CK19联合hMAM检测乳腺癌循环肿瘤细胞的临床价值

目的:探讨细胞角蛋白19(cytokeratin 19,CK19)和人乳腺珠蛋白(human mammaglobin,hMAM)在检测乳腺癌外周血循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)中的临床价值。方法:应用实时荧光定量PCR法联合2种生物标志物CK19和hMAM检测乳腺癌循环肿瘤细胞的阳性率,并分析它们与患者临床病理特征的相关性。结果:乳腺癌患者CK19、hMAM及二者联合检测的阳性率分别为45.5%(20/44)、38.6%(17/44)和56.8%(25/44)。CK19联合hMAM检测的阳性率与患者的淋巴结转移状态相关(P=0.031)。治疗前乳腺癌患者CK19、hMAM及二者联合检测的阳性率均显著高于健康对照组(P=0.000 3、P=0.000 1和P=0.000 1);两个化疗周期后,联合检测结果由阳性转为阴性的患者在TNMⅢ期和Ⅳ期中分别为5例和4例,转阴率差异有统计学意义(P=0.025 3和P=0.045 5);但在TNMⅠ和Ⅱ期患者中,CK19、hMAM或二者联合检测的阳性患者经化疗后其数量均下降,且联合检测的阳性患者数量仍高于单检测的阳性患者数量,但差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:CK19联合hMAM可作为诊断乳腺癌患者循环肿瘤细胞的生物标志物,对于指导乳腺癌患者的早期微转移、治疗和预后判断具有重要意义。     

早期乳腺癌hMAM mRNA阳性循环肿瘤细胞检测及其临床意义

 目的 研究早期乳腺癌hMAM mRNA阳性循环肿瘤细胞检测的临床意义。 方法 巢式RT PCR检测50例早期乳腺癌患者术后辅助治疗前外周血hMAM mRNA阳性细胞,随访。24例乳腺良性疾病患者和20例健康体检志愿者作对照。 结果 早期乳腺癌患者术后辅助治疗前外周血有核细胞hMAM mRNA阳性率26.0%,与良性乳腺疾病患者（4.2%）、健康体检志愿者（0%）比较,差异有统计学意义(分别为P=0.025、P=0.012);其hMAM mRNA阳性率与癌组织HER2过表达相关（P=0.037）;13例阳性患者中8例（61.5%）随访出现复发转移（P=0.004）,中位无瘤生存期明显降低（P=0.002）。 结论 hMAM mRNA是检测乳腺癌循环肿瘤细胞较为理想的分子标记物。早期乳腺癌患者术后辅助治疗前hMAM mRNA阳性循环肿瘤细胞检测,可能是预测复发转移和预后不良的辅助指标。     

hMAM mRNA和CK19 mRNA联合检测乳腺癌骨髓微转移

目的：检测乳腺癌患者骨髓中的human mamglobin（hMAM）mRNA和CK19 mRNA表达,探讨乳腺癌患者早期骨髓微转移与临床病理学因素的关系.方法：采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR一步法）法检测骨髓组织中hMAM mRNA和CK19 mRNA的表达.结果：102例乳腺癌患者骨髓hMAM mRNA、CK19 mRNA表达阳性者分别为37.3%和56.9%,均高于良性乳腺疾病患者骨髓组织中的表达（P=0.043,P=0.002）.两者的阳性表达率与肿瘤大小、临床分期和组织学分级呈显著相关,P值分别为0.000、0.001、0.020、0.003、0.031和0.001;与淋巴结转移状况、年龄和月经状况无关,P值分别为0.101、0.255、0.111、0.110、0.492和0.187.结论：乳腺癌微转移与肿瘤大小、临床分期和组织学分级有关,hMAM mRNA和CK19 mRNA均可作为检测乳腺癌骨髓微转移标志,且两者间存在一致性.     

