利用原生质体技术选育天兰淡红链霉菌

本文报道柔红霉素产生菌－－天兰淡红链霉菌原生质体的制备和再生方法，并从再生菌落中和理到摇瓶发酵单位提高５％的高产菌株３０＃，将再生稿产株经铜蒸气激光辐照，得到在生产罐中发酵水平比对照出发菌株提高１２．９％的高产菌株８２＃。     

溴化乙锭对吸水链霉菌产生除莠霉素的影响

从南京土壤中分离到一株吸水链霉菌，命名为ＮＡＰ－０５，该菌株能产生除莠霉素，并且在菌体细胞内存在另一种初步鉴定为聚醚类抗生素的物质。该菌还能分泌淀粉酶。用嵌入染料如溴化乙锭（ＥＢ）等处理该菌株，发现ＥＢ处理株大部分仍保持产抗能力，而用吖啶橙（ＡＯ）处理亲株后，大部分的处理株失去除莠霉素产生能力。用原生质体再生方法处理ＮＡＰ－０５，发现多数再生株的产抗能力下降，提示ＮＡＰ－０５菌株的除莠霉素生物合成调节可能受到染色体外因子的影响。     

柱晶白霉素产生菌的原生质体制备、再生和诱变

目的：对柱晶白霉素产生菌SK－06的原生质体制备和再生的条件,以及再生菌的产生抗生素能力进行了研究。方法：考察甘氨酸浓度对菌丝生长的影响,摸索和确定溶菌酶酶解的最佳条件,考察再生培养基的组成。结果：溶菌酶酶解的最佳条件为：2mg/ml、30℃、90min。再生率达到15％。通过二次再生后,获得了一株高产菌株,效价提高238％。经过紫外线诱变的孢子和原生质体的效价提高了95％和160％。结论：原生质体制备和再生选育高产菌株是一种有效的菌种德育手段。     

赤霉素产生菌~#218菌株的研究——Ⅰ.原生质体的分离和再生

赤霉素产生菌~#218菌株菌丝体用玻璃纸平板培养法培养,培养时间为36小时。采用2%蜗牛酶,不须硫醇类化合物预处理,可直接裂解赤霉素产生菌~#218菌株菌丝体,得到大量的原生质体。将原生质体悬浮液接种到高渗性再生培养基上,再生频率约为1～2%。原生质体再生菌株仍保留亲株的菌落形态及合成赤霉素的生产能力。     

应用固定化芽孢杆菌CPU－931105再生腺苷三磷酸

应用固定化芽孢杆菌ＣＰＵ－９３１１０５再生腺苷三磷酸张宏兴，王，王丁刚，吴梧桐，彭海燕．药物生物技术，１９９５，２（１）：２０～２３筛选了含乙酰激酶较高活力的菌株，芽孢杆菌ＣＰＵ－９３１１０５，并将其固定化，用于从ＡＤＰ再生ＡＴＰ。采用明胶－戊二醛共...     

应用发根农杆菌Ri T-DNA建立菘蓝的毛状根优质株系和植株再生系统

目的：建立菘蓝（Ｉｓａｔｉｓ ｉｎｄｉｇｏｔｉｃａ Ｆｏｒｔ）的毛状根离体培养系统,并诱导毛状根再生植株。方法：分别用发根农杆菌Ａ４,Ｒ１６０１和ＡＴＣＣ１５８３４三种菌株感染菘蓝的子叶外植体,获得毛状根,并筛选了优质株系;测定了毛状根的生长曲线;在含不同激素的培养基上诱导毛状根再生植株;利用高压纸电泳法对毛状根和再生植株进行Ｔ－ＤＮＡ转化的检测。结果：首次利用发根农杆菌Ａ４,Ｒ１６０１和ＡＴＣＣ１５８３４三种菌株成功地从菘蓝中诱导出毛状根;菘蓝毛状根在含ＢＡ的ＭＳ培养基中成功地诱导出再生植株;经高压纸民泳检测,菘蓝毛状根及其再生植株中均含有甘露三,表明Ｒｉ质粒的Ｔ－ＤＮＡ已整合进毛状根和再生植株中。结论：菘蓝毛状根离本培养和植株再生系统的建立,为进一步进行药用活性成分的工业化生产和引入外源基因改良性状奠定了基     

