金欣口服液含药血清及其有效单体白藜芦醇对RSV的RNA聚合酶转录活性的影响

目的?研究金欣口服液含药血清及其有效单体白藜芦醇对呼吸道合胞病毒（RSV）RNA聚合酶转录活性的作用。方法?通过体外分离病毒核糖核蛋白复合体（RNP）进行体外转录,并在转录过程中应用放射性核苷酸标记,同位素检测RSV的mRNA全长转录本,从而观察金欣口服液含药血清及其有效单体白藜芦醇对RSV 的RNA依赖的RNA聚合酶活性的影响。结果?正常细胞组与病毒感染细胞模型组放射性核苷酸辐射强度有显著差异（P<0.01）,而白藜芦醇组转录掺入的放射性核苷酸明显低于病毒对照组（P<0.01）,而各含药血清组差异不显著。结论?金欣口服液有效单体白藜芦醇对RSV的RNA依赖的RNA聚合酶有较好的抑制作用,其可能是金欣口服液抗RSV的作用机制之一。      

金欣口服液阻断呼吸道合胞病毒入侵的实验研究

目的 研究金欣口服液含药血清时呼吸道合胞病毒入侵宿主细胞环节的影响.方法 在病毒和细胞接触期间采用转换温度方法观察金欣口服液含药血清对 RSV 黏附、侵入的影响.观察药物作用前后宿主细胞表面F蛋白的表达.结果 温度转换前(黏附阶段)加入金欣口服液含药血清,实验组和对照组OD值无差异;温度转换后(侵入阶段)加入金欣口服液含药血清组OD值明显升高,与对照组比有显著性差异.荧光标记的F蛋白位于感染细胞表面,RSV 感染后,细胞发生融合的部位荧光明显增强,金欣口服液含药血清作用后荧光减少.结论 金欣口服液拮抗呼吸道合胞病毒的机制之一是抑制病毒的膜融合,作用位点是病毒的F蛋白或其受体.     

清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒抑制作用的实验研究

目的研究清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染细胞的抑制作用。方法用不同剂量的清肺口服液制成含药血清处理呼吸道合胞病毒感染后的Hep-2细胞,用组织细胞培养法,采用细胞病变(CPE)观察和四氮唑盐还原法(MTT法)检测清肺口服液含药血清对RSV感染细胞的增殖抑制作用。结果在Hep-2细胞上,清肺口服液的最大无毒浓度为1∶9。100TCID50RSV攻击后Hep-2细胞的OD值明显降低,加入中高剂量含药血清后OD值升高。结论清肺口服液含药血清对RSV有抑制作用。      

清肺口服液对呼吸道合胞病毒增殖影响的研究

目的:观察清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(Respiratory Syncytial Virus RSV)A、B亚型增殖的影响.方法:采用组织培养病毒滴度测定方法观察呼吸道合胞病毒A、B亚型滴度的变化.结果:清肺口服液含药血清不能影响呼吸道合胞病毒A、B亚型滴度.结论:清肺口服液含药血清不能直接影响呼吸道合胞病毒增殖.     

金欣口服液不同化学部位对呼吸道合胞病毒感染的影响

目的 观察金欣口服液不同化学部位在体内的抗呼吸道合胞病毒（RSV）作用。方法 小鼠经滴鼻感染RSV建立肺炎模型,随机分为正常对照组、模型对照组、利巴韦林组、金欣口服液组、金欣口服液石油醚、乙酸乙酯、正丁醇提取液组及母液组,光镜下观察肺组织的炎症病变情况,计算小鼠肺指数和肺指数抑制率、脾指数、胸腺指数、死亡保护率。结果 金欣口服液石油醚、乙酸乙酯、正丁醇提取液对RSV感染后小鼠的肺指数增高均有显著的降低作用(P<0.01),减轻感染小鼠肺组织炎症病变,同时能增加脾指数和胸腺指数(P<0.01)。金欣口服液正丁醇提取液能降低RSV感染小鼠的死亡率。结论 金欣口服液石油醚、乙酸乙酯、正丁醇提取液对RSV具有一定的抑制作用,并且能提高RSV感染小鼠的免疫功能。正丁醇提取液对RSV感染小鼠具有一定的死亡保护作用。     

