细胞增殖,流式细胞技术检测细胞凋亡,免疫细胞化学方法、RT-PCR技术检测地塞米松干预前、后细胞中p38MAPK蛋白及基因的表达.结果 分别用不同浓度的地塞米松作用于MCF-7细胞,作用3～5 d时,各种浓度下细胞增殖均明显受抑制,且与药物作用浓度及作用时间呈正相关,并以作用4 d时MCF-7表现出来的增殖抑制最为明显.地塞米松作用于MCF-7细胞后,可见细胞发生凋亡形态改变增多.流式细胞仪检测示地塞米松作用3～5 d后三组细胞凋亡率均较对照组升高,以10-6mol/L浓度作用4 d时凋亡率可达31.85％,与对照组的14.63％相比有明显升高,升高2倍以上,与其他干预组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).细胞免疫染色检测结果显示,p38MAPK在MCF-7胞质、胞核均有表达,通过对染色结果进行分析发现,Dex干预后,MCF-7中p38MAPK蛋白表达升高,尤以10-6 mol/L浓度作用时最为明显(P＜0.05).对干预后细胞提取RNA行半定量PCR检测,见目的基因条带清晰,与Marker各条带相比与扩增长度(184 bp)较接近,经灰度分析可得,MCF-7细胞在予以Dex处理后,p38基因表达较对照组明显升高,尤以10-6mol/L浓度时最明显,与其他干预组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 地塞米松可抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖,并诱导其凋亡,其作用机制可能与促进p38基因表达有关.     

YAP 基因干扰对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨干扰YAP基因的表达对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。 方法：通过逆转录病毒介导的方法,分别用YAP shRNA（实验组）或阴性对照shRNA（对照组）转染MCF-7乳腺癌细胞,用qRT-PCR和Western blot方法检测干扰效率;溴脱氧核苷尿嘧啶（BrdU）结合实验和MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞术和DAPI染色检测细胞凋亡情况。 结果：干扰效率检测显示,转染72 h后,实验组MCF-7细胞YAP mRNA表达量明显降低（P<0.05）,同时YAP蛋白表达也明显下调;细胞增殖检测显示,与对照组比较,实验组MCF-7细胞BrdU结合与OD值明显降低（P<0.05）,转染后24、48、72 h增殖抑制率分别为19.1%、38.5%、53.5%;凋亡检测显示,实验组细胞凋亡率与凋亡细胞数较对照组明显增加（均P<0.05）。 结论：干扰YAP基因的表达能有效抑制乳腺癌细胞的增殖并促进凋亡,YAP可能是乳腺癌潜在治疗靶点。     

Psammaplysene A诱导的叉头转录因子O1A蛋白表达对乳腺癌细胞增殖凋亡的影响

目的 探讨Psammaplysene A(PsA)诱导叉头转录因子O1A蛋白(FOXO1A)表达对人乳腺癌细胞株MCF-7及SKBR3增殖和凋亡的影响.方法 用PsA干预2株细胞后,激光共聚焦显微镜(CSM)观察FOXO1A蛋白在细胞中表达;噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;流式细胞仪(FCM)分析细胞凋亡和周期变化;Western blot检测B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白家族促凋亡调节蛋白(Bim)表达.结果 FOXO 1A蛋白定位于胞核中,PsA诱导后其表达明显增加,细胞发生凋亡,生长减慢.分别用0.1 μmol/L和1.0 μmol/L的PsA干预2株细胞后,凋亡率分别为(16.3±1.4)％和(32.5±2.3)％;(13.7±1.9)％和(30.3±1.6)％;Bim蛋白增加,和阴性对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 PsA通过诱导FOXO1A蛋白表达抑制了乳腺癌细胞增殖,促进凋亡,其机制可能与Bim蛋白激活有关.FOXO1A基因有望成为乳腺癌基因治疗的有效靶点.     

