DNA疫苗的安全性研究

DNA疫苗作为第三代疫苗与传统疫苗相比具有很多优越性,对其安全性的评价主要包括DNA疫苗与宿主细胞基因整合的可能性,接种后诱导宿主免疫耐受和自身免疫病的可能性,以及临床试验中受试者的耐受性等方面。本文就DNA疫苗安全性研究进展和相应法规的制定情况作一综述。     

DNA免疫的研究进展

近年来医学界的实验研究已经证实，DNA疫苗可使宿主获得对病毒、细菌和寄生虫感染的有效保护。DNA疫苗，其主要制各方法为调出用来做为免疫原的基因，将该基因克隆入表达载体质粒中，再将质拉转化入细菌中增殖，最后提纯质粒制备成DNA疫苗。据认为该疫苗将为人类战胜各种疾病和防止细菌耐药性的产生提供有利的武器。DNA免疫的研究进展     

肿瘤基因疫苗的研究进展

基因疫苗（genetic vaccine）又称核酸疫苗或DNA疫苗,是将编码某种抗原的基因片段克隆到真核表达质粒,再用该质粒免疫动物,抗原编码基因在宿主体内表达,刺激机体产生体液免疫和细胞免疫应答。首次发现基因疫苗是在1990年,Wolf等偶然发现在小鼠肌肉组织内注射质粒DNA后，质粒及其携带的基因被小鼠肌细胞摄取,并在肌细胞内进行表达,小鼠可对此外源蛋白产生专一的免疫反应，他们提出这一发现可用于疫苗研究。之后基因疫苗受到了广泛的关注，并且发展迅速。基因疫苗在肿瘤方面的应用取得了很大进展,它具有安全、有效、制备容易、保存运输方便等优点，因而受到广泛重视,发展前景良好。     

肺炎链球菌疫苗的研究进展

肺炎链球菌是引起全球所有年龄组高发病率和病死率的主要病原菌，其疫苗的研制和使用对肺炎链球菌感染的防治具有重要意义。目前临床投入使用的肺炎链球菌疫苗主要有23价荚膜多糖疫苗和7价多糖蛋白结合疫苗，两者都具有一定的效力和良好的安全性，但也存在许多局限性。其他肺炎链球菌多价多糖蛋白结合疫苗、蛋白疫苗、DNA疫苗、联合疫苗等也在研制和开发中。     

增强核酸疫苗免疫应答的策略及方法

核酸疫苗又称DNA疫苗,是指将编码某种目的抗原蛋白的外源基因插入真核细胞表达质粒,直接导入动物体细胞内,并通过宿主细胞的表达系统合成抗原蛋白,诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答,从而达到预防和治疗疾病的目的.核酸疫苗不仅能刺激机体产生特异性的体液免疫,还能诱导产生特异性的具有细胞毒杀伤性功能的CTL效应（细胞免疫）,并可直接清除带有目的抗原的靶细胞,因此对病毒、细胞内寄生的细菌和寄生虫所引起的传染病具有广阔的治疗前景[1-6].     

布氏菌病双价DNA疫苗免疫保护效果的研究

【目的】构建布氏杆菌pcDNA3．1（＋）-L7／L12-BCSP31双价DNA疫苗，观察其免疫保护效果。【方法】分别克隆L7／L12、BCSP31基因，构建pcDNA3．1（＋）-L7／L12-BCSP31双价DNA疫苗。转染COS-7细胞，免疫细胞化学检测目的蛋白的表达。DNA疫苗免疫Balb／c小鼠，观察体液免疫和细胞免疫效果。布氏杆菌强毒株腹腔攻毒，观察双价DNA疫苗的免疫保护效果。【结果】构建的pcDNA3．1（＋）-L7／L12-BCSP31双价DNA疫苗在COS-7细胞有目的蛋白的表达。双价DNA疫苗免疫小鼠，ELISA检测双价DNA疫苗产生了高水平的特异性IgG抗体，且抗体亚型以IgG2a为主。FCM检测双价DNA疫苗的CD4^＋／CD8^＋比值明显下降。ELISPOT检测到疫苗免疫后小鼠分泌IFN-γ的T细胞增多。攻毒实验证明双价DNA疫苗能够产生有效的保护效果；部分数据及攻毒结果表明双价DNA疫苗的效果优于单价。【结论】研制的pcDNA3．1（＋）-L7／L12-BCSP31双价DNA疫苗免疫Balb／c小鼠能产生有效的免疫保护效果，且双价DNA疫苗效果优于单价。     