小单孢菌M—90诱变方法的研究

以高温，ＬｉＣｌ，ＬｉＣｌ＋ＵＶ，甲胺＋ＵＶ，吖啶橙等理化诱变剂对玫瑰降红色小单孢菌Ｍ－９０进行诱发育种，高温，ＬｉＣｌ＋ＵＶ，甲胺＋ＵＶ，吖啶橙处理后都得到了高产菌株，其中以高温，ＬｉＣｌ＋ＵＶ效果最好。经过复筛与传代，得到了具有遗传稳定性的高产菌株，且发酵液中非活性组分较出发菌株减少。     

小单孢菌M－90诱变方法的研究

以高温、ＬｉＣｌ、ＬｉＣｌ＋ＵＶ、甲胺＋ＵＶ、吖啶橙等理化诱变剂对玫瑰降红色小单孢菌Ｍ－９０进行诱变育种。高温、ＬｉＣｌ＋ＵＶ、甲胺＋ＵＶ、吖啶橙处理后都得到了高产菌株。其中以高温、ＬｉＣｌ＋ＵＶ效果最好。经过复筛与传代，得到了具有遗传稳定性的高产菌株，且发酵液中非活性组分较出发菌株减少。     

以抗生素抗性为选择标记的毛壳菌种间原生质体融合

以抗生素抗性为选择标记进行角毛壳菌和球毛壳菌种间原生质体融合。角毛壳菌CH21-I-402菌株对潮霉素有抗性、对G418敏感,球毛壳菌CH08对潮霉素和G418敏感。根癌农杆菌介导的新霉素磷酸转移酶基因转化球毛壳菌,得到成功转化新霉素磷酸转移酶基因的球毛壳菌菌株,转化子对G418抗性提高3～4倍,对潮霉素仍然比较敏感。以耐潮霉素、不耐G418的角毛壳菌和不耐潮霉素、耐G418的球毛壳菌为出发菌株,以PEG6000为助融剂进行原生质体融合,用G418和潮霉素抗性进行筛选,获得再生菌株。经AFLP分析表明：再生菌株PF1、PF26为融合菌株,融合菌株菌落形态均与亲本存在明显差异。     

流式细胞术动态检测肝大部切除后再生相关因子的实验研究

为探讨肝细胞生长因子（HGF）、转化生长因子-α（TGF－α）、转子生长因子－β（TGF－β）在肝再生中的作用及机制。应用流式细胞术（FCM）动态检测再生肝细胞S期肝细胞百分含量及HGF、TGFα、TGF－β的变化。结果表明：HGF、TGF－α浓度在肝大部分切除6h后达高峰，而TGF－β24h后缓慢上升。提示HGF、TGF－α、TGF－β分别通过不同的机制影响肝再生，HGF、TGF－α为正性调节因子，TGF－β为负性调节因子。     

用于乙肝疫苗效力检定的NIH-q小鼠种群的建立

用7个近交系及两个NIH封闭群小鼠分别测定同一样品乙肝疫苗的免疫原性,由不同品系小鼠求出的ED_(50)值之间有显著差异,且该反应差异性与小鼠的H-2单倍型密切相关.NIH小鼠H-2基因的杂合性影响乙肝疫苗效力检定结果的准确性。通过对NIH小鼠的遗传选择,建立了H-2单倍型为q,对HBsAg免疫应答性较为一致的NIH-q种群,同时保持了原封闭群动物繁殖力强、生长速度快等优点.     

