Wnt/β-catenin信号通路在成人睾丸支持细胞增殖中的作用及其机制

目的探讨Wnt/β-catenin信号通路在成人睾丸支持细胞增殖中的作用及其作用机制。方法取成人睾丸组织采用两步酶法消化,分离纯化支持细胞,后行传代培养,并经波形蛋白免疫荧光染色鉴定其纯度。将支持细胞分为3组:正常对照组(Con组)、添加Gsk-3β特异性抑制剂SB216763组(SB组)和添加氯化锂组(LiCl组)。通过BrdU标记和流式细胞仪检测细胞增殖和细胞周期;采用免疫荧光染色、实时荧光定量PCR和Western blot-ting检测细胞中β-catenin和c-myc的表达状况;采用RNA干扰技术,下调支持细胞中c-myc基因表达。结果BrdU标记和流式细胞仪检测结果显示,SB和LiCl组支持细胞增殖明显高于Con组;加入SB216763和LiCl可明显促进细胞β-catenin和c-myc入核,c-myc mRNA和蛋白水平明显高于Con组;转染c-myc siRNA后,可明显降低SB216763引起的支持细胞增殖。结论激活Wnt/β-catenin信号通路可促进成人睾丸支持细胞的增殖,其作用机制可能是通过上调c-myc基因表达来实现的。     

沉默环状RNA PIP5K1A通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来降低口腔鳞癌细胞生长与转移

目的 研究环状RNA PIP5K1A(circPIP5 K1 A)对口腔鳞癌(OsCC)细胞生长和转移的影响及可能的作用机制.方法 用RT-qPCR法检测OSCC组织和细胞中circPIP5K1A的表达情况.将si-circPIP5 K1A转入OSCC细胞后,CCK-8法检测细胞活力,集落形成实验检测细胞集落形成能力,An-nexin V-FITC/PI染色流式细胞术法检测细胞凋亡,Transwell法检测细胞迁移与侵袭,Western blot法检测Wnt/β-catenin通路相关蛋白的表达.Wnt/β-catenin信号通路激动剂LiCl处理已转染si-circPIP5 K1A的OSCC细胞后,分别检测细胞活力、集落形成能力、凋亡、迁移与侵袭.结果 circPIP5K1A在OSCC组织和细胞中上调表达(P＜0.05).沉默cir-cPIP5 K1A后,OSCC细胞的细胞活力、集落形成、迁移与侵袭的能力均降低(P＜0.05),细胞凋亡增加(P＜0.05),Wnt1和β3-catenin蛋白表达降低(P＜0.05).LiCl能抑制沉默cir-cPIP5 K1A对OSCC细胞的生长与转移的抑制作用(P＜0.05).结论 沉默circPIP5 K1 A能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来发挥抑制OSCC细胞的生长与转移的作用.     

小干扰RNA沉默β-catenin基因对人结肠癌SW480细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨小干扰RNA(siRNA)沉默人结肠癌SW480细胞β-catenin基因表达对SW480细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用脂质体转染法合成靶向β-catenin的双链siRNA(β-catenin-siRNA),转染SW480细胞,RTPCR及Western blotting检测SW480细胞中β-catenin mRNA及蛋白的表达,MTT实验和流式细胞术分别检测SW480细胞的增殖和凋亡。结果:RT-PCR及Western blotting检测结果显示β-catenin-siRNA转染后,与空白组、阴性对照组及实验组相比,β-catenin-siRNA转染组SW480细胞中β-catenin mRNA水平明显下降,其蛋白表达也明显下调。β-catenin-siRNA转染后,SW480细胞的凋亡率明显高于阴性对照组及实验组,细胞增殖能力明显下降。结论:siRNA沉默β-catenin的表达可诱导SW480细胞凋亡,抑制细胞的增殖,为结肠癌的临床治疗提出新的思路,可以作为结肠癌治疗的一个新靶点。     

