寻常性银屑病患者外周血Th17/Treg失衡的研究

目的 探讨寻常性银屑病患者外周血辅助性T细胞17（Th17）/调节性T细胞（Treg）的失衡及意义。方法 收集48例寻常性银屑病患者外周血,同时以PASI评分评价银屑病的严重程度,流式细胞仪检测48例寻常性银屑病患者和32例正常人外周血Th17、Treg细胞比例, ELISA方法检测患者和正常人血清中IL-17、IL-10表达水平。结果 寻常性银屑病患者外周血Th17细胞比例和血清IL-17水平分别为（2.70 ± 1.43）%和（90.65 ± 29.61） ng/L,较正常人组（0.86 ± 0.25）%和（48.82 ± 5.49） ng/L显著升高,差异有统计学意义（P值均 < 0.01）。Treg细胞比例和血清IL-10水平分别为（3.63 ± 1.14）%和（17.78 ± 4.09） ng/L,较正常人组（7.87 ± 1.26）%和（23.76 ± 3.82） ng/L显著下降,差异有统计学意义（P值均 < 0.01）。Th17/Treg和IL-17/IL-10比值分别为0.95 ± 0.76和5.78 ± 3.19,较正常人组（0.12 ± 0.06）和（2.16 ± 0.68）显著升高,差异有统计学意义（P值均 < 0.01）。银屑病患者PASI评分与Th17细胞比例、血清IL-17水平、Th17/Treg细胞和IL-17/IL-10比值呈正相关性（r值分别为0.97、0.93、0.99、0.97,P值均 < 0.01）,而与外周血Treg细胞比例和血清IL-10水平均呈负相关性（r值分别为-0.87、-0.90,P值均 < 0.01）。结论Th17/Treg失衡可能在寻常性银屑病的发病机制中具有一定作用。     

过敏性紫癜患者外周血Th17/Treg细胞平衡性检测

目的 探讨Th17细胞/Treg细胞（CD4+CD25+ Foxp3+ T细胞）失衡在过敏性紫癜（HSP）发病机制中的作用。方法 采用流式细胞仪检测59例HSP患儿外周血Th17细胞和Treg细胞的比例、实时定量RT-PCR检测Th17细胞与Treg细胞转录因子RORγt、Foxp3 mRNA的表达。同时以38例性别、年龄匹配的健康儿童做对照。结果 HSP组外周血Th17细胞比例（CD4+IL-17+/CD4+ T细胞,1.87% ± 0.56%）及RORγt mRNA表达量（7.71 ± 1.95）,均显著高于正常人对照组（CD4+IL-17+/CD4+ T细胞：0.39% ± 0.15%,P < 0.01; RORγt mRNA：1.49 ± 0.57,P < 0.01）;HSP组外周血Treg细胞比例（CD4+CD25+Foxp3+/CD4+ T细胞,1.63% ± 0.44%）及Foxp3 mRNA的表达量（0.34 ± 0.11）,均明显低于正常人对照组（CD4+CD25+Foxp3+/CD4+ T细胞：5.04% ± 1.44%,P < 0.01;Foxp3 mRNA：1.71 ± 0.69,P < 0.01）。HSP各组间Th17细胞、Treg细胞比例及RORγt、Foxp3 mRNA的表达量差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 过敏性紫癜患者外周血Th17、Treg细胞水平及其转录因子表达量发生变化,其比例的失平衡可能参与过敏性紫癜的发病。     

