五倍子水提取物对内毒素诱导人牙髓细胞分泌IL-6的影响

目的:观察不同浓度五倍子水提取物对内毒素诱导人牙髓细胞分泌IL-6的影响.方法:采用组织块法体外培养人牙髓细胞,以含不同浓度五倍子水提取物(1.25、2.5、5.10、20 μg/mL)、25μg/mL内毒素和20mL/L新生牛血清的DMEM培养基作用于第5代人牙髓细胞,用放射免疫法测定IL-6含量,采用单因素方差分析(完全随机设计)和t检验对实验数据进行统计学分析.结果:低浓度(1.25、2.5、5、10、20μg/mL)五倍子水提取物能明显抑制25μg/mL内毒素诱导人牙髓细胞分泌IL-6,这种抑制作用在一定范围内呈浓度依赖性.结论:低浓度五倍子水提取物具有抑制内毒素诱导人牙髓细胞分泌IL一6的作用.     

五倍子水提取物对内毒素抑制人牙髓细胞活性的影响

目的：观察不同浓度及不同作用时间的五倍子水提取物对内毒素抑制人牙髓细胞活性的影响。方法：采用组织块法体外培养牙髓细胞，以不同浓度五倍子水提取物（1．25×10^3、2．5×10^3、5×10^3、10×10^3、20×10^3μg／L）和1×10^3μg／L内毒素作用于人牙髓细胞，用四唑盐比色试验（MTT法）检测细胞活性，采用单因素方差分析（完全随机设计）对实验数据进行统计学分析。结果：低浓度（1．25×10^3、2．5×10^3、5×10^3μg／L）五倍子水提取物能明显拮抗100μg／mL内毒素对细胞活性的抑制作用（P〈0．01），2．5×10^3μg／L五倍子水提取物拮抗1×10^3μg／L内毒素对细胞活性的抑制作用第3天开始明显增加，并呈时间依赖性。结论：低浓度五倍子水提取物能够拮抗内毒素对人牙髓细胞活性的抑制作用。     

五倍子水提取物对内毒素损伤人牙髓细胞超微结构的影响

目的：观察五倍子水提取物对内毒素损伤人牙髓细胞超微结构的影响。方法：采用组织块法体外培养人牙髓细胞，以5μg／mL五倍子水提取物和100μg／mL内毒素分别或共同作用于第5代牙髓细胞，并设空白对照组，在透射电镜下观察细胞超微结构的改变。结果：100μg／mL内毒素对牙髓细胞超微结构有不同程度的损伤，加入5μg／mL五倍子水提取物后，牙髓细胞超微结构损伤明显减轻，细胞器结构基本恢复正常。结论：低浓度五倍子水提取物能够抑制内毒素对人牙髓细胞超微结构的损伤作用。     

变形链球菌超声提取物对牙髓细胞增殖和天然免疫受体基因mRNA表达的影响

目的:观察变形链球菌超声提取物对牙髓细胞的增殖活性、天然免疫受体基因mRNA表达的影响。方法:采用组织块法原代培养牙髓细胞,通过不同浓度的变形链球菌超声提取物(1、10、100μg/ml)作用于牙髓细胞,MTT法检测牙髓细胞的增殖活性;荧光定量PCR检测牙髓细胞NOD2、TLR2和TLR4 mRNA的表达水平。结果:1μg/ml变形链球菌超声提取物处理24 h可促进牙髓细胞的增殖;10μg/ml和100μg/ml处理24 h和48 h可明显抑制细胞增殖。变形链球菌超声提取物(10μg/ml)作用于牙髓细胞后,NOD2、TLR2和TLR4 mRNA表达量均增加。结论:变形链球菌超声提取物可抑制牙髓细胞的生长,促进NOD2、TLR2和TLR4 mRNA的表达。     

