沉默p65基因对人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞周期的影响

目的研究miRNA(microRNA)沉默p65基因后对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞周期分布的影响。方法用pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR载体构建p65 miRNA表达质粒,转染MDA-MB-231细胞,用RT-PCR检测转染前后各组细胞中p65 mRNA表达变化;凝胶电泳迁移率改变分析(electrophoretic mobility shift assay, EMSA)实验研究转染前后细胞中NF-κB结合活性的变化;流式细胞术(Flow cytometry, FCM)观察转染前后细胞周期分布的变化;Westernblot法检测转染前后细胞周期相关因子cyclinD1、CDK4、p21蛋白表达的变化。结果p65 miRNA质粒明显下调MDA-MB-231细胞中p65 mRNA的表达水平,并显著抑制细胞中NF-κB的结合活性(P<0.05)。FCM结果显示,转染组细胞G₀/G₁期细胞比例显著增加,S、G₂/M期细胞比例明显下降(P<0.05);Western blot分析结果显示,沉默p65基因后细胞中cyclinD1蛋白表达下调,p21蛋白表达增加。结论p65 miRNA可以显著降低p65 mRNA的表达,诱导乳腺癌细胞发生G₀/G₁期阻滞,可能是通过降低cyclinD1蛋白,上调p21蛋白表达而实现的。     

环加氧酶-2 通过调控EMT促进乳腺癌MDA-MB-231 细胞的迁移和侵袭

[摘要] 目的：探讨环加氧酶-2（COX-2）在乳腺癌转移中的作用及其可能的机制。方法：收集从2015 年10 月至2018 年4 月在云南省肿瘤医院接受乳腺切除术的患者中获得的原发乳腺癌组织和脑转移乳腺癌组织临床病理样本共45 例,其中原发30 例、脑转移15 例。采用qPCR检测COX-2 在原位乳腺癌和脑转移乳腺癌组织中的表达。将COX-2 过表达重组病毒（LV6-COX2）或敲减COX-2 重组病毒（LV3-COX2 shRNA1、LV3-COX2 shRNA2）感染人乳腺癌MDA-MB-231 细胞并获得稳转细胞株后,CCK-8法检测COX-2 表达对MDA-MB-231 细胞增殖的影响,划痕实验和Transwell 法检测对MDA-MB-231 细胞迁移和侵袭的影响。qPCR和WB实验分析各组细胞中COX-2 mRNA和蛋白的表达水平,qPCR检测COX-2 表达对MDA-MB-231 细胞内EMT相关基因表达的影响。结果：COX-2 表达水平在脑转移乳腺癌患者组织中显著高于原位乳腺癌组织（P<0.01）;并且与乳腺癌患者肿瘤TMN分期有关。成功构建稳定过表达/敲减COX-2 的MDA-MB-231 细胞株。过表达COX-2 促进MDA-MB-231 细胞的迁移和侵袭（均P<0.01）,同时显著提高MMP2、MMP1、N-cadherin 和vimentin 的表达（均P<0.01）,但对细胞增殖无明显影响;而沉默COX-2 则有相反的作用,且可促进细胞增殖（P<0.05）。结论：COX-2 在脑转移乳腺癌组织中高表达,其可能通过调控EMT过程促进乳腺癌MDA-MB-231 细胞的迁移和侵袭。     

靶向Bcl-xL基因siRNA在前列腺癌细胞增殖和凋亡中的作用

目的研究Bcl-xL基因特异性RNA干扰对前列腺癌PC-3细胞株体外增殖能力和凋亡的影响。方法构建靶向Bcl-xL的小干扰RNA(siRNA)表达载体,转染PC-3细胞后,采用半定量RT-PCR和Western blot法检测转染前后Bcl-xL mRNA及蛋白表达水平的改变;采用噻唑兰(MTT)法检测细胞生长增殖情况;TUNEL试剂盒测定细胞的凋亡情况。结果靶向Bcl-xL的序列特异性的siRNA可以有效地抑制PC-3细胞Bcl-xL基因的表达。转染靶向Bcl-xL的siRNA表达质粒可以显著抑制PC-3细胞的增殖（P<0.001）,诱导细胞凋亡（P<0.001）。结论Bcl-xL基因特异性RNA干扰可以显著抑制前列腺癌PC-3细胞的体外增殖并诱导细胞凋亡。     

