快速检测日本血吸虫感染性钉螺LAMP试剂盒的建立及应用

目的构建快速检测日本血吸虫感染性钉螺环介导同温DNA扩增（LAMP）试剂盒,用于血吸虫病流行区感染性钉螺调查。方法采用碱裂解法制备钉螺基因组DNA样品,以缩短检测过程中样品DNA制备时间;对LAMP试剂进行组合优化,采用染料显色方法判定LAMP结果,以减少LAMP检测的操作步骤,避免污染,减少假阳性结果产生;建立批量检测钉螺的LAMP方法,以适用于血吸虫病防治现场大规模钉螺筛查与有感染性钉螺地块的调查。将以上优化技术及试剂整合成快速检测日本血吸虫感染性钉螺LAMP试剂盒。结果制备的日本血吸虫感染性钉螺LAMP检测试剂盒可用于血吸虫流行区现场钉螺快速检测,检测时间可由原来的6h缩短为2h,方法的灵敏性与常规LAMP法相似。该试剂盒能检测出感染后1周钉螺,能对现场钉螺进行大批量检测。结论建立的LAMP试剂盒用于日本血吸虫感染性钉螺检测快速、特异、操作简便,适用于日本血吸虫病流行区感染性钉螺调查。     

重组酶介导的核酸等温扩增荧光法快速检测 日本血吸虫感染性钉螺

目的　建立重组酶介导的核酸等温扩增荧光（Recombinase aided amplification,RAA）法快速检测日本血吸虫感染性钉螺技术,并探索钉螺样品的最佳处理方式。方法　将钉螺样本分成3组,每组均含7个亚组,其中6个亚组分别为50只阴性钉螺中混合1、2、3、4、5、10只日本血吸虫感染性钉螺,1个亚组为100只阴性钉螺中混合1只感染性钉螺。3组钉螺分别采用压碎去壳核酸试剂盒提取法、压碎去壳核酸粗提法和直接压碎带壳核酸粗提法进行处理,并分别进行荧光RAA与PCR法检测,对检测结果进行比较。结果　建立了荧光RAA检测技术,工作温度为39 ℃,30 min内即可完成日本血吸虫感染性钉螺检测。钉螺群体样本采用压碎去壳核酸试剂盒提取法处理后,荧光RAA法最低可检测到100只阴性钉螺中混合1只感染性钉螺,PCR法最低可检测到50只阴性钉螺中混合1只感染性钉螺;采用压碎去壳核酸粗提法处理后, 荧光RAA法最低可检测到100只阴性钉螺中混合1只感染性钉螺,PCR法最低可检测到50只阴性钉螺中混合3只感染性钉螺;采用直接压碎带壳核酸粗提法处理后,荧光RAA法最低可检出50只阴性钉螺中混合10只感染性钉螺,PCR法仅可检测出50只阴性钉螺中混合10只感染性钉螺。结论　成功建立了钉螺群体样本中日本血吸虫感染性钉螺快速检测的荧光RAA法,该方法具有快速、灵敏、操作简便等特点;压碎去壳核酸粗提法为钉螺样品的最优处理方式。     

重组酶介导的核酸等温扩增荧光法检测日本血吸虫感染性钉螺的效能评价

目的　评价重组酶介导的核酸等温扩增（recombinase?aided amplification,RAA）荧光法检测日本血吸虫感染性钉螺的效能。方法　采用群体法检测。每50只钉螺作为1个检测样本,阴性样本不含感染性钉螺,阳性样本含不同数量感染性钉螺。设置阴性样本10个和分别含有1、2、3只感染性钉螺的阳性样本各10个,40个样本随机分组后,以盲法经荧光RAA法检测,并以逸蚴法检测结果为金标准,计算荧光RAA法检测灵敏度、特异度、正确指数及符合率。设置阴性钉螺样本5个和分别含有1、2、3只感染性钉螺的阳性样本各5个,20个样本随机分组后,采用配对设计法对同一个样本以盲法分别经压碎镜检法和荧光RAA法进行检测并比较检测结果。 结果　荧光RAA法检测30个阳性样本,29个检测结果为阳性,灵敏度为96.67%;检测10个阴性样本,其中8个检测结果为阴性,特异度为80.00%;约登指数为0.77,同一样本重复检测10次符合率为100%。荧光RAA法与压碎镜检法检测感染性钉螺结果差异无统计学意义（[χ2] = 0,P > 0.05）,检测结果与实际符合率分别为95.00%（19/20）和90.00%（18/20）。结论　荧光RAA法对日本血吸虫感染性钉螺具有良好检测效能,在日本血吸虫感染性钉螺筛查中具有一定应用前景。     