SH2B1沉默对乳腺癌细胞增殖和凋亡及PI3K/Akt通路的影响

目的:探讨RNA干扰技术(RNAi)沉默Src同源性2B衔接蛋白1(SH2B1)对乳腺癌细胞增殖、凋亡及磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)信号通路的影响。方法:体外培养人正常乳腺上皮细胞MCF-10a与乳腺癌细胞MCF-7,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)与蛋白免疫印迹(WB)法检测细胞中SH2B1 mRNA及蛋白表达水平。采用RNAi技术将SH2B1阴性对照质粒、si-SH2B1分别转染至MCF-7细胞,分别命名为si-NC组、si-SH2B1组,未经处理的MCF-7细胞命名为空白对照组。采用RT-PCR法检测各组MCF-7细胞中SH2B1、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白X(Bax)、天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)mRNA表达水平;CCK8法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期情况;Western blot法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、PI3K及其磷酸化蛋白(p-PI3K)、Akt及其磷酸化蛋白(p-Akt)等蛋白表达情况。结果:与MCF-10a细胞相比,MCF-7细胞中SH2B1 mRNA及蛋白表达均显著升高(P0.05);与空白对照组、si-NC组相比,si-SH2B1组SH2B1 mRNA及蛋白表达、S期与G_2/M期DNA量、Bcl-2 mRNA及蛋白表达均显著降低(P0.05);MCF-7细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、G_0/G_1期DNA量、Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白表达均显著升高(P0.05);WB法显示,si-SH2B1组MCF-7细胞中p-PI3K、p-Akt蛋白表达均显著低于空白对照组、si-NC组(P0.05)。结论:SH2B1沉默可抑制乳腺癌细胞增殖,诱导细胞周期阻滞及细胞凋亡,其作用机制可能与下调PI3K/Akt信号通路有关。     

下调星形细胞上调基因1表达对乳腺癌细胞凋亡的影响

目的:探讨下调星形细胞上调基因1(AEG-1)对乳腺癌细胞凋亡的影响。方法:通过脂质体介导的方法,将乳腺癌MCF-7细胞分别转染AEG-1siRNA(AEG-1siRNA)和阴性对照siRNA(阴性对照组),以无处理的MCF-7细胞为空白对照组。验证转染效果后,分别采用流式细胞术与Westernblot检测各组细胞的凋亡以及凋亡相关蛋白caspase-3和caspase-9的表达。结果:与空白对照组细胞比较,AEG-1siRNA组MCF-7细胞AEG-1蛋白表达明显降低、细胞凋亡率明显升高、caspase-3和caspase-9蛋白表达明显上调(均P0.05);阴性对照组与空白对照组间以上各项指标均无统计学差异(均P0.05)。结论:下调乳腺癌细胞AEG-1的表达能促进caspase-3和caspase-9的表达,从而诱导乳腺癌细胞凋亡,因此,AEG-1在乳腺癌细胞中可能起了抑制细胞凋亡的作用,机制可能与其调节凋亡相关蛋白的表达有关。     

不同浓度罗哌卡因对乳腺癌MCF-7细胞增殖和细胞周期的作用研究

目的观察不同浓度罗哌卡因对乳腺癌MCF-7细胞增殖和细胞周期的影响并探讨其机制。方法人乳腺癌细胞MCF-7接种于培养板培养24h,随机分为四组:对照组(C组)、罗哌卡因100μg/ml组(R1组)、罗哌卡因200μg/ml组(R2组)和罗哌卡因400μg/ml组(R3组)处理乳腺癌MCF-7细胞48h后,检测其细胞增殖能力(细胞活力)和细胞周期。检测R3组作用于MCF-7细胞48h后TCF-4、beta-catenin的蛋白表达水平。结果 R2、R3组MCF-7细胞活力明显低于C组(P0.05);R1、R2、R3组MCF-7细胞G0/G1期细胞明显少于C组,S期和G2/M期细胞明显多于C组(P0.05);R3组TCF-4和beta-catenin蛋白表达水平明显低于C组(P0.05)。结论罗哌卡因可能通过下调TCF-4和beta-catenin蛋白表达水平抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖。     

Meox2调控PI3K/AKT信号通路对乳腺癌细胞的增殖及机制的影响

目的:探究间充质同源盒蛋白(Meox2)对乳腺癌细胞增殖能力及其机制的影响。方法:体外培养人乳腺癌细胞株MCF-7,腺病毒转染调高细胞Meox2基因的表达,常规无额外基因序列添加的人乳腺癌细胞株MCF-7细胞设为Control组,含有Meox2基因的腺病毒(Ad-Meox2)转染细胞后设为Ad-Meox2组,以空载体Ad-GFP转染细胞后设为Ad-GFP组。荧光显微镜观察其转染率。采用MTT法和流式细胞仪分别验证过表达的Meox2对乳腺癌细胞在24、48、72 h后细胞的增殖及周期的变化。采用Western blot检测细胞中Meox2及其下游PI3K/AKT通路蛋白的表达。结果:腺病毒转染的MCF-7细胞中Meox2基因表达上调,转染率为95%以上。MTT显示,Ad-Meox2组可明显呈时间依赖性地抑制细胞增殖(P0.05)。流式细胞仪检测显示Ad-Meox2组可显著阻滞细胞周期的进行,使更多的细胞停滞于S期与G2/M期(P0.05),同时,阻滞细胞进入下一个周期,即G0/G1期(P0.05)。Western blot显示各组的MCF-7细胞中PI3K和AKT含量无明显变化(P0.05),但Ad-Meox2组的p-PI3K和p-AKT蛋白含量较Control组明显下降(P0.05)。结论:Meox2基因可通过PI3K/AKT信号通路抑制乳腺癌细胞周期的进程,进而抑制乳腺癌细胞的增殖能力,提示Meox2可能是乳腺癌新的治疗靶点。     