骨桥蛋白下调对乳腺癌细胞生物学行为及MMP-2表达的影响

目的:研究下调骨桥蛋白(osteopontin,OPN)对乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为及基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)表达的影响。方法:采用重组的OPN mRNA干扰质粒转染MDA-MB-231细胞,建立稳定转染细胞株。RT-PCR和Western印迹法检测细胞中OPN和MMP-2的表达,MTT法、流式细胞仪检测和软琼脂生长实验观察OPN下调对细胞生长、细胞周期分布和瘤细胞恶性表型的影响,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养液中MMP-2的分泌水平。结果:与MDA-MB-231细胞相比,建立的转染细胞株M-OPNS1和M-OPNS2细胞的OPN mRNA及其蛋白表达均显著下调,细胞生长受到抑制,在细胞周期上表现为S期阻滞;OPN下调的细胞在软琼脂上的生长能力明显下降,MMP-2表达也明显降低。结论:RNA干扰介导的OPN下调能抑制MDA-MB-231细胞增殖、下调细胞恶性程度和MMP-2的表达,这可能为将来乳腺癌治疗提供新的方法。     

TAGLN基因过表达对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的 研究TAGLN基因过表达对人乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移能力和侵袭能力的影响及其分子机制.方法 对MDA-MB-231细胞采用慢病毒表达系统构建TAGLN基因稳定过表达细胞株,将MDA-MB-231细胞正常培养设为空白对照组,空载体慢病毒包装感染MDA-MB-231细胞后获得的稳定转染细胞株设为空载体对照组.Real time PCR和Western blot检测TAGLN mRNA和蛋白表达,划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot检测TAGLN基因过表达后基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和MMP-9蛋白表达变化.结果 MDA-MB-231细胞感染TAGLN基因过表达慢病毒载体后,细胞中TAGLN mRNA表达和蛋白表达升高(均P＜0.01),成功构建TAGLN基因过表达稳定细胞株(231-TAGLN).231-TAGLN细胞的体外迁移能力和侵袭能力下降,与空载体对照组和空白对照组细胞比较,差异均具有统计学意义(均P＜0.01),同时伴有MMP-2和MMP-9表达水平降低(均P＜0.01).结论 TAGLN基因过表达可以抑制乳腺癌细胞的迁移和侵袭,MMP-2和MMP-9基因表达下降可能参与这一过程.     

NRP-1过表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231、SK-BR-3生物学行为的影响

目的 通过上调乳腺癌细胞MDA-MB-231、SK-BR-3中NRP-1的表达,观察NRP-1对细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的影响。方法 构建pcDNA3.1-NRP-1表达载体,脂质体介导NRP-1 表达质粒转染MDA-MB-231、SK-BR-3细胞,用G418筛选出稳定转染的乳腺癌细胞株。利用RTqPCR、Western blot法分别检测NRP-1基因mRNA及其蛋白表达;CCK-8法、AnnexinⅤ-APC/7-AAD法、Transwell小室分别检测转染细胞增殖率、凋亡率及侵袭、迁移能力。结果 成功构建pcDNA3.1- NRP-1表达载体,转染MDA-MB-231、SK-BR-3细胞并筛选稳定表达系。与对照组相比,过表达组细胞的NRP-1 mRNA及蛋白表达水平明显升高（均P<0.05）;NRP-1过表达组的细胞较对照组增殖率增加、凋亡率降低、侵袭及迁移能力增强（均P<0.05)。结论 NRP-1在乳腺癌发展、浸润、转移中起着一定的作用,它可促进乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,抑制其凋亡。     

siRNA 抑制Sema4C 基因表达对人乳腺癌细胞恶性行为的影响*

目的:研究小干扰RNA（small interf ering RNA,siRNA ）抑制轴突导向蛋白分子（Semaphorin 4C,Sema4C）基因的表达对人乳腺癌细胞MDA-MB-231 体外迁移、侵袭及增殖的影响,并初步探讨其作用机制。方法:根据Sema4C 基因设计序列特异性的siRNA（Sema4C-siRNA ）,在脂质体介导下转染MDA-MB-231 细胞,Western blot方法检测基因封闭效应,利用细胞划痕实验、Tran ?swell小室侵袭实验及CFSE流式细胞仪方法检测细胞转染前后迁移、侵袭及增殖能力的变化,Western blot检测磷酸化AKT（p-AKT ）在转染前后细胞中表达的变化。结果:转染Sema4C-siRNA 72小时后,乳腺癌MDA-MB-231 细胞株（MDA-MB-231/Si）Sema4C 蛋白表达明显下降,与未转染细胞MDA-MB-231 相比,MDA-MB-231/Si细胞体外迁移能力减弱,侵袭及增殖能力明显下降;p-AKT 表达水平在MDA-MB-231/Si细胞中明显降低。结论:Sema4C-SiRNA 转染人乳腺癌MDA-MB-231 细胞可下调细胞中Sema4C 蛋白表达水平,Sema4C-SiRNA 对MDA-MB-231 细胞的体外迁移、侵袭和增殖有抑制作用,这可能与p-AKT 的下调有关。      

