抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)卵黄免疫球蛋白(IgY)的制备与性质研究

目的观察鸡卵黄中抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA)抗体的含量、纯度、来源及稳定性。方法用耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)作为抗原免疫Leghorn鸡;通过改良水稀释法提取卵黄中的IgY;双紫外光波长测定抗体含量,SDS-PAGE电泳检测抗体纯度;Western blot免疫印迹法测定该抗体来源;ELISA检测IgY对温度、酸碱度的稳定性。结果抗体含量13.3 mg/mL蛋黄液,抗体纯度达96%;免疫印迹证明IgY与鸡血清中的IgG具有相同的分子量和抗原性;IgY具有良好的热稳定性,对酸碱具有一定的耐受力。结论改良水稀释法能得到高产量、高纯度的特异性IgY,而且有良好的生物学活性。     

抗加特纳杆菌卵黄免疫球蛋白(IgY)的研究

目的 观察鸡卵黄中抗加特纳杆菌抗体的产量、纯度、来源及稳定性。方法 用阴道加特纳杆菌作为抗原免疫Leghorn鸡。通过改良水稀释法提取卵黄中的IgY。双紫外光波长测定抗体含量,SDS-PAGE电泳检测抗体纯度。Westernblot免疫印迹法测定该抗体来源。ELISA检测IgY对温度、酸碱度的稳定性。结果 抗体含量12．8mg／mL蛋黄液,抗体纯度达95％。免疫印迹证明IgY与鸡血清中的IgC具有相同的分子量和抗原性。IgY具有良好的热稳定性,对酸碱具有一定的耐受力。结论 WD水稀释法能得到高产量、高纯度的特异性IgY,而且有良好的生物学活性。     

抗白色念珠菌IgY的稳定性与应用研究

目的：观察抗白色念珠菌鸡蛋黄抗体IgY的稳定性与体外生物学效应。方法：用水溶法从免疫鸡蛋黄中提取抗白色念珠菌抗体IgY,ELISA法检测抗体耐热,耐酸,耐碱的稳定性,观察IgY抑制白色念珠菌生长和抑制白色念珠菌粘附肠上皮细胞（IEC－6）,结果：IgY在巴氏消毒后活性为对照的61％,在pH7.0至3．0酸性环境中活性改变不显著,在pH7.9,37℃作用150min活性仍对照的60％,IgY在10mg/ml时能明显抑制白色念珠菌生长和对肠上皮细胞的粘附,明显降低细胞上清二胺氧化酶（DAO）释放。结论：鸡蛋黄抗抗IgY具有高度稳定性和良好的体外生物学效应。,     

抗白念珠菌鸡卵黄抗体的制备及温度对其效价的影响

目的:制备抗白念珠菌鸡卵黄抗体(IgY)并检测其生物学性能.方法:白念珠菌标准菌株10231灭活后作为抗原免疫25周龄产蛋海蓝鸡,从水溶法提取鸡卵黄IgY抗体.用考马斯亮蓝染色法测定IgY抗体提取液的蛋白浓度.用Tris-tricine电泳测定提取蛋白的相对分子质量、纯度,Western blot确定蛋白来源.以免疫组织化学检验抗白念珠菌IgY抗体与白念珠菌结合的特异性.ELISA测定抗白念珠菌IgY抗体的抗菌效价.结果:IgY抗体液中蛋白浓度为7.9 g/L,IgY抗体的纯度达到91.5%.提取的IgY抗体与鸡血清和正常鸡IgY抗体具有同源性.提取的IgY抗体可与白念珠菌发生特异性结合. ELISA测定抗白念珠菌IgY抗体的效价达到1:12 000.结论:研究得到的IgY,产量和纯度高,效价好,体温条件下48 h效价没有降低.在体外能够特异性地与白念珠菌结合.     

鸡抗内毒素卵黄抗体IgY的制备

目的：研究分别应用内毒素（LPS）、类脂A(LipidA)和大肠杆菌突变株15免疫鸡后其蛋黄中抗内毒素抗体IgY的产量、纯度、效价并筛选最佳免疫抗原。方法：分别应用内毒素（LPS）、类脂A(LipidA)和大肠杆菌J5突变株作为抗原免疫25周龄Leghom鸡，水溶法（WD）提取蛋黄中抗体IgY，双紫外光测定抗体含量，SDS-PSGE电泳检测抗体纯度，细胞酶联染色和ELISA检测抗体特异性、效价及筛选最佳免疫抗原。结果：3种抗内毒素IgY含量和效价分别为14.4mg/ml和1：12 800（J5）、10.61mg/ml和1：12 800（LPS）、9.26mg/ml和1：3200（LipidA），抗体纯度均为95％左右。结论：大肠杆菌突变株J5和内毒素（LPS）为最佳免疫抗原，免疫鸡后其蛋黄中抗内毒素抗体IgY的产量和效价最高。     