雄激素对MCF-7乳腺癌细胞株增殖凋亡的影响

目的 观察睾丸酮对MCF-7乳腺癌细胞株增殖、凋亡的影响,并探讨其机制.方法 将1×10~(-5)、1×10~(-7)、1×10~(-9)、1×10~(-11) mol/L的睾丸酮分别作用于乳腺癌MCF-7细胞24、48、72 h,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长,流式细胞术检测不同浓度睾丸酮作用48 h时MCF-7细胞的周期分布和凋亡以及该细胞株中细胞周期素D1蛋白和雄激素受体的表达.结果 高浓度睾丸酮抑制MCF-7乳腺癌细胞株的增殖,1×10~(-5) mol/L睾丸酮作用48 h时,细胞生长抑制率为22.21%,细胞凋亡率为(58.60±5.41)%,但可使细胞周期由G_1 期进入S期,并可使细胞周期素D1蛋白表达量增加,雄激素受体蛋白表达量下降.低浓度睾丸酮(1×10~(-9) mol/L)作用后细胞周期素D1蛋白表达量无明显变化,雄激素受体蛋白表达量升高,在短时间内(24 h)可促进MCF-7细胞增殖.结论 高浓度睾丸酮在体外可使MCF-7乳腺癌细胞株细胞周期素D1蛋白表达增加,使细胞周期由G_1进入S期,而同时促使细胞凋亡,表现出抗肿瘤作用.低浓度睾丸酮有短暂的促进MCF-7乳腺癌细胞增殖的作用.     

维生素E琥珀酸酯诱导MCF 7乳腺癌细胞的凋亡

目的检测维生素E琥珀酸酯（VES）对MCF-7乳腺癌细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用，并分析凋亡诱导分子Fas表达的变化。方法人乳腺癌细胞株MCF-7[雌激素受体阳性，ER（＋）]以VES刺激12，24h和48h，VES浓度为5μg／mL，10μg／mL和20μg／mL，用MTT法测定VES对细胞增殖的抑制作用；以流式细胞仪分析细胞周期和细胞表面Fas的表达；Western蛋白印迹法检测VES作用后Fas蛋白水平的变化。结果VES对MCF-7乳腺癌细胞具有显著的抑制作用，并表现为时间和剂量依赖关系。MCF-7乳腺癌细胞的自然凋亡率为1．2％；5μg／mL，10μg／mL和20μg／mL的VES作用48h后凋亡率分别升高至11．2％，16．4％和41．2％。VES作用后乳腺癌细胞Fas蛋白水平和细胞表面Fas表达升高。结论VES对ER（＋）乳腺癌细胞具有显著的增殖抑制作用，并诱导细胞凋亡，其机制与细胞表面Fas表达上调有关。     

下调HDAC6表达对乳腺癌细胞生物学行为的影响及机制

目的：探讨下调HDAC6表达对乳腺癌MCF-7细胞生物学行为的影响及其分子机制。 方法：分别用HDAC6 siRNA和阴性siRNA转染乳腺癌MCF-7细胞,以未处理的MCF-7细胞为空白对照,分别用RT-PCR和Western blot方法检测细胞HDAC6与p21基因和蛋白的表达,CCK-8试剂盒和流式细胞术分别检测细胞增殖与细胞周期,并用TUNEL法检测细胞凋亡。 结果：干扰效果验证结果显示,HDAC6 siRNA转染能有效降低MCF-7细胞HDAC6 mRNA和蛋白的表达（均P<0.05）,而阴性siRNA无此作用（P>0.05）。与空白对照组比较,HDAC6 siRNA组细胞增殖受到明显抑制,细胞G0/G1期比例增加,S期比例减少,细胞的凋亡率明显增加（均P<0.05）;阴性siRNA组无上述改变（均P>0.05）。HDAC6 siRNA组细胞p21 mRNA与蛋白的表达均较空白对照组和阴性siRNA组明显升高（均P<0.05）。 结论：下调HDAC6的表达能抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖,诱导细胞G0/G1期阻滞,并促进细胞凋亡,其机制可能与升高p21表达有关。     

