miR-944在食管鳞癌中的表达及其对Eca109细胞增殖、侵袭的影响

目的探讨miR-944在食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织中的表达与临床意义及其对食管癌细胞Eca109增殖和迁移能力的影响.方法收集36例经病理确诊的ESCC患者手术切除癌及癌旁组织,采用实时荧光定量PCR(realtime quantitative PCR,q RT-PCR)检测癌组织和癌旁组织中mi R-944表达,并分析mi R-944在不同临床病理资料之间的差异.脂质体法转染mi R-944 mimics、inhibitors、无关对照序列(negative control,NC)到Eca109细胞,q RT-PCR检测各组mi R-944表达水平,MTT法检测转染后24、48、72、96 h增殖能力,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力.结果m i R-944在E S C C组织表达水平显著高于癌旁组织(P0.01).同时,mi R-944在癌症组织中的表达水平随患者TNM分期的升高而升高(P0.01),而淋巴结转移阳性组mi R-944表达水平显著高于阴性组(P0.01).与NC组相比,mi R-944 mimics和inhibitors转染组m i R-944表达水平显著升高和细胞增殖能力明显均增强,而inhibitors组均受到抑制(P0.01).结论mi R-944在ESCC组织表达上调,并与ESCC TNM分期和淋巴结转移相关,其可能通过促进癌细胞的增殖和侵袭能力参与ESCC的发生与发展.     

过/降表达miR-92a的食管鳞癌细胞增殖、迁移、侵袭能力及PTEN/PI3K/Akt通路蛋白表达变化

目的 观察过/降表达miR-92a的食管鳞癌（ESCC）细胞增殖、迁移、侵袭能力及磷酸酯酶与张力蛋白同源物（PTEN）/磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/Akt通路蛋白表达变化。方法 将人ESCC细胞系Eca-109随机分为miR-92a过表达组、miR-92a降表达组、过表达阴性对照组、降表达阴性对照组,分别转染miR-92a mimics、miR-92a inhibitor、mimic-NC、inhibitor-NC 24 h。采用CCK-8法检测各组培养24、48、72、96 h的的吸光度（A）值,划痕愈合实验检测细胞迁移能力,Transwell小室检测细胞侵袭能力。采用Westen blotting法检测细胞PTEN/PI3K/Akt通路蛋白PTEN、PI3K、Akt、磷酸化PTEN(p-PTEN)、p-PI3K、p-Akt。结果 各时点细胞A值、细胞迁移距离、穿膜细胞数比较,miR-92a过表达组>过表达阴性对照组、降表达阴性对照组>miR-92a降表达组（P均<0.05）。p-PTEN蛋白miR-92a降表达组>过表达阴性对照组、降表达阴性对照组>...     

miR-133b、Bcl-w在老年食管鳞癌中表达及相关机制

目的 探讨microRNA(miR)-133b、B细胞淋巴瘤(Bcl)-w在老年食管鳞状细胞癌中的表达及对食管鳞状细胞癌细胞的影响。方法 使用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测30例老年患者食管鳞状细胞癌组织及其对应癌旁组织中miR-133b及Bcl-w mRNA表达。将miR-133b mimics及阴性对照转染至食管鳞状细胞癌ECA109细胞株，检测转染效率。检测转染后ECA109细胞的增殖和凋亡情况，使用TargetScan和miRDB软件预测miR-133b的靶基因，并通过双荧光素酶报告实验方法验证，Western印迹检测靶基因Bcl-w蛋白表达。结果 食管鳞状细胞癌中miR-133b mRNA表达量明显低于癌旁组织(P<0.001),而食管鳞状细胞癌中Bcl-w蛋白表达量明显高于癌旁组织(P<0.001),miR-133b与Bcl-w表达呈负相关(r=-0.792,P<0.01)。miR-133b mimics转染能明显上调ECA109细胞中的miR-133b水平，并明显降低其增殖能力，明显促进其凋亡(P<0.001)。miR-133b与B...     