脂多糖对人牙髓细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的:了解脂多糖(LPS)对人牙髓细胞的增殖和碱性磷酸酶活性的影响。方法:Ⅰ型胶原酶消化组织块法体外培养牙髓细胞,检测细胞表面LPS受体CD14(mCD14);流式细胞术观察不同浓度LPS(0.1μg/ml、1μg/ml和10μg/ml)对牙髓细胞细胞周期的影响,测定不同浓度LPS对牙髓细胞碱性磷酸酶活性的影响,采用χ2检验以及单因素方差分析对实验数据分别进行统计学分析。结果:人牙髓细胞不表达mCD14,LPS在浓度为0.1μg/ml、1μg/ml和10μg/ml时可以抑制牙髓细胞增殖(P<0.01)及碱性磷酸酶活性(P<0.05)。结论:LPS具有抑制牙髓细胞增殖及牙髓细胞分化的作用。     

五倍子水提取物抑制LPS对牙周膜细胞附着牙骨质片表面的影响

目的观察五倍子水提取物对LPS抑制PDLC在牙骨质片表面附着的影响。方法采用细胞培养技术,细胞计数法及扫描电镜进行观察。结果加入五倍子水提取物溶液后,对LPS抑制PDLC在牙骨质片表面的附着有明显拮抗作用,该作用随五倍子水提取物浓度增加而增加,到10μg/mL时,达到峰值。另外,培养液中先加入不同浓度的五倍子水提取物溶液,培养24h后再加入LPS时(A组),与LPS和五倍子水提取物溶液同时加入组(B组)相比,除对LPS抑制PDLC在牙骨质片表面附着有同样拮抗趋势外,当五倍子水提取物浓度为10μg/mL、20μg/mL时,A组的细胞附着数明显高于B组。扫描电镜显示,A组与B组牙骨质片表面细胞数量较多,细胞形态丰满,细胞胞突伸展明显,并相互交织成栅栏状、网状结构,部分细胞呈叠层生长,其中A组效果更明显。结论五倍子水提取物对LPS抑制PDLC在牙骨质片表面附着有拮抗和保护作用。     

氟对体外培养人牙乳头细胞分泌I型胶原的影响

目的　了解氟对体外培养人牙乳头细胞分泌I型胶原的影响。方法　对人牙乳头细胞体外培养 ,分别给予 0 .0 g/L、0 .2× 10 -6g/L、1.0× 10 6g/L、5 .0× 10 6g/L、2 5 .0× 10 -6g/L氟处理 ,采用Westernblot方法分析氟对细胞培养外I型胶原的影响。结果　体外培养的人牙乳头细胞合成Ⅰ型胶原可以分泌Ⅰ型胶原。 0 .0g/L、0 .2× 10 -6g/L、1.0× 10 6g/L、5 .0× 10 6g/L氟对细胞外Ⅰ型胶原量无显著差异 (P >0 .0 5 ) ;2 5 .0× 10 -6g/L氟处理组细胞外I型胶原量较其它组高 (P <0 .0 5 )。结论　过量氟可能抑制细胞外I型胶原降解     

五倍子水提取物对牙龈卟啉菌膜泡抑制牙周膜成纤维细胞生物活性的影响

目的:探讨五倍子水提取物对牙龈卟啉菌(Porphyromonas gingivalisPg)膜泡(extracellular vesicles ECV)抑制牙周膜成纤维细胞生物活性的影响。方法:采用体外培养的人牙周膜成纤维细胞,用3H-TdR掺入方法,检测ECV对人牙周膜成纤维细胞DNA合成的影响,以及中药五倍子提取物对ECV这一生物活性的阻断作用。结果:细胞培养物中加入50μg/mLECV时,人牙周膜成纤维细胞DNA的合成受到明显抑制,与空白对照组相比P<0.01。当同时加入各浓度五倍子水提取物时其DNA合成量明显增加,与ECV组相比均(P<0.05),且随五倍子水提取物浓度升高,DNA的合成量也随之增高,并呈一定浓度依赖性。结论:适宜浓度的五倍子提取物可有效地阻断ECV的这种生物活性作用,从而可推测其对牙周病的发生、发展能起到一定的阻断作用。     

