姜黄素对缺氧下大鼠星型胶质细胞的影响及机制研究

目的：探讨姜黄素对缺氧条件下大鼠星型胶质细胞活力、细胞凋亡率及JAK2/STAT3信号通路的影响。方法：从大鼠大脑皮层分离培养星形胶质细胞,姜黄素干预缺氧条件星形胶质细胞,AG490作为JAK2/STAT3信号通路抑制剂,细胞缺氧处理24 h后,通过MTT法检测各组细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、JAK2/STAT3信号通路磷酸化的蛋白酪氨酸激酶2（p-JAK2）及磷酸化的信号转导与转录因子3(p-STAT3)的蛋白表达。结果：与对照组比较,缺氧组细胞活力显著升高,凋亡率显著升高,Bcl-2蛋白表达显著降低,Bax、p-JAK2和p-STAT3的蛋白表达显著升高（P<0.05）;与缺氧组比较,缺氧+姜黄素组胞活力显著降低,凋亡率显著降低,Bcl-2蛋白表达显著升高,Bax、p-JAK2和p-STAT3的蛋白表达显著降低（P<0.05）;与缺氧+姜黄素组比较,缺氧+姜黄素组+AG490组细胞活力显著降低,细胞凋亡率显著降低,Bcl-2蛋白表达显著升高,Bax、p-JAK2和p-STAT3的蛋白表达显著降低（P<0.05）。结论：姜黄素可降低缺氧下大鼠星型胶质细胞活力,抑制细胞凋亡,其机制与JAK2/STAT3信号通路有关。     

雷帕霉素抑制IgA肾病大鼠肾小球信号蛋白STAT3的活化

目的探讨雷帕霉素对IgA肾病大鼠肾组织p-JAK2、STAT3、p-STAT3和PCNA表达的影响。方法制备IgA肾病动物模型,分为对照组、IgA肾病组、氯沙坦(ls)和雷帕霉素(rapa)治疗组。监测大鼠的生化指标及用免疫组化、Western blot、RT-PCR等方法检测肾组织p-JAK2、STAT3、p-STAT3和PCNA的蛋白及mRNA的表达。结果IgA肾病大鼠较对照组24 h尿蛋白定量明显升高、血白蛋白降低、BUN以及Cr水平明显升高(P<0.01);IgA肾病大鼠p-JAK2、STAT3、p-STAT3和PCNA蛋白及mRNA水平也显著高于对照组;雷帕霉素能显著缓解上述改变(P<0.01)。结论雷帕霉素可能通过抑制IgA肾病大鼠肾小球JAK/STAT信号途径、直接抑制STAT3的活化以及抑制系膜细胞的增殖而减轻病变程度。     

长托宁抑制JAK2/STAT3信号通路缓解脑缺血再灌注大鼠脑内炎症反应

目的 探讨长托宁对脑缺血性再灌注大鼠脑损伤的保护作用及对JAK2/STAT3信号通路的影响.方法 采用线栓法制备脑缺血性再灌注(I/R)大鼠模型,随机分为假手术组(sham)、脑缺血再灌注模型组(I/R)、长托宁治疗组(PH);对各组大鼠的神经功能障碍进行评分;检测各组大鼠脑梗死体积以及脑含水量;Nissl染色各组大鼠脑组织神经细胞的数量;ELISA检测各组大鼠脑组织IL-1 β、IL-6及TNF-α蛋白的表达;Western blot法检测脑组织p-JAK2、JAK2、p-STAT3和STAT3蛋白表达.结果 长托宁明显改善I/R大鼠神经功能障碍,缩小脑梗死体积,降低脑含水量,增强脑内神经元的数量,显著降低IL-1β、IL-6及TNF-o蛋白表达水平,抑制p-JAK2和p-STAT3的蛋白表达.结论 长托宁抑制I/R大鼠炎症反应,促进神经元的存活,与抑制JAK2-STAT3信号通路相关.     

