蛋白激酶Cα对人正常肝和肝癌细胞周期及G1期相关调控因子cyclinD1、cyclinE的影响

目的 探讨蛋白激酶Cα(PKCα)对人正常肝和肝癌细胞周期的作用和对G1期相关调控因子的影响。方法通过细胞转染技术将PKCα cDNA正向插入的真核表达质粒PXJ41-PKCα导入正常肝细胞(L-02),并利用本室已构建的表达反义PKCα的BEL-7402细胞(HT6)检测细胞的生长曲线,细胞周期以及细胞对G1期相关调控因子cylinD1和cyclin E的影响。结果 构建了稳定过表达PKCα的人正常肝细胞模型(LT3),过表达PKCα可促进L-02细胞增殖,促进细胞由G1期向s期的过渡;cyclinD1和cyclinE的蛋白水平上升,反之表达反义PKCα的BEL-7402细胞(HT6)增殖被抑制,阻抑细胞由G1期向S期的过渡,cyclinD1和cyclinE的蛋白水平下降。结论 从正反两个方面表明,PKCα可通过作用于G1期相关周期蛋白的水平影响G1／S期的进程。     

细胞周期蛋白D1(cyclinD1)及p16蛋白在肾母细胞瘤中的表达

目的　探讨细胞周期蛋白D1(cyclinD1)和p16蛋白在肾母细胞瘤中的表达、相关性及其意义。方法　应用免疫组织化学方法检测 4 2例肾母细胞瘤患者组织中cyclinD1和 p16蛋白的表达情况。结果　 4 2例中cyclinD1蛋白过表达率为 4 5 .2 3% ,p16蛋白表达缺失率为 6 9.0 4 % ,p16阳性表达与病理组织类型、患儿预后明显相关 (P <0 .0 1)阳性表达者预后好。结论　 (1) p16 -cyclinD1- pRb通路异常与肾母细胞瘤的发病机制密切相关 ,(2 )cyclinD1过表达是肿瘤发生的早期事件 ,(3) p16蛋白表达可作为判断肾母细胞瘤预后的一项指标。     

细胞周期与肿瘤基因治疗

细胞周期 (cellcycle)是从上次有丝分裂结束开始到下一个有丝分裂结束为止 ,周而复始的生长过程 ,并呈现一定的周期性。完整的细胞周期包括DNA合成前期 (G1期 )、DNA合成期 (S期 )、DNA合成后期(G2期 )和有丝分裂期 (M期 ) ,休眠期的细胞 (G0期 )已经退出细胞周期 ,但在一定的刺激因素作用下可以重新进入周期进行有丝分裂 ,他是肿瘤复发的根源。调节细胞周期进展的是专一的细胞周期调控点(checking point) ,细胞周期有三个调控点 ,分别调控G0 /G1、G1 /S、G2 /M。细胞周期的调控实际上就是细胞周期调控点的调控 ,是多因素参与的过程…     

细胞周期蛋白G2与肿瘤

细胞周期蛋白G2是一个崭新的细胞周期蛋白,它具有终止细胞周期和抑制细胞增殖的作用.在许多恶性肿瘤(如甲状腺乳头状癌和白血病)细胞中,其表达均发生显著下降,导致肿瘤细胞的去分化和无限制有丝分裂,为肿瘤的发生、发展提供了基础.低水平的细胞周期蛋白G2表达与肿瘤预后不良相关.研究和探索周期蛋白G2与肿瘤的关系,对进一步认识肿...     

全反式维甲酸对人卵巢癌细胞cyclinD1和CDK4表达的影响

目的　探讨全反式维甲酸 (ATRA)对人卵巢癌细胞增殖抑制作用及其与细胞周期调控因子cyclinD1和CDK4之间的关系。方法　选用人卵巢癌细胞株COC1进行体外培养 ,以不同浓度的ATRA处理COC1细胞 ,甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法检测细胞增殖抑制情况 ;流式细胞仪进行细胞周期时相分析 ;免疫细胞化学法测定细胞内cyclinD1和CDK4的表达。结果　A TRA浓度为 (10 -7～ 10 -5)mol/L时 ,均可明显抑制COC1细胞的增殖 (P <0 0 1) ,并具有时间 剂量依赖性。ATRA处理COC1细胞后G0 /G1期细胞增加 ,从 31 34%上升至 5 3 95 % ,S期细胞减少 ,从 5 8 5 0 %下降至 35 4 0 %。结果显示ATRA作用后 ,COC1细胞cyclinD1和CDK4蛋白表达减弱 ,且与细胞增殖指数 (PI)呈现负相关。结论　ATRA对人卵巢癌细胞株COC1具有明显的增殖抑制作用 ,可能是通过使细胞周期调控因子cyclinD1和CDK4蛋白表达减弱 ,将细胞阻滞于G0 /G1期实现的     