牙髓卟啉单胞菌超声提取物对成骨细胞周期和凋亡的影响

目的:观察牙髓卟啉单胞菌超声提取物对成骨细胞周期和凋亡的影响。方法:用不同浓度牙髓卟啉单胞菌超声提取物(1、10、100μg/ml)作用成骨细胞,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪分析细胞周期分布和凋亡变化。结果:牙髓卟啉单胞菌超声提取物显著抑制成骨细胞的增殖。且在一定时间和浓度范围内具有浓度和时间依赖性。10μg/ml和100μg/ml提取物作用24 h时,处于G1期的成骨细胞明显增多;在作用48 h时,牙髓卟啉单胞菌提取物以浓度依赖方式促进成骨细胞凋亡。结论:牙髓卟啉单胞菌超声提取物可阻滞细胞于G1期,并诱导细胞凋亡,抑制成骨细胞增殖。     

两种生长因子对颞下颌关节盘细胞自组装基体合成影响的动物实验

目的研究转化生长因子β1( transforming growth factor,TGF-β1)及胰岛素样生长因子Ⅰ（insulin-like growth factor-Ⅰ,IGF-Ⅰ）对颞下颌关节(TMJ)盘细胞自组装基体细胞外基质合成的影响。方法采用10、100 μg/L的IGF-Ⅰ（Ⅰ10、Ⅰ100组）及5、50μg/L的TGF-β1（T5、T50组）分别作用于TMJ盘细胞自组装基体,3、6周时观察自组装基体的大小、形态并测重;冰冻切片、天狼猩红（picro-sirius red）及免疫组化染色观察Ⅰ型胶原的分布,番红-O-固绿染色观察Ⅰ型胶原及糖胺聚糖分布。定量检测Ⅰ型胶原、糖胺聚糖含量、测定细胞数量。结果3周时T5、Ⅰ10组上调糖胺聚糖的分泌、细胞的增殖以及Ⅰ型胶原的合成,3周时Ⅰ10组Ⅰ型胶原（109.16±5.12 μg）的表达约是空白对照组（69.13±5.94 μg）的近2倍;空白对照组和Ⅰ10、Ⅰ100、T5、T5o组于第6周时分泌的基质含量及细胞的增殖数量均比第3周增多。结论IGF-Ⅰ、TGF-β1作用时间的延长对基体的生化合成具有上调作用,10μg/L的IGF-Ⅰ更适用于组织工程化TMJ盘细胞自组装基体的应用。     

牙髓组织再生中I型胶原支架最佳浓度的体外研究

目的：探讨牙髓组织再生研究中不同浓度的I型胶原支架对牙髓细胞的分布及数量的影响,确定最佳胶原材料的浓度。方法实验组将10μl移液枪头一端封闭,做为人工根管;对照组为两端开放的10μl移液枪头。体外培养转染绿色荧光蛋白的C57BL/6小鼠牙髓细胞,并将其分别接种于1%,2%和3%的I型胶原支架中,注入10μl的实验组和对照组移液枪头内,于6孔板中培养2周。荧光显微镜下观察牙髓细胞的分布,胰蛋白酶消化后计算各浓度中牙髓细胞的数目。结果对照组各浓度的胶原支架内牙髓细胞均生长良好。实验组1%和2%的I型胶原中的牙髓细胞生长良好,且细胞计数无显著性差异（ P〉0.05）;浓度为3%的胶原中牙髓细胞在人工根管的中、上段少有生长,且与1%和2%的胶原支架中的牙髓细胞数目差异有统计学意义（P〈0.01）。结论 I型胶原支架材料浓度从1%提高到2%,可减少材料的收缩,并能保证细胞生长良好,2%的I型胶原浓度是牙髓组织再生中最佳浓度。     

五倍子水提取物抑制内毒素诱导人牙龈成纤维细胞分泌IL-6

目的：研究不同浓度五倍子水提取物对内毒素(LPS)介导的人牙龈成纤维细胞(HGF)分泌IL-6水平的影响。方法：采用MTT比色法和放射免疫分析法(RIA)，测定五倍子水提取物对HGF增殖的影响；及对以25μg／mL内毒素作为刺激因子，HGF培养上清中IL-6水平的影响。结果：五倍子水提取物可显著抑制内毒素诱导HGF分泌IL-6水平，其作用在一定范围内呈浓度依赖性，同时当其浓度＞50μg／mL时，可抑制HGF增殖。结论：五倍子水提取物能够抑制内毒素诱导人牙龈成纤维细胞分泌IL-6的水平，浓度过高时对HGF增殖有影响，提示一定浓度(＜50μg／mL)的五倍子水提取物具有抗炎作用，有助于对牙周病的防治。     