Wnt/β-catenin通路抑制剂Wnt-C59抑制子宫内膜异位症子宫内膜干细胞的增殖

目的分析Wnt/β-catenin通路抑制剂Wnt-C59对子宫内膜异位症(EM)子宫内膜干细胞增殖的影响。 方法分离纯化获得子宫内膜干细胞,随机分为对照组、低剂量组(5 mmol/L Wnt-C59)和高剂量组(30 mmol/L Wnt-C59)。MTT法分析各组细胞增殖情况,Western blotting法分析细胞凋亡蛋白及Wnt/β-catenin通路蛋白的表达变化,酶联免疫吸附测定法分析LC3、Beclin1水平变化。结果与对照组比较,低剂量组和高剂量组细胞增殖受到明显抑制,Wnt3a及β-catenin蛋白水平明显降低,细胞凋亡蛋白Caspase-3及Caspase-9水平明显升高,LC3、Beclin1蛋白水平明显升高(P＜0.05),且高剂量组均更为明显(P＜0.05)。Pearson相关性分析显示,Wnt3a及β-catenin蛋白水平均与细胞增殖抑制率呈负相关(P＜0.05)。结论Wnt/β-catenin通路抑制剂Wnt-C59能有效抑制EM子宫内膜干细胞增殖,促进其凋亡、自噬作用,其作用可能与其对Wnt/β-catenin信号通路的抑制有关。     

冬凌草甲素促进骨肉瘤细胞143B凋亡及其可能机制

目的 研究冬凌草甲素(oridonin,ORI)对人骨肉瘤细胞株增殖抑制和凋亡诱导作用的分子机制.方法 以结晶紫染色和Western blot检测ORI对143B细胞增殖的抑制作用,Annexin V-EGFP染色法和Western blot检测ORI对143B细胞凋亡的促进作用;RT-PCR和Western blot检测ORI对143B细胞内Wnt/β-catenin信号的影响;沉默或过表达β-catenin后,结晶紫染色分析ORI对143B细胞增殖的抑制作用的变化.结果 ORI能够抑制143B细胞株增殖,并诱导其凋亡(P＜0.05);呈浓度依赖性抑制143B细胞PCNA的表达,同时促进其Caspase3、Bad的表达;能够抑制143B细胞内Wnt/β-catenin信号的表达,沉默或过表达β-catenin后则可以相应地促进或抑制143B细胞的凋亡(P＜0.05).结论 ORI能够浓度依赖性抑制143B骨肉瘤细胞株增殖并诱导其凋亡,可能与ORI能够抑制其Wnt/β-catenin信号转导有关.     

人参皂甙Rg3抑制人结肠癌细胞生长与Wnt/β-catenin信号的关系

目的研究人参皂甙Rg3对结肠癌细胞的增殖抑制作用与Wnt/β-catenin信号转导的关系。方法将结肠癌细胞分为对照组和用不同浓度Rg3处理组。采用结晶紫染色法及集落形成实验检测Rg3对HCT116细胞增殖的抑制作用。利用荧光素酶报告质粒检测Rg3对HCT116细胞中β-catenin/Tcf4转录活性的影响。采用Western blot法检测β-catenin及c-Myc蛋白表达;利用免疫荧光检测Rg3对结肠细胞SW480中β-catenin核转移的抑制作用。结果 Rg3在60μmol/L时就能明显抑制细胞增殖(P<0.05),集落形成实验结果呈现相同的变化趋势。荧光素酶报告质粒检测结果显示,Rg3在25μmol/L时就能明显降低HCT116细胞中β-catenin/Tcf4的转录活性(P<0.05),并降低c-Myc蛋白表达,但对β-catenin蛋白表达无明显影响。免疫荧光检测结果显示,Rg3能明显抑制SW480细胞中β-catenin的核转移。结论Rg3能抑制人结肠癌细胞增殖,其机制可能与Rg3抑制β-catenin的核转移,进而抑制Wnt/β-catenin信号转导有关。     