金欣口服液对RSV感染细胞TLR4及TNF-α表达的影响

目的 研究开肺化痰清热止咳中药金欣口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的Hep-2细胞TLR4及该通路下游细胞因子TNF-α表达的影响.方法 制备血行药物成分溶液,作用于RSV感染的Hep-2细胞,通过RT-qPCR、免疫荧光标记结合激光共聚焦技术及ELISA法,分别观察分析细胞TLR4 mRNA、蛋白和相关细胞因子的表达水平,分析药物作用机制.结果 与病毒对照组比较,金欣口服液作用于RSV感染的Hep-2细胞后,TLR4 mRNA及蛋白表达显著降低,TNF-α表达显著降低,细胞病变程度减轻.结论 金欣口服液含药血清可以通过下调TLR4和TNF-α表达水平减轻感染RSV后Hep-2细胞的病变程度.     

金欣口服液对呼吸道合胞病毒感染人胚肺成纤维细胞胞内钙离子的影响

目的:探讨金欣口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染细胞内的钙离子影响.方法:体外建立RsV A型LONG株攻击体外培养的人胚肺成纤维细胞模型,设正常细胞组、病毒组、空白血清组、利巴韦林组和金欣口服液组.采用激光共聚焦技术检测其对感染细胞不同时间点的胞内钙离子的变化.结果:RsV感染24 h细胞内钙离子与正常细胞组相比无显著性差别(P>0.05).空白血清、利巴韦林、金欣口服液组和病毒组相比无显著性差异(P>O.05).RSV感染48、72 h均高于细胞组(P0.05).72 h低于病毒组(P<0.05);利巴韦林组和金欣口服液组48、72 h均低于病毒组,且有显著性差异(P<0.05).金欣口服液组和利巴韦林组相比.48 h有显著性差异(P<0.05),但72 h无显著性差异(P>0.05).结论:金欣口服液可能抑制成纤维细胞的钙离子内流,这也许是金欣口服液抑制RSV感染细胞凋亡的一个因素.金欣口服液可作为早期抗RSV感染治疗药物.     

金欣口服液对感染RSV大鼠血清IL12表达水平的影响

目的?观察金欣口服液对感染呼吸道合胞病毒（RSV）大鼠血清IL12表达水平的影响,以寻找更有效的抗RSV感染方式。方法?将96只SD大鼠随机分为12组,分别为空白对照组,模型组,金欣高、中、低灌胃组,金欣高、中、低灌肠组,利巴韦林灌肠、灌胃组,金欣预先灌胃、灌肠组。用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组SD大鼠血清IL12的水平。结果? 与空白对照组比较,模型组感染RSV后血清IL12水平明显下降(P<0.01）;金欣组的高剂量灌胃组、中剂量灌胃组、中剂量灌肠组及预先灌胃组的IL12水平较模型组显著升高(P<0.01）,且与利巴韦林组有明显差异(P<0.01）。灌胃组中预先给药的IL12含量比其他给药组相比显著增加(P<0.01）。与灌肠给药相比,灌胃给药的预先组和金欣高剂量组的IL12较高(P<0.01）。 结论?金欣口服液能提高血清IL12的表达,且以灌胃方式提前给药能够更有效地抑制大鼠感染RSV。      

金欣口服液抗呼吸道病毒实验研究

目的:观察金欣口服液对小鼠流感病毒和副流感病毒性肺炎模型的影响及体外对腺病毒致细胞病变作用的影响.方法:小鼠经滴鼻感染流感病毒和仙台病毒造成肺炎模型,计算小鼠死亡保护率、肺指数和肺指数抑制率;体外抗病毒实验采用MTT法测病变抑制率.结果:金欣口服液对流感病毒和仙台病毒致小鼠肺部炎症有明显抑制作用,可明确降低流感病毒和仙台病毒感染后小鼠的死亡率;体外实验表明,金欣口服液对腺病毒引起的细胞病变有明显抑制作用.结论:金欣口服液对流感病毒、仙台病毒、腺病毒均有抑制作用.     