改良压碎逸蚴法检测感染性钉螺

目的评价改良压碎逸蚴法检测感染性钉螺的检出率和工效。方法采用双盲对照实验,以压碎法作为金标准,比较改良压碎逸蚴法及压碎法的感染性钉螺检出率,并对尾蚴数进行定量。在现场应用中比较改良压碎逸蚴法、压碎法和逸蚴法的工效。结果改良压碎逸蚴法检出率为100％,每只感染性钉螺体内含尾蚴数（4778±1157）只,一定容积水样检获的尾蚴数与感染性钉螺数呈正相关。改良压碎逸蚴法的工效是压碎法的18．2倍,是逸蚴法的17．3倍。结论改良压碎逸蚴法能快速检测感染性钉螺,并能对感染性钉螺和尾蚴数定量,适用于大批量分处（段）检测阳性钉螺。     

中国大陆钉螺等位基因位点研究

检测安徽、上海、江苏、浙江、江西、湖南、湖北、四川、云南９省（市）的９地代表性钉螺的ＡＡＴ、ＡＣＰＨ、ＡＫ、ＡＯ、ＡＰＨ、ＣＫ、ＥＳＴ、ＧＤＨ、ＧＰＩ、Ｇ６ＰＤ、ＨＢＤ、ＩＳＤＨ、ＬＡＰ、ＬＤＨ、ＭＥ、ＭＤＨ、ＭＰＩ、ＮＡＤＤ、ＯＣＴ、ＰＧＭ、６ＰＧＤ、ＳＤＨ、ＳＯＤ、ＸＤＨ２４种酶。检得４０个等位基因位点，１１７个等位基因；其中变异最大的位点是ＧＰＩ和ＰＧＭ－Ⅰ。２２个位点的等位基因在３个以上。多态位点酶有１４个，占所测酶的５８．３３％。表明中国大陆钉螺存在遗传多态现象。同时发现ＰＧＭ、ＭＤＨ酶是中国大陆钉螺及日本血吸虫共有的多态位点酶，为虫、螺两者相互关系的研究提供新的线索。     

2018年安徽马鞍山市血吸虫病传播风险监测

目的 及时发现 ２０１８ 年马鞍山市血吸虫病传播风险,为制订防治对策提供科学依据。 方法 在马鞍山市选取 １１ 个重点环境,采用系统抽样法查螺,应用解剖镜检法和 ＬＡＭＰ 法检测钉螺感染血吸虫情况;采集新鲜野粪,采用集卵孵化法检测其含血吸虫卵情况。 另外抽取 ４ 个环境,采用鼠笼法测定水体的感染性。 结果 共计开展钉螺调查 ２６． ９ ｈｍ２ ,采用解剖镜检法检测钉螺 １ ０３８ 只,未发现感染螺;采用 ＬＡＭＰ 法检测 ２５ 管混合样本,其中 ４ 个样本检出阳性。 在 ４ 个环境捡获新鲜野粪,其中牛粪 ３ 份、羊粪 １１ 份、犬粪 ３份、兔粪 １ 份,经实验室检测全部阴性。 共计投放哨鼠 ８５ 只,经解剖后未发现阳性。 结论 马鞍山市部分地区,尤其是渔船民集散地和多年来未开展药物灭螺工作的湖阳镇,血吸虫病传播风险依然较高。 少数存在耕牛淘汰不彻底和羊、犬等家畜散养现象的区域,以及野生哺乳动物活动频繁的有螺区域,血吸虫病潜在传播风险不容忽视。     