小RNA干扰PDK1抑制乳腺肿瘤细胞侵袭

目的:在肿瘤侵袭转移的细胞和生物学机制中,包含有多种基因和信号传导通路的改变.PDK1是P13K分子通路上的一个重要分子,为了研究PDK1对乳腺肿瘤细胞侵袭能力的影响,我们以乳腺癌MDA-MB-231细胞为研究模型,用小RNA干扰法特异下调PDK1的表达,研究其侵袭能力的变化,为乳腺癌临床治疗探索新的分子靶点.方法:通过构建PDK1特异的小RNA干扰质粒,利用脂质体介导的方法转染乳腺癌细胞MDA-MB-231,无限稀释法筛选单克隆细胞系,并通过Western Blot的方法检测各组细胞中PDK1蛋白的表达水平.细胞计数的方法观察各组细胞之间的增殖情况,并利用Matrigel Transwell的实验方法研究细胞在体外的侵袭能力差别.结果:MDA-MB-231细胞经小RNA干扰后PDK1蛋白表达水平明显下降,与对照组相比,细胞的生长增殖能力没有显著差异(P＞0.05),细胞的侵袭能力显著下降,并且差异有统计学意义(P＜0.05).结论:MDA-MB-231是一种侵袭能力高的乳腺癌细胞系,本研究利用小RNA干扰技术,特异性下调了乳腺癌MDA-MB-231细胞中的PDK1蛋白表达,结果表明,乳腺癌细胞的生长能力与对照组的细胞相比没有明显差别,但是,PDK1蛋白表达水平下降后乳腺癌细胞的侵袭能力明显下降,提示我们PDK1可能与乳腺癌MDA-MB-231细胞的侵袭能力紧密相关.鉴于PDK1处于PDK1-Akt-PKC信号通路的上游,以PDK1为靶标的分子干预可能对乳腺癌细胞的侵袭转移起到有效的作用.     

干扰LOX表达对MDA-MB-231细胞侵袭迁移影响及其机制的探讨

目的:研究干扰赖氨酰氧化酶(LOX)基因表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231体外侵袭迁移能力的影响,并探讨相关机制及意义。方法:设计合成特异性慢病毒干扰载体(LOX-RNAi-LV)转染MDA-MB-231细胞,实时定量PCR检测LOX mRNA和侵袭转移相关因子MMP-2、MMP-9和HIF-1α的mRNA表达,蛋白质印迹法检测LOX蛋白表达,细胞侵袭迁移实验(Transwell)检测细胞侵袭迁移能力。结果:转染LOX-RNAi-LV后,乳腺癌MDA-MB-231细胞LOXmRNA和蛋白表达水平明显降低,与空白组相比,抑制率分别为89.2%和82.97%。MMP-2(F=225.271,P=0.0000)、MMP-9(F=35.373,P=0.000 01)和低氧诱导因子HIF-1α(F=341.081,P=0.0000)的mRNA表达均明显降低。细胞侵袭迁移实验显示,干扰组穿过Transwell小室滤过膜的细胞数明显少于对照组(侵袭实验F=269.557,P=0.000 5;迁移实验F=164.321,P=0.000 3)。结论:转染LOX-RNAi-LV能有效地干扰LOX在乳腺癌细胞MDA-MB-231中表达,抑制肿瘤细胞的侵袭和迁移能力,其作用机制可能与下调MMP-2、MMP-9和HIF-1α表达有关。     