电针对局灶性脑缺血大鼠JAK-STAT信号转导通路的影响

目的:研究电针对局灶性脑缺血大鼠不同时间段缺血侧皮层p-JAK2、p-STAT3表达的影响。方法:按区组随机化法将150只SD大鼠分为假手术组、模型组和电针组。采用热凝闭大脑中动脉建立局灶性脑缺血模型。电针组取"百会"、"大椎"穴,留针30 min,每天治疗1次。分别于缺血后2 h,1、3、7 d和21 d后取材,采用Western Blot及免疫荧光法检测缺血侧皮层p-JAK2、p-STAT3的表达变化。结果:(1)在假手术组大鼠脑组织中未发现明显p-JAK2、p-STAT3表达;(2)模型组p-JAK2、p-STAT3与同时间段假手术组比较表达量均增多(P<0.05),其中以1 d组表达量增高最为显著;(3)电针治疗组中,1、3、7 d组与同时段模型组相比p-JAK2和p-STAT3的表达量均减少(P<0.05)。结论:脑缺血后磷酸化JAK2、STAT3的超量表达,JAK2-STAT3信号转导通路异常激活,可能为脑损伤加重的机制之一。脑缺血后电针治疗可下调p-JAK2、p-STAT3的表达水平,降低其磷酸化活性,阻断JAK2/STAT3信号转导通路的异常激活。     

草乌甲素通过JAK2/STAT3通路抑制Nav1.6表达减轻奥沙利铂诱发的神经病理性疼痛

目的:探讨草乌甲素(BLA)减轻奥沙利铂(OXA)诱发的神经病理性疼痛(NP)的机制。方法:制备OXA诱发的NP大鼠模型,并分别给予0.04 mg/kg、0.12 mg/kg和0.36 mg/kg剂量的BLA治疗。采用von Frey细丝实验和冷板实验评价疼痛敏感度,采用电生理方法检测神经元兴奋性,Western blot检测Janus激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)通路相关蛋白及电压门控性钠通道1.6(Nav1.6)蛋白的水平,RT-qPCR检测Nav1.6的mRNA表达。另外在0.36 mg/kg BLA的基础上腹腔注射JAK2激动剂C-A1,探究BLA调控JAK2/STAT3通路和神经元兴奋性的机制。结果:与对照组比较,OXA组机械痛和冷痛阈值及诱发动作电位的最小刺激电流明显降低,静息膜电位(RMP)、动作电位数量、Nav1.6的mRNA和蛋白表达及p-JAK2和p-STAT3蛋白水平均明显升高(P0.05)。与OXA组比较,0.04 mg/kg BLA仅可显著提高大鼠的冷痛阈值和诱发动作电位的最小刺激电流(P0.05),而0.12 mg/kg和0.36 mg/kg BLA均可显著升高大鼠的机械痛、冷痛阈值及诱发动作电位的最小刺激电流,降低RMP、动作电位数量、Nav1.6的mRNA和蛋白表达及p-JAK2和p-STAT3的蛋白水平(P0.05);与0.36 mg/kg BLA组比较,JAK2激动剂C-A1可显著减弱BLA对OXA诱导的大鼠p-JAK2、p-STAT3和Nav1.6蛋白水平及动作电位数量的作用(P0.05)。结论:BLA减轻OXA诱导大鼠的神经病理性疼痛症状,可能是通过调节JAK2/STAT3通路,抑制Nav1.6蛋白表达并降低神经元兴奋性来实现的。     

苯那普利对糖尿病大鼠肾皮质JAK/STAT信号蛋白磷酸化的影响

目的: 探讨血管紧张素Ⅱ转换酶抑制剂苯那普利对糖尿病大鼠肾皮质p-JAK2、p-STAT1和p-STAT3信号蛋白表达的影响。方法: 雄性Wistar大鼠随机分为对照组、糖尿病组和苯那普利治疗组。腹腔注射STZ诱发糖尿病大鼠模型，治疗组每日灌胃给予苯那普利10 mg/kg，共2周。采用免疫沉淀和Western blotting检测JAK2磷酸化，Western blotting检测肾皮质p-STAT1、p-STAT3和TGF-β₁蛋白的表达，半定量RT-PCR检测肾皮质细胞TGF-β₁ mRNA的表达。结果: 糖尿病组肾皮质p-JAK2、p-STAT1、p-STAT3及其TGF-β₁表达明显高于对照组，同时TGF-β₁ mRNA表达亦明显强于对照组；苯那普利治疗组p-JAK2、p-STAT1和p-STAT3表达低于糖尿病组，同时TGF-β₁ 蛋白及其mRNA 表达亦低于糖尿病组。结论: JAK/STAT信号途径可能参与糖尿病早期肾脏变化的过程，苯那普利的肾脏保护作用可能部分是通过影响JAK/STAT信号途径的激活而实现。     