五倍子水提取物对胶原酶活性的影响

目的：观察五倍子水提取物对牙周炎组织中胶原酶活性的影响，并探讨其抗炎作用机制。方法：应用羟脯氨酸检测法，观察6．25ug／ml、12．5ug／ml、25ug／ml、50ug／ml、100ug／ml5种浓度五倍子水提取物对胶原酶活性的影响。结果：与胶原酶组比较，各浓度组五倍子水提取物均能明显降低胶原酶活性，其作用呈浓度依赖性。但浓度在100ug／ml以内时，其抑制效果比5ug／ml的强力霉素低。结论：五倍子水提取物能够阻断胶原酶对结缔组织的破坏作用，抑制或减缓牙周炎的进展。     

肝细胞生长因子对牙髓细胞增殖的影响

目的　探讨肝细胞生长因子对牙髓细胞生长增殖的影响。方法　以体外培养的牙髓细胞为实验对象,以 不同浓度肝细胞生长因子作用于牙髓细胞,通过二甲基噻唑二苯基四唑溴盐比色法对细胞的增殖情况进行研究, 用流式细胞术对细胞的周期进行分析。结果　1~200μg/L的肝细胞生长因子可明显促进牙髓细胞的增殖 (P<0·05),100μg/L为最大效应浓度。100μg/L的肝细胞生长因子作用牙髓细胞3 d对其细胞周期无显著性影响, 作用5 d缩短了G1期,增加了S期比例。结论　肝细胞生长因子对牙髓细胞的增殖有促进作用。     

五倍子水提取物对LPS抑制PDLC的ALP活性的影响

目的：观察五倍子水提取物对LPS抑制牙周膜细胞(Periodontal ligament cell，PDLC)的ALP活性的影响。方法：本实验采用细胞培养技术和酶联免疫技术，对LPS抑制PDLC的ALP活性的影响进行观察。结果：100μg／mL LPS可显著抑制ALP活性。加入五倍子水提取物后，对LPS抑制ALP活性有拮抗作用，该作用随五倍子水提取物浓度增加而增加，到10μg／mL时，达到峰值。另外，培养液中先加入不同浓度的五倍子水提取物溶液，培养24h后再加入LPS时(A组)，与LPS和五倍子水提取物溶液同时加入组(B组)相比，除对LPS抑制ALP活性有同样拮抗趋势外，A、B两组间比较，B组效果更佳。结论：五倍子水提取物对LPS抑制ALP活性具有保护作用。     

牛血浆粘连蛋白对培养的人牙髓成纤维细胞FN和Ⅲ型胶原表达的影响

观察了不同浓度牛血浆纤维粘连蛋白（ＦＮ）对培养的人牙髓成纤维细胞Ⅲ型胶原、ＦＮ表达的影响；用图象分析仪对染色强弱进行相对定量分析，ＦＮ（１０、２０μｇ／ｍｌ）组的人牙髓细胞Ⅲ型胶原表达最强，ＦＮ（４０，８０μｇ／ｍｌ）组的人牙髓细胞ＦＮ表达最强，说明ＦＮ的不同浓度影响了培养的人牙髓成纤维细胞的功能，ＥＬＩＳＡ测定结果可做为图象分析的参考与补充。     

五倍子水提取物对牙龈卟啉菌内毒素诱导人单核细胞CD14表达改变的影响

目的 :研究五倍子水提取物对牙龈卟啉菌内毒素 (PgLPS)诱导人单核细胞CD1 4表达改变的影响。方法 :采用人外周血分离培养的单核细胞 ,以 2 5 μg/mL内毒素作为刺激因子 ,观察五倍子水提取物对单核细胞CD1 4表达改变的影响 ,用流式细胞仪 (FCM )测定细胞膜表面CD1 4的表达。结果 :五倍子水提取物作用后 ,牙龈卟啉菌内毒素诱导人单核细胞膜表面CD1 4的表达的阳性细胞率从 6 9.9%± 2 .3 %下降至 4 5 .9%± 3 .7%。结论 :五倍子水提取物能够减少牙龈卟啉菌内毒素诱导人单核细胞膜表面CD1 4的表达 ,提示五倍子具有一定的抗炎作用 ,有助于对牙周病的防治。     

