大鼠睾丸Leydig细胞的培养和鉴定

目的:研究体外培养大鼠睾丸Leyd ig细胞的有效方法。方法:原代培养大鼠睾丸Leyd ig细胞,用4 U/m l人绒毛膜促性腺激素(hCG)作用细胞,对照组未用hCG,放射免疫法测定培养液中睾酮浓度,3β羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)免疫组化染色观察睾丸Leyd ig细胞形态和生物学特性。结果:培养细胞成分均一、增殖旺盛、分化率高。接种72 h后大鼠睾丸Leyd ig细胞纯度达95%。接种后24 h内,hCG刺激组较对照组睾酮分泌量明显提高(P<0.05)。结论:体外培养的睾丸Leyd ig细胞可分泌高浓度的睾酮;睾丸Leyd ig细胞的纯化和培养方法的建立,可为中老年男性雄激素部分缺乏综合征睾酮替代治疗的基础和临床研究提供一条可行的思路。     

邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯对小鼠胎鼠睾丸及睾丸引带的影响

目的:研究邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)对小鼠胎鼠睾丸与睾丸引带形态结构及功能的影响,探讨隐睾发生的可能机制。方法:30只健康KM孕鼠随机均分为3组:空白对照组、玉米油对照组、DEHP组。DEHP组以剂量500mg/(kg.d)的DEHP灌胃作用于怀孕12～19d(GD12～GD19)的KM母鼠,观察DEHP对每胎胎鼠数、雌雄性胎鼠比例、雄性胎鼠体重、睾丸重量、睾丸引带形态结构、位置、睾丸到膀胱颈之间的相对距离(TBD)、颅侧悬韧带残留情况、引带内雄激素受体(AR)、雌激素受体(ER)、肌动蛋白、增殖细胞核抗原(PCNA)表达水平的影响。结果:DEHP对每胎胎鼠数、雌雄性胎鼠比例、雄性胎鼠体重无明显影响;DEHP可影响胎鼠睾丸重量及TBD;DEHP组睾丸均有一定程度的下降不全,睾丸引带形态结构无明显差异;光镜下见DEHP组睾丸生精小管、支持细胞存在明显的发育障碍,睾丸Leydig细胞明显增生;DEHP组睾丸引带AR阳性表达率降低(P<0.01)。结论:DEHP可通过抗雄激素效应导致睾丸引带功能障碍,使睾丸下降发生异常而诱导小鼠隐睾;同时造成睾丸Ser-toli细胞、睾丸Leydig细胞和生精细胞的发育障碍和功能改变。     

小鼠胚胎睾丸Leydig细胞培养、纯化及其功能研究

目的:探讨小鼠胚胎睾丸Leyd ig细胞体外培养、鉴定、纯化的方法,并进行形态学观察、分泌睾酮能力等生物学特性检测。方法:选择胎龄16 d的胎鼠睾丸,0.03%胶原酶Ⅰ消化,3β-羟基类固醇脱氢酶(HSD)染色鉴定及纯度测定,锥虫蓝染色检测细胞活率。放免法测定Leyd ig细胞不同培养时间及密度下分泌睾酮的水平。结果:Leyd ig细胞培养前和培养72 h后纯度分别为(45.10±1.66)%和(81.17±2.32)%;培养液中可检测到睾酮,睾酮水平与Leyd ig细胞数、培养时间相关,单个Leyd ig细胞睾酮分泌能力逐日下降。结论:该法分离的胚胎Leyd ig细胞纯度较高,生长性好,保持增殖和分泌睾酮的生物学特性,可应用于相关的研究。     