JAK/STAT信号途径参与高糖诱导的肾小管上皮细胞转分化

目的：观察Janus激酶/信号转导和转录活化因子(JAK/STAT) 信号的激活对高糖诱导肾小管上皮细胞转分化的影响。方法:体外培养人肾近曲小管上皮细胞株（HKCs）,分别给予高糖和JAK拮抗剂AG490干预,采用免疫沉淀和Western印迹检测JAK2的磷酸化;Western印迹检测平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏素(E-cadherin)及信号蛋白STAT1、STAT3、磷酸化STAT1 (phospho-STAT1, p-STAT1) 和p-STAT3的水平; 酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞上清液中转化生长因子β₁(TGF-β₁)和I型胶原的分泌,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测TGF-β₁mRNA表达。结果:与低糖对照组比较,高糖培养的HKCs中α-SMA 的水平及p-JAK2 、p-STAT1 和p-STAT3 比例明显上调；E-cadherin表达明显下调；TGF-β₁ mRNA 表达增加；细胞培养上清液中TGF-β₁、Ⅰ型胶原分泌增加。AG490明显抑制JAK2磷酸化、下调p－STAT1 和p-STAT3的同时,明显抑制高糖刺激HKCs中α-SMA表达的升高，减轻E-cadherin表达下降程度；降低TGF-β₁ mRNA 表达及TGF-β₁、Ⅰ型胶原的分泌。结论:JAK/STAT信号途径参与高糖诱导的HKCs转分化，并刺激TGF-β₁和细胞外基质的分泌。     

Xyloketal B通过调控JAK2/STAT3信号通路减轻大鼠癫痫后脑损伤

目的:探讨海洋天然产物xyloketal B(Xyl-B)能否通过调控JAK2/STAT3信号通路保护发育期大鼠癫痫后脑损伤。方法:32只20日龄雄性SD大鼠随机分为4组:对照control组、红藻氨酸(KA)组、KA+Xyl-B(10mg/kg)组及KA+Xyl-B(20 mg/kg)组,通过腹腔注射KA制作大鼠癫痫模型,对照组仅注射生理盐水。Xyl-B在KA诱导癫痫前2 h腹腔注射给药。癫痫后24 h处死大鼠,取海马组织,免疫荧光检测存活的神经元和活化的小胶质细胞,Western blot检测p-JAK2、p-STAT3、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、caspase-3、Bax和Bcl-2蛋白水平,RT-qPCR检测JAK2、STAT3、TNF-α、IL-1β、caspase-3、Bax和Bcl-2的mRNA表达。结果:(1)免疫荧光结果显示KA组神经元数量明显减少,活化的小胶质细胞显著增多(P0.05),而Xyl-B治疗后能增加神经元的数量和抑制小胶质细胞的活化;(2)KA组p-JAK2、p-STAT3、TNF-α和IL-1β蛋白水平及JAK2、STAT3、TNF-α和IL-1β的mRNA表达均较对照组显著升高(P0.05),而Xyl-B治疗后能降低这些蛋白和mRNA表达水平;(3)与对照组相比,KA组caspase-3和Bax蛋白及mRNA表达显著增多(P0.05),Bcl-2蛋白和mRNA的表达显著减少(P0.05);Xyl-B干预治疗后能逆转caspase-3、Bax和Bcl-2的表达,20 mg/kg比10 mg/kg治疗作用更显著。结论:Xyl-B能抑制JAK2/STAT3炎症通路和凋亡蛋白的生成,增加存活的神经元数量,抑制小胶质细胞活化,从而抑制KA诱导的发育期大鼠癫痫,对脑起到保护作用。     