特应性皮炎患者外周血辅助性T细胞17与白介素17的检测

目的 探讨特应性皮炎（atopic dermatitis,AD）患者外周血白介素17蛋白和mRNA水平及辅助性T细胞17（Th17）表达及其意义。方法 用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测63例AD患者及30例正常人对照血浆中IL-17蛋白水平。实时荧光定量RT-PCR检测两组外周血中IL-17 mRNA表达水平。流式细胞仪检测AD患者和对照者外周血单一核细胞中Thl7细胞的比例。分析外周血Th17细胞比例和IL-17水平与AD患者病情严重度的相关性。结果 急性期AD患者外周血中Th17细胞比例为1.83% ± 0.47%,明显高于正常人对照组（0.85％ ± 0.45％,t = 4.128,P < 0.01）和慢性期组（1.12% ± 0.69%,t = 2.439,P < 0.05）。AD组外周血中血浆IL-17水平为98.37 ng/L,高于正常人组63.75 ng/L,U = 168,P < 0.05。AD组外周血IL-17mRNA表达水平高于正常人对照组。AD患者外周血Th17细胞比例和血IL-17蛋白水平与湿疹面积及严重度指数（EASI）积分均呈显著正相关（r = 0.68l,P < 0.01;r = 0.427,P < 0.05）。结论　急性期AD患者外周血Th17细胞比例显著升高, IL-17蛋白分泌及基因表达水平存在异常,与病情严重度明显相关,提示IL-17和Th17细胞可能在AD发病中起作用。     

特应性皮炎患者外周血调节性T细胞与Th17细胞平衡状态分析

目的 探讨调节性T细胞（Treg 细胞）与Th17细胞失平衡在特应性皮炎（AD）发病机制中的作用。方法 采用流式细胞仪检测41例AD患者外周血Treg细胞与Th17细胞的比例,实时定量逆转录聚合酶链反应检测Treg细胞与Th17细胞转录因子Foxp3、RORγt mRNA的表达水平,酶联免疫吸附试验检测血清中转化生长因子β（TGF-β）、白介素17（IL-17）和白介素23（IL-23）的含量;同时以38例性别、年龄匹配的健康儿童作为对照组。采用独立样本t检验和线性相关进行统计学分析。结果 AD患者组外周血Treg细胞（CD4+CD25+Foxp3+T细胞）比例为2.01% ± 0.57%,Foxp3 mRNA的表达量为0.65 ± 0.19;健康对照组分别为5.04% ± 1.44%和1.71 ± 0.69,AD患者组均明显低于健康对照组（两组比较,t值分别为12.47和9.47,P值均 ＜ 0.01）。AD患者组外周血Th17细胞（CD4+IL-17+T细胞）比例为1.77% ± 0.55%,RORγt mRNA表达量为5.97 ± 1.45;健康对照组分别为0.39% ± 0.15%和1.49 ± 0.57,AD患者组均显著高于健康对照组（两组比较,t值分别为14.82和17.78,P值均＜ 0.01。AD患者组Treg/Th17细胞比值（1.26 ± 0.61）较健康对照组（14.53 ± 5.77）明显降低（t = 14.11,P ＜ 0.01）。急性期AD患者Treg/Th17细胞比值为0.88 ± 0.04,与亚急性期（1.29 ± 0.11,t = 4.02,P ＜ 0.01）和慢性期（2.05 ± 0.24,t = 4.83,P ＜ 0.01）AD患者比较,差异均有统计学意义;AD患者亚急性期与慢性期比较,差异亦有统计学意义（t = 2.89,P ＜ 0.05）。AD患者血清中IL-17和IL-23含量均高于健康对照组（P值均 ＜ 0.01）,而TGF-β含量比较,差异无统计学意义（t = 1.96,P ＞ 0.05）。中、重度AD患者疾病严重程度评分与外周血Treg细胞比例呈负相关（r = -0.40,P ＜ 0.05）,与Th17细胞比例呈正相关（r = 0.42,P ＜ 0.05）。结论 AD患者外周血Treg和Th17细胞比例、特异性转录因子Foxp3、RORγt mRNA表达水平及血清中相应细胞因子含量发生变化,Treg/Th17细胞失平衡可能参与了AD的发病。     