食管鳞癌中微小核糖核酸let-7的表达及病理生物学意义

目的 探讨微小RNA(miRNA)1et-7对食管鳞癌细胞增殖的影响及食管鳞癌组织中let-7表达水平与临床病理特征间的关系.方法 利用RNA干扰(RNAi)和细胞转染技术将食管鳞癌细胞Eca109分别转染入let-7、let-7抑制剂及随机序列.以正常培养的Eca109细胞为阴性对照组.噻唑蓝(MTT)比色法检测各组Eca109细胞的增殖情况.实时荧光定量聚合酶链反应(qRTPCR)检测各组细胞、45例食管鳞癌组织及其癌旁组织中let-7的表达水平,并分析其与食管鳞癌临床病理特征间的关系.结果 转染后72 h,转染let-7组吸光度(A)值较阴性对照组明显降低(P=0.005),转染let-7抑制剂组A值较阴性对照组明显升高(P=0.029).与阴性对照组let-7表达量比较,转染let-7组表达增加33%(1.33比1.00,P=0.039),转染let-7抑制剂组表达降低50%(0.50比1.00,P=0.014).食管鳞癌组织和癌旁组织中let-7相对表达量的比值为0.66±0.47,差异有统计学意义(P=0.001).汉族患者食管鳞癌组织中let-7相对表达量(0.48±0.43)低于哈萨克族(0.88±0.51,P=0.019).低分化食管鳞癌组织中let-7相对表达量(0.42±0.30)低于高分化食管鳞癌组织(0.84±0.38,P=0.015).有淋巴结转移者食管鳞癌组织中let-7相对表达量(0.50±0.35)低于无淋巴结转移者(0.80±0.52,P=0.032).结论 let-7对食管鳞癌的发生、发展起抑制作用,其表达水平与组织分化程度、淋巴结转移及民族相关.

Abstract：

Objective To estimate the effect of microRNA (miRNA) let-7 expression on human esophageal squamous cell carcinoma(ESCC) and the relationship between let-7 level and clinicopathological parameters. Methods ESCC cell line (Eca109) was transfected with let-7 or its inhibitor by RNAi and cell transfection techniques. Normal cultured Eca109 cell was served as negative control. The proliferation of Eca109 cell was detected by MTT. The expression of let-7 in Eca109 cells and 45 paired ESCC tissues and corresponding para-cancerous tissues were measured using real-time quantitative polymerase chain reaction (qRT-PCR). The relationship between let-7 level and clinicopathological parameters in patients with ESCC was analyzed. Results The A value of let-7 in Eca109 cells transfected with let-7 was lower than negative control (P=0.005), while it was higher in Eca109 cells transfected inhibitor than that in negative control 72 hours after transfection. In comparison with negative control, the expression of let-7 in Eca109 cells transfected with let-7 was increased 33% (1.33 vs 1.00,P=0. 039) and it was decreased 50% in Eca109 cells transfected with inhibitor (0.50 vs 1.00,P=0. 014). The ratio of let-7 expression in ESCC tissue and para-cancerous tissue was 0.66 ± 0.47 with significant differece (P= 0.001). Moreover, The level of let-7 expression in Han patients with ESCC was lower than Kazakh patients with ESCC (0.48±0.43 vs 0. 88±0.51,P=0. 019). The level of let-7 expression in poorly differentiated ESCC tissue was lower than well differentiated ESCC tissue (0.42±0.30 vs 0.84±0.38,P=0. 015). The level of let-7 expression in patients with lymph node metastasis was lower than those without lymph node metastasis (0.50±0.35vs 0. 80±0.52,P=0. 032) . Conclusion It is demonstrated that let-7 can inhibit the carcinogenesis and development of ESCC. The level of let-7 expression is associated with cell differentiation,lymph node metastasis and nationalities.     