补肾方对自然衰老大鼠睾酮调节作用及机制研究

目的:探讨补肾方对自然衰老大鼠睾酮调节作用及机制,为临床治疗迟发性睾丸功能减退提供理论和实验依据。方法:将32只18月龄老年雄性SD大鼠随机分为4组,自然衰老模型组,补肾方低、中、高剂量组,每组8只;另选4月龄青年雄性SD大鼠8只作为正常对照。正常对照组、自然衰老模型组予生理盐水,补肾方低剂量、中剂量、高剂量组分别按生药量3.25、7.5、15.0 g/kg体重予中药复方连续灌胃,各组给药3周后处死。采用苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠睾丸组织形态,放免法检测大鼠血清睾酮水平,RT-PCR法检测大鼠类固醇合成急性调节蛋白(StAR)、细胞色素胆固醇侧链裂解酶(P450 scc)、3β-羟类固醇脱氢酶Ⅰ(3β-HSDⅠ)mRNA的相对表达。结果:睾丸组织病理切片显示补肾方干预后大鼠睾丸间质细胞数目增多,补肾方低、中、高剂量组血清睾酮水平[(6.74±1.56)、(8.50±1.99)、(12.41±2.91)nmol/L]与自然衰老模型组[(3.48±0.75)nmol/L]比较显著提高(P<0.05),睾酮合成相关酶StAR、P450 scc、3β-HSDⅠmRNA相对表达(StAR:0.74±0.29、0.83±0.32、1.35±0.50;P450 scc:0.72±0.36、1.02±0.30、1.41±0.37;3β-HSDⅠ:0.58±0.14、0.72±0.07、0.85±0.18)与自然衰老模型组(StAR:0.44±0.09;P450 scc:0.33±0.05;3β-HSDⅠ:0.34±0.02)比较均提高,其中高剂量组StAR,中、高剂量组P450 scc、3β-HSDⅠ的表达与自然衰老模型组比较差异有显著性(P<0.05)。结论:改善睾丸组织衰老的病理状态,提高睾酮合成酶表达可能是补肾方调节自然衰老大鼠睾酮水平的作用机制。     

有机磷农药-敌敌畏诱导大鼠尿道下裂动物模型睾丸组织的病理学初步观察

目的:探讨环境内分泌干扰物-有机磷农药敌敌畏导致尿道下裂发生的可能机制。方法:30只SD大鼠随机分为两组:实验组(20只)和对照组(10只)。于孕12~17 d分别以敌敌畏10 mg/(kg.d)和生理盐水灌胃。实验组产雄仔鼠88只,其中22只发生尿道下裂,对照组产雄仔鼠33只,无尿道下裂发生。实验组(尿道下裂鼠)和对照组各5只仔鼠喂养至性成熟,取其睾丸组织作常规石蜡切片分别用HE染色和用抗大鼠Calretin in抗体作SP免疫组化染色检测。结果:尿道下裂大鼠睾丸组织中间质细胞(Leyd ig)数量明显减少,生精小管数及形态无明显改变;尿道下裂大鼠睾丸组织中Calretin in阳性的Leyd ig细胞数明显少于对照组。结论:孕SD大鼠染毒敌敌畏农药后能导致雄性仔鼠睾丸组织中的Leyd ig细胞数量减少,推测环境内分泌干扰物质敌敌畏诱导大鼠尿道下裂发生的可能机制是敌敌畏的毒性作用致使胎鼠睾丸中的Leyd ig细胞受损,导致胎鼠睾丸产生的睾酮水平降低,在尿道形成过程中发生障碍而产生尿道下裂。     

衰老雄性大鼠睾丸组织脂质过氧化与睾酮水平和bcl-2基因表达的研究

目的:探讨衰老雄性大鼠睾丸组织脂质过氧化对血清睾酮(T)水平和睾丸间质(Leyd ig)细胞bcl-2基因表达的影响。方法:由D-半乳糖建立亚急性衰老模型,SD大鼠20只随机均分为对照(C)组和D-半乳糖(D)组,用分光光度计检测睾丸组织超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量、放免法检测血清中T水平以及免疫组化检测Leyd ig细胞bcl-2基因表达情况。结果:①SOD活性:D组(116±18.09)U/mg.prot显著低于C组(156±31.02)U/mg.prot(P<0.01);②MDA含量:D组(1.77±0.41)nmol/mg.prot明显高于C组(1.19±0.15)nmol/mg.prot(P<0.05);③血清T:D组(2.39±0.90)nmol/L显著低于C组(8.95±2.53)nmol/L(P<0.01);④bcl-2基因表达:D组(35.1±3.6)%明显低于C组(49.6±7.4)%(P<0.01)。结论:衰老大鼠睾丸组织脂质过氧化的变化影响T水平和Leyd ig细胞bcl-2基因表达。     

