OK432优化的内皮细胞疫苗抗小鼠乳腺癌作用研究

目的探讨OK432优化的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)疫苗对小鼠EAC乳腺癌的生长抑制作用。方法体外培养HUVECs,与佐剂OK432混合,制备HUVECs-OK432疫苗,以小鼠EAC乳腺癌皮下移植瘤模型考查HUVECsOK432疫苗的抗肿瘤效应,并通过ELISA、脾细胞增殖及细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤实验检测疫苗免疫后体液及细胞免疫应答水平。结果在预防性免疫中,HUVECsOK432疫苗可以明显抑制EAC乳腺癌生长;HUVECs-OK432疫苗诱导小鼠产生了高滴度的特异性HUVEC抗体;HUVECs-OK432疫苗能有效刺激免疫小鼠脾淋巴细胞的增殖;HUVECs-OK432组小鼠脾细胞诱导产生了明显的靶向HUVEC细胞的CTL杀伤作用。结论 HUVECs-OK432疫苗可以有效诱导机体产生靶向HUVEC的特异性体液及细胞免疫应答,从而有效抑制了小鼠EAC乳腺癌的生长。     

肿瘤细胞裂解物抗小鼠B16F10黑色素瘤的作用研究

反复冻融B16F10肿瘤细胞制备裂解物,以白喉毒素(Diphtheria toxin,DT)为载体,OK432和来源于结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)热休克蛋白70(HSP70)第407-426(mHSP70407～426,M)的两段串联重复序列M2为佐剂,制备了肿瘤细胞疫苗B16F10-DT-M2-OK432(BDTMOK),探讨其能否抑制小鼠B16黑色素瘤,并且对其抗肿瘤的作用机理进行部分探讨。以制备的BDTMOK免疫C57BL/6小鼠,分别检测体液免疫应答和细胞免疫应答。通过ELISA法,从血清中检测到高滴度的抗B16肿瘤细胞裂解物(B16 tumor cell lysate,B16TCL)类抗体。淋巴细胞增殖实验的结果显示,BDTMOK的免疫能够有效的刺激脾淋巴细胞的增殖。预防结合治疗性实验的结果显示,BDTMOK激发的免疫应答对于B16肿瘤攻击起到有效的保护作用,与PBS阴性对照组比较,皮下注射BDTMOK可以延长皮下移植瘤发生的潜伏期(P<0.05),并且平均瘤重显著降低(P<0.05);抑制了小鼠皮内肿瘤模型中的血管新生(P<0.01)。疫苗BDTMOK能有效的抑制小鼠B16黑色素瘤的生长。     

抗βhCG蛋白疫苗的抗肿瘤作用

以人绒毛膜促性腺激素β亚基(βhCG)的羧基端109~118的6段串联重复表位为靶点、热休克蛋白65(HSP65)为载体,设计一种新型的蛋白疫苗HSP65-X6-βhCGCTP37,探讨其能否抑制小鼠前列腺癌,并且对其抗肿瘤的作用机理进行部分探讨。以制备的HSP65-X6-βhCGCTP37免疫C57BL/6小鼠,分别检测体液免疫应答和细胞免疫应答。通过ELISA法,从血清中检测到高滴度的抗βhCGIgG类抗体。Western blot实验证明小鼠血清中的抗体能够特异性识别βhCG表位。淋巴细胞增殖实验的结果显示,HSP65-X6-βhCGCTP37的免疫能够有效的刺激脾淋巴细胞的增殖。预防性实验的结果显示,HSP65-X6-βhCGCTP37激发的免疫应答对于RM-1肿瘤攻击起到有效的保护作用,与PBS阴性对照组比较,平均肿瘤重显著降低(P<0.05)。同时有效地减少了小鼠的肺转移(P<0.01);抑制了小鼠皮内肿瘤模型中的血管新生(P<0.01)。HSP65-X6-βhCGCTP37蛋白疫苗能有效地抑制小鼠前列腺癌的生长。     

VEGF融合蛋白疫苗联合环磷酰胺抗小鼠H22肝癌实验研究

目的探讨分子佐剂修饰的VEGF融合蛋白疫苗与低剂量环磷酰胺(CTX)能否产生协同抗肝癌作用。方法建立小鼠H22肝癌模型,将BALB/c小鼠随机分为4组:生理盐水对照组、CTX单药组、VEGF蛋白疫苗单药组(V2组)、V2与CTX联合治疗组(V2+CTX)。分别在H22肝癌皮下移植瘤及皮内肿瘤模型中评价联合治疗方案抗肿瘤生长及抗血管生成的能力,并通过Western blot及ELISA方法检测抗-VEGF抗体水平。结果皮下移植瘤模型结果显示V2+CTX联合治疗组的肿瘤体积、平均瘤重低于各单药治疗组(P<0.05 vs V2,P<0.01 vs CTX);在皮内肿瘤血管模型中,联合治疗对肿瘤新生血管的抑制作用最为明显,与单独的V2及CTX组相比,差异均有统计学意义(P<0.05 vs V2,P<0.01 vs CTX);Western blot及ELISA的结果显示,V2+CTX联合治疗诱导小鼠产生了高水平的特异性抗-VEGF抗体。结论低剂量CTX与重组VEGF融合蛋白疫苗联合治疗有协同抗肝癌作用。     