β-catenin反义寡核苷酸对MCF-7细胞增殖和紫杉醇敏感性的影响

目的 探讨β-catenin反义寡核苷酸(ASODN)对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响,及其与紫杉醇(paclitaxel)联合时对MCF-7细胞的抑制作用.方法 不同浓度的β-catenin ASODN和错义对照(SODN)作用于MCF-7细胞48 h后,测定细胞凋亡比例.以终浓度为10 μmol/L的ASODN、SODN和空白对照培养细胞10 d后,计算各自的集落形成率.按不同组合分别在培养细胞中加入ASODN、SODN、紫杉醇,于培养24、48 h用荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR) 检测β-catenin mRNA 表达,培养72 h后MTT法计算各组细胞存活率.结果 MCF-7细胞凋亡比例随β-catenin ASODN作用浓度升高而略有升高,与SODN、空白对照组比较差异有显著性意义(均P<0.05).ASODN组平均集落形成率(12.5%)与SODN组(34.0%)和空白对照组(37.0%)差异有统计学意义(均P<0.05).MTT实验和荧光定量RT-PCR结果显示,ASODN联合紫杉醇组与单用ASODN组或单用紫杉醇组比较,细胞生长抑制率明显增高,β-catenin mRNA表达相对值明显降低,均存在显著性差异.结论 β-catenin ASODN抑制MCF-7细胞增殖,促进凋亡,并且同紫杉醇联合作用时显著抑制细胞生长和β-catenin mRNA 表达.     

儿童急性淋巴细胞白血病患者骨髓细胞中Wnt/β-catenin基因表达水平的研究

目的:检测急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿骨髓单个核细胞中β-连环蛋白(β-catenin)基因表达水平,探讨Wnt/β-catenin与儿童ALL之间的关系。方法:选取徐州市儿童医院诊治的ALL初发患儿35例作为ALL组。选取同期诊治的非恶性血液病患儿30例作为对照组。采用RT-PCR法检测两组患者骨髓单个核细胞中β-catenin mRNA的表达水平,采用Western Blot法检测单个核细胞中蛋白的表达水平。结果:ALL组患儿骨髓单个核细胞中β-catenin mRNA及蛋白表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:与非恶性血液病患儿相比较,ALL患儿骨髓单个核细胞中β-catenin基因表达水平明显升高,β-catenin过表达致Wnt/β-catenin信号通路过度激活可能为ALL发生、发展中的重要环节。     

hS100A6 inhibits proliferation, induces apoptosis and up-regulates Wnt/β-catenin activity in ovarian cancer cell lines HO8910 and HO8910 PM

目的 研究hS100A6(human S100A6)对人卵巢癌细胞系(低转移系HO8910和高转移系HO8910 PM)增殖、凋亡和Wnt/β-catenin信号途径的影响.方法 通过MTT以及台盼蓝染色检测细胞增殖的变化;Hoechst检测细胞凋亡的变化;提取细胞总蛋白及核蛋白Western blot检测hS100A6对β-catenin的影响.结果 MTT及台盼蓝染色结果显示hS100A6抑制HO8910细胞和HO8910 PM细胞的增殖(P＜0.05),Hoechst染色结果显示hS100A6同时促进这两系细胞的 凋亡(P＜0.05);Western blot显示hS100A6增加β-catenin的水平并促进其发生核转位.结论 hS100A6能抑制人卵巢癌细胞系HO8910和HO8910 PM增殖,促进其凋亡,同时激活Wnt/β-catenin信号途径.     

精脒对SW620细胞增殖及糖酵解的影响

目的 探讨精脒对人结肠癌SW620细胞增殖及糖酵解的影响.方法 以SW620细胞为研究对象,用0.625～2.5 μmoL/L精脒(SPD)作用于细胞,细胞密度以104个/mL接种于96孔培养板,分别培养24 h后,MTT法检测细胞增殖情况;同时,取6孔板培养24 h的细胞上清液,用试剂盒检测SW620细胞葡萄糖消耗及乳酸水平;细胞密度以1.2× 105个/mL接种于6孔培养板中,培养24 h后加入不同浓度SPD,继续培养24 h后,Western blot检测缺氧诱导因子(HIF-1)、乳酸脱氢酶(LDHA)及葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)表达的变化.结果 与对照组比较,精脒各浓度组均能促进SW620细胞的增殖(P＜0.01),且促进作用呈剂量依赖性;精脒各浓度组作用后SW620细胞内葡萄糖的消耗及乳酸含量明显增多(P＜0.01),呈剂量依赖性;与对照组比较,LDHA、HIF-1及GLUT1蛋白表达水平随着精脒浓度的升高而增加(P＜0.01),且呈剂量依赖性.结论 精脒具有促进人结肠癌SW620细胞增殖及糖酵解的作用.