邻苯二甲酸二乙基己酯及代谢产物MEHP对幼鼠睾丸组织TGF-β1表达和端粒酶活性的影响

目的:观察邻苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)及代谢产物邻苯二酸-单-2-乙基己酯(MEHP)对幼鼠睾丸组织转化生长因子-β1(TGF-β1)表达和端粒酶活性的影响,探讨DEHP和MEHP损害生精功能可能的机制。方法:生后2周龄的Wistar雄性幼鼠96只,随机分8组,每组12只。随机选择1组行生理盐水[0.9%NS0.2 ml/(kg.d),喂养3周]灌胃,作为正常对照组(NC组);再选1组行环磷酰胺[CTX 100 mg/(kg.d),喂养1周]灌胃,作为阳性对照组(PC组);余各组分别用DEHP、MEHP按低剂量[100 mg/(kg.d),喂养3周]、中剂量[200 mg/(kg.d),喂养2周]、高剂量[300 mg/(kg.d),喂养1周]灌胃制作动物模型。观察不同时期、不同剂量下睾丸组织精子形态变化,光镜下计数精子头部及畸形率;应用免疫组化SABC法及RT-PCR法检查睾丸组织TGF-β1的表达,并测定面密度;ELISA法检查睾丸组织中端粒酶活性。结果:①睾丸组织内精子形态变化:用药组精子数量减少,出现精子断头、无钩、双尾等畸形精子;在光镜下精子计数,与NC组比较,用药各组精子头部显著减少(P<0.05),畸形率增加(P<0.05),但高剂量短时间用药组与低剂量长时间用药组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。②睾丸组织TGF-β1的表达变化:NC组低表达,DEHP及代谢产物MEHP染毒各组生精细胞内表达增多,PC组大量表达,阳性细胞呈黄褐色,主要分布于胞膜及胞质。NC组面密度为0.156 0±0.003 5、TGF-β1mRNA为1.51±0.20,PC组面密度为0.534 0±0.003 1、TGF-β1 mRNA为8.43±1.75;用药的DEHP组面密度均值为0.289 0±0.003 6、TGF-β1 mRNA为3.83±1.57,MEHP组面密度均值为0.284 0±0.003 1、TGF-β1 mRNA为3.51±1.41,用药各组与NC组、PC组比较差异有统计学意义(P<0.01),但高剂量短时间用药组与低剂量长时间用药组比较,差异无统计学意义(P>0.05);③睾丸组织中端粒酶活性:与NC组比较,用药各组睾丸组织中端粒酶活性下降(P<0.05),高剂量短时间用药组与低剂量长时间用药组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:DEHP及代谢产物MEHP对幼鼠生精功能有明显损害,其损害机制可能与DEHP及代谢产物MEHP诱导睾丸组织TGF-β1的表达水平升高、端粒酶活性降低有关。     

大鼠睾丸Leydig细胞体外增殖研究

目的:探讨通过优化细胞培养体系,实现Leydig细胞的体外增殖培养。方法:联合应用胶原酶消化、不锈钢滤网过滤及差速贴壁法获得3周龄雄性Wistar大鼠睾丸Leydig细胞,贴壁细胞以DMEM/F12培养液及优化培养体系培养,MTT法、细胞计数法检测培养细胞的增殖能力;分别对原代培养2h、4d细胞进行3β-HSD免疫化学染色及流式细胞术分析,检测细胞成分,同时检测培养细胞睾酮在hCG刺激下分泌能力变化。结果:优化培养体系能够明显促进3周龄大鼠睾丸Leydig细胞大量增殖,群体倍增时间为(2.26±0.31)d,传统培养体系培养细胞群体倍增时间为(16.32±2.14)d,两者差异有显著性(P<0.05);原代细胞经流式细胞术鉴定,3β-HSD阳性细胞所占比例分别为(54.3±7.1)%,培养4d后,增殖细胞3β-HSD阳性细胞率为(93.6±4.6)%。增殖细胞均有睾酮生成功能,在hCG刺激下睾酮分泌均明显上升(P<0.05)。结论:优化培养体系能够促进差速贴壁法获得的睾丸Leydig细胞大量增殖。     