RNA干扰Akt对食管癌细胞株Eca109生物学特性的影响

目的:探讨RNA干扰沉默Akt对人食管鳞癌细胞体外增殖、迁移及血管生成拟态(VM)形成的影响.方法:应用倒置荧光显微镜观察Akt的干扰质粒转染食管癌细胞Eca109后绿色荧光蛋白的表达;采用Western blot方法检测Akt蛋白的表达;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测转染前后细胞增殖能力的变化;Transwell方法...     

siRNA干扰PDCD4表达对人食管鳞状细胞癌细胞株Eca109的影响

背景:研究发现PDCD4是一种新的肿瘤抑制基因,其表达与多种肿瘤的恶性转化相关。然而,PDCD4在食管鳞状细胞癌中的作用尚未完全明确。目的:探讨沉默PDCD4表达对食管鳞状细胞癌细胞株Eca109体外增殖、迁移、凋亡能力的影响。方法:选择未转染的Eca109细胞(空白对照组)、转染无义序列的Eca109细胞(阴性对照组)和转染PDCD4 siRNA的Eca109细胞(si-PDCD4组),采用蛋白质印迹法检测PDCD4蛋白表达,CCK-8法检测细胞增殖能力,平板单克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移能力。结果:与空白对照组、阴性对照组相比,si-PDCD4组细胞中PDCD4蛋白表达降低(P0.05),细胞增殖能力增强(P0.05),细胞克隆形成数目增多(P0.05),细胞凋亡率降低(P0.05),细胞迁移能力增强(P0.05)。结论:PDCD4 siRNA可在体外促进食管鳞状细胞癌Eca109细胞的增殖、迁移,并抑制细胞凋亡,为食管鳞状细胞癌的诊治提供了新的实验依据。     

SIRT3在食管鳞癌中的表达及作用机制

目的探讨SIRT3在食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)中的表达及其相关作用机制,为ESCC的早期诊断提供依据。方法收集ESCC患者癌组织、正常食管组织标本各20例,免疫组化(IHC)、蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测各组标本中SIRT3的表达;Western blotting检测ESCC细胞株Eca109在常氧、缺氧(6 h、12 h、24 h)状态下SIRT3、HIF-1α蛋白的表达。结果 SIRT3蛋白在ESCC组织中的表达水平高于正常食管组织,差异有统计学意义(0.51±0.06 vs 0.26±0.04,P0.05);缺氧状态下Eca109细胞中SIRT3表达水平降低,HIF-1α表达水平升高。结论 SIRT3的高表达可能与ESCC的发生、发展有关;HIF-1α对ESCC的发生、发展有促进作用,对其表达的检测可能会成为ESCC的早期诊断手段之一。     

PIK3CA在食管鳞癌细胞系Eca 109中的功能

目的:探讨PIK3CA在食管鳞癌细胞系Eca109中的作用.方法:用脂质体介导siRNA瞬时转染Ecal09细胞,转染细胞分为3组:空白对照组(正常培养的Eca109细胞)、阴性对照组(转染随机序列的siRNA)及实验组(转染PIK3CA-siRNA).运用Western blot技术检测PIK3CA基因干扰后蛋白水平表达的变化;四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)和细胞划痕实验检测PIK3CA干扰后Eca109细胞增殖和迁移能力的改变;流式细胞仪检测PIK3CA干扰后细胞周期和凋亡率的变化.结果:干扰PIK3CA基因表达后,其蛋白水平表达较空白对照组及阴性对照组显著性降低(P0.05).MTT实验和划痕实验显示干扰PIK3CA的表达后,Eca109细胞增殖受到显著性抑制(P0.05),迁移能力显著性降低(P0.05).流式细胞仪检测下调P I K3C A的表达后细胞周期阻滞在细胞分裂的S期(P0.05),且使细胞凋亡率显著性增加(P0.05).结论:PIK3CA基因能够促进Eca109细胞的增殖和迁移能力,并具有抗凋亡作用.PIK3CA基因有望成为食管鳞癌治疗的潜在靶点.     