寻常型银屑病患者miR-124与Th17 Treg细胞及相关细胞因子表达的关系

 目的探讨寻常型银屑病患者miR-124与Th17 Treg细胞及相关细胞因子表达的相关性。方法选取寻常型银屑病患者100例作为实验组（进行期47例,稳定期53例）,同时选取50例体检健康者作为对照组,采集外周血样本;用PCR法检测各组miR-124表达水平;用流式细胞仪检测Th17和Treg细胞数量;用双抗体夹心ELISA法检测各组细胞因子TNF-α、IFN-γ、TGF-β、IL-6、IL-17、IL-21、IL-23水平;采用RT-PCR法检测各组ROR-γt mRNA和Foxp3 mRNA转录水平,同时分析miR-124表达与Th17 Treg细胞及相关细胞因子表达的相关性。结果银屑病进行期组和稳定期组miR-124表达水平均低于对照组（均P<0.05）。对照组Th17、Treg和Th17/Treg水平分别为（0.64±0.31）%、（5.11±1.45）%和（0.13±0.05）,均低于银屑病进行期组和稳定期组患者（均P<0.05）。寻常型银屑病进行期和稳定期患者TGF-β的浓度分别为（476.52±34.42）、（471.10±52.39） pg/L,均低于对照组（均P<0.05）;而其他细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-17、IL-21和IL-23水平均高于对照组（均P<0.05）。对照组患者ROR-γt mRNA和Foxp3 mRNA值分别为9.14±2.98、2.45±0.97,均高于银屑病进行期组和稳定期组患者（均P<0.05）。对照组miR-124水平与Th17和Treg之间无相关性（r=0.30,P=0.542;r=0.35,P=0.612）,而银屑病进行期组和稳定期组患者miR-124水平与Th17和Treg之间均存在相关性（P<0.05）。IFN-γ、TGF-β、IL-17、IL-21和IL-23与miR-124表达之间均存在相关性（均P<0.05）。结论寻常型银屑病患者Th17和Treg细胞的分化失衡与miR-124表达有关,miR-124表达异常减少可能是寻常型银屑病患者发生发展的因素之一。     

特应性皮炎患儿外周血Th17细胞与CD4+CD25+ T细胞失衡的研究

【摘要】 目的 探讨Th17细胞和Treg细胞失衡在特应性皮炎（AD）发病机制中的作用。方法 流式细胞仪检测52例AD患者外周血Th17细胞和Treg细胞的频率、酶联免疫吸附方法（ELISA） 检测外周血中细胞因子IL-6、TGF-β1的表达水平。同时以30例性别、年龄匹配的健康体检者作为对照。结果 AD组外周血Th17细胞（CD3+CD8-IL17+）占CD3+T细胞的百分比为（1.20 ± 0.41）%,高于对照组的（0.54 ± 0.28）% （t = 2.58,P < 0.05）;Treg（CD4+ CD25+）细胞的百分比为（2.29 ± 0.67）%,低于对照组（5.95 ± 0.45）%,（t = 15.23,P < 0.01）。关键调控因子测定结果：IL-6水平,AD组（5.12 ± 0.45）ng/L高于对照组（3.89 ± 0.38） ng/L,差异具有统计学意义（t = 2.59,P < 0.05）;而TGF-β1的表达水平AD组（57.65 ± 10.78） ng/L低于对照组的（81.18 ± 7.78） ng/L,（t = 5.41,P < 0.01）。 结论 特应性皮炎患儿外周血Th17、Treg细胞水平及其关键的调控平衡因子IL-6、TGF-β1发生变化,其比例的失平衡可能参与特应性皮炎的发病。     

Th17细胞、IL-17A mRNA及IL-23R mRNA与寻常性银屑病的关系

目的 探讨寻常性银屑病（PV）皮损中IL-17A mRNA及IL-23R mRNA水平、外周血CD4+IL-17+ T细胞数量及它们与疾病严重程度的关系。方法 PV组25例,对照组14例。对PV皮损面积和严重指数（PASI）评分,用RT-PCR检测皮肤中IL-17A mRNA及IL-23R mRNA的水平,并用流式细胞仪测定20例PV患者及10例对照组外周血CD4+IL-17+ T细胞的数量。结果 PV组IL-17A mRNA的水平明显高于对照组（0.996 ± 0.231比0.437 ± 0.096,t = 10.57,P < 0.05）,IL-23R mRNA水平也明显高于对照组（1.006 ± 0.339比0.491 ± 0.196,t = 6.02,P < 0.05）。PV皮损中IL-17A mRNA与IL-23R mRNA的水平与PASI均呈线性正相关（分别为r s ＝ 0.67,P < 0.05;r s ＝ 0.70,P < 0.05）。外周血CD4+IL-17+ T细胞数量在两组差异无统计学意义。PV组中,外周血中CD4+IL-17+ T细胞数量与皮损中IL-17A mRNA、IL-23R mRNA水平无相关性。结论 PV皮损中IL-17A mRNA及IL-23R mRNA 的水平升高,与疾病严重程度相关,外周血Th17细胞数量无改变。     