光照应激对雄性大鼠生殖相关参数的影响

目的 观察比较光照应激状态下不同应激时间段SD大鼠生殖相关参数的变化.方法 建立SD大鼠的光照应激模型分为光照应激短期(2d、3d、4d、7d)和光照应激长期(14d、21d、28d),并分别取应激状态下SD大鼠睾丸、附睾称重,对附睾尾精子计数,HE染色观察睾丸结构,应用免疫组织化学和westernblot分析3 β-HSD表达,比较各实验组和对照组问上述指标的变化.结果 短期光照应激组(2d、3d、4d、7d)与对照组相比,大鼠体重、睾丸重量、附睾重量、精子数量没有明显变化(P>0.05),HE染色显示睾丸结构无明显变化,免疫组化和western blot显示3β-HSD表达无明显变化.长期光照应激组与对照组相比,大鼠重量、睾丸和附睾重量都有明显增加.与对照组相比,14 d实验组的附睾重量有显著性差异(P<0.05):21 d、28 d实验组的睾丸重量有显著差异(P<0.05),21 d、28 d实验组的体重、附睾重量和精子相对计数都有极显著差异(P<0.01).HE染色显示睾丸内生精小管变粗,管腔内生精细胞增多,免疫组化和western blot显示长期应激组14 d的3β-HSD相对表达量增加20.3%,有显著性差异(P<0.05);21d和28d实验组3β-HSD的相对含量分别增加30.4%和43.3%,差异极显著(P<0.01).结论 短期光照应激不能破坏大鼠机体内稳态的调节机制,对生殖的影响并不明显;而长期处于光照应激状态下的雄性大鼠,超出机体内稳态的调节能力,对生殖的影响不仅表现在体重、睾丸、附睾和附睾尾的重量增加,而且精子相对计数及睾丸结构都发生相应变化,3β-HSD表达量也明显增加.提示光照是影响大鼠生殖功能的一个因素.     

ATP50荧光表达载体构建及其在TM3小鼠睾丸Leydig细胞定位研究

目的:构建ATP50的荧光表达载体,研究其在原代培养的小鼠睾丸Leyd ig细胞中的表达和在TM3小鼠睾丸Leyd ig细胞中的定位。方法:原代培养小鼠睾丸Leyd ig细胞并利用3β-HSD染色法鉴定,应用PCR方法研究ATP50在小鼠睾丸Leyd ig细胞中的表达。利用BamH I和EcoR I酶切位点把ATP50克隆到pEYFP-N1。细胞转染和细胞荧光显微镜技术观察YFP-ATP50在TM3小鼠睾丸Leydig细胞的定位。结果:ATP50表达在原代培养的小鼠睾丸Leydig细胞中。TM3小鼠睾丸Leydig细胞中,绿色荧光的YFP-ATP50和红色荧光的线粒体标记物M ito-tracker有完全的共定位。结论:ATP50在小鼠睾丸Leydig细胞表达,成功构建了ATP50真核荧光蛋白表达载体,明确YFP-ATP50定位在Leydig细胞的线粒体。这些结果将对老年男性睾丸间质细胞睾酮合成功能障碍的研究提供重要的信息,有利于进一步深入研究。     

邻苯二甲酸二-(2-乙基)己酯致小鼠隐睾睾丸和附睾的组织病理学改变

目的 :探讨邻苯二甲酸二 (2 乙基 )己酯 (DEHP)引起的小鼠隐睾睾丸和附睾的组织病理学改变。　方法 :妊娠KM小鼠 4 0只 ,随机分成 5组 ,分别为正常对照组 8只、玉米油对照组 8只、己烯雌酚 (DES)组 8只、DEHP低剂量组 [DEHP 10 0mg/ (kg·d) ]9只和DEHP高剂量组 [DEHP 5 0 0mg/ (kg·d) ]7只。自妊娠第 12d开始到分娩后 3d ,分别持续经口给予DEHP 10 0mg/ (kg·d)、5 0 0mg/ (kg·d)和DES 10 0 μg/ (kg·d)及玉米油 ,观察仔代雄小鼠的隐睾发生率及隐睾睾丸和附睾的组织病理学改变。　结果 :DEHP 5 0 0mg/ (kg·d)组染毒小鼠的隐睾发生率显著增高 ,睾丸和附睾的体积明显减小、重量减轻 ;睾丸生精上皮发育明显异常 ,精曲小管变薄、萎缩 ,间质细胞异常增生 ,电镜下其隐睾精曲小管上皮和间质细胞均出现明显的超微结构改变。同时附睾管腔中的精子数显著减少甚至缺乏。　结论 :高剂量 [5 0 0mg/ (kg·d) ]DEHP可能具有与DES类似的作用 ,是一种诱发隐睾的重要因子。小鼠在孕期及哺乳期接触DEHP后可引起雄性仔鼠性分化异常 ,诱导隐睾发生、睾丸生精上皮损害和生精过程障碍 ,从而对雄性仔鼠生育力产生不利影响。以上作用存在明确的量 效关系。     