热毒宁抗呼吸道合胞病毒(RSV,Long株)作用体外实验研究

目的:研究中草药热毒宁注射液对呼吸道合胞病毒(RSV,Long株)的抑制作用.方法:以病毒唑为阳性对照药,采用细胞培养技术,观察不同药物浓度及不同给药方式下RSV攻击后各组Hep-2细胞的病变效应(CPE),在此基础上采用MTT比色法,测定各组细胞的病毒抑制率.以CPE法计算药物的半数中毒浓度TC50,分别以CPE法及MTT法计算药物的半数有效浓度EC50及治疗指数TI,比较不同药物浓度及不同给药方式下热毒宁对呼吸道合胞病毒(RSV)的抑制作用效果.结果:热毒宁注射液半数中毒浓度TC50为3.972g/L.预防给药方式、细胞外直接灭活及治疗给药方式均有抗RSV作用,其抗RSV的半数有效浓度(EC50)分别为0.428、1.160、1.189 g/L,治疗指数TI分别为9.28、3.42和 3.34,热毒宁对RSV的抑制作用存在着明显的量效反应关系.结论:热毒宁对RSV有直接灭活作用,对RSV侵入Hep-2细胞有阻断作用,对RSV在Hep-2细胞内增殖有抑制作用,相同浓度下,以预防作用更显著.     

银黄清肺胶囊含药血清体外抗呼吸道合胞病毒实验研究

目的 研究银黄清肺胶囊含药血清体外抑制呼吸道合胞病毒(RSV)的作用.方法 采用观察CPE及MTT法,观察在银黄清肺胶囊含药血清干预下,感染RSV Hep-2细胞的CPE及光密度值,从而比较不同给药方式(预防给药、治疗给药、直接杀灭)及不同药物剂量下银黄清肺胶囊对RSV的抑制作用. 结果 在三种给药方式中,与相应浓度空白血清比较,各浓度银黄清肺胶囊与利巴韦林片含药血清OD值均明显增高(P<0.05);其中稀释度为3.13%的利巴韦林片含药血清和稀释度为6.25%的银黄清肺胶囊含药血清相比本组其他浓度含药血清OD值均明显增高(P<0.05).结论 银黄清肺胶囊含药血清对RSV有直接灭活作用,对RSV侵入Hep-2细胞有阻断作用,对RSV在Hep-2细胞内增殖有抑制作用. 其中稀释度为3.13%的利巴韦林含药血清和稀释度为6.25%的银黄清肺胶囊含药血清相比本组其他浓度含药血清体外抗RSV活性强.     

基于高分辨率质谱的金欣口服液治疗小鼠RSV感染的血清脂质组学研究

目的 基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS高分辨率质谱,观察RSV诱发的肺炎模型小鼠的血清中脂质代谢的变化,分析金欣口服液对RSV肺炎小鼠中脂质代谢紊乱的调节作用,探讨金欣口服液治疗RSV诱发的病毒性肺炎的潜在机制。方法 用RSV诱导小鼠病毒性肺炎,灌胃金欣口服液予以治疗,分别采集对照组、模型组、金欣口服液组小鼠的血清样本,提取脂质成分,采用LC-MS分析,采用主成分分析法（PCA）、聚类分析法（CA）等多元统计方法,对小鼠血清脂质代谢轮廓进行分析,同时进行Kruskal–Wallis test以及fold change法进行统计,寻找差异性脂质。结果 RSV感染导致小鼠肺部炎性细胞浸润及不同程度的肺炎,血清中多种脂质代谢物代谢紊乱,具体表现多数PC、PE出现明显上调,金欣口服液均能改善小鼠肺炎症状且显著恢复血清中异常紊乱的脂质。结论 RSV感染可导致小鼠血清中脂质代谢紊乱,而金欣口服液可一定程度恢复RSV模型中代谢紊乱的脂质,提示金欣口服液可通过调节脂质改善RSV诱发的肺炎。      

