降钙素原在恶性肿瘤合并细菌感染诊断中的应用

目的 探讨降钙素原(PCT)在恶性肿瘤合并细菌性感染诊断中的应用价值.方法 选取在云南省肿瘤医院就诊的60例经病原学确诊的恶性肿瘤伴细菌感染患者,35例排除感染的恶性肿瘤患者作为对照.采集患者静脉血检测血清PCT、WBC及中性粒细胞百分比(N％)水平,并对结果进行比对.结果 恶性肿瘤合并细菌感染的患者PCT、WBC及N％水平分别为1.23 (0.17～2.61) ng/mL、9.98 (7.65～13.29) ×109/L和(81.36±10.72)％,均高于对照组,且差异有统计学意义(Z=-7.359、-6.689,t=-9.550,P均＜0.01).60例患者中,PCT阳性率达100.00％,明显高于WBC的43.33％(26例)及N％的53.33％(32例),且差异有统计学意义(Fisher's确切概率法,P＜0.05).WBC及N％水平随着PCT水平升高也同时升高,但未见PCT水平与WBC或N％存在相关性(P均＞0.05).革兰阴性菌感染者的PCT水平为0.57(0.30～8.29) ng/mL,高于革兰阳性菌感染者(Z=-3.562,P＜0.01);全身感染者PCT、WBC及N％分别为8.73(8.29～12.75) ng/mL、12.59(8.11～12.82)×109/L和(85.41±8.54)％,均高于局部感染者,差异均有统计学意义(Z=-4.436,P＜0.01;Z=-2.182,P＜0.05; t=3.048,P＜0.01).结论 PCT比WBC及N％更能反映恶性肿瘤患者的感染状态,且可不受免疫抑制治疗的影响,同时也能在一定程度上反映感染菌株的类型及感染程度.     

四川省甲型H1N1流感病毒血凝素基因特性和抗原性分析

目的 了解四川省甲型H1N1流感病毒的抗原性和血凝素(HA)基因的变异情况.方法 对四川省2009-2011年分离的流感病毒采用单项血凝抑制试验鉴定毒株型别,在此基础上选取分离自中国内地首发甲型H1N1流感病例、首起甲型H1N1流感疫情、甲型H1N1流感死亡病例以及哨点医院流感样病例标本的甲型H1N1流感病毒株共计11株,进行HA基因核苷酸序列测定并推导出其氨基酸序列,然后进行基因特征分析.结果 与中国代表株A/四川/SWL1/2009(H1N1)相比,2009-2011年四川省甲型H1N1流感毒株单项血凝抑制效价均无4倍以上差异,与疫苗株A/California/7/2009(H1N1)相比,HA氨基酸具有高度同源性(96.6％ ～99.4％).结论 四川省甲型H1N1流感病毒的HA基因特性和抗原性没有发生明显变异.     

一起甲型H1N1和H3N2流感病毒混合感染调查研究

目的 从病例临床特征、抗体变化规律及病原学检测等多角度分析一起由甲型H1N1和H3N2流感病毒混合感染引起暴发疫情的流行特征,为有效控制疾病的发生与蔓延提供科学依据.方法 采用回顾性调查和现场流行病学调查方法进行问卷调查,利用RT-PCR和血凝抑制试验分别进行流感病毒和血清抗体检测.结果 45例流感样病例中,确诊40例,其中22例为甲型H1N1流感、12例为季节性H3N2型流感、6例为H1N1和H3N2病毒混合感染.不同病毒感染病例的临床表现差异无统计学意义.序列比对分析显示,混合病毒感染和单一病毒感染者的甲型H1N1和季节性H3N2病毒基因序列没有差异.同时分析表明,所有流感病例的病毒株均对金刚烷胺耐药,对奥司他韦(达菲)有效.患者的双份血清血凝抑制试验检测表明,暴发由甲型H1N1和H3N2流感病毒混合感染引起.结论 这是一起由甲型H1N1和H3N2流感病毒混合感染引起的疫情,甲型H1N1病毒在传播过程中可能较H3N2更具有优势.     