IFN-γ通过激活JAK/STAT信号通路上调手足口病患儿OAS1表达

目的:探讨干扰素γ(IFN-γ)是否可以通过激活Janus激酶(JAK)/信号转导和转录激活因子(STAT)信号通路上调手足口病(HFMD)患者2',5'-寡聚腺苷酸合成酶1(OAS1)的表达,从而发挥抗病毒感染的作用。方法:收集140例儿童手足口病和60例健康对照儿童外周血标本,RT-qPCR和Western blot检测OAS1 mRNA和蛋白的表达。提取手足口病患儿外周血单个核细胞(PBMCs),常规培养,无血清培养基同步化后分为正常对照组、IFN-γ干预组和AG490+INF-γ联合干预组。在不同时点采用Western blot检测OAS1、JAK和STAT1蛋白表达及磷酸化水平。结果:HFMD患儿外周血OAS1 mRNA和蛋白的表达明显高于正常对照儿童,并且随着HFMD病情加重,OAS1的mRNA和蛋白表达水平进一步显著升高(P<0.01)。IFN-γ能够呈时间依赖性地显著上调HFMD患儿PBMCs中OAS1蛋白的表达。在IFN-γ刺激下,PBMCs中p-JAK1、p-JAK2和p-STAT1蛋白水平及STAT1核蛋白水平较正常培养PBMCs呈时间依赖性升高(P<0.05);而联合加入AG490干预后,PBMCs中p-JAK1、p-JAK2、p-STAT1和OAS1蛋白水平及STAT1核蛋白水平均较IFN-γ单独刺激组呈时间依赖性显著降低(P<0.05)。结论:IFN-γ能够促进HFMD患儿OAS1的表达,其机制可能与激活JAK/STAT信号通路有关。     

血管紧张素(1-7)通过抑制JAK/STAT信号通路对抗高糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤

目的:研究血管紧张素(1-7)[Ang-(1-7)]能否通过抑制JAK/STAT信号通路对抗高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤。方法:CCK-8检测细胞存活率;Western blot法检测内皮细胞JAK2、STAT3、pJAK2、p-STAT3、cleaved caspase-3和内皮型一氧化氮合酶(e NOS)的蛋白水平;Hoechst 33258染色荧光显微镜照相法检测内皮细胞凋亡数量;DCFH-DA染色荧光显微镜照相法检测内皮细胞内活性氧簇(ROS)的水平。结果:应用高糖(40 mmol/L)处理HUVECs 12~48 h能明显上调JAK2的磷酸化水平,于24 h达最高峰;在24~48 h能明显上调STAT3的磷酸化水平,于36 h最高;在12~24 h能明显上调cleaved caspase-3的表达,在3~48 h随着时间延长,e NOS的表达逐渐降低。2μmol/L的Ang-(1-7)或20μmol/L的JAK/STAT通路抑制剂AG490预处理0.5 h可显著抑制由高糖引起的内皮细胞损伤,表现为p-STAT3、p-JAK2及cleaved caspase-3蛋白水平降低、细胞存活率及e NOS表达升高,细胞凋亡数量和胞内ROS生成减少。结论:Ang-(1-7)能通过抑制JAK/STAT通路对抗高糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤。     

miR-19a介导JAK/STAT信号通路促进卵巢癌细胞增殖的研究

目的 探讨miR-19a对卵巢癌细胞增殖的影响及可能机制.方法 选取人卵巢癌细胞株SKOV3、正常人卵巢表面上皮细胞HOSEpiC以及30例上皮卵巢癌组织和20例癌旁组织为研究对象.对SKOV3细胞株进行转染,分为NC组(未进行任何处理)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-19a组(转染miR-19a mimic).MTT检测细胞增殖能力;克隆形成实验检测细胞生长;流式细胞术检测细胞周期;采用实时荧光定量PCR检测卵巢癌中miR-19a、JAK2、STAT3、p-JAK2和p-STAT3基因mRNA水平;Western blot检测细胞JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达水平.结果 卵巢癌组织miR-19a水平高于正常卵巢组织,SKOV3细胞株中miR-19a表达水平高于HOSEpiC细胞(P<0.01).转染后48 h和72 h,与NC组、miR-NC组相比,miR-19a组细胞增殖能力明显升高(P<0.05).与NC组、miR-NC组相比,miR-19a组细胞克隆数目、S期细胞百分比明显升高(P<0.05).与NC组、miR-NC组相比,miR-19a组细胞p-JAK2、p-STAT3蛋白表达水平,p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值明显升高(P<0.05).与NC组、miR-NC组相比,miR-19a组细胞p-JAK2、p-STAT3基因mRNA表达水平,p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值明显升高(P<0.05).结论 卵巢癌组织miR-19a高表达,miR-19a过表达可能通过Akt/mTOR通路促进卵巢癌细胞的增殖.     