新大环内酯类抗生素M—90的研究Ⅱ.小单孢菌M—90的诱变育种

M-90为四川省土壤中分离得到的一株产生大环内酯类抗生素的小单孢菌。在其诱变研究中比较了紫外线、硫酸二乙酯及紫外线氯化锂复合处理对小单孢菌M-90的诱变作用。结果表明,紫外线是最佳诱变剂,紫外线处理菌丝悬液比处理孢子悬液获得了更多的诺亚霉素高产菌株。对这些高产株进一步筛选分离后,找到了几株具有较高生产率和较少组分的突变株,其效价约为出发株的3倍,且组分由6个减至3个。几次传代培养后,大多数具有遗传稳定性。     

牙髓病细菌学检查

对牙髓病24例标本进行了细菌学检查,检出需氧菌及兼性厌氧菌22株;无芽胞厌氧菌28株。除提示这些细菌是口腔正常菌群外,也可能是条件致病菌。但是否为牙髓病的病原菌则尚需进一步研究。药物敏感试验结果提示治疗口腔炎症可选用青霉素、红霉素、利福平、灭滴灵等药物。     

Potency Titration of Oral Polio Vaccine by Estimation of Live Virus Content Using Tissue Culture Technique

Representative vaccines from 34 different batches of oral log₁₀ (6.425) and a minimum titre of polio vaccine (OPV) were tested for potency by tissue culture technique. All 34 samples were found to be potent, a maximum titre of log₁₀ (6.425) and a minimum titre of log₁₀ (5.86) was obtained. In addition, 6 vaccines from the immunisation clinic (left over sample after immunisation) were also subjected to potency titration and their potency was found to be within normal limits. Adequate potency confirmed ideal storage condition of the vaccines in Armed Forces set up.Key Words: Oral polio vaccine, Potency, Storage     

LABORATORY AND CLINICAL STUDIES ON AMIKACIN

Amikacin and other aminoglycoside antibiotics were tested for in vitro antibacterial activity against 480 strains of common pathogens, including S aureus, E coli, Shigella, P aeruginosa, K pneumoniae, Entero- bacter, Proteus, etc. The results indicated that home made amikacin was equal in potency to the Japanese made product. The in vitro antibacterial activity of amikacin was markedly superior to that of kanamycin, gentamicin, tobramycin, and streptomycin. Amikacin was active against organisms resistant to gentamicin, tobramycin and kanamycin. Clinical pharmacological studies were performed on 12 cases with normal renal functions. The peak level was 24.75 vg/ml one hour after intramuscular injection of 400 mg amikacin. The biological half life was 2.39-2.48 hours. Thirty-one cases of infections caused by Gram negative rods and S aureus were treated. 87.1<70 were considered effective. Renal and oto-toxicity was minimal. It is concluded that amikacin is a broad-spectrum, high potency aminoglycoside antibiotic, and is es pecially suitable for the treatment of severe Gram negative infections and those infections that were caused by gentamicin-tobramycin resistant Gram negative rods.     

STUDY OF IN VITRO ANTIBACTERIAL ACTIVITY OF 19 ANTIMICROBIAL AGENTS AGAINST PSEUDOMONAS AERUGINOSA

The in vitro antibacterial activity of 19 antimicrobial agents against 40 strains of P aeruginosa was studied. The 19 antimicrobial agents included 7 semisynthetic penicillins, 6 third generation cephalosporins, 5 aminoglycosides and l quinolone agent. The minimal inhibition concentrations (MIGs) were measured by the serial dilution on solid agar. Ceftazidime was the most active in 19 antimicrobial agents again P aeruginosa (MIC50: I pg / ml, MIC90: 2 /ig / ml) Amikacin and ofloxaxin followed it in activity. Acylureido-penicillins, such as azlocillin, fur- benicillin and piperacillin were highly active against P aeruginosa, which could inhibit, 92.5%, 90% and 85% of these strains at a concentration of 8 µg/ml. Cefsulodine and cefoperazone were also active against the same strains, inhibiting 92.5% and 99% of the strains at a concentration of 8 µg / ml. The potency of the agents mentioned above against P.aeruginosa was similar to that of aminoglycosides. The drug susceptibility of 10 strains isolated in our hospital was compared with that of 29 strains of other hospitals in Beijing. The MICS of 5 penicillins and 3 cephalosporins against the isolates of our hospi- tal was higher than that of other hospitals, suggesting that the susceptibility of β-lactam antibiotics against isolates of our hospital was lower. The effects of combined use of azlocillin with oxacillin and piperacillin with ofloxacin against 4 strains of carbenicillin-resistant P aeruginosa was studied using check-board testing. The synergy and partial synergy were observed in both combinations.     