过表达AnnexinA2抑制食管癌Eca109细胞增殖和迁移

目的探讨AnnexinA2的表达对人食管癌细胞Eca109增殖、迁移、细胞周期和凋亡的影响。方法采用基因过表达技术上调Eca109细胞中AnnexinA2的表达,qRT-PCR和Western blot技术检测AnnexinA2 mRNA和蛋白水平变化;赛唑蓝(MTT)比色法研究其对Eca109细胞的存活、增殖能力的影响;采用划痕实验观察其对细胞迁移能力的影响;流式细胞术检测其对Eca109细胞周期及细胞凋亡的影响。结果 qRT-PCR和Western blot检测提示Eca109细胞转染AnnexinA2过表达质粒后mRNA和蛋白质表达水平均显著增高;MTT实验表明AnnexinA2过表达组细胞的增殖能力明显低于对照组(P0.05),同时细胞迁移能力也显著下降(P0.05);AnnexinA2在Eca109细胞中高表达将细胞阻滞于G2/M期,对细胞凋亡没有影响。结论 AnnexinA2在食管癌细胞中呈低表达,上调AnnexinA2蛋白水平可以明显抑制食管癌细胞的增殖、迁移能力。     

食管鳞癌中微小核糖核酸-21的作用及对靶蛋白的影响

目的 探讨微小RNA(miRNA)-21对食管鳞癌细胞Eca109和哈萨克族食管癌的促增殖作用及对程序性细胞死亡基因4(PDCD4)表达的影响。方法将食管鳞癌细胞系Eca109分为miRNA-21 Mimics组（转染序列5′-UCAACAUCAGUCUGAUAAGCUA-3′）、miRNA-21抑制剂组（转染序列5′-UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA-3′）、阴性对照组（转染随机序列）和正常对照组（不予转染等任何处理）。细胞按4.5×105个/孔接种于6孔板,基于RNA干扰(RNAi)技术、使用脂质体2000试剂进行细胞转染。采用细胞计数法检测转染后各组细胞的增殖情况。使用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组细胞的miRNA-21转录水平。采用Western印迹技术检测转染后各组PDCD4蛋白表达情况。检测18对哈萨克族食管癌及其对应的癌旁正常食管组织中miRNA-21转录和PDCD4蛋白表达情况。结果 转染48 h后,与正常对照组比较,miRNA-21Mimics组Eca109细胞数增加36％(P=0.002),miRNA-21抑制剂组细胞数减少28％(P=0.002),阴性对照组细胞数变化不明显(P=0.515)。转染48 h后,miRNA-21抑制剂组、miRNA-21 Mimics 组、阴性对照组、正常对照组miRNA-21的相对表达量分别为0.37±0.10、9.17±1.08、0.74±0.23和1.04±0.34,PDCD4蛋白相对表达量分别为1.47±0.11、0.61±0.09、0.89±0.12、0.79±0.02。与正常对照组比较,miRNA-21抑制剂组miRNA-21相对表达量下降(P=0.031)、PDCD4蛋白相对表达量上调（P=0.001）,miRNA-21 Mimics组miRNA-21相对表达量上升(P=0.001)、PDCD4相对表达量下调(P=0.030),阴性对照组则差异无统计学意义（P值分别=0.272和0.541）。18对哈萨克族食管癌组织中16对的miRNA-21相对表达量(0.11±0.09)高于其对应的癌旁正常食管组织(0.03±0.03,P=0.001),PDCD4蛋白相对表达量（0.92±0.39）低于其对应的癌旁正常食管组织（1.57±0.80,P=0.004）,且癌组织中miRNA-21相对表达水平越高,PDCD4蛋白相对表达水平越低（r=-0.538,P=0.046）。结论miRNA-21可能通过抑制PDCD4蛋白表达而促进食管鳞癌细胞Eca109增殖,并且参与哈萨克族食管癌的发生。     