联合检测乳腺癌患者外周血中细胞角蛋白19及人乳腺球蛋白mRNA的意义

目的通过检测分析乳腺癌患者外周血细胞角蛋白19(cytokeratin19,CK19)及人乳腺球蛋白(human mammaglobin,hMAM)mRNA表达,探讨其作为判断乳腺癌的相关指标。方法应用荧光定量PCR(Fluorescence Quantification-Polymerase Chain Reaction,FQ-PCR)技术对40例乳腺癌患者及10名健康志愿者外周血中CK19及hMAM mRNA的表达进行测定。运用χ2检验和Fisher确切概率法对各组间差别进行统计学分析;乳腺癌患者CK19和hMAM表达相关性分析采用Kappa检验。结果乳腺癌患者中CK19和hMAM阳性率分别为52.5%(21/40)和55%(22/40),均显著高于正常对照组(CK19阳性为1/10,hMAM均为阴性)(P0.050)。乳腺癌患者CK19和hMAM阳性表达具有相关性(Kappa=0.849,P=0.000)。CK19阳性表达与肿瘤大小、淋巴结转移和PR有密切关系(P0.050),与ER、HER-2无关;hMAM阳性表达与肿瘤大小、淋巴结转移、ER、HER-2有关(P0.050),与PR无关。结论联合检测乳腺肿瘤患者外周血中CK19及hMAM应用于临床动态监测,可起到帮助临床诊断的作用。     

早期乳腺癌患者外周血CK19 mRNA阳性循环细胞检测及其临床意义

 目的　探讨早期乳腺癌患者外周血CK19 mRNA阳性细胞检测的临床意义及其预后价值。方法　应用RT-PCR检测50例早期乳腺癌患者、24例良性乳腺病变患者及20名健康体检志愿者外周血有核细胞CK19 mRNA的表达,并根据基因标志物结果随访。结果　早期乳腺癌患者术后辅助治疗前外周血有核细胞CK19 mRNA阳性率40.0 %（20／50）,与良性乳腺疾病患者[12.5 %（3／24）]及健康体检志愿者[5 %（1／20）]比较,差异均有统计学意义（P＝0.018,P＝0.004）;外周血有核细胞CK19 mRNA阳性率与患者年龄、月经状况、TNM分期、肿瘤大小、淋巴结转移状况、病理分化、激素受体状况、Her-2、血清CA153、血清CEA水平异常升高无关（P＞0.05）;20例外周血有核细胞CK19 mRNA阳性的患者中有11例随访期出现转移复发（P＝0.002）,中位无瘤生存期明显缩短（P＝0.007）。结论　CK19 mRNA可以作为循环肿瘤细胞基因标志物。检测CK19 mRNA阳性循环肿瘤细胞,可能作为早期乳腺癌术后判断复发转移的辅助指标。     

hMAM mRNA和CEA mRNA RT-PCR检测乳腺癌外周血微转移

目的:应用RT-PCR法检测乳腺癌患者外周血中的hMAM mRNA和CEA mRNA表达情况.方法:用RT-PCR法,检测52例乳腺癌患者外周血中hMAM mRNA和CEA mRNA的表达情况,另抽取28例乳腺良性疾病患者和10例健康志愿者外周血标本作为对照.结果:52例乳腺癌患者外周血中hMAM mRNA和CEA mRNA的阳性率分别为30.8%、34.6%.28倒乳腺良性疾病患者和10例健康志愿者外周血中hMAM mRNA、CEA mRNA表达均为阴性.二者的阳性表达与患者的腋淋巴结状况、TNM分期差异均有显著性意义(P＜0.05),而与患者的年龄、原发肿瘤大小、病理类型以及激素受体状况等差异均无显著性(P＞0.05).结论:hMAM mRNA、CEA mRNA均可作为标志物来检测乳腺癌患者外周血中微转移,联合检测可增加外周血中循环肿瘤细胞的检出率.     

检测乳腺癌患者骨髓中CK19的表达及其临床意义

背景与目的:乳腺癌早期即可发生播散和转移,远处转移尤其骨转移是影响患者预后的主要因素之一,而骨髓微转移用常规方法又难以检测出来。本研究旨在探讨检测乳腺癌患者骨髓中CK19mRNA的表达及其临床意义。方法:应用RT鄄PCR技术,同时对照检测65例乳腺癌患者、15例乳腺良性病变患者和8例健康人骨髓中的CK19mRNA表达,并分析CK19mRNA表达与临床病理因素的关系。结果:65例乳腺癌患者中,22例CK19mRNA阳性,阳性率为33.8%;乳腺良性病变患者和健康人骨髓中未检测到CK19mRNA表达。CK19mRNA表达与乳腺癌肿瘤大小和分期有关(P<0.05),与年龄和淋巴结转移状况无显著性相关(P>0.05);与外周血中CEA异常增高呈正相关(r=0.372,P=0.002)。结论:CK19mRNA可作为检测乳腺癌患者骨髓微转移的分子指标之一,可为乳腺癌患者的治疗和预后判断提供帮助。     