鸡血藤水提物抗流感病毒作用的研究

目的揭示鸡血藤水提取物A.E.体外抗流感病毒A1的作用。方法采用细胞病变CPE法测定鸡血藤水提取物A.E.在MDCK细胞的抗流感病毒的活性。同时采用血凝滴度测定鸡血藤水提物A.E.对鸡胚培养甲型流感病毒的抑制作用。小鼠经滴鼻感染流感病毒造成肺炎模型,观察其肺指数、死亡率及病理切片。结果鸡血藤水提物A.E.在MDCK细胞中对流感病毒A1具有一定的抑制作用,其半数抑制浓度IC50为(74.5±4.7)μg/ml,治疗指数TI为13.3。在鸡胚中与病毒对照组比较,鸡血藤水提物A.E.各剂量组的血凝滴度降低,差异有统计学意义(P0.01)。每日灌注鸡血藤水提物A.E.能够明显降低病毒感染小鼠的死亡率、肺指数、肺病理切片坏死和浸润的程度。结论鸡血藤水提物对流感病毒A1具有抑制作用。     

禽流感病毒免疫血清对实验感染小鼠的紧急预防效果研究

目的 评价H5N1亚型禽流感病毒免疫血清对实验感染小鼠的紧急预防保护效果.方法 给30只小鼠腹腔注射0.2 ml/只禽流感病毒免疫血清,注射后1～19 d内每天采3只小鼠血清测定血凝抑制(HI)抗体效价,测定免疫血清在小鼠体内的消长规律;给10只小鼠腹腔注射1.5 ml/只禽流感病毒免疫血清,检测免疫血清对小鼠的安全性;将70只小鼠按数字表法随机分为7组,分别为正常对照组、病毒对照组以及免疫血清高剂量早期组、高剂量中期组、高剂量晚期组、中剂量组、低剂量组.每组10只,分别在攻毒前8 d,4 d和1 d时腹腔注射血清0.2 ml/只、0.1 ml/只、0.05 ml/只禽流感病毒免疫血清,然后给小鼠滴鼻感染10个半数致死量(LD50)病毒,攻毒后连续观察14 d,计算小鼠存活率和平均存活天数,比较各实验组小鼠肺指数及肺脏病毒感染滴度.结果注射0.2 ml免疫血清小鼠HI抗体效价在1～15 d时为26,在17 d以后开始下降;1.5 ml免疫血清注射小鼠全部存活,没有发病;在攻毒前8 d、4 d和1 d时给小鼠腹腔注射0.2 ml免疫血清,小鼠存活率分别为80%、100%和100%,平均存活天数分别为13.1 d、14.0 d和14.0 d,在攻毒前1 d给小鼠腹腔注射0.1 ml和0.05 ml免疫血清,小鼠存活率分别为100%和50%,平均存活天数分别为14.0 d和11.7 d,各实验组小鼠肺指数(O.0096±0.0033～0.0145±0.0060)均小于病毒对照组(0.0199±0.0025),除低剂量组外,均具有统计学意义(P值0.0022～0.0470,＜0.05),各实验组小鼠肺脏病毒滴度(TCID50)较病毒对照组平均低2个滴度.结论禽流感病毒免疫血清对实验感染小鼠具有较好的紧急预防保护效果,可作为人禽流感紧急预防制剂加以研究开发.     

四价流感病毒裂解疫苗安全性和免疫原性研究

目的探讨四价流感病毒裂解疫苗的安全性和免疫原性。方法使用世界卫生组织推荐的北半球疫苗株制备四价流感病毒裂解疫苗,检定合格后,用于开展全面的动物毒理试验和免疫原性研究。结果ICR小鼠毒理试验结果显示,疫苗最大耐受量MTD大于1200μg/kg;家兔免疫原性试验结果显示,血凝抑制抗体滴度大于1:40,阳转率达到100%,血清中的中和抗体能够保护鸡胚不受流感病毒感染。结论动物试验表明,该疫苗显示出良好的安全性和免疫原性。     

纳米银溶液尾静脉注射致小鼠急性毒性作用

目的 探讨尾静脉注射纳米银溶液对小鼠的急性毒性作用.方法 将纳米银溶液12、3、0.75 mg/mL,按10 ml/kg剂量经小鼠尾静脉注射,对照组注射生理盐水,染毒7 d和14 d后分批处死小鼠,检测脏器指数、血清生化指标和组织病理学.结果 0.75 mg/mL纳米银组染毒7 d时总蛋白(TP)和白蛋白(ALB)含量分别为(50.17±4.71)和(13.83±1.47)g/L,低于对照组(P＜0.05),乳酸脱氢酶(LDH)活力为(789.00±341.03)U/L,高于对照组(P＜0.05),3 mg/mL纳米银组TP和ALB分别为(48.67±3.61)、(13.33±1.03)g/L,低于对照组(P＜0.05);纳米银染毒14 d时,0.75 mg/mL组谷草转氨酶(100.00±17.19)U/L低于对照组(P＜0.05),3 mg/mL组LDH(667.00±217.24)U/L与尿素氮(8.93±1.03)mmol/L,高于对照组(P＜0.05);病理检查显示,高剂量组多数小鼠肺部出现炎细胞浸润及间质性炎症改变;肝细胞弥漫性水肿,胞浆疏松化.结论 尾静脉注射纳米银溶液可以影响小鼠肺脏、肝脏和肾脏的功能.     

帕拉米韦对流感病毒感染小鼠免疫功能及炎症反应的调节作用

目的探究帕拉米韦对流感病毒感染小鼠免疫功能及炎症反应的调节作用。方法将48只BALB/c小鼠随机分为对照组、感染组、低、高剂量治疗组,每组12只,病毒感染组、低、高剂量治疗组小鼠用H1N1病毒株(PR8)滴鼻途径攻毒,4 h后治疗组小鼠通过肌肉注射帕拉米韦4、20 mg/kg·d,连续注射5 d,对照组和病毒感染组给予等量生理盐水;在攻毒后3 d时,每组随机取2只小鼠处死,观察肺组织病理变化及其病毒载量;攻毒后5 d时,每组随机取6只小鼠处死,取脾制成单细胞后,利用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群水平,取肺组织制成组织匀浆,利用酶联免疫吸附法(ELISA)检测白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)水平,每日观察小鼠状态,持续观察14 d,根据观察结果分析小鼠的存活率及平均生存时间。结果攻毒14 d后,感染组小鼠全部死亡,死亡率明显高于低、高剂量治疗组(P<0.05),低剂量治疗组的死亡率高于高剂量治疗组(P<0.05);攻毒后3 d时,低、高剂量治疗组小鼠的肺指数及肺组织病毒载量低于感染组(P<0.05),高剂量治疗组上述指标变化更显著(P<0.05);感染组小鼠肺组织的病理损伤及炎症浸润严重,低、高剂量治疗组小鼠的病理损伤及炎症浸润有不同程度减轻,且高剂量治疗组改善更明显;攻毒后5 d时,低、高剂量治疗组小鼠的CD₄⁺、CD₄⁺/CD_₈⁺、IL-6、TNF-α水平低于感染组,IL-2、IFN-γ水平高于感染组(P<0.05),且高剂量治疗组的IL-6、TNF-α水平低于低剂量治疗组,IL-2、IFN-γ水平高于低剂量治疗组(P<0.05)。结论帕拉米韦通过抑制肺组织中流感病毒的释放和增殖,缓解过度免疫反应引起的炎症损伤,进而提高小鼠存活率。     

草血竭纯化部分对小鼠甲型H1N1流感的疗效

目的探讨草血竭纯化部分对于小鼠甲型H1N1流感的疗效。方法采用滴鼻法建立甲型H1N1流感病毒感染小鼠模型,通过灌胃途径给予不同剂量的草血竭,以给予奥司他韦者为阳性对照,以未给予药物者为病毒对照组。观察14d内小鼠生活状态,计算小鼠肺指数,检测肺组织内流感病毒核酸相对量和病毒滴度。结果甲型H1N1流感病毒对小鼠的半数致死量为10-6。阳性对照组和草血竭高、中剂量组小鼠的存活率均为100%,平均生存日数均为14d,草血竭低剂量组小鼠的存活率为42.86%,平均生存日数为9.14d,而病毒对照组小鼠的存活率及平均生存日数分别为0和3.57d。不同组别小鼠平均生存日数比较,差异有统计学意义(F=8.53,P=0.02);阳性对照组、高剂量组、中剂量组、低剂量组小鼠平均生存日数均高于病毒对照组(P0.05)。阳性对照组和草血竭高剂量、中剂量、低剂量组及病毒对照组肺指数分别为:(0.84±0.07)%、(0.81±0.07)%、(0.84±0.10)%、(0.84±0.10)%和(1.42±0.12)%,差异有统计学意义(P=0.03);病毒核酸相对量分别为:0.37±0.11、0.42±0.06、0.42±0.06、0.65±0.19和1.00±0.06,差异有统计学意义(P=0.04);病毒滴度分别为:2.49±0.12、2.35±0.29、2.43±0.15、2.46±0.12和2.80±0.16,差异有统计学意义(P=0.04)。阳性对照组和草血竭各剂量组的肺指数、肺组织内流感病毒核酸相对量和病毒滴度均低于病毒对照组(P0.05);而阳性对照组的上述指标与草血竭各剂量组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论草血竭纯化部分在体内对甲型H1N1流感病毒具有抑制作用,能够改善甲型H1N1流感小鼠的肺组织的病变,降低病死率。     

TPCK胰酶和普通胰酶对各亚型流感病毒在MDCK细胞分离培养中的影响

目的比较不同种类的胰酶对不同亚型流感病毒在MDCK细胞增殖能力的影响,寻找最佳胰酶类型和浓度。方法将血凝滴度为1∶16的甲型H1N1、H3N2、Victoria、Yamagata流感病毒稀释100倍接种到MDCK细胞上,分别改变维持液中TPCK-胰酶和普通胰酶浓度,在24 h、48 h、72 h、96 h取培养物上清测血凝滴度,比较不同亚型流感病毒在MDCK细胞病变速度和病毒含量的差异。结果 TPCK胰酶对各亚型流感病毒在MDCK细胞培养中的增值能力明显提高,TPCK胰酶在甲型H1N1、H3N2、Victoria、Yamagata流感病毒的最优浓度分别为1μg/ml~3μg/ml、1μg/ml、0.5μg/ml~2μg/ml、1μg/ml。普通胰酶对甲型H1N1流感病毒的增值能力有提高作用,最佳胰酶浓度为5μg/ml,普通胰酶对H3N2、Victoria、Yamagata流感病毒在MDCK细胞的增值无提高作用。结论 MDCK培养流感病毒时,需要添加TPCK胰酶。     

流感病毒在MDCK细胞上培养条件的优化分析

摘要:目的　优化甲、乙型流感病毒在MDCK细胞上的培养条件,提高流感病毒的分离效果。方法　将5种流感病毒液（甲型流感病毒:甲型H1N1、季节性H1N1、季节性H3N2和乙型流感病毒:Victoria、Yamagata）分别接种于MDCK细胞,通过比较不同的病毒接种量（30 μl/cm2、60 μl/cm2、90 μl/cm2、120 μl/cm2、150 μl/cm2）、不同的病毒孵育时间（0.5 h、1.0 h、1.5 h、2.0 h、2.5 h、3.0 h）、不同的TPCK-胰酶添加浓度（1.0 μg/ml、2.0 μg/ml、3.0 μg/ml、4.0 μg/ml、5/0 μg/ml）以及不同的MDCK细胞增毒代次（连续盲传5代）对5种流感病毒易感性的影响,确定其最佳分离效果;对分离后的病毒以红细胞凝集（HA）方法检测病毒滴度,结果　通过对比病毒HA滴度结果,5种流感病毒（甲型H1N1、季节性H1N1、季节性H3N2、Victoria和Yamagata）的最佳病毒接种量分别为:90 μl/cm2、90 μl/cm2、60 μl/cm2、120 μl/cm2、120 μl/cm2;最佳病毒孵育时间:甲型流感病毒为1.0～1.5 h,乙型流感病毒为2.0～2.5 h;胰酶最佳使用浓度分别是:2.0 μg/ml、2.0 μg/ml、2.0 μg/ml、3.0 μg/ml、3.0 μg/ml;最适宜的细胞增毒传代次数为:1代、3代、2代、2代、2代;甲型流感病毒经培养后病毒的HA滴度低于乙型流感,甲型H1N1流感病毒经培养后HA滴度较低。结论　甲型流感病毒对MDCK细胞的易感性低于乙型流感病毒;甲型H1N1流感病毒的分离效果低于季节性H1N1和季节性H3N2;Victoria与Yamagata的分离条件基本相同。     

河南省甲型H1N1流感病毒抗体人群分布的横断面调查

目的 调查河南省人群甲型H1N1流感抗体的分布.方法 选择河南省的不同城区和农村进行采样,共采4 651份样品,RDE处理血清后,用鸡血球测定HI,以侧倾出现泪滴判定,大于40的为阳性.结果 省会城市的抗体阳性率为27.76％,地市级城市抗体阳性率为27.13％,农村地区为18.81％,城市阳性率显著高于农村,各年龄段抗体阳性率不等,6～17岁年龄组抗体阳性率较高.结论 河南省的人群已经初步形成了甲型H1N1的免疫屏障,但是还比较薄弱,有待于科学使用甲型H1N1疫苗,提高人群抗体分布水平.     

Generation and characterization of a cold-adapted influenza A H9N2 reassortant as a live pandemic influenza virus vaccine candidate

H9N2 subtype influenza A viruses have been identified in avian species worldwide and were isolated from humans in 1999, raising concerns about their pandemic potential and prompting the development of candidate vaccines to protect humans against this subtype of influenza A virus. Reassortant H1N1 and H3N2 human influenza A viruses with the internal genes of the influenza A/Ann Arbor/6/60 (H2N2) (AA) cold-adapted (ca) virus have proven to be attenuated and safe as live virus vaccines in humans. Using classical genetic reassortment, we generated a reassortant virus (G9/AA ca) that contains the hemagglutinin and neuraminidase genes from influenza A/chicken/Hong Kong/G9/97 (H9N2) (G9) and six internal gene segments from the AA ca virus. When administered intranasally, the reassortant virus was immunogenic and protected mice from subsequent challenge with wild-type H9N2 viruses, although it was restricted in replication in the respiratory tract of mice. The G9/AA ca virus bears properties that are desirable in a vaccine for humans and is available for clinical evaluation and use, should the need arise.     

北京市金融街地区甲流流行后健康人群抗体水平的调查

目的了解甲型H1N1流行性感冒（甲流）大流行后北京市金融街地区健康人群甲流血清抗体水平,为今后的流感防控提供有益的参考.方法随机选择北京市金融街地区健康人群250人作为调查对象,采用血凝抑制试验测定甲流抗体,并进行相关问卷调查和流行病学分析.结果250名健康人群甲流抗体阳性率为25.6％ (64/250),男女性别间抗体阳性率差异无统计学意义(P＞0.05),接种甲流疫苗组与未接种疫苗组阳性率差异有统计学意义(P＜0.05),有流感样症状者与未出现流感样症状者抗体阳性率差异有统计学意义(P＜0.05),3～5岁和6 ～15岁年龄组人群阳性率最高,分别为50％和54％.结论北京市金融街地区健康人群中25.6％的人已具有甲流抗体,已形成有效的免疫屏障.     

Recommended tests for association in 2×2 tables

The asymptotic Pearson's chi‐squared test and Fisher's exact test have long been the most used for testing association in 2×2 tables. Unconditional tests preserve the significance level and generally are more powerful than Fisher's exact test for moderate to small samples, but previously were disadvantaged by being computationally demanding. This disadvantage is now moot, as software to facilitate unconditional tests has been available for years. Moreover, Fisher's exact test with mid‐p adjustment gives about the same results as an unconditional test. Consequently, several better tests are available, and the choice of a test should depend only on its merits for the application involved. Unconditional tests and the mid‐p approach ought to be used more than they now are. The traditional Fisher's exact test should practically never be used. Copyright © 2009 John Wiley & Sons, Ltd.     

2000-2007年佛山市甲1亚型(H1N1)流感病毒监测情况及其HA1基因的变异

目的分析2000-2007年佛山市甲1亚型(H1N1)毒株流行情况及其HA1基因变异情况。方法用MDCK细胞分离流感病毒,采用血球凝集抑制试验进行型别鉴定,选取每年2~4株甲1亚型毒株的细胞培养物提取病毒核酸,进行HA1基因的逆转录,对其核苷酸和氨基酸序列及亲缘关系进行分析。结果病毒分离结果显示2000-2007年间甲1亚型流感病毒在佛山市人群中的流行是间断性的,只在2000、2001、2005、2006年4个年份分离到甲1亚型流感毒株。毒株的HA1区氨基酸序列与流感疫苗推荐株A/New Caledonia/20/99和A/Solomon Islands/3/2006相比,同源性分别为97.2%~99.7%和97.2%~98.5%。氨基酸残基平均替换数随年份的推移而增加,只有2006年的毒株在抗原决定簇发生了替换。结论与疫苗株比较,佛山市的甲1亚型流感毒株抗原性已逐渐发生了改变,应密切注意疫苗对毒株的免疫效果。     

一起寄宿制学校甲型H1N1流感暴发危险因素分析

目的探讨一起甲型H1N1流感在寄宿制学校暴发的危险因素,为制定甲型H1N1流感疫情的防控措施提供科学依据。方法采用RT-PCR方法以及血凝抑制试验,进行甲型H1N1流感病毒核酸及血清抗体检测;同时进行面对问卷调查并查阅校医门诊记录,运用病例对照研究,分析甲型H1N1流感病毒感染的危险因素。结果一次疫情暴发后,学生甲型H1N1流感感染率为32.69%。2χ检验表明,同班同学发热(OR=2.257,95% CI=1.664~3.060)、同宿舍室友发热(OR=2.270,95%CI=1.782~2.891)、宿舍每天开排气扇(OR=0.776,95% CI=0.617~0.976)、宿舍朝向与当时季节风向不一致(OR=1.417,95%CI=1.114~1.801)均与甲型H1N1流感感染有关。结论加强晨检、及时发现传染源并采取单间隔离或居家隔离是控制甲型H1N1流感暴发疫情的重要手段,加强居室通风是切实可行的预防措施。     

年龄和流感病毒暴露对免后血清与H3N2亚型变异株交叉反应的影响

  目的  评估年龄和既往流感病毒暴露史对免后血清与H3N2亚型变异株交叉反应的影响。  方法  将750名受试者按照1:1的比例接种试验用流感病毒亚单位疫苗和对照用流感病毒裂解疫苗,并且根据年龄和流感病毒暴露史分组,通过血凝抑制（hemagglutination inhibition,HI）试验测得受试者免疫前后血清针对疫苗株的血凝抑制滴度,与免疫后血清针对当年流行的4株H3N2亚型变异流感毒株的抗体滴度,计算抗体几何平均滴度（geometric mean titer,GMT）,以及变异株和疫苗株的抗体GMT比值比,使用Kruskal-Wallis秩和检验比较不同年龄组以及不同既往流感暴露组之间的GMT比值比差异。  结果  在接种流感病毒亚单位疫苗的人群中,在免疫前同时暴露于H1亚型和B型流感病毒株的受试者,其针对A/Jiangsu-Nanchang/11926/2014（H3N2）的免后抗体水平高于无H1/B暴露的人群（t=3.913,P=0.001）。在接种流感病毒裂解疫苗的人群中,19~59岁的成年人针对A/Jiangsu-Haizhou/11044/2015（H3N2）免后交叉反应水平高于3~18岁的青少年（t=3.198,P=0.008）。  结论  先前暴露于H1亚型或B型流感病毒,可能会不同程度地影响H3免后抗体应答的交叉反应性,并因此可能影响疫苗效力。人类的免疫后反应存在年龄特异性差异。     

M2SR,a novel live influenza vaccine,protects mice and ferrets against highly pathogenic avian influenza

The emergence of highly pathogenic avian influenza H5N1 viruses has heightened global concern about the threat posed by pandemic influenza. To address the need for a highly effective universal influenza vaccine, we developed a novel M2-deficient single replication (M2SR) influenza vaccine virus and previously reported that it provided strong heterosubtypic protection against seasonal influenza viruses in mice. In the current study, we assessed M2SR induced protection against H5N1 influenza in mice and ferrets.Mice were intranasally inoculated with M2SR viruses containing the HA and NA from A/Vietnam/1203/2004 (M2SR H5N1) or A/California/07/2009 (M2SR H1N1). All M2SR vaccinated mice survived lethal challenge with influenza A/Vietnam/1203/2004 (H5N1), whereas 40% of mice vaccinated with recombinant H5 HA and none of the naïve controls survived. M2SR H5N1 provided sterile immunity, whereas low levels of virus were detected in the lungs of some M2SR H1N1 vaccinated mice. In contrast, recombinant H5 HA vaccinated mice and naïve controls showed systemic infection.M2SR H5N1 induced strong serum and mucosal antibody responses (IgG and IgA classes) against H5 HA, with high hemagglutination inhibition (HAI) titers. In contrast, while M2SR H1N1 elicited cross-reactive antibodies recognizing the H5 HA2 stalk region or the neuraminidase, no HAI activity against H5N1 virus was detected after M2SR H1N1 immunization.Both M2SR H5N1 and H1N1 also protected ferrets against lethal challenge with A/Vietnam/1203/2004. A prime–boost regimen provided optimal protection with no virus detected in the respiratory tract or brain after challenge. As in the mouse model, only the M2SR H5N1 vaccine induced HAI antibodies against the challenge virus in ferrets, while the M2SR H1N1 was able to provide protection without the induction of HAI antibodies.In summary, effective protection against highly pathogenic H5N1 influenza virus was provided by both homologous H5N1 M2SR and heterologous H1N1 M2SR demonstrating the cross-protective attributes of the M2SR platform.     

Influenza virus-like particles comprised of the HA, NA, and M1 proteins of H9N2 influenza virus induce protective immune responses in BALB/c mice

Avian influenza viruses represent a growing threat for an influenza pandemic. To develop recombinant vaccine for avian influenza of the H9N2 subtype, we expressed in insect cells virus-like particles (VLPs) consisting of three structural proteins of influenza A/Hong Kong/1073/99 (H9N2) virus. Upon infection of Sf9 cells with recombinant baculoviruses, the hemagglutinin (HA), neuraminidase (NA), and matrix (M1) proteins were co-expressed in the infected cells, self-assembled, and released into the culture medium as VLPs of 80–120 nm in diameter. VLPs exhibited functional characteristics of influenza virus including hemagglutination and neuraminidase activities. In BALB/c mice, VLPs elicited serum antibodies specific for influenza A/Hong Kong/1073/99 (H9N2) virus and inhibited replication of the influenza virus after challenge. Thus, VLPs represent a potential strategy for the development of human vaccines against avian influenza H9N2 viruses.