ESCC组织SNHG17表达及转染si-SNHG17质粒的人食管鳞癌细胞株增殖、凋亡、放射敏感性观察

目的 观察食管鳞癌（ESCC）组织小核仁RNA宿主基因17(SNHG17)表达情况及转染si-SNHG17质粒的人ESCC细胞株ECA109增殖、凋亡、放射敏感性。方法 取ESCC肿瘤组织与癌旁组织标本各89例份;另取ECA109细胞,并随机分为对照组（Control组,空白培养基处理）、si NC组（转染si NC质粒）、si-SNHG17组（转染siSNHG17质粒）、si-SNHG17+inhibitor NC组（si-SNHG17与inhibitor NC共转染）、si-SNHG17+miR-375 inhibitor组（si-SNHG17与miR-375 inhibitor共转染）;采用RT-qPCR法检测ESCC组织、癌旁组织和各组细胞SNHG17、miR-375、USP14 mRNA,CCK-8法检测各组细胞增殖能力（OD值）,流式细胞术及Western blot法检测各组细胞凋亡能力[凋亡率及凋亡相关蛋白（Bax、Bcl-2、Caspase3、USP14蛋白）],克隆形成实验检测各组细胞放射敏感性。双荧光素酶报告基因实验分别验证SNHG17、miR-375及miR-37...     

MiR497HG靶向miR-588调控肺癌细胞增殖、迁移侵袭和凋亡的机制研究

目的研究MiR497HG对肺癌细胞增殖、迁移侵袭及凋亡的影响,并探讨其机制。方法运用RT-PCR法检测永生化正常肺上皮细胞BEAS-2 B、肺癌细胞NCI-H1975、NCI-H460、A549中MiR497HG、miR-588的表达;将blank组(不做任何处理)、si-NC组(转染si-NC)、si-MiR497HG组(转染si-MiR497HG)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-588组(转染anti-miR-588)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-588组(转染miR-588 mimics)、si-MiR497HG+anti-miR-NC组(共转染si-MiR497HG和anti-miR-NC)、si-MiR497HG+anti-miR-588组(共转染si-MiR497HG和anti-miR-588),均用脂质体法转染至NCI-H1975细胞;MTT法检测细胞增殖;Transwell小室检测细胞的迁移侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中MiR497HG与miR-588的结合力。结果与永生化正常肺上皮细胞BEAS-2 B相比,肺癌细胞NCI-H1975、NCI-H460、A549中MiR497HG表达显著升高,miR-588表达显著降低(P0.05);抑制MiR497HG或过表达miR-588均可抑制NCI-H1975细胞的增殖、迁移侵袭,促进凋亡;miR-588可抑制野生型MiR497HG细胞的荧光活性,且可负向调控MiR497HG的表达;过表达MiR497HG可逆转miR-588对肺癌细胞的增殖、迁移侵袭抑制和凋亡促进作用。结论长链非编码RNA MiR497HG可促进肺癌细胞增殖、迁移侵袭,抑制凋亡,其机制可能与靶向抑制miR-588有关,将可为肺癌的治疗提供新靶点。     

RNA干扰PKM2对食管癌细胞株Eca109生物学特性的影响

目的将靶向PKM2的siRNA转染食管癌细胞株Eca109,观察转染后细胞内PKM2基因的表达变化及其对Eca109细胞增殖和周期的影响。方法将人工合成的针对PKM2基因的siRNA片段通过Lipofectamine 2000转染食管癌细胞株Eca109;实验分为实验组、空白对照组和阴性对照组,分别用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantita-tive PCR,qRT-PCR)和Western blot法检测各组细胞中PKM2的mRNA和蛋白质的表达量,并用MTT法检测各组细胞的增殖活力,流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果与空白对照、阴性对照比较,实验组细胞中PKM2 mRNA及蛋白表达减少(P<0.05),Eca109细胞转染PKM2 siRNA后,增殖能力减弱,细胞周期被阻滞在G0/G1期。结论 PKM2对Eca109细胞的生长起促进作用。     