急性髓系白血病Bcl—2基因表达及其临床意义

目的：探讨Ｂｃｌ－２基因在急性髓系白血病（ＡＭＬ）中的作用。方法：应用ＡＰＡＡＰ法检测６７例ＡＭＬ患者骨髓单个核细胞Ｂｃｌ－２基因表达，半固体培养法检测ＣＦＵ－Ｌ形成能力，并观察临床化疗效果．结果：发现ＡＭＬ患者Ｂｃｌ－２基因表达显著高于正常对照组（Ｐ〈０．００１），分化较成熟的Ｍ３型白血病表达率显著低于其它各亚型白血病（Ｐ〈０．０１），Ｂｃｌ－２蛋白表达表达与ＣＦＵ－Ｌ形成无相关性同，与患者外周     

钉螺压碎器批量检测钉螺应用效果

目的评价钉螺压碎器在批量检测血吸虫感染性钉螺中的应用效果。方法制作钉螺压碎器和逸蚴三角瓶,将未感染血吸虫的钉螺按50、100、200、300只分成4组,分别装入逸蚴三角瓶中,每组10瓶;从每组中随机选3瓶,将实验室人工培养的血吸虫感染性钉螺12只分别投入各瓶,每瓶1只;将装有感染性钉螺的逸蚴瓶放回各组统一编号。用钉螺压碎器压碎钉螺,记录各组碎螺率、施压次数与时间;待钉螺全部被压碎后,加水并取水膜至显微镜下观察,记录尾蚴数量并计算各组尾蚴检出率。现场采集钉螺,用压碎法和钉螺压碎器改良压碎逸蚴法(压逸法)进行检测,计算二者的符合率。结果采用钉螺压碎器压碎50、100、200、300只钉螺,各组碎螺率均为100%,每组平均施压次数分别为15.70、23.20、32.20、39.20次,平均施压时间分别为1.01、1.70、2.00、3.00 min,施压次数、时间与批量钉螺只数呈正相关(r=0.68、0.73,P均0.01);各组尾蚴检出率均为100%。现场应用中,压碎法检测钉螺109只,钉螺压碎器压逸法检测620只,均未发现感染性钉螺,两种方法符合率为100%。结论钉螺压碎器操作简单、省力,具有现场推广应用价值。     

逸蚴法检查邛海周边环境钉螺感染情况的报告

目的 观察四川山区钉螺的感染和选蚴情况。方法用选蚴法检查钉螺，观察钉螺选蚴的时间、数量和尾蚴的存活时间；用压碎法计数部分感染性钉螺体内的尾蚴数；用压碎法抽查部分选蚴法阴性的钉螺。结果 选蚴法共检查10021只钉螺，检出感染性钉螺121只，感染性钉螺在入水后4—6h为选蚴高峰，室温存活24h的尾蚴运动活跃，感染性钉螺体内的平均尾蚴数为1595条，钉螺逸出的尾蚴占钉螺体内尾蚴数约10％，逸蚴法仅能检查出45．45％的感染性钉螺。结论 逸蚴法可检查出约一半的感染性钉螺，检出率低于压碎法，但逸蚴法可保存感染性钉螺为后期实验使用。     

恶性疟原虫Fcc—1／HN株MSP1 19基因的体外扩增及鉴定

本文根据恶性疟原虫ＭＳＰ１ １９已知序列，自行设计一对用于特异扩增ＭＳＰ１Ｃ 端１９肽基因的引物Ｐ１，Ｐ２在Ｐ１引物中引入Ｓａｌ Ｉ酶切位点及ＡＴＧ起始密码子，在Ｐ２引物中引入Ｘｂａ Ｉ酶切位点及终止密码子，经ＰＣＲ扩增获得３６３ｂｐ大小片段，与预期大小相符，采用“压碎与浸泡法”纯化回收ＰＣＲ产物，ＰＣＲ产物经套式ＰＣＲ及酶切鉴定证实与预期大小相符。采用“压碎与浸泡法”纯化回收ＰＣＲ产物，ＰＣＲ产     