hMAM mRNA在检测乳腺癌外周血微小转移中的应用

目的 探讨乳腺组织特异性基因hMAM mRNA作为检测乳腺癌血道微小转移指标的可能性。方法 采用巢式PCR结合荧光定量PCR,对63例乳腺癌患者、8例乳腺增生患者、5例乳腺纤维腺瘤患者、25例其他癌患者以及31例健康志愿者的外周血进行检测。结果63例乳腺癌患者外周血中hMAM mRNA阳性率30．2％（19／63）,手术后阴转率为31．6％（6／19）。乳腺良性疾病、胃癌、大肠癌、食管癌、肺癌、卵巢癌患者外周血中均阴性,而31例健康献血员中有1例阳性。hMAM mRNA表达随肿瘤分期进展阳性率增高,但与肿瘤分期、ER和PR状态无关（P＞0．05）。结论 hMAM mRNA特异表达于乳腺癌患者外周血,有可能作为检测乳腺癌血道微小转移的指标。     

无假基因干扰的CK19 RT-PCR方法检测乳腺癌外周血微转移

目的:以CK19为基因标志检测乳腺癌患者外周血中播散的肿瘤细胞,并对其临床意义进行评价。方法:采用优化的无假基因干扰的RT-PCR方法检测乳腺癌患者外周血有核细胞的CK19mRNA表达。结果:1)方法可靠性验证:检测30例正常人外周血CK19mRNA表达,结果无假阳性;将乳腺癌细胞系MCF-7以1∶107与正常外周血有核细胞混合,检测CK19mRNA表达,结果无假阴性。2)检测乳腺癌41例,外周血肿瘤细胞阳性检出率26.8%(11/41);乳腺癌患者外周血肿瘤细胞阳性率在患者不同年龄、肿瘤大小、临床分期、组织学分级、ER和PR状态的各组间差异无显著性(P>0.05);淋巴结转移阳性病例外周血肿瘤细胞检出率(38.1%)明显高于淋巴结转移阴性组(15.0%),虽然统计学差异不具有显著性(P=0.10),但提示淋巴结转移阳性的患者肿瘤细胞血行播散的危险性有增加的趋势。结论:以CK19为基因标志采用RT-PCR方法检测乳腺癌患者外周血中的肿瘤细胞可能是乳腺癌有意义的预后指标,可以为治疗方案的选择、治疗疗效的评价及外周血干细胞移植联合大剂量化疗适应证筛选提供重要依据。     

CK19和hMAM及SBEM检测乳腺癌微转移价值分析

目的：探讨生物学标志乳腺上皮小黏蛋白（smallbreastepithelialmucin,SBEM）、乳腺珠蛋白（humanmamma—globin,hMAM）和细胞角蛋白19（cytokeratin19,CK19）检测乳腺癌外周血及淋巴结微转移的临床应用价值。方法：收集2012-04—13—2012-10—10广西医科大学附属肿瘤医院乳腺外科首诊的患者外周血及组织标本。采用巢式PCR技术对47例乳腺癌患者和45例乳腺良性肿瘤患者外周血有核细胞中SBEM、hMAM和CK19的mRNA进行检测;采用半定量PCR技术对10例乳腺癌组织及对应的癌旁组织,以及10例乳腺良性肿瘤患者组织mRMA进行检测;采用免疫组化技术对其中27例乳腺癌患者的109个淋巴结进行检测。结果：乳腺癌和乳腺良性肿瘤患者的外周血SBEM表达率分别为82．98％（39／47）和62．22％（28／45）,χ2=5．005,P=0．021;乳腺癌和乳腺良性肿瘤患者的外周血hMAM表达率分别为65．96％（31／47）和42．22％（19／45）,差异有统计学意义,χ2=5．220,P=0．022;乳腺癌和乳腺良性肿瘤患者的外周血CK19表达率分别为89．36％（42／47）和80．00％（36／45）,差异无统计学意义,χ2=1．562,P=0．211。免疫组化CK19在52个转移性淋巴结中强阳性表达,在57个常规病理检查未发现的转移性淋巴结中检出5个淋巴结存在转移灶;hMAM及SBEM在转移性淋巴结中表达比CK19弱,而且阳性细胞染色不均一。结论：SBEM、hMAM和CK19作为乳腺癌外周血微转移生物学标志具有较高的灵敏性,但缺乏特异性,联合检测可以提高特异性,对发现早期乳腺癌微转移有一定临床意义;CK19可用于检测乳腺癌腋窝淋巴结的微小转移灶。     