hIFN-λ1基因在大肠杆菌中的表达及其对角膜基质细胞的抗病毒作用

目的获取重组人干扰素-λ1（hIFN-λ1）的原核表达产物并研究hIFN-λ1对兔角膜基质细胞的抗单纯疱疹病毒（HSV）作用。方法用含基因重组表达载体pGEX-4T-λ1的大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达和包涵体提取纯化后获取hIFN-λ1蛋白,采用微量滴定法测定其效价。采用组织块培养法培养兔眼角膜基质细胞,用微量细胞病变法比较hIFN-λ1、IFN-α标准品对兔眼角膜基质细胞的抗HSV作用。结果诱导含基因重组表达载体PGEX-4T-λ1的大肠杆菌BL21后,蛋白电泳显示出一条相对分子量约为33kd的蛋白条带;用IFN-α标准品校正其效价为62.5U/ml。hIFN-λ1抗HSV-I的作用与IFN-α相近,HSV-II的作用比IFN-α约弱50%。结论含基因重组表达载体pGEX-4T-λ1的大肠杆菌,经诱导表达和包涵体提取纯化后可获得hIFN-λ1,它对兔眼角膜基质细胞有一定的抗HSV作用。     

暗黑链霉菌原生质体制备及再生株产生抗生素能力的研究

研究妥布拉霉素产生菌暗黑链霉菌原生质体的制备、再生条件再生株产生抗生素能力的变化及甘氨酸浓度对菌丝体生长的影响，确定了原生质体再生培养基的组成，再生率为２９％，三次再生过程获得了高产菌株，产生抗生素的能力提高了２２．５％。     

中国东海亚硫酸杆菌属微生物的鉴定及生物学活性分析

目的:对44株中国东海来源的亚硫酸杆菌进行16S rDNA的序列测定和生物学活性的初步分析.方法:用PCR方法对细菌的16S rDNA序列进行扩增,并在GenBank上进行相似性搜索.将全部亚硫酸杆菌的16S rDNA序列运用Clustal X1.8软件进行多序列比对并用MEGA4.1绘制进化树.利用稻瘟霉菌(Pyricularia oryzae) P-2b、枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis) 和大肠埃希菌 (Escherichia coli) 作为指示菌检测菌株发酵液的抗菌活性.以HL-60、HepG2细胞作为细胞毒活性指示细胞株检测菌株发酵液的细胞毒活性.采用ABTS和DPPH抗氧化模型检测菌株发酵液的自由基清除能力.结果:经与GenBank数据库比对,44株菌均与亚硫酸杆菌属有很高的相似性(97%～100%).所有菌株发酵液对指示菌未显示出抗菌活性.菌株发酵液有不同程度的细胞毒活性和清除自由基的能力.19株菌的发酵液对HepG2细胞有抑制作用,抑制率为6.8%～42.8%,18株菌的发酵液对HL-60细胞有抑制活性,抑制率为6.9%～43.6%.12株菌的发酵液对ABTS自由基有清除能力,清除率为4.49%～23.08%,8株菌发酵液对DPPH自由基有清除能力,清除率为1.23%～30.76%.结论:44株中国东海来源的亚硫酸杆菌表现出显著的细胞毒活性及抗氧化活性,具有潜在的药用价值.     

重组人干扰素α1b空间诱变菌种初步筛选研究

目的 利用“神舟八号”飞船对表达重组人干扰素α1b 的基因工程菌株进行空间诱变，通过菌种筛选，获得高表达目的产物的菌株。方法 对重组人干扰素α1b 空间搭载菌种进行平板分离、抗性平板初筛和试管复筛，进行诱导表达，通过2 轮SDS-PAGE 分析获取高产菌株。结果 首先从300 个克隆中筛出221 株阳性克隆，再从194 个表达重组人干扰素α1b 单克隆中筛选到144 株具有氨苄青霉素抗性的克隆；通过等量接种和小量试管表达，最终筛选到6 株目的蛋白表达量和表达比例较高的克隆。结论 通过初步筛选，获得6 株空间诱变后较高表达的重组人干扰素α1b 生物工程菌菌株。