MRP-1/CD9与高转移人乳腺癌MDA-MB-231细胞恶性行为相关性的体外研究

目的:观察MRP-1/CD9对高转移人乳腺癌细胞系MDA-MB-231体外增殖和侵袭的抑制效应,并初步探讨其作用机制。方法:应用MRP-1/CD9特异性扩增引物,借助RT-PCR获得MRP-1/CD9全长cDNA片段,正向插入pcDNA3.1表达载体中,并将重组质粒导入MDA-MB-231细胞中,G418稳定筛选;应用CFSE-流式细胞仪检测,单层伤口愈合实验,软琼脂克隆形成实验等方法观察了MDA-MB-231细胞转染前后,细胞体外增殖及侵袭能力等指标的变化。Western blot检测AKT、p-AKT和SRC在转染前后的细胞中的表达变化。结果:成功构建全长MRP-1/CD9真核表达载体,将其转染入MDA-MB-231细胞后获得稳定表达MRP-1/CD9的MDA-MB-231克隆株(MDA-MB-231/CD9)。与空质粒转染后的MDA-MB-231细胞相比,MDA-MB-231/CD9细胞运动能力明显减弱,侵袭能力降低;p-AKT和SRC在MDA-MB-231/CD9细胞中表达明显降低。结论:MRP-1/CD9对细胞的运动和侵袭有抑制作用,这种作用与p-AKT和SRC的下调引起E-cadherin介导的粘附增强有关。     

乏氧环境下HO-1诱导表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭迁移的调控作用研究

目的:研究乏氧对人乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭及迁移能力的影响,并研究血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)在这一过程中的作用,初步探讨其作用机制。方法:利用RNA干扰技术,抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞中HO-1的表达,得到HO-1表达受干扰的细胞系MDA-MB-231-HO-1△。通过Transwell迁移、侵袭实验分别检测常氧及乏氧条件下MDA-MB-231-NC细胞（HO-1正常表达）和MDA-MB-231-HO-1△细胞（HO-1干扰表达）迁移、侵袭能力的变化,Western blot检测乏氧条件下两组乳腺癌细胞的上皮和间质标记物的表达,检验细胞系是否发生了上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)。结果:乏氧培养24小时后,MDA-MB-231-NC 细胞中HO-1蛋白表达水平显著升高,MDA-MB-231-HO-1△细胞中HO-1表达受抑制。乏氧培养后MDA-MB-231-NC细胞的侵袭、迁移能力较常氧培养的细胞明显增强,其差异具有统计学意义(P<0.05);而MDA-MB-231-HO-1△细胞侵袭、迁移能力在乏氧和常氧培养下无显著差异。乏氧条件下,MDA-MB-231-NC细胞的上皮标志物E-cadherin表达显著下调,间质标志物Vimentin表达显著上调,而MDA-MB-231-HO-1△细胞的E-cadherin、Vimentin表达无明显变化。结论:乏氧条件下乳腺癌MDA-MB-231细胞中HO-1可被诱导高表达,促进了细胞的侵袭迁移,其可能机制是促进了乳腺癌细胞上皮-间质转化。     

Radiation-enhancement of MDA-MB-231 breast cancer cell invasion prevented by a cyclooxygenase-2 inhibitor

Background:

Recent evidences support that radiation can promote the invasion of cancer cells. As interactions between cancer cells and surrounding stromal cells can have an important role in tumour progression, we determined whether an irradiation to fibroblasts can enhance the invasiveness of breast cancer cells. The role of cyclooxygenase-2 (COX-2), an inflammatory enzyme frequently induced by radiotherapy, was investigated.

Methods:

Irradiated 3T3 fibroblasts were plated in the lower compartment of invasion chambers and used as chemoattractant for non-irradiated human breast cancer cell MDA-MB-231, which are oestrogen receptor negative (ER(−)) and the oestrogen receptor positive (ER(+)) MCF-7 cells. Stimulation of COX-2 expression in irradiated 3T3 cells was measured by a semi-quantitative qPCR and western blot. Capacity of the major product of COX-2, the prostaglandin E2 (PGE₂), to stimulate the production of the matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) and cancer cell invasion were assessed with a zymography gel and invasion chambers.

Results:

Irradiation (5 Gy) of 3T3 fibroblasts increased COX-2 expression and enhanced by 5.8-fold the invasiveness of non-irradiated MDA-MB-231 cells, while their migration was not modified. Addition of the COX-2 inhibitor NS-398 completely prevented radiation-enhancement of cancer cell invasion. Further supporting the potential role of COX-2, addition of PGE₂ has increased cancer cell invasion and release of MMP-2 from the MDA-MB-231 cells. This effect of radiation was dependant on the expression of membrane type 1 (MT1)–MMP, which is required to activate the MMP-2, but was not associated with the ER status. Although irradiated fibroblasts stimulated the invasiveness of MDA-MB-231 ER(−) cells, no enhancement was measured with the ER(+) cell line MCF-7.