应用RT-PCR检测乳腺癌患者外周血CK-19mRNA的临床意义

目的:探索取材于乳腺癌患者外周血诊断微转移的方法。方法:66例乳腺癌和37例乳腺良性疾病患者的外周血,分离其有核细胞后进行细胞总RNA的抽提,运用RT-PCR技术进行CK-19 mRNA的检测。结果:以RT-PCR终产物出现460bp条带定为阳性。66例乳腺癌患者CK-19mRNA有24例表达,总阳性率为36.36％。37例乳腺良性疾病者CK-19mRNA无一例表达。两组有统计学意义(x2=17.54,P<0.001)。结论:RT-PCR检测CK-19 mRNA可以用于临床诊断乳腺癌患者外周血中微转移。     

应用RT-PCR检测乳腺癌患者外周血CEA mRNA和CK-19 mRNA的研究及意义

目的：检测乳腺癌患者外周血中CEA mRNA和CK-19 mRNA的表达，建立取材于外周血早期诊断乳腺癌微转移的方法。方法：65例乳腺癌和37例乳腺良性疾病患者的外周血，分离其有核细胞后进行细胞总RNA的抽提，运用果式RT-PCR技术进行CEA mRNA和CK-19 mRNA的检测。结果：以     

Peripheral blood circulating cytokeratin-19 mRNA-positive cells after the completion of adjuvant chemotherapy in patients with operable breast cancer.

BACKGROUND: The purpose of this study was to evaluate the prognostic significance of the molecular detection of cytokeratin 19 (CK-19) mRNA-positive cells in the peripheral blood of women with operable breast cancer after the completion of adjuvant chemotherapy. PATIENTS AND METHODS: Blood from 161 patients with stage I and II breast cancer, obtained after the completion of adjuvant chemotherapy, was tested by nested RT-PCR for CK-19 mRNA detection. Using univariate and multivariate analyses possible interactions with other prognostic factors and association of CK-19 mRNA detection with risk of relapse, disease-free interval (DFI) and overall survival were investigated. RESULTS: After completion of adjuvant chemotherapy, 27.3% of patients had peripheral blood CK-19 mRNA-positive cells; there was no association of this finding with any other prognostic factors or the type of chemotherapy regimen used. For patients with less than four involved axillary lymph nodes the risk of relapse was 3.81 [95% confidence interval (CI) 1.06-13.71] times higher, and the DFI was significantly reduced (P = 0.028) if CK-19 mRNA-positive cells were detectable in the blood after the completion of adjuvant chemotherapy. In contrast, for patients with four or more involved lymph nodes, the presence of CK-19 mRNA-positive cells after adjuvant chemotherapy did not significantly affect the risk of relapse or DFI. Furthermore, the risk of relapse was higher (hazards ratio 3.70; 95% CI 1.09-13.89) and the DFI was reduced (P = 0.022) for patients with detectable CK-19 mRNA-positive cells following adjuvant cyclophosphamide, methotrexate and 5-fluorouracil (CMF) as compared with epirubicin, cyclophosphamide and 5-fluorouracil (FEC) or sequential taxotere-epirubicin and cyclophosphamide (T/EC) chemotherapy. CONCLUSIONS: The detection of CK-19 mRNA-positive cells in the peripheral blood after adjuvant chemotherapy may be of clinical relevance for patients with early breast cancer and less than four involved axillary lymph nodes.