改良压碎逸蚴法现场检测感染性钉螺效果

评价改良压碎逸蚴法 （压逸法） 现场检测感染性钉螺效果。方法 方法 2011年4-5月, 在湖北省荆州市进行查螺, 以村为单位随机分组, 比较压逸法和压碎法现场检测感染性钉螺的符合率、 检出率及人力投入。结果 结果 检测14个有螺环境, 压逸法和压碎法感染性螺点检出符合率为100%。春季查螺, 压逸法检测539个有螺村、 3 536个螺点, 压碎法检测 671个有螺村、 11 375个螺点, 两法对感染性螺点村的检出率分别为25.79%和28.46 %, 差异无统计学意义 （χ2 = 1.079 5, P＞0.05）; 对感染性螺点的检出率分别为5.57%和3.66%, 差异有统计学意义 （χ2 = 95.464 1, P＜0.01）。压逸法比压碎法减少人力投入87.86%, 平均每乡 （镇） 节省人力12.95人⋅ d。结论 结论 压逸法快速确定感染性螺点效果明显, 定性准确, 节省人力投入, 适用于疫区批量检测感染性钉螺及感染性钉螺环境 （段）     

中国在陆钉螺等位基因位点研究

检测安徽、上海、江苏、浙江、江西、湖南、湖北、四川、云南９个省（市）的９地代表性钉螺的ＡＡＴ、ＡｃＰＨ、ＡＫ、ＡＯ、ＡＰＨ、ＣＫ、ＥＳＴ、ＧＤＨ、ＧＰＩ、Ｇ６ＰＤ、ＨＢＤ、ＩＳＤＨ、ＬＡＰ、ＬＤＨ、ＭＥ、ＭＤＨ、ＭＰＩ、ＮＡＤＤ、ＯＣＴ、ＰＧＭ、６ＰＧＤ、ＳＤＨ、ＳＯＤ、ＸＤＨ２４种酶。检得４０个等位基因位点，１１７个等位基因；其中变异最大的位点是ＧＰＩ和ＰＧＭ－Ｉ。２２个位点的等位基因在３个以上     

8—甲氧基补骨脂素对人离体肺动脉收缩的影响

目的通过观察８－甲氧基补骨脂素（８－ＭＯＰ）对人肺动脉收缩的影响，探讨８－ＭＯＰ舒张肺动脉的作用和机制，为８－ＭＯＰ进一步用于降低肺动脉高压提供客观依据。方法采用离体肺动脉平滑肌收缩的实验方法。结果（１）２×１０－５ｍｏｌ／Ｌ的８－ＭＯＰ可使１０－６ｍｏｌ／Ｌ的去甲肾上腺素（ＮＡ）所致收缩的肺动脉环舒张原张力的８８％，其中７例无血管内皮者舒张８３％，４例内皮细胞完好者舒张９７％；（２）经２×１０－５ｍｏｌ／Ｌ的８－ＭＯＰ预处理肺动脉环后，１０－６ｍｏｌ／Ｌ的ＮＡ收缩肺动脉环张力被抑制８９％；（３）上述浓度的８－ＭＯＰ可使ＮＡ收缩肺动脉环的累积量－效曲线不平行右移，最大收缩反应被抑制５５％，抑制参数ＰＤ′２为４．７９。结论提示８－ＭＯＰ有理想的舒张人肺动脉作用，其作用可不依赖于肺动脉内皮细胞的存在，８－ＭＯＰ有可能会成为一种有效降低肺动脉高压药物。     