新型Ⅰ型人类免疫缺陷病毒疫苗

目前，新型的HIV-1疫苗主要包括HIV-1 DNA疫苗、HIV-1活病毒载体，以及基于这两种疫苗发展起来的异源的致敏强化疫苗策略。本文就HIV-1 DNA疫苗引发免疫反应的原理，疫苗设计中所采用的抗病毒靶点以及提升其免疫效果的策略作了介绍。同时介绍了目前应用广泛的几种HIV-1活病毒载体，以及基于HIV-1 DNA疫苗和HIV-1活病毒载体这两种疫苗发展起来的异源的致敏强化疫苗策略。     

人B细胞淋巴瘤独特型DNA疫苗诱导抗肿瘤免疫反应的实验研究

本研究目的在于探讨含人B细胞淋巴瘤免疫球蛋白重链可变区基因片段的DNA疫苗诱导小鼠抗肿瘤免疫反应的情况，为人B细胞淋巴瘤疫苗的应用提供基础实验研究资料。本研究通过PCR方法获得人B细胞淋巴瘤细胞系Namalwa膜表面免疫球蛋白重链可变区(VH)基因片段，同时克隆小鼠单核细胞趋化蛋白-3(MCP-3)作为免疫佐剂分子，进一步以重组PCR的方法获得MCP-3和、VH基因的融合基因片段，构建DNA疫苗重组质粒。在体外以瞬时转染的方法证实以融合基因片段作为抗原基因的DNA疫苗质粒能够在真核细胞中正确表达。DNA疫苗质粒大量提取后免疫小鼠。用流式细胞术检测小鼠抗体生成情况，并用LDH释放法测定CTL活性以检测抗独特型细胞免疫。结果表明，从接种疫苗第8周开始小鼠体内特异性抗独特型抗体明显升高，并且抗体滴度可维持高水平至少至第20周。在DNA疫苗免疫组中5只免疫小鼠有3只产生抗体。所诱导的抗体只特异性识别肿瘤细胞表面独特型抗原，而不识别人A549对照细胞。用乳酸脱氢酶释放法未测到明显CTL反应的产生。结论：以MCP-3与VH的融合作为抗原基因构建的DNA疫苗能够诱导小鼠体内产生抗淋巴瘤细胞的特异性抗独特型抗体，为DNA疫苗临床用于人B细胞淋巴瘤治疗提供了初步实验支持。     

T细胞受体β独特型抗原决定簇DNA疫苗诱导抗淋巴瘤抗体的研究

目的 观察T细胞受体（TCR）β不同独特型抗原决定簇DNA疫苗诱导BALB/c小鼠抗人类CEM淋巴瘤细胞免疫反应的情况。方法 RT-PCR扩增CEM细胞特异性重排的TCRβ基因片段，克隆至真核表达载体pcDNA3中，然后以此为模板，扩增编码不同抗原决定簇的基因片段到pcDNA3中作为DNA疫苗。肌肉注射法免疫小鼠，间接免疫荧光法检测小鼠血清中抗体生成情况。结果 CEM细胞TCRβ共包含5个抗原决定簇，其DNA疫苗免疫的6只小鼠全部产生了特异性抗独特型抗体（最高滴度1：480）；含4个抗原决定簇的DNA疫苗免疫的6只小鼠中有4只产生了特异性抗独特型抗体，但滴度均较低（最高滴度1：80）；仅含2个抗原决定簇的DNA疫苗未能使小鼠产生特异性抗独特型抗体。结论 包含TCRβV区全长，共有5个抗原决定簇的独特型DNA疫苗可以诱导小鼠产生抗淋巴瘤细胞的独特型特异性抗体；含有4个抗原决定簇的DNA疫苗仍可诱导特异性抗体的生成，但这种反应较弱，而仅含有2个抗原决定簇的DNA疫苗则不能诱导小鼠产生抗淋巴瘤的特异性抗体。     