复方野马追胶囊抗呼吸道合胞病毒研究

目的 观察复方野马追胶囊对呼吸道合胞病毒（RSV）感染及炎性因子IL-8释放的抑制作用。方法 采用细胞病变（CPE）观察和活细胞染色方法,观察复方野马追胶囊对呼吸道合胞病毒感染细胞的保护。同时,通过ELISA法测定培养上清IL-8的变化。结果 复方野马追胶囊对呼吸道合胞病毒感染有抑制作用,其中以治疗法效果最为明显。同时该药对呼吸道合胞病毒感染后引起的IL-8释放也有明显抑制作用。结论 复方野马追胶囊具有明显的体外抗呼吸道合胞病毒感染、降低感染后气道炎症因子释放的作用。     

穿心莲提取物体外抗呼吸道合胞病毒作用的研究

目的：了解穿心莲提取物对呼吸道合胞病毒(RSV)的体外抑制作用。方法：通过光镜观察不同药物浓度下：RSV对Hep-2的致病作用(CPE),四甲基偶氮唑盐(MTT)比色检测穿心莲提取物对RSV的抑制和对：RSV感染HeF2细胞的保护作用。结果：穿心莲提取物对RSV无直接灭活作用,亦不能阻止RSV的吸附,各药物浓度均出现典型的CPE;穿心莲提取物有抑制RSV生物合成的作用,其半数抑制浓度(IC50)是1．52μg,／ml,治疗指数为36,且随着药物浓度的增加,CPE特征明显逐渐减弱,病毒滴度逐渐降低,而病毒抑制率则明显增高。结论：穿心莲提取物在体外可能是通过抑制生物合成来发挥抗RSV作用。     

金欣口服液对呼吸道合胞病毒感染的肺巨噬细胞及BALB/c小鼠IL-1β表达的调控作用

[目的]探讨金欣口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染肺巨噬细胞(Raw264.7)及BALB/c小鼠白介素-1β(IL-1β)表达的调控作用。[方法]体外实验:培养Raw264.7细胞,共分4组(n=6),分别是正常细胞组,RSV感染模型组,利巴韦林注射液组,金欣口服液组。进行含药血清干预,收集24h的上清以酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组IL-1β的含量;体内实验:分为A组(感染前高剂量及等效剂量给药)、B组(感染前感染后高剂量及等效剂量给药)、C组(感染后高剂量及等效剂量给药)三大组,观察金欣口服液不同剂量、不同给药时间对RSV感染BALB/c小鼠24h、72h、144h时IL-1β表达的调控作用。[结果]RSV感染Raw264.7细胞后24h上清中未检测到IL-1β的表达。其中RSV感染BALB/c小鼠24h后IL-1β的表达量显著增加,A组中金欣口服液高预防组和等效预防组均能下调其表达且以等效预防组的下调作用明显;RSV感染BALB/c小鼠72h后IL-1β的表达量也显著增加,但较RSV感染24h时的表达量稍有减少,B组中金欣高预防组和治疗组IL-1β的表达均下调;RSV感染BALB/c小鼠144h后IL-1β的表达量显著减少,而C组中的金欣治疗组均能上调其表达。[结论]金欣口服液预防和治疗组在RSV感染BALB/c小鼠早期能显著下调其表达,防止机体因过度免疫而致肺损伤,随着感染时间持续延长IL-1β的表达开始急剧下降,而金欣口服液又能将其恢复到合适的水平,以增强机体的免疫力。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对呼吸道合胞病毒的抑制作用