抗内毒素鸡蛋黄抗体F(ab'''')2制备

目的研究抗内毒素鸡蛋黄免疫球蛋白(IgY)用胃蛋白酶切后提取的F(ab’)2片段，探索防治内毒素血症的新途径。方法用内毒素(LPS)作抗原免疫25周龄leghorn鸡，改良水溶法提取抗内毒素IgY，胃蛋白酶切后提取IgY—F(ab’)2段，光密度法测抗内毒素IgY—F(ab’)2浓度和含量、ELISA检测抗内毒素IgY—F(ab’)2效价，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其分子量及纯度。结果抗内毒素IgY—F(ab’)2含量为1．04mg／ml蛋黄液，效价为1：25600，纯度为90％，相对分子质量为24000。结论抗内毒素IgY—F(ab’)2产量大、效价高、特异性强。     

两种鸡蛋黄IgG提取方法的对比研究

从免疫鸡的蛋黄中提取特异性IgG抗体,是一条简便而廉价的制备诊断用抗体制品的途径。作者建立并比较了两种鸡蛋黄IgG提取方法。结果显示,两法均可从每毫升超免疫鸡的蛋黄中提取到16～17mg IgG制品,而且法Ⅱ提取之蛋黄IgG制品的纯度和抗体活性比法Ⅰ高。由于法Ⅰ和法Ⅱ提取的蛋黄IgG制品分别含有22％和16％的无关蛋白质,因此,如需高纯度蛋黄IgG制品,还须对其进一步纯化。     

抗内毒素IgY-F(ab)2鉴定

目的 研究抗内毒素IgY用胃蛋白酶切后提取的F(ab)2片段，对其理化特性进行研究。方法 将抗内毒素igY用胃蛋白酶切后提取igY—F(ab)2段，光密度法测抗内毒素IgY—F(ab)2浓度和含量、ELISA检测抗内毒素IgY—F(ab)2效价，SDS-聚内烯酰胺凝胶电泳检测其分子量及纯度，免疫印迹法(Wescem—blotting)测定其特异性。结果 抗内毒素IgY—F(ab)2含量为1．04mg／mL蛋黄液，效价为1：25600，纯度为90％。分子量为24KD，与鸡血清中的IgG有相同的抗原性。结论抗内毒素IgY—F(ab)2产量大、效价高、特异性强。     

A Study on Preparation of Anti-helicobacter Pylori Egg Yolk IgY and Its Biological Activity

目的:从免疫了幽门螺杆菌(Hp)抗原的母鸡蛋黄中提取抗Hp-IgY.方法:用超声破碎的Hp抗原免疫21周龄罗曼产蛋母鸡,取免疫后所产鸡蛋卵黄,利用水稀释法加硫酸铵盐析方法,提纯IgY,ELISA间接法检测抗体效价,Bradford法检测抗体蛋白含量,SDS-PAGE法检测其相对分子质量及纯度.结果:母鸡初次免疫后第7天,抗体效价即渐渐升高,约第45天达到高峰;蛋黄抗体经纯化后,抗Hp-IgY蛋白纯度可达90％以上,含量为6.25 g/L.结论:用超声破碎的Hp抗原免疫母鸡,盐析法提纯免疫母鸡产蛋黄中的抗Hp-IgY,可获得高纯度及高效价的抗Hp的特异性蛋黄抗体.     

抗幽门螺杆菌蛋黄免疫球蛋白IgY的制备及生物活性的研究

目的:从免疫了幽门螺杆菌(Hp)抗原的母鸡蛋黄中提取抗Hp-IgY。方法:用超声破碎的Hp抗原免疫21周龄罗曼产蛋母鸡,取免疫后所产鸡蛋卵黄,利用水稀释法加硫酸铵盐析方法,提纯IgY,ELISA间接法检测抗体效价,Bradford法检测抗体蛋白含量,SDS-PAGE法检测其相对分子质量及纯度。结果:母鸡初次免疫后第7天,抗体效价即渐渐升高,约第45天达到高峰;蛋黄抗体经纯化后,抗Hp-IgY蛋白纯度可达90%以上,含量为6.25 g/L。结论:用超声破碎的Hp抗原免疫母鸡,盐析法提纯免疫母鸡产蛋黄中的抗Hp-IgY,可获得高纯度及高效价的抗Hp的特异性蛋黄抗体。     