用基因组DNA制备独特型抗淋巴瘤核酸疫苗的实验研究

本研究观察从人B细胞淋巴瘤细胞系基因组DNA及RNA分别构建的表达载体作为核酸疫苗诱导小鼠产生抗肿瘤免疫反应的情况。分别提取人B淋巴瘤细胞系Namalwa细胞的基因组DNA及RNA，将免疫球蛋白重链可变区（IgHV)基因片段克隆到pcDNA3.0真核表达载体中作为独特型核酸疫苗，其中DNA 核酸疫苗用LipofectAMINE转染COS细胞，多面手用RT－PCR观察转录及剪接的情况。两种不同来源的核酸疫苗分别肌内注射免疫小鼠后，用间接免疫荧光法检测抗独特型抗体的生成。结果发现，基因组DNA来源的核酸疫苗在COS细胞中能成功地转录，转录产物大小为477bp，其中86bp的内含子区域被剪接；两种疫苗免疫动物后均可诱导针对Namalwa细胞特异的抗独特型抗体，并于第6周达高峰。结论提示，淋巴瘤基因组DNA和RNA来源的IgHV基因片段均可制备核酸疫苗，能诱发小鼠产生抗淋巴瘤免疫反应。     

常见感染性皮肤病：人类乳头瘤病毒性皮肤病及性病

1人类乳头瘤病毒概述 人类乳头瘤病毒（HPV）是一种DNA病毒，有100多种亚型，人是该病毒惟一宿主，宿主细胞是皮肤和黏膜上皮，具有高度宿主和组织特异性。皮肤HPV感染主要通过直接接触传播，生殖道HPV感染主要通过性接触传播，部分可通过间接接触传染和母婴传播。HPV感染与机体的免疫功能有重要关系，其中细胞免疫起主要作用。     

DNA疫苗的研究进展

DNA疫苗是20世纪90年代发展起来的一项崭新的免疫技术，由Tang等首次报道，随后引起了广泛的关注。大量的疫苗研制工作如抗流感疫苗、HIV疫苗、乙肝病毒疫苗和肿瘤相关抗原疫苗等相继报道，被称为“第三次疫苗革命”，是继减毒疫苗、基因工程疫苗之后的第三代疫苗。     

16型人乳头瘤病毒疫苗的研究进展

人乳头瘤病毒(human papillomavirus HPV)是一类具有严格宿主范围和组织特异性的DNA病毒,目前已发现100多型。已有的研究表明,90％宫颈癌与HPV感染相关,其中50％的宫颈癌与HPV16感染有关,在成人中HPV16感染率达20％。因此,宫颈癌疫苗的研究主要集中在HPV16型。宫颈癌在全球妇女癌症死因中占第二位,在某些发展中国家甚至居首位。我国每年死于     

T7噬菌体表达巨细胞病毒PP65蛋白抗原的初步研究

目的利用噬菌体展示技术构建巨细胞病毒基质蛋白PP65的抗原，初步评价其抗原性。方法PP65的基因片段经酶切后，与T7噬菌体的基因组相应酶切位点结合．借助包装蛋白组裴成为完整的噬菌体。PP65目的蛋白以融合蛋白的形式表达在T7噬菌体的头蛋白部位，每个噬菌体颗粒表面可表达5～15个拷贝。噬菌体可以在宿主细胞中快速繁殖，并且能够迅速裂解宿主细胞，使目的蛋白的富集达到很高的效率。人巨细胞病毒基质蛋白PP65可以激发机体强烈的免疫反应，运用T7噬菌体载体展示系统表达PP65的部分肽段，扩增噬菌体，以SDS—PAGE电泳和western—blot鉴定所表达的抗原特性。结果获得了重组T7-PP65噬菌体，通过鉴定，噬菌体表达在其头蛋白上的PP65抗原可以被天然PP65的单克隆抗体所识别。结论噬菌体展示技术可以有效地进行病毒蛋白抗原的表达，为抗原筛选和疫苗的研制提供科学依据。将PP65表达在T7噬菌体表面，可以研究其免疫原性及评估其作为疫苗的可能性。     

