NS-398和顺铂联合作用对人肺腺癌增殖的影响及其机制初步探讨

背景与目的　近年的研究结果显示COX 2抑制剂具有抑制肿瘤生长、增强化疗药物疗效的作 用。NS 398是一种选择性COX 2抑制剂,可抑制肺癌细胞的增殖并增强化疗药物的疗效。但NS 398与顺 铂联合作用对肺腺癌细胞增殖的影响及其作用机制目前尚不清楚。本研究旨在明确NS 398对顺铂肺腺癌 细胞增殖抑制作用的影响,探讨NS 398与顺铂的联合作用对细胞凋亡以及细胞周期的影响。方法　采用 MTT比色法检测NS 398和顺铂联合作用对肺腺癌细胞增殖的影响,吖啶橙和溴化乙啶荧光染色法观察肺 腺癌细胞凋亡情况,流式细胞仪PI染色法分析两药联合处理的肺腺癌细胞凋亡率和细胞周期的改变。结果 　联合NS 398后SPC A 1细胞顺铂IC50降低百分率为43.34%～69.61%,A549细胞为48.25%～62.44%, 两药联合为轻度协同～协同作用。NS 398与顺铂联合组作用24和48小时诱导肺腺癌细胞的凋亡率显著增 高,联合组48小时和72小时的S期细胞比例亦明显增高。NS 398和顺铂联合作用诱导的肺腺癌细胞凋亡 率与S期细胞比例呈正相关(r=0.882,P=0.01)。结论　NS 398可以增强顺铂对肺腺癌细胞增殖的抑制作 用,两种药物具有协同作用。NS 398与顺铂的协同作用可能与凋亡机制有关。     

地塞米松对顺铂诱导中国人肺腺癌原代细胞凋亡的影响

背景与目的糖皮质激素如地塞米松能诱导淋巴细胞的凋亡并能防治因化疗引发的恶心及呕吐。然而,最近的研究资料显示糖皮质激素能引发欧洲人肺癌治疗耐药。中国人肺腺癌化疗时地塞米松对顺铂抑制肺腺癌原代细胞增殖效应的影响,目前尚不清楚。方法分离10例经病理学确诊为中国人源肺腺癌的原代细胞,经不同浓度的顺铂+/-地塞米松处理,采用四氮唑蓝比色法(MTT)检测肺腺癌原代细胞的增殖状况,并应用流式细胞仪检测顺铂联合地塞米松处理后的人肺腺癌细胞株A549的细胞凋亡率。结果在10例肺腺癌原代细胞中,地塞米松均可降低顺铂抑制肺腺癌原代细胞增殖的效应。同样,人肺腺癌细胞株A549,经顺铂联合地塞米松培养2周和3周后,地塞米松能降低癌细胞因顺铂诱导的细胞死亡率和凋亡率,提示地塞米松对顺铂诱导的细胞凋亡有抑制效应。结论地塞米松可以降低顺铂诱导肺腺癌细胞凋亡的作用,建议在肺腺癌化疗时谨慎使用地塞米松。     

p73基因对人肺腺癌细胞H1299化疗敏感性的影响

背景与目的:实验证明野生型p53基因能增强大多数非小细胞肺癌的化疗敏感性。p53基因的同源体p73与其在结构和功能上都具有高度的相似性。本研究拟探讨p73基因对人肺腺癌细胞株H1299化疗敏感性的影响。方法:通过脂质体介导将p73α基因导入人肺腺癌细胞株H1299,G418筛选获得稳定表达P73α的阳性细胞克隆。Westernblot检测转染细胞中P73α蛋白的表达;MTT法检测细胞存活率,观察转染细胞对阿霉素、顺铂的敏感性变化;采用流式细胞仪和TUNEL法检测.p73646化疗药诱导前后转染细胞凋亡的变化;克隆形成实验观察细胞生物学性状的变化。结果:转染p73α基因的H1299细胞可以稳定高表达P73α蛋白。MTT实验提示顺铂和阿霉素的IC50值分别减少了86.2%和99.2%,转染细胞在原本没有明显抑制和杀伤作用的药物浓度(1.25μmol/L的顺铂或0.05μmol/L的阿霉素)作用下生长明显受到抑制。流式细胞术显示p73α基因转染后顺铂诱导的细胞凋亡率从10.1%升高到38.4%(P<0.01),阿霉素诱导的细胞凋亡率从12.1%升高到49.3%(P<0.01)。克隆形成实验显示p73α基因转染能明显降低化疗后H1299细胞的克隆形成数(P<0.01),对顺铂和阿霉素的化疗增效倍数分别为1.8和2.6倍。结论:转染p73基因可以提高H1299细胞对阿霉素、顺铂等化疗药的敏感性。该作用可     