周期蛋白E在细胞周期调节中的作用

cyclin E是 G1期的周期蛋白 ,基因定位于 1 9q1 2 - 1 3,参与细胞周期的调节及肿瘤的发生。cyclin E与 CDK2结合在G1期末发挥作用 ,促进细胞进入 S期。cyclin E的过量表达通过对 p RB及其它底物的磷酸化、释放出转录因子进而启动 DNA的合成 ,加速细胞的 G1期进程。 p2 1、p2 7及 TGF-β通过对 cyclin E- CDK2活性的抑制而减缓 G1期的进程。 cyclin E是周期进程的基本的调节因子 ,对它的分析将有助于说明肿瘤细胞基本的生物特性及真核细胞周期调控机制     

MCMV影响神经干细胞cyclins表达和细胞周期进程的体外实验研究

目的:观察鼠巨细胞病毒(MCMV)感染对体外培养神经干细胞(NSCs)细胞周期进程和cyclins表达的影响,探讨MCMV感染致脑发育异常的机制。方法:本实验体外分离、培养和鉴定BABL/C胎鼠NSCs,以感染复数(MOI)为5,1和0.1的MCMVsmith毒株感染NSCs并于感染后1,2,3,4,5,6d收集细胞,采用Cyclin/DNA双参数流式细胞术检测感染细胞cyclinA,cyclinB1,cyclinD1,cyclinE的表达和细胞周期时相的动态变化,观察MC-MV对感染NSCs细胞周期进程的影响。结果:体外分离培养的NSCs呈球样生长,神经干细胞特异性标记Nestin表达阳性,并可进一步分化为GFAP阳性的星形胶质细胞和NF-200阳性的神经元;各感染组cyclinA,cyclinB1,cy-clinD1和cyclinE的表达均上调,其中MOI=0.1表达逐渐上升,在第6d达峰值,MOI=1组表达高峰在第4d,MOI=5组表达高峰在第3d;感染组G0/G1期细胞比率减少,S期和G2/M期细胞比率增加,其变化趋势与cyclins的表达基本一致,并随MOI的增加变化越明显。结论:Cyclin/DNA多参数流式细胞术可用于NSCs细胞周期的分析;MCMV可通过上调cyclinA,cyclinB1,cyclinD1,cyclinE的表达来影响NSCs细胞周期进程,并与MOI存在一定量效依赖关系;MCMV感染可诱导NSCs从G0/G1期进入S期,出现S期和G2/M期偏移和阻滞,影响NSCs细胞周期进程,这可能是CMV抑制NSCs增殖并导致先天性脑发育异常的重要机制之一。     

人巨细胞病毒感染对宿主细胞周期蛋白表达影响的实验研究

目的观察人巨细胞病毒（HCMV）感染对宿主细胞周期蛋白（Cyclins）表达的影响。方法用HCMV感染同步化于G0/G1期的人胚肺成纤维细胞（HEL）,分别于感染后0 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、96 h终止培养。用免疫蛋白印迹法（Western Blot）检测CyclinE、CyclinA、CyclinD1蛋白的表达。结果HCMV感染接触抑制细胞12 h时CyclinE蛋白被诱导,感染后24 h出现CyclinE峰值;HCMV不能诱导CyclinA蛋白表达;CyclinD1没有被诱导,且在感染后24 h开始下降。结论HCMV感染同步化于G0/G1期的细胞后,诱导CyclinE蛋白明显升高,激活CyclinE/Cdk2激酶,使细胞周期越过G1/S限制点,将细胞周期阻止于晚G1期。     

G1期细胞周期调节因子与细胞癌变

目前研究结果表明，细胞周期中的多种调整因子参与细胞癌变，特别是Ｇ１期的Ｄ型细胞周期蛋白（ｃｙｃｌｉｎＤ）的过表达，细胞周期蛋白依赖性抑制因子（ＣＤＩ）的ｐ１６，ｐ１５，ｐ２１，ｎ２７及参与Ｇ１期负向调节的抑癌基因产物ｐ５３，Ｒｂ的低表达或基因突变皆可导致恶性肿瘤的发生。     

TGF—β与细胞周期调控的研究进展

转化生长因子 β(TGF β)对上皮细胞的增殖抑制作用是它重要的生物学功能之一 ,对细胞周期的阻滞是它抑制细胞增殖的重要机制。TGF β可以调节细胞周期素 (cyclin)、细胞周期素依赖激酶 (CDK)、细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子 (CKI)以及c myc的表达水平及功能状态 ,使大量pRB去磷酸化而活化 ,活化的 pRB结合并抑制大量生长因子 ,导致细胞G1期阻滞。肿瘤细胞中细胞周期蛋白基因的突变或缺失是细胞对TGF β不应答的重要原因。     

Bcl—2蛋白与细胞周期调控

Bcl 2作为一种凋亡抑制蛋白 ,同样对细胞周期进程产生重要影响。Bcl 2通过pp2 7kip1抑制G1/S期转换 ,促进细胞进入分化状态并诱导肿瘤细胞产生耐药。在某些化疗药物导致G2 /M期阻滞的过程中 ,Bcl 2呈现剂量依赖性的磷酸化。但目前尚未发现此种磷酸化的确切作用。另外 ,Bcl 2通过与p5 3下游蛋白的相互作用抑制p5 3的促凋亡和细胞周期阻滞功能。在行使上述功能时 ,Bcl 2蛋白不同位点的氨基酸残基发挥着不同的作用。     

CDK4在子宫内膜癌组织中的表达及意义

CDK4是细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶(cyc lin-depend-ent k inases,Cdks)家族的成员之一,是细胞周期G1期的正调控因子。哺乳动物细胞增生及分化的调节大部分发生于细胞周期G0/G1期和/或G1/S期的转变时期,CDK4作为G1期重要的调控因子,已发现它在多种肿瘤中出现表达异常[1]。本研究应用免疫组化方法检测了子宫内膜癌(endom e-trial carc inom a,EC)中CDK4蛋白的表达,以探讨它们在EC的发生、发展中的作用。1材料与方法1·1材料:收集齐鲁医院1999年6月—2001年12月EC存档蜡块42例。病理分类按国际妇科病理协会(1988)标准分类。临床手术…     

氧化低密度脂蛋白可促进小鼠造血干细胞衰老

目的 观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对造血干细胞(HSCs)细胞周期调控基因p16、p21、CDK2、CDK4及细胞周期蛋白(cyclinD)表达的影响,探讨ox-LDL诱导HSCs衰老的可能分子机制.方法 采用免疫磁性分选法分离纯化小鼠Sca-1+ HSCs,并与ox-LDL共培养,通过衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测衰老HSCs,四唑氮盐(MTS)比色法与多向造血祖细胞(CFU-Mix)混合集落培养检测HSCs自我更新能力和多向分化潜能,流式细胞术分析细胞周期分布,荧光定量PCR及Western blotting检测HSCs p16、p21、CDK2、CDK4及cyclinD表达.结果 与对照组比较,ox-LDL能增加HSCs SA-β-Gal染色阳性细胞率;促进HSCs停滞于G1期,G0/G1期细胞增多、S期细胞减少,减弱HSCs自我更新与多向分化能力;ox-LDL能上调HSCs p16和p21 mRNA及蛋白表达水平,下调CDK4及cyclinD蛋白表达,而对CDK2蛋白表达无影响.结论 ox-LDL能通过上调p16、p21表达及下调CDK4、cyclinD表达,在体外促进HSCs衰老.     

肝细胞癌细胞周期蛋白D1基因的扩增和表达

目的　探讨细胞周期蛋白 (cyclin)D1基因 (CCND1)扩增和cyclinD1在肝细胞癌 (HCC)中的表达情况及其与HCC发生发展的关系。方法　分别应用差异聚合酶链反应 (DPCR)、逆转录(RT) PCR和免疫组织化学法检测 2 0例HCC中cyclinD1基因扩增率、mRNA和蛋白表达状况 ,并分析其与HCC组织学分级的关系。结果　cyclinD1基因扩增结果为 6/ 2 0 ,其mRNA和蛋白过表达分别为9/ 2 0和 14 / 2 0。cyclinD1mRNA表达与基因扩增相关 (P <0 .0 5) ,也和蛋白表达水平相关 (P <0 .0 5)。cyclinD1蛋白表达与HCC组织学分级具有相关性 (P <0 .0 5)。结论　cyclinD1基因扩增在HCC中较常见 ,是引起cyclinD1mRNA和蛋白过表达的主要原因之一。cyclinD1蛋白过表达与HCC的组织学分级相关。cyclinD1基因扩增及过表达可能在肝癌的演进和分化中起重要作用     

细胞周期调节正负控蛋白

很多疾病，特别是有炎症反应的病变，都伴有明显的细胞数量增多。增多的细胞不是血液中炎性细胞的浸润，而是受损组织固有细胞的增生。诱导增生的因子有生长因子、细胞因子、补体成分以及其它丝裂原。细胞增生是在一系列细胞周期调控蛋白的调控下，通过细胞周期进行DNA合成和有丝分裂。细胞周期调节蛋白在细胞周期中的表达和作用已成为当今研究的热门话题。本文将在简述细胞周期之后，就细胞周期调节蛋白的分子生物学研究进展进行综述。细胞周期是指细胞从一次分裂结束开始生长，到下一次分裂终了所经历的过程。依次分为q、S（DNA合成期…     

p27与肿瘤的研究进展

肿瘤的发生、发展和恶变与细胞周期失控密切相关。细胞周期的顺利进行和完成依赖于一系列正负调节因子的相互作用 ,主要有细胞周期素 (cyclins)、细胞周期素依赖激酶(cyclin -dependentkinases,CDKs)和细胞周期素依赖激酶抑制蛋白 (cyclin -dependentkinaseinhibitors ,CDKIs)。CDKIs是近几年来分离得到的一类重要的细胞周期调控蛋白 ,参与细胞G1期进入S期的负调控 ,可防止细胞过度增殖和恶变。p2 7是新近发现的CDKIs家族成员之一。1 p2 7基因及其蛋白1994年 ,Polyak等[1] 在转化生长因子 - β(TGF - β)和经细胞接触处理的生长抑…     

细胞周期蛋白E在哮喘大鼠肺组织中的表达及其与气道重塑的关系

目的:通过测定哮喘大鼠肺组织中细胞周期蛋白E(cyclin E)的表达,研究cyclin E在哮喘气道重塑中的作用。方法:20只Wistar大鼠随机分为哮喘组和对照组,每组10只。用鸡卵清白蛋白(OVA)溶液致敏及激发复制哮喘模型。HE染色观察气道炎症;图像分析测量气道管壁厚度;流式细胞仪测定外周血单个核细胞细胞周期时相分布;免疫组化法检测cyclin E的表达情况;实时定量(real-time)RT-PCR测定肺组织中cyclin E mRNA水平表达;Western blotting法检测肺组织中cyclin E蛋白的表达。结果:哮喘组大鼠支气管管壁厚度较对照组增加(P0.01);哮喘组外周血单个核细胞S期、S+G2/M期百分率均较对照组增加,而G0/G1期百分率较对照组降低(均P0.01);哮喘组肺组织中cyclin E mRNA和蛋白水平的相对表达量较对照组高(均P0.01);肺组织中cyc-lin E蛋白的相对表达量与支气管管壁厚度呈正相关(P0.01)。结论:Cyclin E在哮喘大鼠肺组织中表达增加,其表达的上调可使细胞周期的G1期缩短,进而可能通过促进细胞的分裂增殖而参与哮喘气道重塑的发生发展。     

D类细胞周期素在细胞周期中的作用

细胞周期进程由周期性表达的细胞周期素和细胞周期素依赖性激酶推动完成。 Cyclin D在 G1 期中期开始表达 ,是最早合成的细胞周期素 ,它与 Cdk4或 Cdk6形成的活性复合物 ,不仅可促进 p Rb的磷酸化 ,也可隔离P2 7对 cyclin E- Cdk2活性的抑制 ,使细胞顺利越过 G1 期进入 S期。除此之外 ,cyclin D过度表达还可抑制细胞增殖 ,在细胞分化和衰老过程中发挥重要作用     

CIP-KIP细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子家族

细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子(CKI)是细胞周期调控网络的主要成员之一,在周期调控中具有重要的地位,CIP-KIP是CKI两个家族之一,与细胞生长分化和肿瘤发生方面有极其重要的关系。本文对CIP-KIP家族的细胞周期调控、基因敲除以及促CDK/CychnD装配功能的最新进展进行综述。     

Chk2与细胞周期调控

细胞周期检测点激酶2(Chk2)是近来新发现的一个细胞周期调控蛋白.在发生DNA损伤或复制阻滞后,细胞通过不同途径激活Chk2,进而作用于下游不同的靶蛋白,最终激活G1、S和(或)G2/M期检测点机制,使细胞周期进程发生阻滞,同时激活修复相关基因的转录,促进细胞对损伤进行修复.Chk2基因突变在肿瘤发病中具有一定意义,但其发生率较低.肿瘤细胞可通过激活Chk2来加强损伤修复,导致耐药表型产生.