寻常性银屑病患者外周血和皮损中Th17细胞及相关因子的表达

目的 探讨寻常性银屑病患者外周血和皮损中Th17细胞及相关因子IL-17、IL-22表达,分析其与疾病严重程度及病程的相关性。方法 抽取44例寻常性银屑病患者和28例正常人对照者外周血,用三色法流式细胞仪检测外周血Th17细胞,ELISA法检测血清中IL-17、IL-22表达。取20例寻常性银屑病患者皮损和8例正常人对照者皮肤,用量子点免疫荧光双标法检测Th17细胞表达。结果 寻常性银屑病患者外周血Th17细胞百分比（4.71% ± 2.55%）高于正常人对照组（0.55% ± 0.39%）,两组差异有统计学意义（P < 0.01）。银屑病患者Th17细胞与银屑病病情严重度评分（PASI）呈显著正相关（r = 0.53,P < 0.01）,但与病程无相关性（r = 0.09,P > 0.05）。银屑病患者血清中IL-17（24.02 ± 12.31 ng/L）、IL-22（18.32 ± 8.14 ng/L）表达均高于正常人对照组（IL-17为7.16 ± 4.04 ng/L,IL-22为6.52 ± 4.15 ng/L）,差异均有统计学意义（P < 0.01和 < 0.05）。银屑病患者血清IL-17、IL-22表达与PASI呈显著正相关（r = 0.47,P < 0.01;r = 0.53,P < 0.01）,与病程无相关性（r = 0.03,P > 0.05;r = 0.19,P > 0.05）。银屑病患者皮损中可见Th17细胞浸润,主要集中在真皮浅层血管周围;而正常人皮肤中仅有微量CD4+ T细胞表达,未见Th17细胞。 结论 Th17细胞参与银屑病的发病,提示阻断相关因子IL-17、IL-22的药物可成为治疗银屑病的又一新靶点。     

白介素22及其相关因子在银屑病患者血清及外周血单一核细胞中的表达

目的 探讨白介素（IL）-22及其相关因子IL-23p19、IL-6在寻常性银屑病患者外周血单一核细胞（PBMC）及血清中表达的意义。方法 采用实时定量RT-PCR法检测寻常性银屑病患者及正常人对照者外周血PBMC中IL-22 mRNA、IL-23p19 mRNA及IL-6 mRNA的水平;采用ELISA法检测寻常性银屑病患者及正常人对照者血清和PBMC培养上清中IL-22的分泌水平。结果 银屑病组和正常人对照组PBMC中IL-22 mRNA的相对表达量分别为4.48 ± 2.64和2.35 ± 0.91;IL-23p19 mRNA的相对表达量分别为6.07 ± 4.09和2.61 ± 1.46;IL-6 mRNA的相对表达量分别为3.87 ± 1.49和1.48 ± 0.62;差异均有统计学意义（P < 0.01）。ELISA检测发现,银屑病组和正常人对照组血清中IL-22的水平分别为（86.23 ± 25.58） ng/L和（43.67 ± 14.82） ng/L（P < 0.01）,PBMC培养上清中IL-22的水平分别为（119.11 ± 21.51） ng/L和（57.70 ± 13.17） ng/L（P < 0.01）。结论 寻常性银屑病患者PBMC和血清中过度表达IL-22,提示IL-22可能参与银屑病的发病机制。     