miR-130a调控肿瘤抑制因子对结直肠癌细胞生物学行为的影响

目的通过检测miR-130a的表达情况及miR-130a与肿瘤抑制因子(CYLD)的靶向关系,探讨miR-130a是否可通过调控CYLD对结直肠癌SW480细胞生物学行为产生影响。方法将结直肠癌SW480细胞设置为对照组、阴性转染组、miR-130a inhibitor组,采用qRT-PCR检测各组miR-130a的表达; MTT法、Transwell法、流式细胞术分别检测各组SW480细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移情况;双荧光素酶报告基因检测miR-130a与CYLD靶向关系; Western blot检测各组细胞CYLD、增殖、凋亡、侵袭迁移相关蛋白表达情况。结果与对照组相比,miR-130a inhibitor组的miR-130a表达水平显著降低(P 0.05)。与对照组相比,miR-130a inhibitor组SW480细胞凋亡率显著增加,而存活率、侵袭迁移数显著降低(P 0.05)。与对照组相比,miR-130a inhibitor组c-Myc、CyclinD1、MMP7、Bcl-2表达水平显著降低,Bax、Caspase-3、CYLD表达水平显著增加(P 0.05)。靶基因预测结果显示,CYLD是miR-130a的潜在目标基因,与pmirGLO-CYLD-wt+miR-NC组相比,pmirGLO-CYLD-wt+miR-130a mimics组荧光素酶活性显著降低。结论 miR-130a表达沉默可能通过促进CYLD表达抑制SW480细胞的增殖、侵袭、迁移,促进细胞凋亡。     

miR-21在大肠癌细胞迁移和侵袭中的作用及机制探讨

目的 探讨miR-21在大肠癌细胞迁移和侵袭中的作用及机制.方法 取大肠癌SW480细胞培养、传代,分为两组.观察组转染miR-21 mimics,对照组加入同浓度的miRNA mimics negative control.采用实时荧光定量PCR法检测细胞中miR-21的表达情况,采用Transwell小室检测细胞的迁移和侵袭能力,Western blot法检测上皮一间质转化(EMT)相关蛋白表达情况.结果 转染组miR-21的表达量、细胞的迁移和侵袭能力均明显高于对照组(P均＜0.05);细胞中紧密连接蛋白(ZO-1)和上皮钙黏蛋白(E-cad)的表达明显降低、神经钙黏蛋白(N-cad)和转录因子Slug的表达明显升高,第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)表达明显降低、而磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)表达明显升高(P均＜0.05).结论 miR-21可促进人大肠癌细胞发生EMT发生细胞迁移和侵袭,其机制为下调PTEN蛋白表达、激活P13K/Akt,促进EMT.     

miR-34b在老年鼻咽癌组织中表达及对细胞增殖、侵袭的影响

目的探讨miR-34b在老年鼻咽癌组织中表达及对细胞增殖、侵袭的影响。方法选取初治原发性老年鼻咽癌患者83例,正常鼻咽黏膜组织40例作为对照组,培养人鼻咽癌CNE-2细胞株,根据转染物不同将细胞分为miR-34b转染组、阴性对照组和空白对照组,利用实时荧光定量PCR技术检测老年鼻咽癌及对照组组织中miR-34b表达以及不同转染组细胞中miR-34b表达,MTT比色法检测不同转染组细胞增殖能力,检测细胞黏附能力,Transwell法检测不同转染组细胞侵袭能力。结果老年鼻咽癌组织中miR-34b相对表达量为(0.64±0.09),显著低于对照组的(0.94±0.12),差异有统计学意义(t=14.410,P<0.001);miR-34b在老年鼻咽癌组织中相对表达量与临床分期、T分期、N分期和淋巴结转移有关(P<0.001);miR-34b转染组细胞中miR-34b相对表达量为(0.85±0.10),显著高于阴性对照组和空白对照组,分别为(0.52±0.08)和(0.50±0.07),差异有统计学意义(F=243.329,P<0.001);与阴性对照组和空白对照组相比,miR-34b转染组细胞增殖能力显著降低(P<0.05);miR-34b转染组黏附细胞数显著高于阴性对照组和空白对照组,而侵袭细胞数显著低于阴性对照组和空白对照组(P<0.001)。结论 miR-34b在老年鼻咽癌组织中呈低表达,上调miR-34b表达可减少细胞增殖,增加细胞黏附能力,抑制细胞侵袭能力,有望成为提高鼻咽癌对放射治疗敏感性的目的基因。     