钉螺经不同的浸泡后酶组织学变化的观察

目的 为研究槟榔碱（Ａｒｅｃｏｌｉｎｅ）灭螺增效的作用机制。方法 用加入和未加入增效剂的灭螺药物浸泡钉螺２４ｈ后,观察不同浓度的Ａｒｅ单用或杀螺剂合用对钉螺中枢神经节Ｍｇ＾２＋－ＡＴＰａｓｅ、ＣｈＥ、ＳＤＨ、ＬＤＨ的变化。结果 ６．２５同Ａｒｅ浸泡钉螺２４ｈ后,其中枢神经节Ｍｇ＾２＋－ＡＴＰａｓｅ被明显破坏,ＣｈＥ轻度破坏;１．５６ｍｇ／Ｌ Ａｒｅ与１．２５ｍｇ／Ｌ ＮａＰＣＰ、０．２５ｍｇ／Ｌ     

人心肌肌凝蛋白轻链的生化特性及其临床意义

测定人心肌肌凝蛋白（Ｍｙｏｓｉｎ）、肌凝蛋白轻链（Ｍ－ＬＣ）、重链（Ｍ－ＨＣ）的ＡＴＰ酶活性，结果Ｍ－ＬＣ的Ｍ－ＬＣＡＴＰ酶活性略高于肌凝蛋白ＡＴＰ酶活性，Ｍ－ＨＣ无ＡＴＰ酶活性。同时采用ＥＬＩＳＡ方法测定９６例正常人及４７例心肌梗塞病人，结果正常人血清Ｍ－ＬＣ１平均值为５．９６ｎｇ／ｍｌ，心肌梗塞病人为７３．５ｎｇ／ｍｌ（Ｐ＜０．００１）。心肌酶谱与Ｍ－ＬＣ１对心肌梗塞诊断符合率比较，Ｍ－ＬＣ１诊断符合率为１００％，ＣＰＫ同功酶ＭＢ为９０．６％。本组制备的单抗与兔心肌肌凝蛋白无交叉反应，抗鸡心肌Ｍ－ＬＣ的单抗与本组提纯的Ｍ－ＬＣ１亦无亲和反应，说明人心肌Ｍ－ＬＣ１单抗具有种属特异性。     

编码恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1的17区片段的核酸疫苗诱？…

目的 初步研究编码恶性疟原虫裂殖子表面蛋白１（ＭＳＰ１）的１７区片段的核酸疫苗（ＶＲ１０１２／ＭＳＰ１－１７）诱导小鼠的体液免疫反应。方法 ＢＡＬＢ／ｃ小鼠和Ｃ５７ＢＬ／６小鼠分别经每次每只２００μｇ／１００μｌ和１００μｇ／１００μｌ的ＶＲ１０１２／ＭＳＰ１－１７三闪肌注免疫后，用ＥＬＩＳＡ间接法检测铭疫鼠血清中抗ＭＳＰ１１７区的抗体。结果 两种不均产生明显的抗ＭＳＰ１１７区的抗体，ＢＡＬＢ／ｃ     

重组酶介导核酸等温扩增荧光法用于日本血吸虫感染性钉螺早期检测的研究北大核心CSCD

目的探索重组酶介导的核酸等温扩增(recombinase aided amplification,RAA)荧光法用于日本血吸虫感染性钉螺早期检测的可行性。方法用日本血吸虫毛蚴人工感染200只湖北钉螺,随机分为阳性对照组和实验组各100只,另取100只未感染钉螺作为阴性对照组。将阳性对照组钉螺饲养至70 d,通过逸蚴法观察感染情况并计算阳性率。实验组钉螺分别在3 h以及5、20、40、70 d随机取20只,压碎镜检,同时提取钉螺软体DNA,进行荧光RAA法检测,获得不同时间点的阳性率,并与阳性对照组相比较。通过二代测序法对RAA检测阳性的特异性扩增产物进行测序鉴定。结果毛蚴感染后3 h、5 d、20 d、40 d、70 d实验组钉螺RAA法检测阳性率分别为60%、60%、65%、60%、70%,压碎镜检的阳性率分别为0、0、0、15%、65%,除70 d外其余时间点两种检测方法的阳性率差异均有统计学(χ^2=17.14,χ^2=17.14,χ^220 d=19.26,χ^2=8.64,均P<0.01);各时间点间阳性率差异无统计学意义(χ^2=0.68,P>0.05),各时间点阳性率与阳性对照组阳性率64.6%比较差异均无统计学意义。RAA扩增产物经二代测序后与数据库比对,确认为血吸虫特异性基因片段。结论 RAA荧光法敏感、特异,可用于日本血吸虫感染性钉螺的早期检测。     