Conclusions:

Radiation-enhancement of breast cancer cell invasion induced by irradiated 3T3 fibroblasts is not dependant on the ER status, but rather the expression of MT1–MMP. This adverse effect of radiation can be prevented by a specific COX-2 inhibitor.     

RNA干扰抑制MTA 1的表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响

目的:探讨通过RNA干扰技术抑制MTA1的表达及对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和细胞周期的影响。方法:建立3种稳定表达靶向MTA1的shRNA的MDA-MB-231细胞系。通过反转录-聚合酶链反应(reverse transeription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和免疫组化法验证基因表达的抑制效果;采用细胞计数法及噻唑蓝(thiazolylblue,MTT)法检测细胞的增殖能力;流式细胞仪分析细胞周期。结果:MTA1基因被抑制后,其mRNA表达明显下降,RT-PCR结果显示,稳定转染3种重组质粒后,MTA1mRNA水平较对照组分别下调了70.07%、82.40%和63.44%;同时,MDA-MB-231细胞的生长明显受抑制,与对照组细胞相比,细胞计数示细胞数目明显减低;MTT分析示细胞增殖下降,流式细胞分析示细胞周期阻滞在G0/G1期。结论:在MDA-MB-231细胞中,抑制MTA1的表达可有效抑制细胞生长并导致细胞周期的阻滞;利用RNA干扰技术抑制MTA1的表达可能会成为一种有效的乳腺癌基因治疗手段。     

Stimulation of cyclooxygenase-2 expression by bone-derived transforming growth factor-beta enhances bone metastases in breast cancer

Cyclooxygenase-2 (COX-2), the rate-limiting enzyme of prostaglandin synthesis, has been implicated in invasiveness and distant metastases of cancer. Bone is one of the most common target sites of cancer metastasis. However, the role of COX-2 in bone metastasis is unclear. We examined the surgical specimens of bone metastases from patients with various types of cancers by using immunohistochemistry and observed evident COX-2 expression in these bone metastases. In a nude mouse model of bone metastasis, the MDA-MB-231 human breast cancer cells showed no COX-2 expression at orthotopic sites, whereas these cells, when metastasized to bone, intensely expressed COX-2, suggesting that the bone microenvironment induced COX-2 expression. Consistent with this notion, inhibition of bone resorption by the bisphosphonate ibandronate reduced COX-2 expression in MDA-MB-231 cells in bone. Transforming growth factor-beta (TGFbeta), one of the most abundant growth factors stored in bone, increased COX-2 expression and prostaglandin E2 production in MDA-MB-231 cells in culture. MDA-MB-231 cells overexpressing dominant-negative TGFbeta type II receptors showed decreased bone metastases and reduced osteoclastic bone resorption with impaired COX-2 expression. The COX-2 inhibitors, NS-398 and nimesulide, significantly suppressed bone metastases with decreased osteoclast number and increased apoptosis in MDA-MB-231 cells. These results suggest that bone-derived TGFbeta up-regulates COX-2 expression in breast cancer cells, thereby increasing prostaglandin E2 production, which in turn, stimulates osteoclastic bone destruction, leading to the progression of bone metastases. Our results also suggest that COX-2 is a potential therapeutic target for bone metastases in breast cancer.     

Targeting of COX-2 Expression by Recombinant Adenovirus shRNA Attenuates the Malignant Biological Behavior of Breast Cancer Cells

Background: Cyclooxygenase-2 (COX-2), considered to have tumor-promoting potential, is highly expressedin a variety of tumors, including breast cancer. Since the functions and action mechanisms of COX-2 in breastcancer have not been fully elucidated, in the present study, the effects of target inhibiting COX-2 with recombinantadenovirus Ad-COX-2-shRNA on malignant biological behavior were investigated in representative cell lines.Materials and Methods: Breast cancer MDA-MB-231 and MCF-7 cells were transfected with Ad-COX-2-shRNAand COX-2 expression was tested by RT-PCR and Western blotting. Changes in proliferation, apoptosis andinvasion of breast cancer cells were detected with various assays including MTT, colony forming, flowcytometryand Transwell invasion tests. The expression of related proteins involved in the cell cycle, apoptosis, invasionand signaling pathways was assessed by Western blotting. Results: COX-2 expression was significantly reducedin both breast cancer cell lines infected with Ad-COX-2-shRNA, with obvious inhibition of proliferation,colony forming rate, G2/M phase passage and invasion, as well as induction of apoptosis, in MDA-MB-231 andMCF-7 cells, respectively. At the same time, proteins related to the cell cycle, anti-apoptosis and invasion weresignificantly downregulated. In addition, c-myc expression and phosphorylation activation of Wnt/β-cateninand p38MAPK pathways were reduced by the Ad-COX-2-shRNA. Conclusions: COX-2 expression is associatedwith proliferation, apoptosis and invasion of breast cancer cells, and its mechanisms of action involve regulatingexpression of c-myc through the p38MAPK and Wnt/β-catenin pathways.     