含多糖中药抗病毒的研究进展

病毒性疾病是危害人类健康的一种重要疾病。与肿瘤、心血管和神经系统的疾病不同,它具有高度的传染性,且是许多其他疾病的病因。病毒为细胞内寄生的微生物,利用宿主细胞的DNA、RNA及蛋白合成系统进行复制,甚至可以将自身的核酸信息整合到宿主细胞的DNA中,与宿主细胞同期复制,并且在不断的复制中产生错误而形成变异。作为抗病     

结核分枝杆菌ESAT-6基因的克隆与表达

目的 对结核分枝杆菌的ESAT-6基因进行克隆、鉴定与表达，为结核病的诊断、重组疫苗的应用打下基础。方法 以结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA为模板，用聚合酶链反应(PCR)对ESAT-6基因进行扩增，将扩增的产物连接于测序载体pGEM-T上，经测序反应确定无误后，再将PCR产物与原核表达载体pET42b( )构建表达ESAT-6的重组质粒，将重组质粒先转化人大肠杆菌DH5a内并提取质粒，经酶切鉴定后，再转化入表达宿主大肠杆菌BL21菌株内，对转化菌株进行诱导后，破菌，进行SDS-PAGE电泳。结果 电泳发现转化了重组质粒的菌株有表达蛋白，其表达的蛋白质相对分子质量为9900。结论 目的基因克隆到菌株内，重组结核分枝杆菌ESAT-6的成功表达为结核病诊断、重组疫苗应用和免疫效应检测等奠定了基础。     

结核菌疫苗的研究进展

世界范围内，结核病疫情急剧恶化，而疫苗可能是根治结核病的最佳甚至唯一途径。但是，目前唯一可用的疫苗BCG的免疫效果不理想。因此，开发安全、廉价、实用、有效的新型疫苗就成为结核病防治的研究热点.目前研究的疫苗主要有蛋白质亚单位疫苗、DNA疫苗、减毒活疫苗和改进的卡介苗以及转基因植物疫苗等。本文概括地分析和介绍了结核病疫苗的研究现状和新近进展。并对疫苗的发展趋势进行了展望。     

HPV疫苗接种现状及干预研究进展

HPV全称为人乳头瘤病毒，为球形 DNA 病毒，特异性较高。HPV 疫苗为非免疫规划疫苗，能够预防 HPV 感染引起的 宫颈癌、生殖器疣等疾病，主要接种目标人群为 9～45 岁女性。疫苗接种及干预具有显著医学价值。为此，本文详细阐述 HPV 疫苗与宫颈癌关系、HPV 疫苗基本情况、分析 HPV 疫苗接种现状和干预的研究进展，以期为 HPV 疫苗接种及干预工作提供参 考，从而提高 HPV 疫苗接种率及接种干预质量。     

新型Ⅰ型人类免疫缺陷病毒疫苗

目前,新型的HIV-1疫苗主要包括HIV-1DNA疫苗、HIV-1活病毒载体,以及基于这两种疫苗发展起来的异源的致敏-强化疫苗策略.本文就HIV-1DNA疫苗引发免疫反应的原理,疫苗设计中所采用的抗病毒靶点以及提升其免疫效果的策略作了介绍.同时介绍了目前应用广泛的几种HIV-1活病毒载体,以及基于HIV-1DNA疫苗和HIV-1活病毒载体这两种疫苗发展起来的异源的致敏强化疫苗策略.     

人SART 3基因疫苗对荷瘤小鼠的免疫杀伤作用

目的研究表达人T细胞识别的鳞状细胞癌抗原3（SART3）基因的DNA疫苗在小鼠体内对表达该基因肿瘤细胞的免疫杀伤作用。方法构建表达人SART3基因的C3H小鼠骨肉瘤细胞LM8-SART3，将其接种到C3H小鼠成瘤，比较疫苗治疗组和空载体对照组中肿瘤的生长情况，取小鼠淋巴细胞检测免疫反应活性并行病理切片镜下比较。结果荷瘤小鼠经疫苗注射后肿瘤生长延缓，免疫反应活性与淋巴细胞数量有关，镜下可见肿瘤细胞坏死并淋巴细胞浸润。结论表达人SART3基因的DNA疫苗能诱导小鼠免疫杀伤肿瘤细胞，抑制表达该基因的肿瘤细胞在小鼠体内生长。