人参皂甙Rg3对乳腺癌MCF-7线粒体凋亡途径的影响

目的探讨20（R）–人参皂甙Rg3（SPG-Rg3）对人乳腺癌MCF-7细胞的诱导凋亡作用及其可能机制。方法人乳腺癌细胞MCF-7细胞株分为空白对照组、实验对照组及SPG-Rg3多个浓度组。利用MTT法观察人参皂甙Rg3对MCF-7细胞生长的抑制作用,并计算出IC-50,进一步确定其有效浓度;流式细胞术检测人参皂甙Rg3作用后MCF-7细胞周期的变化;利用AnnexinV-EGFP/PI双染法,检测人参皂甙Rg3诱导MCF-7细胞凋亡情况;免疫细胞化学染色检测MCF-7细胞凋亡与Fas、FasL蛋白表达的关系。结果 SPG-Rg3作用48h的IC-50为244.54μg/mL。流式细胞仪检测Rg3使MCF-7的S期细胞比率明显增加（P〈0.01）,凋亡率明显增加（P〈0.01）。免疫细胞化学显示Rg3能使MCF-7细胞胞浆内细胞色素C增加（P〈0.01）。结论 SPG-Rg3能诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡,其机制可能与诱导线粒体释放细胞色素C有关。     

脂氧合酶抑制剂对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响

目的 探讨脂氧合酶抑制剂去甲二氢愈创木酸（NDGA）对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响。方法 噻唑蓝（MTT）法绘制细胞生长曲线及检测细胞存活率；流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率；倒置相差显微镜和扫描电镜观察细胞凋亡。结果 MTT法显示NDGA对MCF-7细胞生长增殖有明显的抑制作用（P〈0.05），呈剂量和时间依赖效应；流式细胞仪结果显示NDGA阻滞细胞周期于S期，诱导细胞凋亡；在光镜和扫描电镜下，NDGA诱导细胞发生凋亡形态学变化，导致细胞表面超微结构的改变和凋亡小体的形成。结论 NDGA能够抑制MCF-7细胞的增殖，诱导细胞凋亡，为脂氧合酶抑制剂临床应用于乳腺癌提供了科学依据。     

他莫昔芬与γ-干扰素联合抗人乳腺癌细胞株的作用及其机制研究

目的: 探讨他莫昔芬(TAM)与 γ-干扰素(γ-IFN)联合抗乳腺癌细胞株的作用及其机制。方法:在体外培养条件下，分别或联合应用γ-IFN,TAM或雌二醇（E2）作用于ER阳性的MCF-7人乳腺癌细胞株，用MTT比色法分析细胞生长抑制作用;用流式细胞仪（FCM）检测细胞周期分布、凋亡率及用药前后Bcl-2,Bax,Fas,FasL及Caspase-8蛋白的变化;荧光分光光度仪检测Caspase-3活性。结果:TAM能抑制ER阳性乳腺癌细胞的生长，阻滞细胞周期于G0/G1期，并可诱导细胞凋亡;同时，TAM能拮抗外源性雌激素对MCF-7细胞的促生长作用。γ-IFN预处理细胞24h后，TAM抗乳腺癌细胞的作用增强。联用γ-IFN与TAM后，细胞Bcl-2蛋白表达下调，Caspase-8表达上调;但药物处理前后，细胞Bax，Fas，FasL蛋白表达水平及Caspase-3活性未见明显变化。结论:体外条件下，TAM通过影响细胞周期、诱导细胞凋亡而发挥抗ER阳性乳腺癌细胞作用;γ-IFN能加强TAM的抗乳腺癌作用。两者作用机制可能系通过下调Bcl-2表达和上调Caspase-8的表达。     