抗白念珠菌IgY的动物实验研究

目的:制备抗白念珠菌特异性IgY,并对其活性及应用进行研究。方法:自烧伤继发感染白念珠菌病人的创面分离出的白念珠菌免疫蛋鸡,并对从该鸡产的蛋白中分离提取出的特异性IgY进行纯化及活性测定,同时用于烧伤大鼠感染白念珠菌的预防。结果:本实验制备的IgY有与白念珠菌特异性结合的能力,并能明显抑制烧伤鼠创面(痂下组织)继发感染白念珠菌。结论:抗白念珠菌特异性IgY有助于烧伤鼠预防白念珠菌的继发感染     

抗内毒素IgY的制备及稳定性研究

目的 用大肠杆菌J5制备特异抗内毒素IgY，探索防治内毒素血症的新途径。方法 用大肠杆菌J5作抗原免疫25周龄Roman鸡，水溶法提取抗体，进行SDS-PAGE及Western blot分析，通过酶联染色反应检测其免疫学活性，ELISA检测其时酸、碱和酶的稳定性。结果 抗体含量为11．4mg／ml蛋黄液，纯度为92．3％，分子量为180KD，初步鉴定其时内毒素具有特异性结合作用，并且对酸、碱、酶有很好的稳定性。结论 用大肠杆菌J5株免疫鸡可刺备出特异性抗内毒素的IgY，且具有良好的稳定性，作为口服制剂为预防和治疗内毒素血症奠定了基础。     

抗肌A—A^＊0201重链卵黄抗体的制备及初步鉴定

OBJECTIVE: To prepare a high-titer specific and efficient egg yolk immunoglobulin (IgY). METHODS: The antigen of HLA-A* 0201 heavy chain was used to immunize the hens together with Freud's adjuvant and the eggs these hens laid were collected. IgY was purified from the egg yolk by water extraction, salt precipitation with ammonium sulfate and dialysis. The immunoactivity of the IgY was measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and its purity was determined by SDS-PAGE. RESULTS: The titer of IgY was 1 10(6) as shown by ELISA, with protein concentration of 9.77 mg/ml. The purity of the resultant IgY was more than 90% as suggested by SDS-PAGE analysis. CONCLUSIONS: The antigen of HLA-A* 0201 heavy chain along with complete Freund adjuvant is effective to elicit an immune response of hens for producing IgY antibodies in high yields.     

p53蛋白的原核表达及其鸡卵黄抗体的制备

目的 制备抗p53蛋白卵黄抗体。方法 原核表达p53融合蛋白，纯化后免疫产蛋母鸡。结果 融合蛋白能有效刺激母鸡产生抗体，末次免疫后其卵黄抗体滴度达到1：10^4,并且能维持较长时间。结论 本文介绍的方法是一种简便、经济、特异、高效、均一、来源充足的抗体产生方法。     

抗HPV16L1 IgY抗体的制备及活性检测

目的 制备出高特异性的抗HPV16L1 IgY抗体,为HPV16L1蛋白的检测提供一种方法.方法 用纯化HPV16 L1蛋白免疫母鸡,分别收集鸡蛋,4℃下保存备用;经聚乙二醇法提取鸡蛋黄中IgY抗体;用酶联免疫吸附法检测IgY抗体效价的测定;采用免疫组织化学法通过对转染pcDNAEGFP-HPV16L1(含EGFP-HPV16L1融合基因)质粒的CHO细胞中L1蛋白的检测评价IgY抗体的特异性.结果 3次免疫之后,IgY抗体效价达到1:10 240,同时可特异性与转染pcDNAEGFP-HPV16L1(含EGFP-HPV16L1融合基因)质粒的CHO细胞中EGFP-HPV16L1 结合.结论 采用HPV16L1蛋白免疫母鸡,成功获得了较高效价的特异性IgY抗体,并可用于HPV16L1蛋白的细胞学检测,为IgY抗体在免疫组织化学检中的应用提供实验依据.     

IgY与双歧杆菌防治小鼠白色念珠菌感染的研究

目的 观察特异性抗白色念珠菌鸡蛋黄抗体IgY和双歧杆菌的体内生物学效应，探讨将二者复合应用的可能性。方法 建立无特殊病原菌(Specific pathogen free,SPF)小鼠烧伤后口服白色念珠菌感染模型，应用活菌计数方法检测其回肠膜粘附白色念珠菌量、盲肠内容物白色念珠菌量以及白色念珠菌脏器移位率。结果 烧伤SPF小鼠喂服IgY和双歧杆菌后，均能明显抑制肠道内白色念珠菌生长和白色念珠菌粘附肠上皮细胞；二者复合应用后还能明显降低脏器白色念珠菌移位率。结论 特异性鸡蛋黄抗体IgY具有良好的体内生物学效应且优于单独使用双歧杆菌，二者复合应用效果最佳。