窄谱中波紫外线对银屑病患者白细胞介素17、22水平的影响

目的 探讨窄谱中波紫外线（NB-UVB）在银屑病治疗中的作用机制。 方法 42例银屑病患者仅用NB-UVB照射治疗20次,治疗前及治愈患者分别进行标本采集及皮损面积和严重程度指数（PASI）评分;采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定患者治疗前后外周血IL-17和IL-22水平的变化情况,并与20例健康对照比较,同时利用RT-PCR法检测10例患者治疗前后皮肤组织中IL-17和IL-22 mRNA表达水平的差异,并与10例健康对照进行对比分析。 结果 银屑病患者外周血中IL-17（34.26 ± 10.05 ng/L） 和IL-22（13.72 ± 4.45 ng/L）水平明显高于健康对照组（分别为16.34 ± 4.73 ng/L和5.03 ± 1.84 ng/L）,均P < 0.01。患者皮损IL-17 mRNA（13.43 ± 2.12）和IL-22 mRNA（16.53 ± 2.65）表达水平明显高于健康对照组（分别为5.26 ± 0.87和7.72 ± 2.13）,均P < 0.01。银屑病患者PASI与外周血中IL-17和IL-22水平呈正相关（r值分别为0.76和0.70,均P < 0.05）,与皮损中IL-17和IL-22水平亦呈正相关（r值分别为0.65和0.68,均P < 0.05）。42例银屑病患者经NB-UVB照射治疗20次后,15例治愈,且治愈后外周血及皮损中IL-17和IL-22 mRNA及蛋白水平、PASI均明显低于治疗前组,均P < 0.05。 结论 NB-UVB照射治疗银屑病有效的机制之一可能与抑制患者外周血及皮损组织中IL-17及IL-22水平有关。     

天疱疮患者血清白介素6、10、17、γ干扰素和外周血Th17细胞水平检测

目的 探讨寻常型天疱疮可能的细胞免疫机制。方法 用ELISA法检测33例寻常型天疱疮（PV）患者及34例正常人对照血清白介素6（IL-6）、白介素10（IL-10）、白介素17（IL-17）及γ干扰素（IFN-γ）水平。流式细胞仪检测10例PV患者及10例正常人对照外周血Th17细胞水平。结果 PV患者血清IL-6、IL-17水平高于正常人对照（P < 0.05）,IFN-γ、IL-10水平低于正常人对照（P < 0.05）。PV患者外周血中Th17细胞的百分比高于正常人对照（P < 0.05）。结论 IL-6、IL-10、IFN-γ、IL-17和Th17细胞与PV的发病可能有关。     

SLE患者T淋巴细胞IL-13受体α1基因表达及其调节序列甲基化状态的研究

目的 研究SLE患者外周血T淋巴细胞IL-13受体α1（IL-13Rα1）基因mRNA的表达及IL-13Rα1基因调节序列甲基化状态。方法 免疫磁珠法（MACS）分离10例SLE患者和6例正常人外周血CD4+和CD8+ T细胞，采用实时荧光定量PCR检测T细胞中IL-13Rα1 mRNA的表达，并用甲基化特异性PCR（MSP）方法检测IL-13Rα1基因调节序列的甲基化水平。结果 活动期SLE患者CD4+ T细胞中IL-13Rα1 mRNA表达水平为2.224 ± 0.251，非活动期SLE患者为1.712 ± 0.132，正常人组为1.104 ± 0.044，三组间比较，差异均有统计学意义（P < 0.05）；CD8+ T细胞中IL-13Rα1 mRNA表达水平活动期、非活动期及正常人组分别为1.672 ± 0.142，1.410 ± 0.154，1.238 ± 0.106，活动期组与正常人组比较差异有统计学意义（P < 0.05），而非活动期组与正常人组、活动期组与非活动期组比较，差异均无统计学意义（P > 0.05）。CD4+ T细胞中IL-13Rα1基因甲基化指数活动期SLE患者为0.454 ± 0.023，非活动期为0.635 ± 0.065，正常人为0.844 ± 0.097，三组间比较，差异均有统计学意义（P < 0.05）；CD8+ T细胞中IL-13Rα1基因甲基化指数三组间比较，差异均无统计学意义（P > 0.05）。SLE患者外周血CD4+，CD8+ T细胞IL-13Rα1 mRNA的表达与疾病活动度（SLEDAI评分）呈正相关（r = 0.79，P < 0.01；r = 0.76，P < 0.05）；CD4+ T细胞的IL-13Rα1基因的甲基化水平与疾病活动度（SLEDAI评分）呈负相关（r = -0.89，P < 0.01）；CD4+ T细胞IL-13Rα1 mRNA表达与其调节序列的甲基化水平呈负相关（r = -0.84，P < 0.01）。结论 SLE的发生发展可能与DNA低甲基化导致SLE患者T细胞过度表达IL-13Rα1有关。     