川穹嗪对糖尿病肾病大鼠肾脏的保护作用及可能机制

目的 观察川穹嗪对糖尿病肾病大鼠肾脏的保护作用及其可能的信号机制.方法 将36只SD大鼠随机分为对照组(control)、糖尿病肾病模型组(DN)和川穹嗪治疗组(TMP),每组12只.于造模成功后第8周,生化分析仪检测各组大鼠血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、总蛋白(TP)、白蛋白丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)的含量;测定肾脏指数;HE染色观察各组大鼠肾组织病理学改变;ELISA方法检测各组大鼠肾组织IL-6、C反应蛋白(CRP)与肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达水平;Western blot方法检测各组大鼠肾组织中JAK激酶2(JAK2)、p-JAK2、信号转导与转录因子3(STAT3)及p-STAT3的蛋白表达.结果 川穹嗪能够降低糖尿病肾病大鼠血清中Scr、BUN含量(P＜0.05);降低糖尿病肾病大鼠肾脏指数,减轻肾脏的病理损伤(P＜0.05);降低糖尿病肾病大鼠肾组织IL-6、CRP与TNF-α水平(P＜0.05);下调糖尿病肾病大鼠肾组织p-JAK2及p-STAT3的蛋白表达(P＜0.05).结论 川穹嗪可能通过抑制JAK2/STAT3信号通路减轻糖尿病肾病大鼠的炎症反应.     

温补脾肾法对脾肾阳虚型UC大鼠JAK2/STAT3-SOCS6信号通路相关蛋白及基因表达的影响北大核心CSCD

目的:观察以温补脾肾法为指导的理中汤合四神丸对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎(UC)大鼠模型病变结肠组织中JAK2、STAT3、p-STAT3、SOCS6蛋白及基因表达的影响。方法:采用病证结合造模方法复制脾肾阳虚型UC模型,成模大鼠随机分为模型组、柳氮磺砒啶组(SASP组)、理中汤合四神丸高、中、低剂量组,16只/组,同时设16只大鼠作为空白组。空白组与模型组给予蒸馏水灌胃,各治疗组给予对应的药物及剂量灌胃治疗,连续21 d。HE染色观察大鼠结肠黏膜组织病理变化;免疫组化法检测大鼠结肠黏膜组织中JAK2、STAT3、p-STAT3、SOCS6蛋白表达情况;RT-qPCR检测大鼠JAK2、STAT3、SOCS6mRNA表达情况;ELISA检测大鼠组织和血清中TGF-β1、ICAM-1含量。结果:与空白组相比,模型组大鼠结肠黏膜组织JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达显著升高(P<0.01),JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白着色深,表达呈强阳性,SOCS6蛋白表达显著降低(P<0.01),SOCS6蛋白着色浅,表达呈弱阳性。JAK2、STAT3 mRNA表达显著升高,SOCS6 mRNA表达显著降低(P<0.01),组织和血清中TGF-β1含量显著降低(P<0.01),ICAM-1含量显著升高(P<0.01);与模型组相比,中药高、中剂量组及SASP组JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达显著降低(P<0.01),JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白着色浅,表达呈弱阳性,SOCS6蛋白表达显著升高(P<0.01),SOCS6蛋白着色深,表达呈强阳性。JAK2、STAT3 mRNA表达显著降低(P<0.01),SOCS6 mRNA表达显著升高(P<0.01),组织和血清中TGF-β1含量显著升高(P<0.01),ICAM-1含量显著降低(P<0.01)。结论:以温补脾肾法为指导的理中汤合四神丸可能通过抑制JAK2/STAT3-SOCS6信号通路的激活,调节免疫系统平衡,修复受损结肠黏膜,达到治疗UC的目的。     