Biphasic effects of postnatal exposure to diethylhexylphthalate on the timing of puberty in male rats

Phthalate esters such as di(2-ethylhexyl)phthalate (DEHP), which are commonly found in cosmetics and in flexible plastics distributed by the food, construction, and medical products industries, have been classified as anti-androgens. High-dose DEHP exposure in utero is associated with decreased androgen levels. However, when administered after birth, low doses of DEHP (eg, 10 mg/kg body weight) may stimulate androgen production. In the present study, the potential of phthalate exposure to advance or delay the timing of puberty was assessed. Male Long-Evans rat pups were chronically subjected to low or high doses of DEHP, with the androgen-driven process of preputial separation serving as an index of pubertal timing. Rats were treated with 0, 10, 500, or 750 mg/kg body weight DEHP for 28 days starting at day 21 postpartum. The average age at which the animals completed preputial separation was measured in each group. The age of preputial separation was 41.5 +/- 0.1 days postpartum in controls (vehicle). The 10 mg/kg DEHP dose advanced pubertal onset significantly to 39.7 +/- 0.1 days postpartum, whereas the 750 mg/kg DEHP dose delayed pubertal onset to 46.3 +/- 0.1 days postpartum. The 10 mg/kg DEHP dose also significantly increased serum testosterone (T) levels (3.13 +/- 0.37 ng/mL) and seminal vesicle weights (0.33 +/- 0.02 g) compared with control serum T (1.98 +/- 0.20 ng/mL) and seminal vesicle weight (0.26 +/- 0.02 g), while the 750 mg/kg dose decreased serum T (1.18 +/- 0.18 ng/mL) as well as testes and body weights. Direct action of the DEHP metabolite, monoethylhexylphthalate (MEHP), on Leydig cell steroidogenic capacity was investigated in vitro. MEHP treatment at a low concentration (100 microM) increased luteinizing hormone-stimulated T production, whereas 10 mM concentrations were inhibitory. In conclusion, data from the present study indicate that DEHP has a biphasic effect on Leydig cell function, with low-dose exposure advancing the onset of puberty. High doses of DEHP, which are anti-androgenic, may also be outside the range of real environmental exposure levels.     