特应性皮炎患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的检测

目的 探讨CD4+CD25+调节性T细胞（CD4+CD25+ Treg）在特应性皮炎（AD）发病中的作用机制及临床意义。方法 流式细胞仪分析AD患者外周血中CD4+CD25+ Treg细胞数量,实时荧光定量PCR检测外周血单核细胞（PBMC）中Foxp3 mRNA水平,ELISA检测血清中IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ水平。结果 AD患者外周血中CD4+CD25+ Treg细胞占CD3+ T细胞及CD4+ T细胞的比例均明显低于正常人对照组（t′ = 3.775、4.533,P值均 ＜ 0.01）;外周血中CD4+CD25+ Treg细胞占CD3+ T细胞比例在AD患者急性期明显低于慢性期（t = 2.217,P < 0.05）,而在急性期与亚急性期、亚急性期与慢性期之间差异均无统计学意义（t = 1.558、0.49,P值均 ＞ 0.05）。AD患者PBMC中Foxp3 mRNA的水平低于正常人对照组（z = -2.368,P ＜ 0.05）;其外周血中CD4+CD25+ Treg细胞与血清中IL-2和IL-10成正相关（r = 0.512、0.494,P值均 ＜ 0.05）,与IL-4和IFN-γ的相关性无统计学意义（r = -0.110、-0.237,P值均 ＞ 0.05）。结论 在AD患者中,外周血中CD4+CD25+ Treg细胞数量及Foxp3 mRNA水平均下降,从而可能减少对Th2细胞增生及其细胞因子分泌的抑制,使Th2占优势,参与AD的发病。     

银屑病调节性T细胞的功能异常及STAT3通路调控机制研究

目的 研究银屑病患者外周血调节性T细胞（Treg）的功能,探讨与功能异常相关的STAT3信号通路机制。 方法 寻常性银屑病患者81例,银屑病面积和严重度指数（PASI）评分10 ～ 30,均为慢性斑块状。对照组46例,为健康献血者。采用流式细胞仪检测外周血中Treg细胞的比例,用体外淋巴细胞混合培养方法检测银屑病患者和健康人外周血中Treg细胞的增殖活性及对效应性T细胞（Tresp）的抑制功能,用流式细胞仪及qRT-PCR检测Treg细胞中磷酸化STAT3的比例及分泌促炎因子干扰素γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素17（IL-17）的水平。最后,用STAT3通路抑制剂Stattic V处理银屑病患者Treg细胞,观察其增殖及抑制功能的恢复及分泌促炎因子的变化。 结果 银屑病患者组外周血Treg细胞数量（6.437% ± 0.186%）与对照组（6.812% ± 0.241%）比较差异无统计学意义（t = 1.224,P ＞ 0.05）,但银屑病患者组外周血Treg细胞增殖活性及对Tresp细胞的抑制功能明显降低,磷酸化STAT3表达水平显著升高,分泌促炎因子IFN-γ、TNF-α、IL-17的水平显著升高（均P ＜ 0.05）。经50 μg/L Stattic V作用后,银屑病患者Treg细胞对Tresp抑制率为61.670% ± 4.640%,未处理组为28.820% ± 11.490%,两组差异有统计学意义（P ＜ 0.05）;50 μg/L Stattic V作用后,促炎因子IFN-γ、TNF-α、IL-17 mRNA表达量（2-△△Ct）分别为1.654 ± 0.879、0.850 ± 0.705、0.572 ± 0.135,均显著低于未处理组（分别为23.350 ± 6.721、4.847 ± 1.525、3.095 ± 0.650）, 差异均有统计学意义（P ＜ 0.05）。 结论 银屑病患者Treg细胞对Tresp细胞的负向调控功能降低,其机制与STAT3信号通路异常活化有关,抑制STAT3通路的活化有可能一定程度地恢复Treg细胞功能。