SLE发病中可溶性细胞间粘附分子-1变化的研究

目的：研究呆溶性细胞间粘附分子－１在系统性红斑狼疮中的变化。方法：用双抗体夹心ＥＬＩＳＡ方法对２５例活动期ＳＬＥ病人血清和末梢血单个核细胞培养上清液ｓＩＣＡＭ－１水平进行检测。对部分稳定期病人重复检测。结果：活动期ＳＬＥ病人血清ｓＩＣＡＭ－１水平较正常对照组明显增高，活动期ＳＬＥ病人ＰＢＭＣ培养上清液中ｓＩＣＡＭ－１水平低于正常对照组，但两组间无明显差异。     

检测日本血吸虫感染性钉螺PCR方法的建立

目的 建立灵敏、特异的检测日本血吸虫感染性钉螺的PCR方法。 方法 根据日本血吸虫18S小亚基单位核糖体核酸（18S-rRNA）基因设计1对引物，建立检测日本血吸虫感染性钉螺的PCR方法。测定PCR产物的DNA序列，稀释血吸虫毛蚴DNA进行PCR方法的灵敏性试验，扩增单尾尾蚴感染的钉螺DNA进行交叉反应试验，并根据不同稀释度的感染性钉螺DNA的扩增结果来验证PCR的群体检测效果。 结果 PCR扩增日本血吸虫感染性钉螺，得到了与靶DNA片段位置相同的产物，测序片段长度为469 bp，与靶DNA相同且序列一致，并将序列登录GenBank(注册号：DQ442999)。扩增阴性钉螺无产物出现。灵敏性试验提示，PCR可检出日本血吸虫毛蚴DNA的最低浓度为40 pg/μl；交叉反应试验显示，PCR方法不能扩增出单尾尾蚴感染钉螺的DNA；群体检测试验表明，PCR可检出感染性钉螺提取的DNA最高稀释度为1∶640。 结论 初步建立的检测日本血吸虫感染性钉螺的PCR方法灵敏、特异且具有良好的群体检测效果。     

重组酶介导核酸等温扩增荧光法用于日本血吸虫感染性钉螺早期检测的研究

目的探索重组酶介导的核酸等温扩增(recombinase aided amplification,RAA)荧光法用于日本血吸虫感染性钉螺早期检测的可行性。方法用日本血吸虫毛蚴人工感染200只湖北钉螺,随机分为阳性对照组和实验组各100只,另取100只未感染钉螺作为阴性对照组。将阳性对照组钉螺饲养至70 d,通过逸蚴法观察感染情况并计算阳性率。实验组钉螺分别在3 h以及5、20、40、70 d随机取20只,压碎镜检,同时提取钉螺软体DNA,进行荧光RAA法检测,获得不同时间点的阳性率,并与阳性对照组相比较。通过二代测序法对RAA检测阳性的特异性扩增产物进行测序鉴定。结果毛蚴感染后3 h、5 d、20 d、40 d、70 d实验组钉螺RAA法检测阳性率分别为60%、60%、65%、60%、70%,压碎镜检的阳性率分别为0、0、0、15%、65%,除70 d外其余时间点两种检测方法的阳性率差异均有统计学(χ■=17.14,χ■=17.14,χ~220 d=19.26,χ■=8.64,均P0.01);各时间点间阳性率差异无统计学意义(χ~2=0.68,P0.05),各时间点阳性率与阳性对照组阳性率64.6%比较差异均无统计学意义。RAA扩增产物经二代测序后与数据库比对,确认为血吸虫特异性基因片段。结论 RAA荧光法敏感、特异,可用于日本血吸虫感染性钉螺的早期检测。