目的:为探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)体内和体外抗呼吸道合胞病毒(RSV)作用。方法:在体外以不同浓度的EGCG分别作用于RSV复制周期的3个阶段,用CPE法观察EGCG抑制RSV的致细胞病变作用,用MTT法检测EGCG作用RSV的病毒抑制率;在体内建立RSV感染的BALB/c小鼠的动物模型,通过观察肺外观和HE染色镜下观察、计算肺指数、实时定量RT-PCR检测RSV核酸水平和空斑试验检测肺组织匀浆病毒滴度,探讨EGCG对RSV感染的保护作用。结果:在体外,EGCG对RSV有抗生物合成作用和预防作用,但是无直接杀伤作用。在体内,口服EGCG能够减少RSV感染的BALB/c小鼠肺组织病变程度,肺指数、RSV核酸水平表达和病毒滴度较RSV组明显降低。结论:EGCG在体内外均具有较好的抗RSV感染与复制作用。     

锌盐对体外呼吸道合胞病毒的作用研究

目的研究锌盐抗呼吸道合胞病毒的作用。方法采用细胞病变抑制实验,观察锌盐在HEP-2细胞中对呼吸道合胞病毒的抑制作用,以抑制指数为评价指标。结果硫酸锌和醋酸锌在10～100μm/mL时,对细胞无毒性作用。先病毒后锌盐试验50μm/mL浓度的硫酸锌和醋酸锌,抑制指数为2。先锌盐后病毒试验结果显示：25μm/mL浓度的硫酸锌和醋酸锌,抑制指数为4。结论锌对呼吸道合胞病毒（RSV）有直接杀伤作用,规律补锌可以预防呼吸道合胞病毒感染。     

龙胆水提液体外抑制呼吸道合胞病毒作用研究

目的了解龙胆水提液体外抑制呼吸道合胞病毒(RSV)的作用.方法采用细胞病变抑制实验观察龙胆水提液在HeLa细胞中对呼吸道合胞病毒的抑制作用.结果龙胆水提液的半数中毒浓度(TC50)为15.25mg/ml;抑制RSV的半数有效浓度(EC50)为1.07mg/ml,治疗指数(TI)为14.25;且对RSV的抑制作用存在明显的量效反应关系(P<0.01).结论龙胆水提液在HeLa细胞中对呼吸道合胞病毒有明显的抑制作用.     

空心莲子草微乳体外抗RSV作用的实验研究

目的 用空心莲子草微乳进行细胞内抗呼吸道合胞病毒(RSV)的研究,以扩大该药新的抗病毒谱.方法 采用细胞病变效应法(CPE)、逆转录-PCR,观察检测空心莲子草微乳对Hep-2细胞的细胞毒性作用和抗RSV作用.结果 除320mg/ml组外,各药物浓度组处理的细胞均未见细胞的毒性反应.药物对RSV增殖的抑制作用随着药物浓度升高,细胞病变数减少,其半数有效浓度(IC50)为160 ug/ml.虽然各药物浓度组中均可检出RSV-RNA,但在药物对RSV抑制作用组,病毒滴度则随着药物浓度的增加而减少.结论 空心莲子草微乳对细胞的毒性作用低.该药虽不能直接杀灭RSV使细胞免受病毒的攻击,但对进入细胞内的病毒有抑制作用.     

大黄蒽醌类化合物体外抗呼吸道合胞病毒作用的研究

目的:探讨大黄蒽醌类化合物(Rhubarb Anthraquinone Analogues, RAA)在细胞培养中抗呼吸道合胞病毒(RSV)的作用.方法:采用细胞培养技术,以病毒唑为阳性对照药,比较观察大黄蒽醌类化合物对RSV引起的细胞病变(CPE)的抑制作用.结果:RAA半数中毒浓度(TC50)为209.7 mg/L,其抗RSV的半数有效浓度(IC50)为96.7 mg/L,治疗指数(TI)为2.3,且对RSV抑制作用存在明显的量效反应关系.结论:RAA在Hep-2细胞中对呼吸道合胞病毒有抑制作用.