黄精多糖对自身免疫性心肌炎大鼠JAK/STAT通路及心肌纤维化的影响

目的探讨黄精多糖(Polygonatum sibiricumpolysaccharide,PSP)对自身免疫性心肌炎(AM)大鼠Janus激酶/信号转导子和转录激活子(JAK/STAT)通路及心肌纤维化的影响。方法建立自身免疫性心肌炎大鼠模型,随机分为:模型组、PSP低剂量组、PSP中剂量组、PSP高剂量组、卡托普利组,每组12只,另取12只SD大鼠设为对照组,分组处理后,HE染色检测大鼠心肌组织病理变化;Masson染色检测大鼠心肌纤维化;以试剂盒检测大鼠心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量;酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)及转化生长因子-β1(TGF-β1)水平;免疫印记法检测各组大鼠心肌组织JAK/STAT3通路相关蛋白表达。结果对照组大鼠心肌组织无病理损伤及纤维化变性。与对照组相比,模型组大鼠可见心肌纤维化变性等病理损伤,心肌组织MDA含量、血清TNF-α、IL-6及TGF-β1水平显著升高(P<0.05),心肌组织SOD含量、JAK/STAT3通路相关蛋白p-JAK/JAK及p-STAT3/STAT3显著降低(P<0.05);与模型组相比,PSP低、中、高剂量组及卡托普利组大鼠心肌纤维化变性等病理损伤减轻,心肌组织MDA含量、血清TNF-α、IL-6及TGF-β1水平降低,心肌组织SOD含量、p-JAK/JAK及p-STAT3/STAT3升高(P<0.05);PSP高剂量组与卡托普利组大鼠相比,各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PSP可抑制自身免疫性心肌炎大鼠氧化应激及炎症反应,减轻心肌组织病理损伤及纤维化,可能通过激活JAK/STAT3信号通路实现。     

JAK2抑制剂对食管癌细胞增殖、凋亡及COX-2表达的影响

目的 研究食管癌细胞Eca-109增殖、凋亡及COX-2表达与信号转导子和激活子3（STAT3）信号传导通路的关系，明确以JAK2/STAT3为靶向的信号转导在Eca-109细胞中的分子调控机制。方法 将JAK2抑制剂AG490作用于Eca-109细胞，用MTT法检测细胞增殖；流式细胞仪、DNA琼脂糖电泳法及透射电子显微镜检测细胞凋亡；Western blot法检测细胞中JAK2、p-JAK2、p-Stat3及COX-2的蛋白表达变化；RT-PCR 检测COX-2 mRNA的变化。结果 AG490呈时间、剂量依赖性的抑制Eca-109细胞增殖并诱导凋亡，抑制JAK2/STAT3通路蛋白的表达，呈浓度依赖性地下调p-JAK2及p-Stat3蛋白的表达（P <0.05），并下调COX-2 mRNA及蛋白的表达（P <0.05）。结论 JAK2/STAT3信号传导通路调控AG490对Eca-109细胞作用的细胞内信号传导机制，最终通过下调COX-2表达影响Eca-109细胞的增殖并诱导凋亡。     

乙肝病毒X蛋白抑制小鼠足细胞系MPC5增殖并促进其凋亡

目的探讨乙肝病毒X蛋白(HBx)对条件永生型小鼠足细胞系(MPC5)增殖与凋亡的影响。方法用携带HBx基因的pEX质粒转染MPC5细胞,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)验证转染效率。实验分空白对照组(MPC5 group)、阴性对照组(MPC5-pEX-neo group)、HBx转染组(MPC5-pEX-HBx group)。MTT法检测足细胞存活率;流式细胞计量术检测细胞凋亡;Western blot检测细胞中nephrin、STAT3、JAK2、p-STAT3和p-JAK2、caspase-3蛋白表达。结果 HBx转染MPC5细胞48 h后HBx表达最高。HBx转染组中nephrin蛋白表达水平显著低于空白对照及阴性对照(均P0.01)。转染HBx基因后足细胞增殖明显受抑,同时凋亡率显著增高(均P0.01)。此外,HBx转染组STAT3、p-STAT3、JAK2和p-JAK2蛋白表达较空白对照及阴性对照组均显著增高(均P0.01), caspase-3在HBx转染组中的表达也显著增高(均P0.01)。结论 HBx可下调足细胞中nephrin蛋白表达,抑制足细胞增殖,并促进其凋亡的发生。其作用机制可能与STAT3/JAK2信号通路活化有关。     

Rab18通过JAK2/STAT3下调PLIN2并减少THP-1巨噬细胞脂质蓄积

目的：研究Rab18是否通过Janus激酶2(JAK2)/信号转导及转录激活因子3(STAT3)信号通路下调脂滴包被蛋白2(PLIN2)表达,并影响人THP-1巨噬细胞脂质蓄积。方法：采用氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）孵育人THP-1巨噬细胞不同时间（0、6、12和24 h）,用Western blot检测细胞内Rab18、JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3及PLIN2蛋白水平,使用油红O染色法观察细胞内脂质蓄积的变化。制备野生型、活化型和失活型Rab18巨噬细胞,予以ox-LDL孵育,Western blot和RT-qPCR检测细胞内Rab18、JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3及PLIN2蛋白水平,细胞免疫荧光技术观察巨噬细胞内p-JAK2和p-STAT3的核转位情况。用JAK2抑制剂AG490预处理活化型Rab18细胞,再用ox-LDL孵育该细胞,Western blot和RT-qPCR检测JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3及PLIN2蛋白水平,细胞免疫荧光技术观察巨噬细胞中PLIN2的表达,油红O染色和GPO-PAP酶法观察细胞...     

糖皮质激素调节JAK2/STAT5信号抑制小鼠气道重塑平滑肌细胞的增殖作用

目的 观察糖皮质激素(glucocorticoid, GCS)通过调节JAK2/STAT5信号通路,抑制小鼠气道重塑气道平滑肌细胞增殖的作用.方法 以卵白蛋白致敏和雾化激发制备慢性小鼠哮喘气道重塑模型,计数支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)中嗜酸性粒细胞(eosinophil, EOS)占白细胞总数的百分比;肺组织切片HE染色观察小鼠气道平滑肌厚度的病理改变;Western Blot检测肺组织中磷酸化p-JAK2和p-STAT5的蛋白表达.结果 糖皮质激素能显著降低哮喘模型小鼠BALF中EOS的百分比(P<0.05);糖皮质激素组小鼠气道平滑肌厚度低于模型组(P<0.05);糖皮质激素能显著降低p-JAK2和p-STAT5的蛋白表达(P<0.05).结论 糖皮质激素能通过调节JAK2/STAT5信号通路够有效缓解小鼠气道重塑气道平滑肌细胞增殖的作用,具有一定的气道保护作用.     

中药大黄对重症急性胰腺炎肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞凋亡的影响

目的:研究中药大黄对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肺泡巨噬细胞凋亡影响并探讨其作用机制。方法:牛磺胆酸钠建立大鼠SAP模型;流式细胞术检测大黄对SAP大鼠肺泡巨噬细胞损伤的影响;ELISA法检测大黄治疗的SAP大鼠肺泡巨噬细胞中TNF-α、NO含量;qRT-PCR法检测大黄治疗的SAP大鼠肺泡巨噬细胞中TNF-α、iNOS mRNA水平;Western blot检测大黄治疗的SAP大鼠肺泡巨噬细胞中p-JAK2、p-STAT3蛋白表达。结果:成功建立大鼠SAP模型;大黄治疗后,模型大鼠肺泡巨噬细胞中TNF-α、NO含量、TNF-α、iNOS mRNA表达及p-JAK2、p-STAT3蛋白表达均显著降低(P0.05)。结论:中药大黄可促进SAP大鼠肺泡巨噬细胞凋亡,其机制可能与失活JAK2/STAT3信号通路、抑制炎症因子分泌有关,可能为大黄的临床应用提供依据。     

高糖对肾小管上皮细胞系细胞因子表达的影响

目的观察高糖诱导肾小管上皮细胞中转化生长因子β1(TGF-β1)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏素(E-Cadherin)的改变及酪氨酸激酶(JAK)抑制剂AG490对其的影响。方法体外培养人肾近曲小管上皮细胞系(HKC),分别给予高糖和AG490干预,采用免疫沉淀和Western blot检测JAK2磷酸化的表达;Western blot检测α-SMA、E-cadherin及信号蛋白STAT1、STAT3等的水平;ELISA法测定细胞上清液中TGF-β1和Ⅰ型胶原的分泌;RT-PCR检测TGF-β1mRNA表达。结果与低糖组比较,高糖培养HKC中α-SMA、p-JAK2、p-STAT1和p-STAT3表达明显上调,E-Cadherin表达明显下调,TGF-β1mRNA表达增加;细胞上清液中TGF-β1、Ⅰ型胶原分泌增加。AG490明显抑制高糖刺激HKC中α-SMA表达的升高,减轻E-Cadherin表达下降程度,降低TGF-β1mRNA表达及TGF-β1、Ⅰ型胶原的分泌。结论JAK/STAT信号途径可能参与高糖诱导的HKC中TGF-β1和细胞外基质的分泌。