致敏树突状细胞疫苗抗小鼠乳腺癌的实验研究

目的研究以EMT6乳腺癌细胞致敏的树突状细胞(DC)疫苗的抗肿瘤作用。方法无菌取小鼠骨髓细胞,在体外培养条件下经细胞因子诱导为DC,用EMT6肿瘤细胞冻融抗原冲击致敏DC,检测经DC免疫产生的细胞毒T淋巴细胞(CTL)体外杀伤肿瘤细胞的活性。建立EMT6荷瘤小鼠模型,随机分为实验组、实验对照组和空白对照组,于肿瘤接种后第7、14天给予相应DC疫苗治疗,观察致敏DC免疫对小鼠乳腺肿瘤模型的治疗作用。结果致敏DC诱导生成的特异性CTL在体外对肿瘤细胞可产生杀伤作用,与PBS对照组比较,差异有显著性(P<0.05);经致敏DC注射免疫后,小鼠移植瘤得到抑制,与PBS对照组比较,差异有显著性(P<0.05)。结论以EMT6乳腺癌细胞致敏的树突状细胞(DC)疫苗在体外和小鼠体内均显示了抗肿瘤作用。     

溶血性链球菌菌体制剂肿瘤细胞疫苗对荷瘤小鼠B细胞免疫效应研究

<正>肿瘤的发生发展与机体的免疫系统息息相关,当肿瘤发生以后,机体可针对肿瘤抗原产生特异性的免疫应答,但随着肿瘤的发生发展,机体的免疫功能就受到抑制。本实验试图探究溶血性链球菌菌体制剂(OK-432)肿瘤疫苗对DBA/2荷瘤小鼠B细胞免疫效应,探讨OK-432肿瘤疫苗可能的作用机制。1材料与方法1.1瘤株和实验动物:KLN-205细胞株(DBA/2小鼠来源的肺癌细胞)购自上海爱丁堡生物科技发展有限公司。KLN-205     

重组毕赤酵母HBsAg诱导小鼠细胞免疫应答的研究

目的   研究毕赤酵母表达的重组HBsAg(Pichia-rHBsAg)在小鼠中诱导T细胞免疫应答的能力,评价疫苗的免疫原性.   方法  以rHBsAg免疫雌性BALB/c小鼠,制备小鼠脾淋巴细胞,并在体外以抗原/特异性多肽刺激.采用ELISA法测定抗原特异性T淋巴细胞分泌的细胞因子,酶联免疫斑点法(ELISPOT)测定CTL频数.   结果 由毕赤酵母表达的rHBsAg可在小鼠中诱导Th1和Th2型免疫应答;加铝佐剂的rHBsAg诱导IFN-γ的水平及CTL克隆明显高于无佐剂抗原;Pichia-rHBsAg刺激小鼠细胞免疫应答的水平强于酵母-rHBsAg,与中国仓鼠卵巢细胞-rHBsAg相仿.   结论   Pichia-rHBsAg可在BALB/c小鼠中诱导较强的细胞免疫应答.     

二硝基苯酚的抗肿瘤作用

目的探讨二硝基苯酚的抗肿瘤作用。方法采用小鼠Lewis肺癌皮下移植模型和4T1乳腺癌肺转移肿瘤模型考察二硝基苯酚的抗肿瘤作用。结果在Lewis肺癌皮下移植模型中,静注二硝基苯酚对小鼠的肺肿瘤有很好的抑制作用,局部注射没有明显的抑制作用;在4T1乳腺癌肺转移肿瘤模型中,二硝基苯酚皮下注射有明显的免疫功能和抗肺转移作用。结论二硝基苯酚具有一定的抗肿瘤作用     

单剂HBsAg-PLGA控释疫苗微球小鼠体内免疫学研究

目的研究小鼠皮下注射重组乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)-乳酸/乙醇酸共聚物(PLGA)微球后的体内抗体应答水平和免疫学机制。方法采用复乳法制备疫苗微球后，单剂注射到BALB/c小鼠皮下，在一定时间内检测全抗体、IgG抗体亚型及细胞因子的应答水平。结果HBsAg-PLGA微球在小鼠体内主要引发体液免疫应答；其中单剂注射HBsAg-PLGA50/50-COOH微球在免疫早期产生较高免疫表达，6周后降低，全抗体水平显著低于常规铝佐剂疫苗(P<0.01)；分别单剂注射HBsAg-PLGA50/50微球及HBsAg-PLGA75/25微球后产生的免疫应答在18周内与铝佐剂疫苗相当(P>0.05)。结论PLGA微球作为乙肝疫苗的长效缓释可生物降解载体，具有一定潜在优势。     

松萝酸抑制小鼠H22肿瘤生长及作用机制研究

摘 要 目的： 探讨松萝酸对小鼠H22肿瘤生长的影响及其作用机制。方法: 昆明种小鼠前腋下皮下接种H22细胞,第2天腹腔注射松萝酸,每3 d测量1次肿瘤体积。用免疫组化法检测微血管密度（MVD）;ELISA 法检测小鼠血清和人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）细胞培养基上清中血管内皮生长因子（VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）水平;MTT法检测松萝酸对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）体外增殖的影响。结果: 松萝酸组小鼠H22肿瘤体积、重量增长明显较模型组缓慢(P<0.05),同时松萝酸组的肿瘤微血管密度显著减少(P<0.05),松萝酸对HUVEC体外增殖有显著抑制作用。松萝酸可显著降低HUVEC细胞和小鼠血清VEGF和bFGF水平(P<0.01)。结论:松萝酸可显著抑制小鼠H22肿瘤生长及血管生成,且能抑制VEGF和bFGF表达和HUVEC体外增殖。松萝酸对VEGF和bFGF分泌的抑制作用可能是其抗H22肿瘤及抗血管生成的一个重要机制。