乏氧条件下PTEN、KAI1基因双转染对胰腺癌AsPC1细胞增殖、转移的影响

目的 观察乏氧环境下PTEN和KAI1基因双转染人胰腺癌AsPC1细胞后对其增殖、迁移的影响.方法 应用我们前期构建的PTEN和KAI1基因过表达载体同时转染乏氧环境培养的人胰腺癌AsPC1细胞,采用蛋白质印迹法检测PTEN和KAI1蛋白的表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖,克隆形成实验观察肿瘤细胞形成集落能力,Transwell小室实验观察细胞的迁移能力.结果 双基因转染后,乏氧培养的AsPC1细胞的PTEN、KAI1蛋白表达量较空载体转染组细胞增加2.05倍及1.51倍;细胞增殖显著减缓(0.5比0.8,P=0.000);克隆形成数显著下降[(41.67±5.03)个比(86.00±7.81)个,P=0.017)];细胞迁移能力明显减弱(0.68±0.05比1.23±0.03,P=0.003).结论 乏氧条件下PTEN、KAI1基因双转染AsPC1细胞后能够抑制其增殖、迁移能力,基因联合治疗胰腺癌可能具有潜在的应用价值.     

LncRNA NEAT1靶向miR-520b调控口腔鳞癌细胞增殖、凋亡及自噬的分子机制

目的研究长链非编码RNA(LncRNA)核富集的转录物(NEAT)1对人口腔鳞癌细胞Tca8113增殖、凋亡和自噬的影响,并探讨其机制。方法运用qRT-PCR检测人口腔鳞癌细胞Tca8113、人正常口腔上皮细胞HOEC中NEAT1、短链非编码RNA(miR)-520b的表达;将si-NC组(转染si-NC)、si-NEAT1组(转染si-NEAT1)、miR-520b组(转染miR-520b mimics)、miR-NC组(转染miR-NC)、si-NEAT1+anti-miR-NC组(si-NEAT1和anti-miR-NC共转染)、si-NEAT1+anti-miR-520b组(si-NEAT1和anti-miR-520b共转染),用脂质体法转染至Tca8113细胞;MTT法检测各组细胞的增殖;流式细胞术检测各组细胞的凋亡;Western印迹检测各组细胞中LC3Ⅱ/Ⅰ的蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果与HOEC相比,Tca8113中NEAT1表达显著升高,miR-520b表达显著降低(P0.05);抑制NEAT1、过表达miR-520b均可抑制Tca8113细胞增殖,促进凋亡和自噬。抑制miR-520b可逆转抑制NEAT1对Tca8113细胞的增殖抑制和凋亡、自噬促进作用。结论抑制NEAT1可抑制口腔鳞癌细胞增殖、促进凋亡和自噬,其机制可能与靶向miR-520b有关,将可为口腔鳞癌的靶向治疗提供依据。     

微小RNA-214对肝纤维化的影响

目的探讨miRNA-214对肝纤维化的影响及其可能的机制。方法通过腹腔注射CCl4构建小鼠肝纤维化模型,运用逆转录-聚合酶链反应(reversetranscriotion-polymerasechainreaction,RT-PCR)法检测miR-214的表达情况。通过脂质体转染方式调控LX-2细胞miR-214的表达水平,采用CCK-8法、RT-PCR及划痕实验检测转染miR-214模拟物和miR-214抑制物后LX-2细胞增殖、活化及迁移能力的变化。通过蛋白质印迹法对数据库Targetscan预测的miR-214靶基因进行验证。结果模型组小鼠肝脏miR-214表达水平显著高于对照组(t=1.928,P=0.040)。LX-2细胞转染miR-214模拟物后,miR-214表达上调(t=3.872,P=0.001);LX-2细胞α-SMA、胶原ⅠαmRNA的表达水平上调(t=1.952,P=0.039;t=2.926,P=0.006),LX-2细胞增殖和迁移能力增强,数据库Targetscan预测的靶基因PTEN蛋白表达量下调。结论 miR-214参与HSC的活化、增殖及迁移,可促进肝纤维化的形成,miR-214可能是通过抑制PTEN的表达来影响HSC的生物学功能。