青春期前己烯雌酚暴露对SD大鼠睾丸发育及功能的影响

目的:研究青春期前己烯雌酚(DES)暴露对SD大鼠睾丸发育及功能的影响。方法:21日龄雄性SD大鼠90只,随机分为DES0.01、0.1、1.0、10.0μg/(kg.d)4个实验组和1个对照组(分别为Da、Db、Dc、Dd和C组,每组n=18)。于青春期前,即出生后第22d(postnatalday22,PND22)～35d(PND35),实验组每日皮下注射相应剂量的DES,共14d,对照组仅注射溶媒(玉米油)。观察各组大鼠睾丸下降时间。于青春期晚期(PND50)、性成熟后(PND64)和成年期(PND130)分3批(每批n=6)处死各组大鼠取材,测定睾丸重量,观察比较睾丸组织形态学变化,分析PND130大鼠附睾尾精子质量。结果:C、Da、Db、Dc和Dd组睾丸下降时间分别为PND26.17±1.94、26.83±1.47、28.68±1.03、33.50±1.87和41.50±2.74,其中Db、Dc和Dd组较C组明显延迟(P<0.05或P<0.01)。PND50时,C、Da、Db、Dc和Dd组单侧睾丸重量分别为(1.38±0.10)、(1.38±0.12)、(1.30±0.14)、(0.86±0.18)g和(0.73±0.27)g,其中Dc和Dd组较C组显著减轻(P<0.01);与C组比较,Db组仅有少数生精小管生精上皮中的细胞数目稍减少,Dc和Dd组生精小管发育较差、生精上皮中细胞数目减少、精子发生阻滞、间质细胞发育幼稚,其程度随DES暴露剂量增加而加重。PND64时,C、Da、Db、Dc和Dd组单侧睾丸重量分别为(1.60±0.06)、(1.62±0.11)、(1.58±0.08)、(1.47±0.10)g和(0.99±0.37)g,其中Dc和Dd组较C组显著减轻(P<0.05或P<0.01);Dc和Dd组睾丸组织形态学改变与PND50时类似,但总体较PND50有所改善。PND130时,各实验组与对照组比较,单侧睾丸重量差异无统计学意义(P>0.05),睾丸组织形态学改变难以鉴别出明显差异;C、Da、Db、Dc和Dd组大鼠附睾尾精子密度分别为(73.00±16.90)、(68.00±19.67)、(68.67±12.15)、(35.17±15.64)×106/ml和(19.13±5.17)×106/ml,其中Dc和Dd组精子密度较C组明显降低(P<0.01);与C组比较,Dd组精子活动率下降(P<0.01),Db、Dc和Dd组a级精子比例降低(P<0.05或P<0.01),Dd组b级精子比例降低(P<0.01)。结论:青春期前小剂量DES[0.01μg/(kg.d)×14d]暴露对SD大鼠睾丸发育及功能无明显影响,较大剂量DES[1.0～10.0μg/(kg.d)×14d]暴露对大鼠睾丸发育及功能有明显的近期(PND50和PND64)和较远期(PND130)毒性作用,该毒性作用随DES的暴露剂量增加而加重,随鼠龄增长而逐渐减退,其机制可能与间质细胞和支持细胞的发育及功能受损相关。     

DEHP与GEN孕期及哺乳期暴露对雄性子代成年大鼠生殖系统的影响

目的 探讨DEHP与GEN孕期及哺乳期暴露对雄性子代成年大鼠生殖系统发育的影响及其机制.方法 30只孕鼠于孕3 d（GD3）~子代出生后21 d（PND21）,每天按分组方案灌胃,观察对成年后（PND90）雄性子代生殖系统发育的影响.结果 孕期及哺乳期单一暴露于DEHP（250mg/kg）,精子密度及（a＋b）级活动率较对照组下降.单一暴露于GEN（400mg/kg）,脏器系数、精子质量、睾丸附睾组织学等较对照组无显著性变化.孕期及哺乳期同时暴露于DEHP（250 mg/kg）及低剂量GEN（50mg/kg）,精子质量、组织学表现较DEHP单一暴露明显改善.孕期及哺乳期同时暴露于DEHP（250 mg/kg）及高剂量GEN（400mg/kg）,睾丸系数、前列腺系数、精子质量、组织学改变较空白组及DEHP或GEN单一暴露损害明显加重.结论 DEHP单一暴露可导致精子质量下降,GEN单一暴露并未表现出明显生殖毒性,低剂量GEN对DEHP造成的损害具有一定的拮抗作用,高剂量GEN可加重 DEHP造成的损害.     

从术后时间及环孢霉素A剂量探讨男性肾移植患者的授孕时机

目的:探讨男性肾移植患者术后授孕比较适合的时机。方法:将26例肾移植术后不同时期以及应用环孢霉素A(CsA)不同剂量的患者分为3组:A组7例,肾移植术后<6个月,CsA剂量为4.1～6mg/(kg.d);B组11例,肾移植术后6个月～2年,CsA剂量为2.1～4mg/(kg.d);C组8例,肾移植术后>2年,CsA剂量为1.3～2mg/(kg.d);对上述患者的精液进行检测,并与12例正常男性的精液进行比较。结果:术后不同时期以及CsA不同剂量患者的精液pH值、精液体积、精子存活率和精子密度方面,各组间差异无显著性(P>0.05);但是在精子活动力、精子头部缺陷方面,肾移植术后<6个月与2年后比较,差异有显著性(P<0.05)。结论:男性肾移植患者选择手术2年后授孕是比较适合的时机。     

Short-term effects of di-（2-ethylhexyl） phthalate on testes,liver, kidneys and pancreas in mice

Aim： To determine the biochemical effect of di-（2-ethylhexyl） phthalate （DEHP） on testes, liver, kidneys and pancreas on day 10 in the process of degeneration of the seminiferous epithelium. Methods： Diets containing 2% DEHP were given to male Crlj：CDI（ICR） mice for 10 days. The dose of DEHP was 0.90±0.52 mg/mouse/day. Their testes, livers, kidneys and pancreata were examined for detection of mono-（2-ethylhexyl） phthalate （MEHP）, nitrogen oxides （NOx） produced by peroxidation of nitric oxide （NO） with free radicals, and lipid peroxidation induced by the chain reaction of free radicals. Results： Histological observation and serum analysis showed the presence of severe sperrnatogenic disturbance, Leydig cell dysfunction, liver dysfunction and dehydration. Unexpectedly, the concentration of MEHP in the testes was extremely low compared with that in the liver. However, the concentration of the NOx in the testes was as high as the hepatic concentration. Furthermore, free radical-induced lipid peroxidation was histochemically detected in the testes but not in the liver. Conclusion： The results indicate that DEHP-induced aspermatogenesis is caused by the high sensitivity of the testicular tissues to MEHP rather than the specific accumulation or uptake of circulating MEHP into the testes.     

Coadministration of active phthalates results in disruption of foetal testicular function in rats

The reproductive effects of the coadministration of di-2-(ethylhexyl) phthalate (DEHP) and di-butyl phthalate (DBP) were studied in both foetal and adult male rat offspring exposed in utero . Pregnant Wistar rats were treated by oral gavage from gestation day 13 to 21 with vehicle control, 150 mg DEHP/kg body weight (bw)/day, 100 mg DBP/kg bw/ or a combination of the two compounds (DEHP 150 + DBP 100 mg/kg bw/day). An additional group of dams received 500 mg DBP/kg bw/day. A significant decrease in foetal testicular testosterone levels was observed in animals exposed to 500 mg DBP/kg/day or the phthalate mixture. Similarly, histological analysis of the foetal testis revealed that the coadministration of DEHP and DBP was able to increase the diameter of seminiferous cords and induce gonocyte multinucleation at doses that individually had no significant effects on these variables. However, in the phthalate mixture group, no significant changes were observed in anogenital distance and nipple retention, variables that are used to indicate possible anti-androgenic effects. Also, the adult endpoints investigated, that included reproductive organ weights and the number of spermatids per testis, were unaffected by any treatment regimen. Overall, coadministration of DEHP and DBP in utero significantly reduced testicular testosterone levels and resulted in misshapen seminiferous cords and gonocyte multinucleation in rat foetal testis. Our results also confirm that these foetal endpoints seem to be the most sensitive markers of prenatal phthalate exposure.     

邻苯二甲酸二(2-乙己基)酯致小鼠睾丸基因组DNA甲基化水平变化分析

目的:探讨增塑剂邻苯二甲酸二(2-乙己基)酯(DEHP)作用于怀孕小鼠后,其仔代睾丸基因组DNA甲基化水平的改变情况。方法:妊娠KM小鼠随机分为3组:正常对照组、玉米油对照组和DEHP实验组。自妊娠12.5 d到生后第3天分别持续经口予以玉米油和DEHP[500 mg/(kg.d)],于生后第7天取仔代睾丸,应用甲基敏感扩增多态性(MSAP)技术,对仔鼠睾丸组织DNA进行EcoRⅠ/MspⅠ和EcoRⅠ/HpaⅡ两种酶切反应,经ABI 3730DNA自动测序仪电泳及检测后,运用Genescan3.1分析扩增谱带。结果:对CCGG位点,DEHP实验组小鼠仔代睾丸组织DNA甲基化程度明显增高,其甲基化水平为(34.03±3.05)%;而正常对照组和玉米油对照组小鼠仔代睾丸组织基因组DNA甲基化程度分别为(28.37±2.37)%和(28.58±2.45)%。DEHP实验组与正常对照组和玉米油对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:DEHP作用孕鼠后可导致仔代睾丸基因组DNA甲基化水平改变,影响基因组表观遗传修饰改变,可能是导致生殖系统损害的重要毒理机制之一。