沉默环状RNA hsa_circ_0001785表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的:探究环状RNA（circRNA）hsa_circ_0001785在乳腺癌组织和细胞中的表达变化及其对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:qRT-PCR实验检测hsa_circ_0001785在乳腺癌组织和乳腺癌细胞（MDA-MB-231和SK-BP-3）中的相对表达水平；CCK-8和克隆形成实验检测沉默或上调表达hsa_circ_0001785对MDA-MB-231细胞活性和克隆形成能力的影响；划痕愈合实验和Transwell侵袭实验检测沉默或上调表达hsa_circ_0001785对MDA-MB-231细胞迁移及侵袭能力的影响。结果:hsa_circ_0001785在乳腺癌组织中的相对表达水平明显高于癌旁组织，hsa_circ_0001785在MDA-MB-231和SK-BP-3细胞中的相对表达水平明显高于人乳腺上皮细胞MCF10A。在MDA-MB-231细胞沉默hsa_circ_0001785，MDA-MB-231细胞的活性和克隆形成能力明显降低，迁移距离显著减少，侵袭能力也明显下降。而在MDA-MB-231细胞中上调表达hsa_circ_0001785，MDA-MB-231细胞的活性和克隆形成能力显著升高，迁移距离明显升高，侵袭能力也明显升高。结论:hsa_circ_0001785在乳腺癌组织和乳腺癌细胞（MDA-MB-231和SK-BP-3）中的表达水平明显升高；沉默hsa_circ_0001785显著抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭能力，而上调表达hsa_circ_0001785明显促进乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

circNEIL3 通过靶向miR-4784 调控乳腺癌MDA-MB-231 细胞的增殖、迁移和侵袭

目的：研究环状RNA nei 样DNA糖化酶3（circNEIL3）和微小RNA（miR）-4784 对乳腺癌细胞MDA-MB-231 的增殖、迁移和侵袭的影响。方法：收集2018 年1月至2019 年12月在济南市中西医结合医院经组织病理诊断为乳腺癌并行手术切除的45 例乳腺癌患者的癌组织和配对癌旁组织，qPCR 法检测乳腺癌组织、癌旁组织中circNEIL3 和miR-4784 的相对水平。将circNEIL3 的小干扰RNA（si-circNEIL3）、miR-4784 模拟物、si-circNEIL3+miR-4784 抑制物分别转染MDA-MB-231 细胞，采用CCK-8法、平板克隆实验、划痕愈合实验、Transwell 实验检测circNEIL3和miR-4784 表达对细胞活力、克隆形成、迁移和侵袭的影响。双荧光素酶报告基因实验、RNA免疫沉淀（RIP）和RNA pull-down 实验检测circNEIL3和miR-4784 之间相互作用。结果：乳腺癌组织中circNEIL3呈高表达（P<0.05），miR-4784 呈低表达（P<0.05）。干扰circNEIL3显著降低MDA-MB-231 细胞活力、克隆形成数、划痕愈合率以及侵袭数（均P<0.05）。过表达miR-4784 显著降低MDA-MB-231 细胞活力、克隆形成数、划痕愈合率以及侵袭数（均P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验、RIP 和 RNA pull-down 实验均证实circNEIL3 与miR-4784 可直接结合，干扰circNEIL3 能明显上调miR-4784表达（P<0.05），过表达circNEIL3 能明显下调 miR-4784 表达（P<0.05）。抑制miR-4784 表达部分逆转干扰circNEIL3对MDA-MB-231 细胞活力、克隆形成、迁移和侵袭的抑制作用（P<0.05）。结论：干扰circNEIL3通过靶向上调miR-4784表达抑制MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭。