逆转录－巢式聚合酶链反应检测庚型肝炎病毒RNA方法的建立及初步应用

庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）基因组为单链、正股ＲＮＡ，全长９３９２ｂｐ。根据５’－非编码区基因序列设计合成两对引物。随机选取酶联抗－ＨＧＶ阳性病人血清３份，阴性病人血清６份，应用逆转录－巢式聚合酶链反应进行检测。结果２份抗－ＨＧＶ阳性血清可见较强的特异扩增带，１份抗－ＨＧＶ阳性血清可见较弱的特异扩增带，其余６份抗－ＨＧＶ阴性血清均无特异性扩增带。特异扩增片断大小与设计相符，并经序列分析及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交给予证实。     

利用双扩增聚合酶链反应检测非甲非乙型肝炎患者血清中丙型肝炎病毒RNA

利用丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）５’－端序列合成两对引物，建立了灵敏、特异的ＨＣＶＲＮＡ双扩增聚合酶链反应检测方法。用此方法及第二代Ａｂｂｏｔｔ酶联抗－ＨＣＶ检测试剂盒，检测了４４例非甲非乙型肝炎患者血清及１０名抗－ＨＣＶ阴性健康人。在４４例患者中，４１例（９３％）ＨＣＶＲＮＡ阳性，３６例（８２％）抗－ＨＣＶ阳性，３３例（７５％）ＨＣＶＲＮＡ、抗－ＨＣＶ全部阳性。３例ＨＣＶＲＮＡ阴性，但抗－ＨＣＶ阳性，另外，有８例抗－ＨＣＶ阴性，ＨＣＶＲＮＡ阳性。１０名健康人ＨＣＶＲＮＡ均为阴性。结果表明，大部分（９２％）抗－ＨＣＶ阳性患者带有ＨＣＶ，但为了检测所有病毒血症患者，抗－ＨＣＶ检测是不够的，利用双扩增ＰＣＲ方法检测ＨＣＶＲＮＡ对于抗－ＨＣＶ阴性患者的诊断是非常有用的。     

合成肽抗原在庚型肝炎病毒抗体检测中的初步应用

为了研究庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）在我国的感染状况，依照对ＨＧＶ氨基酸序列的亲水性和抗原决定簇位点分析，采用固相法合成了ＨＧＶ不同区段的４条多肽，以此为抗原建立了检测抗ＨＧＶ－ＩｇＧ的间接酶联免疫吸附试验。检测５７份非甲－戊型肝炎病人血清，抗ＨＧＶ－ＩｇＧ阳性者２０份，阳性检出率为３５．０９％（２０／５７），ＨＧＶ ＲＮＡ阳性者１４份，阳性率为２４．５６％（１４／５７）。检测甲型肝炎病人血清３０份，阳     

831名健康青年庚型肝炎病毒和人免疫缺陷病毒感染？…

目的 了解我国健康青年中庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）和人免疫缺陷病毒的感染情况。方法 采用酶联免疫法（ＥＩＡ）检测６省８３１名健康青年血清中的ＨＧＶ和ＨＩＶ抗体，对抗－ＨＧＶＩｇＧ阳性的血清再用逆转录－巢式聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＨＧＶＲＮＡ。结果 发现抗－ＨＧＶ ＩｇＧ阳性率为２．５３％（２１／８３１），２１例阳性者中ＨＧＶ ＲＮＡ阳性８例，两者符合率为３８．１％；抗－ＨＩＶ均阴性。结论 我     

831名健康青年庚型肝炎病毒和人免疫缺陷病毒感染的调查

目的了解我国健康青年中庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）和人免疫缺陷病毒的感染情况。方法采用酶联免疫法（ＥＩＡ）检测６省８３１名健康青年血清中的ＨＧＶ和ＨＩＶ抗体，对抗－ＨＧＶＩｇＧ阳性的血清再用逆转录－巢式聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＨＧＶＲＮＡ。结果发现抗－ＨＣＶＩｇＧ阳性率为２５３％（２１／８３１），２１例阳性者中ＨＧＶＲＮＡ阳性８例，两者符合率为３８１％；抗－ＨＩＶ均阴性。结论我国健康青年人群中确实存在ＨＧＶ感染。     

套叠式（Nested）PCR检测乳汁中HBV－DNA

本文应用Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ技术，检测了５２例血清ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性（ＰＣＲ检测）产妇和１５例血清ＨＢＶ－ＤＮＡ阴性（ＰＣＲ检测）产妇乳汁中的ＨＢＶ－ＤＮＡ。结果表明：５２例阳性产妇乳汁中ＨＢＶ－ＤＮＡ经第一次扩增后，１２例ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性。经第二次扩增后，４０例阳性（阳性率７６．９％）；１５例阴性产妇乳汁中ＨＢＶ－ＤＮＡ经两次扩增后均为阴性。作者认为，Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ技术是检测血清ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性产妇乳汁是否排泌ＨＢＶ的简便、灵敏、特异的方法。乳汁中含有ＨＢＶ应停止哺乳。     

用ELISA捕获法测抗甲型肝炎病毒IgG及与竞争法测抗甲型肝炎病毒的比较

用抗甲型肝炎病毒（ＨＡＶ）ＩｇＧ阴性血清处理以抑制非特异反应，提高灵敏性的捕获法酶联免疫吸附试验检测甲型肝炎病毒特异ＩｇＧ抗体，并与竞争法检测总抗ＨＡＶ进行了比较。结果为甲型肝炎患者发病早期血清１：２０稀释时，抗ＨＡＶＩｇＧ２８／３０例阳性，总抗ＨＡＶ３０／３０例阳性。血清１：１０００稀释时，则抗ＨＡＶＩｇＧ为８／３０例阳性，总抗ＨＡＶ２９／３０例阳性。若以此稀释度为诊断界限，８例抗ＨＡＶＩｇＧ阳性出现于发病第１０至１４天。实验提示甲型肝炎患者发病早期已产生抗ＨＡＶＩｇＧ，而仅测总抗ＨＡＶ是不能区别抗体类型的。     

心脏移植并发疱疹病毒6型感染

从１３例心脏移植病人的外周血淋巴细胞中分离出２株疱疹病毒６型（ＨＨＶ６），并检测了手术前后病人血清特异性抗－ＨＨＶ６ＩｇＧ抗体。这２株ＨＨＶ６可引起典型的细胞病变。分离的毒株在电镜下可见疱疹类病毒样颗粒。经特异性抗体和ＤＮＡ杂交试验证明，这两株病毒均属于ＨＨＶ６Ｂ组。病人血清中特异性抗－ＨＨＶ６ＩｇＧ抗体出现４倍或４倍以上增长的有５例（３９％），其中包括２例病毒分离阳性的病人血清。由于病人在术前血清已是阳性和术后出现有意义效价的增长，因此试验结果提示心脏移植前后免疫抑制剂的应用可能是造成ＨＨＶ６复发感染的重要原因。     

丙型肝炎患者血清抗丙型肝炎病毒性抗IgM及HCVRN…

用酶联免疫吸附试验对住院病人抗丙型肝炎病毒抗体阳性血清标本进行抗－ＨＣＶＩｇＭ的检测，并与ＨＣＶＲＮＡ检测结果比较。结果表明，ＨＣＶＲＮＡ阳性、抗－ＨＣＶ阳性，ＨＣＶＲＮＡ阳性，抗－ＨＣＶ阴性及ＨＣＶＲＮＡ阴性，抗－ＨＣＶ阳性三类型中均有抗－ＨＣＶＩｇＭ阳性者。     

用聚合酶链反应和放射免疫法检测肾移植术后人巨细胞病毒感染

将５０例肾移植术后发热病人的尿标本接种细胞，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测第１代细胞培养上清中的人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＤＮＡ。结果１９例为ＨＣＭＶＤＮＡ阳性，阳性率为３８．００％，用固相放射免疫法（ＲＩＡ）检测ＨＣＭＶ抗原，阳性的有１５例，阳性率为２７．７７％。将５４倒尿标本接种人胎肺二倍体单层细胞，分离到６株ＨＣＭＶ。用ＥＬＩＳＡ检测６５例病人单份血清的ＨＣＭＶ－ＩｇＭ抗体，阳性的有１７例，检测４５例病人双份血清ＩｇＧ抗体，１１例的第２份血清的ＨＣＭＶ－ＩｇＧ抗体滴度比第１份有４倍以上升高。上述结果表明，ＰＣＲ检测结果与ＲＩＡ的检测结果基本符合；病人血清抗体的阳性率与ＰＣＲ检测的阳性率基本符合。     

血清学标志阴性的非甲～戊型肝炎的病原学研究

目的对血清学标志阴性的非甲～戊型肝炎进行病原学研究。方法用ＨＢＶＰＣＲ、ＨＣＶＲＴ－ＰＣＲ和ＨＥＶＲＴ－ＰＣＲ分别检测血清学标志阴性的非甲～戊型肝炎患者血清，并对其部分阳性产物进行克隆测序。结果８７例非甲～戊型肝炎血清ＨＢＶＤＮＡ均为阴性，９例（１０．３％）为ＨＣＶＲＮＡ阳性，部分经测序证实为ＨＣＶ１ｂ亚型；余７８例为ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ均阴性。该７８例中，１４例因无血清未作ＨＥＶＲＮＡ检测，余６４例中４９例（７６．６％）为ＨＥＶＲＮＡ阴性，１５例（２３．４％）为ＨＥＶＲＮＡ阳性。经序列分析显示，其中９例为典型的中国ＨＥＶ株基因序列，６例变异较大，与典型的中国株基因序列的同源性仅为８０％左右。４９例ＨＢＶＤＮＡ、ＨＣＶＲＮＡ和ＨＥＶＲＮＡ均阴性的血清中１６例（３２．６％）ＨＧＶＲＮＡ阳性。由此可见，该８７例中至少有９例为ＨＣＶ感染，１５例为ＨＥＶ感染，１６例为ＨＧＶ感染。结论对血清学标志阴性的非甲～戊型肝炎的病人应该用ＰＣＲ法进行病原学分型，以明确其诊断     

丙型肝炎患者血清抗丙型肝炎病毒抗体IgM及HCVRNA检测结果的比较

用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）对住院病人抗丙型肝炎病毒抗体（抗－ＨＣＶ）阳性血清标本进行抗－ＨＣＶＩｇＭ的检测，并与ＨＣＶＲＮＡ检测结果比较。结果表明，ＨＣＶＲＮＡ阳性、抗－ＨＣＶ阳性，ＨＣＶＲＮＡ阳性、抗－ＨＣＶ阴性及ＨＣＶＲＮＡ阴性、抗－ＨＣＶ阳性三种类型中均有抗－ＨＣＶＩｇＭ阳性者。结果还表明ＨＣＶＲＮＡ阳性病例的抗－ＨＣＶＩｇＭ阳性率明显高于ＨＣＶＲＮＡ阴性的病例（Ｐ＜０．０５），在临床诊断上ＨＣＶＲＮＡ阳性与阴性病例的肝病大多数为急性肝炎（ＡＨ）和慢性活动性肝炎（ＣＡＨ），ＨＣＶＲＮＡ阳性与阴性比较，各类肝病的病例数无明显差别。     

乌鲁木齐市部分高危人群庚型肝炎病毒感染现状及5′ UTR区基因序列分析

新疆地处我国西部边陲 ,存在着各型肝炎散发流行的危险因素 ,庚型肝炎病毒在乌鲁木齐市的流行现状尚未见报道。在新疆医科大学第一附院收集了2 67份各类人群的血清 ,用酶标法检测血清中庚型肝炎病毒抗体 (抗 ＨＧＶ) ,再以庚型肝炎病毒ＮＳ3区为引物运用ＲＴ ＰＣＲ法对抗 ＨＧＶ(阳性 )血清进行庚型肝炎病毒核酸 (ＨＧＶＲＮＡ)的扩增检测 ,阳性扩增产物为 83ｂｐ。最后 ,选择该病毒 5′非编码区为引物对第一次ＲＴ ＰＣＲ扩增ＨＧＶＲＮＡ(阳性 )血清 ,再次进行163.ｃｏｍ)ＲＴ ＰＣＲ扩增 ,阳性扩增产物为 1 90ｂｐ ,对第二次扩增ＨＧＶ…     

7例庚型肝炎的临床分析

７例庚型肝炎的临床分析张绍刚王建文任宝琴检测了６１例各型病毒性肝炎病人血清中庚型肝炎病毒感染情况。检出庚型肝炎病毒抗体阳性者７例（抗－ＨＧＶ）。其中９例甲～戊型病毒性肝炎标志均阴性者，有２例抗－ＨＧＶ阳性，另外５例均与它型肝炎重叠感染。１材料和方法１...     

从基因分型看血液透析及肾移植患者丙型肝炎病毒感染状况

采用国产和美国Ｏｒｔｈｏ公司第２代抗丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）试剂对１００例维持性血透及肾移植患者进行血清丙型肝炎病毒抗体（抗－ＨＣＶ）对比检测。阳性标本用聚合酶键反应（ＰＣＲ）法检测ＨＣＶＲＮＡ并采用型特异的ＨＣＶ亚基因探针对其非结构蛋白ＮＳＳ区扩增产物进行了杂交基因分型。结果表明，这组病人中抗－ＨＣＶ阳性率为４１％，肾移植术后再透析者达５６．５２％，且与透析时间、输血次数、受血量成正相关；国产抗－ＨＣＶ试剂同美国Ｏｒｔｈｏ公司试剂比较阳性符合率达９１．４３％；抗－ＨＣＶ阳性患者中有３１．４３％（１１／３２）血清ＨＣＶＲＮＡＮＳ５阳性；透析患者中，ＨＣＶ基因型各型均有，以混合型为主，占６３．６４％。     

乙型肝炎病毒核心基因变异的研究

用聚合酶键反应（ＰＣＲ）对３份肝癌组织及１份乙型肝炎表面抗原阳性但核心抗体（抗－ＨＢｃ）为阴性的无症状携带者血清，扩增及克隆了核心（Ｃ）基因。经核苷酸序列分析，与我国ＨＢＶ克隆株ＰＡＤＲ－１比较，发现无症状携带者的Ｃ基因与ＰＡＤＲ－１的基因差别不大；但自肝癌组织克隆的Ｃ基因平均每例有１５．６个核苷酸变异。结果提示，ＨＢＶ核心基因的变异与疾病的严重程度可能有关。     

用ELISA法快速检测病毒性脑炎患儿脑脊液中单纯疱疹病毒特异性抗原

用单纯疱疹病毒单克隆抗体（ＨＳＶ－ＭｃＡｂ）ＥＬＩＳＡ法检测了６２例病毒性脑炎患儿脑脊液中ＨＳＶ特异性抗原（ＨＳＶ－Ａｇ），２０例其他脑神经系统疾患者。３２例脑炎患儿同时取脑脊液和血清作ＨＳＶ－ＩｇＧ抗体水平测定比较。病毒性脑炎患儿的ＨＳＶ－Ａｇ阳性检出率为２０．６％，与血清／脑脊液的ＨＳＶ－ＩｇＧ测定比较，灵敏性８４．６％，特异性９４．７％。用ＥＬＩＳＡ法检测脑脊液中ＨＳＶ－Ａｇ是一种简便、快速、灵敏、特异的方法，对疱疹性脑炎具有早期诊断价值。     

乙肝患者血清抗－HBe效价与HBeAg阴性变异株出现频率关系的研究

利用多聚酶链反应（ＰＣＲ）结合寡核苷酸探针杂交的方法，对７７例抗－ＨＢｅ阳性的乙肝病人血清进行了乙肝病毒（ＨＢＶ）ＨＢｅＡｇ阴性变异的分析，同时研究了血清抗－ＨＢｅ滴度与ＨＢｅＡｇ阴性变异出现频率的关系。结果１４例单独野毒株感染的病人，抗－ＨＢｅ平均效价为４．７９±１４．４５；１９例野毒株与变异株混合感染的病人，抗－ＨＢｅ平均效价为１２８．８３±２３．４４；１８例单独变异株感染的病人，抗－ＨＢｅ平均效价为２８．１８±３７．１５；２６例无ＨＢＶ复制的病人，抗－ＨＢｅ平均效价为８１．２８±２２．９１。单独野毒株感染组抗－ＨＢｅ效价显著低于混合感染组（Ｐ＜０．０１）及无ＨＢＶ复制组（Ｐ＜０．０５）。结果提示：高效价的抗－ＨＢｅ可能是选择ＨＢｅＡｇ阴性变异株的重要条件。在抗－ＨＢｅ效价高而ＨＢＶＤＮＡ仍为阳性的病人中，可能存在ＨＢｅＡｇ阴性变异株感染。     

散发性戊型肝炎病毒感染的诊断

用基因工程重组的戊型肝炎病毒基因结构区第二码框架和第二读码框架具有免疫表位的嵌合抗原，建立了间接酶联免疫法，检测散发性急性肝炎病人血清中抗－ＨＥＶＩｇＧ和ＩｇＭ抗体。在４６例急性肝炎病人中出抗－ＨＥＶＩｇＧ抗体阳性７例，阳性率为１５．２２％，７例ＩｇＧ抗体阳性中，有５例ＩｇＭ抗体也阳性，占７１．４％。     

戊型肝炎病人和实验感染戊型肝炎病毒的猕猴血清抗－HEV ORF2和ORF3的动态变化

应用人工合成的戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）基因组开放读码框架２（ＯＲＦ２）和３（ＯＲＦ３）两段多肽，分别建立了酶联免疫试验（ＥＩＡ），检测８５份实验感染ＨＥＶ的猕猴和１４３份戊型肝炎（简称戊肝）病人血清，结果两组抗－ＨＥＶＯＲＦ２阳性率分别为７０．８９％和６８．５３％，均显著高于抗－ＨＥＶＯＲＦ３（分别为４０．０３％和５７．３４％），且前者阳转时间较早，持续阳性时间也较长。虽然多数（９７．３％）抗－ＨＥＶＯＲＦ３阳性血清，抗－ＨＥＶＯＲＦ２也为阳性，但有少数血清（２．７％）抗－ＨＥＶＯＲＦ２为阴性。上述结果提示，ＨＥＶ基因组ＯＲＦ２和ＯＲＦ３编码的蛋白含有不同的抗原表位，可引起宿主不同的免疫反应。因此，在制备抗－ＨＥＶＥＩＡ试剂时，应联合应用ＯＲＦ２和ＯＲＦ３多肽，以提高其灵敏度和特异性。