SHH和bFGF体外诱导人牙髓干细胞向神经细胞分化的研究

目的：研究体外使用音猬因子（SHH）、碱性成纤维生长因子（bFGF）体外诱导人牙髓干细胞（DPSCs）分化为神经细胞的可行性,以优化人牙髓干细胞向神经细胞分化的诱导条件。方法：从因正畸或阻生拔除的第一前磨牙或第三磨牙中提取牙髓,采用酶消化及过滤法得到单细胞悬液,有限稀释法培养分离的原代人牙髓干细胞,并进行克隆化培养,检测间充质干细胞特异性标志物STRO-1的表达。将人牙髓干细胞分别接种于含有不同浓度诱导液,MTT法检测不同时间、两种因子单独或联合对细胞增殖能力的影;免疫荧光法检测抗微管相关蛋白（MAP-2）、神经元烯醇化酶（NSE）、胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）的表达。透射电镜观察诱导前后细胞超微结构。结果：克隆来源细胞的间充质干细胞特异性标志物STRO-1表达阳性。100μg/L音猬因子SHH与20μg/L碱性成纤维生长因子bFGF单独作用促增殖作用最强（P〈0.05）,碱性成纤维生长因子bFGF单独作用各组及对照组均未检测出神经元样细胞。音猬因子SHH作用各组检测到阳性细胞。而100μg/L音猬因子SHH与20μg/L碱性成纤维生长因子bFGF联合增殖和分化作用均优于其它组。透射电镜观察到神经元样细胞表现。结论：100μg/L音猬因子和20μg/L碱性成纤维生长因子联合可以在体外有效诱导人牙髓干细胞分化为神经细胞。     

牙髓卟啉单胞菌促成骨细胞凋亡的机制初探

目的:观察牙髓卟啉单胞菌超声提取物对成骨细胞凋亡的促进作用,并初步探讨其相关分子机制。方法:用浓度为1、10、100μg/m L牙髓卟啉单胞菌超声提取物作用于成骨细胞,分别采用Hoechst33258染色法观察细胞的形态变化;比色法检测细胞中的Caspase-3酶活性改变;同时通过Caspase抑制剂阻断实验分析相关成骨细胞的凋亡途径。结果:牙髓卟啉单胞菌超声提取物能使成骨细胞形态出现染色质浓缩、碎裂等典型的凋亡改变,并可显著提高成骨细胞的Caspase-3酶活性,且具有浓度依赖性(P<0.05);Caspase-8抑制剂和Caspase-9抑制剂可以部分抑制牙髓卟啉单胞菌提取物对成骨细胞的促凋亡作用,而Caspase-3抑制剂则能完全阻断牙髓卟啉单胞菌对成骨细胞的促凋亡作用。结论:牙髓卟啉单胞菌超声提取物具有促成骨细胞凋亡的作用,细胞内、外凋亡途径都参与了该过程,并且是一种依赖Caspase-3的凋亡通路。     

rhBMP2和rhTGF-β1联合应用对人牙髓细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的:探讨rhBMP2和rhTGF-β1联合应用对人牙髓细胞ALPase活性的影响.方法:采用酶动力学的方法,比较不同浓度rhBMP2和rhTGF-β1单独或联合应用对人牙髓细胞的ALPase活性的影响.结果 :rhBMP2对人牙髓细胞的ALPase活性呈浓度依赖性增强,rhTGF-β1对人牙髓细胞ALPase活性的影响与其本身浓度有关 .当rhTGF-β1浓度为1μg/L与rhBMP2联合应用时, ALPa se活性比rhBMP2单独应用明显增高.结论:rhBMP2、rhTGF-β1单独及联合应用于人牙髓细胞时,对人牙髓细胞的ALPase活性作用不同,其对人牙髓细胞的生理功能可能有调节作用.