熊果酸对MCF-7乳腺癌细胞生长的影响

目的 观察熊果酸对MCF-7乳腺癌细胞增殖、凋亡、细胞侵袭及裸鼠移植瘤生长的影响.方法 将1、10、100 μmol/L的熊果酸分别作用于乳腺癌MCF-7细胞12、24、48 h,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力变化及生长抑制率,流式细胞术及Transwell小室法检测熊果酸作用48h时MCF-7细胞周期、细胞凋亡率及细胞侵袭力.将乳腺癌MCF-7细胞接种于裸鼠,成瘤后分为生理盐水对照组、熊果酸低剂量组(每日1 mg/kg)、中剂量组(每日5 mg/kg)和高剂量组(每日25 mg/kg),检测5、10、15 d裸鼠移植瘤体积、肿瘤生长抑制率及15 d时肝肾功能、血常规变化.结果 随熊果酸浓度增加及作用时间延长,MCF-7细胞生长及凋亡发生受到显著影响,100 μmol/L熊果酸作用48 h时,细胞生长抑制率为46.0%,生长周期阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率为(16.48±2.46)%,细胞侵袭力显著下降.熊果酸组裸鼠移植瘤体积显著小于对照组,15 d时熊果酸高剂量组肿瘤体积为(323.5±33.5)mm3生长抑制率为50.9%.各组肝肾功能和血常规无明显变化.结论 熊果酸可引起体外乳腺癌McF-7细胞增殖抑制、细胞凋亡率增加及细胞侵袭力下降,可显著抑制裸鼠乳腺癌移植瘤生长.     

尿多酸肽对乳腺癌细胞凋亡的影响

目的研究肿瘤细胞分化诱导剂尿多酸肽（CDA—Ⅱ）对乳腺癌细胞凋亡的影响。方法将CDA—Ⅱ与不同生物学特性的乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231进行体外培养，同时以维甲酸为阳性对照，观察CDA—Ⅱ对乳腺癌细胞生长曲线、细胞凋亡及形态学等方面的影响。结果CDA—Ⅱ可减缓两株乳腺癌细胞的生长和增殖能力，诱导乳腺癌细胞凋亡。结论CDA—Ⅱ可抑制MCF-7和MDA-MB-231两株乳腺癌细胞的生长和增殖能力，诱导乳腺癌细胞凋亡．本研究为CDA-Ⅱ治疗乳腺痛提供了实验依据。     

siRNA特异性靶向沉默Livin基因对人乳腺癌MCF－7多药耐药细胞耐药性的研究

目的研究siRNA特异性靶向沉默Livin基因对人乳腺癌MCF－7多药耐药细胞耐药性的影响。 方法采用ADM低浓度梯度递增结合大剂量间歇诱导方法建立5－FU诱导的多药耐药细胞系,采用ATP生物荧光肿瘤体外药物检测技术(ATP－TCA)法检测细胞耐药性,采用免疫组织化学方法检测Livin蛋白在MCF－7耐药细胞株系中的表达情况,采用Livin SiRNA联合表柔吡星、5－氟尿嘧啶、多西他赛、健择诱导乳腺癌MDR细胞的凋亡。采用SPSS 20.0处理数据,耐药情况、细胞的凋亡情况用( ±s)表示,采用t检验,当P<0.05时差异具有统计学意义。 结果结果显示,MCF－7多药耐药细胞存在多药耐药问题;联合组MCF－7增敏(19.48±12.00) μM、MCF－7/MDR增敏(35.62±2.37) μM,与转染组与加药组对比,数据差异具有统计学意义(P<0.05)。 结论siRNA特异性靶向沉默Livin基因可增强人乳腺癌MCF－7多药耐药细胞的敏感性,提高细胞凋亡率。     

Bisphosphonates induce breast cancer cell death in vitro.

Breast cancer frequently spreads to bone and is almost always associated with osteolysis. This tumor-induced osteolysis is caused by increased osteoclastic bone resorption. Bisphosphonates are used successfully to inhibit bone resorption in tumor bone disease and may prevent development of new osteolytic lesions. The classical view is that bisphosphonates only act on bone cells. We investigated their effects on breast cancer cells using three human cell lines, namely, MCF-7, T47D, and MDA.MB.231, and we tested four structurally different bisphosphonates: clodronate, pamidronate, ibandronate, and zoledronate. We performed time course studies for each bisphosphonate at various concentrations and found that all four compounds induced a nonreversible growth inhibition in both MCF-7 and T47D cell lines in a time- and dose-dependent manner. The MDA.MB.231 cell line was less responsive. Bisphosphonates induced apoptosis in MCF-7 and cell necrosis in T47D cells. The inhibition of MCF-7 cell proliferation could be reverted almost completely by the benzyloxycarbonyl-Val-Ala-Asp(OMe)-fluoromethyl ketone (z-VAD-fmk) inhibitor of caspases, suggesting that the apoptotic process observed in the MCF-7 cell line is mediated, at least partly, by the caspase system. Caspase activity was little changed by bisphosphonates in T47D cells and the inhibitor of caspase did not modify bisphosphonates effects. In summary, we found that bisphosphonates inhibit breast cancer cell growth by inducing cell death in vitro. Such effects could contribute to the beneficial role of bisphosphonates in the treatment and the prevention of tumor-induced osteolysis.