rhTRAIL对耐顺铂人肺腺癌细胞凋亡的影响

背景与目的TRAIL和TNF、Fas一样均属TNF蛋白超家族成员。研究表明,TNFα可用于克服某些肿瘤细胞的化疗耐药性,而一些化疗药物可上调死亡受体DR的表达,从而促进TRAIL诱导的细胞凋亡。本研究旨在探讨重组人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体蛋白rhTRAIL对耐顺铂人肺腺癌细胞凋亡的影响。方法常规体外培养耐顺铂人肺腺癌细胞株A549/DDP,应用MTT比色法、DPA法、流式细胞术和激酶法,检测rhTRAIL对耐顺铂人肺腺癌细胞株A549/DDP细胞增殖的抑制活性及其诱导细胞凋亡的效应。结果单用rhTRAIL时,低剂量rhTRAIL(6.25、12.5、25.0μg/L)对A549/DDP细胞的生长抑制率和各项凋亡指数(细胞凋亡率、DNA片段化比率和Caspase3活性)均无明显影响,P>0.05,但当rhTRAIL浓度在50μg/L时,细胞生长抑制率、细胞凋亡指数、DNA片段化比率和Caspase3活性均明显增高,各达68.6%、(27.13±0.66)%、(37.4±2.0)%和0.117±0.011(P<0.05)。当3mg/LDDP和rhTRAIL联用时,12.5μg/L的rhTRAIL即可使A549/DDP细胞生长抑制率、细胞凋亡指数、DNA片段化比率和Caspase3活性明显增高,各达30.4%、(19.39±0.54)%、(17.3±4.1)%和0.138±0.009(P<0.05)。结论单用较高剂量的rhTRAIL可以诱导耐顺铂人肺腺癌细胞A549/DDP细胞凋亡。低剂量顺铂可以增强rhTRAIL诱导A549/DDP细胞凋亡的效应。rhTRAIL可望成为耐药性肺癌治疗的一种重要的生物制剂。     

国产吉西他滨联合顺铂治疗晚期肺鳞癌及肺腺癌疗效分析

目的观察国产吉西他滨（泽菲）联合顺铂对晚期肺鳞癌与肺腺癌治疗疗效差别,为临床上晚期肺癌的化疗药物筛选提供依据。方法肺鳞癌组36例与肺腺癌组34例分别接受吉西他滨（1000 mg/m2）加顺铂（75 mg/m2）化疗,每21 d为1周期,每2个周期评价疗效。结果鳞癌36例和腺癌组34例均能进行临床评价。鳞癌组中部分缓解（PR）14例（38.9%）,稳定（SD）16例（44.4%）,进展（PD）6例（16.7%）,有效率（RR）为38.9%,疾病控制率（DCR）为83.3%,中位肿瘤进展时间（TTP）为5.7个月,中位生存期为12个月,1年生存率为47.2%（17/36））。腺癌组中PR 11例（32.4%）,SD 18例（52.9%）,PD 5例（14.7%）,RR 32.4%,DCR 85.3%,中位TTP为5.3个月,中位生存期为9个月,1年生存率为32.4%（11/34）。结论吉西他滨对肺鳞癌与肺腺癌的疾病控制率相近,但对鳞癌表现出比腺癌更高的生存时间与生存率。     

非小细胞肺癌体外化疗敏感试验影响因素的研究

目的：研究非小细胞肺癌对化疗药物原发敏感情况及药敏试验相关影响因素。方法：采用MTT比色法测定31例非小细胞肺癌标本对9种化疗药物的敏感性，每种药物设3个浓度等级，根据每种药物的抑制率进行分析。结果：31例肺癌标本对9种化疗药物的敏感程度依次为：异长春花硷83．87%、长春新碱77．42%、丝裂霉索74．19％、阿霉素69．72%、卡铂69．72％、顺铂61．29％、足叶乙甙58．06%、氨甲喋呤22．58%、5-氟脲嘧啶19．35％；足叶乙甙和阿霉素对肺鳞癌抑制率明显高于肺腺癌，足叶乙甙和顺铂对低分化肺癌抑制率明显高于中高分化肺癌。结论：体外药敏试验受到多因素影响，药敏结果能够较好指导临床化疗。     

男性肺腺癌与肺鳞癌的临床特征分析

目的 :探讨目前男性肺腺癌与肺鳞癌患者的部分临床特点。方法 :回顾性分析 12 8例男性肺腺癌与肺鳞癌患者的临床资料。结果 :>60岁组腺癌为 3 5 0 % ( 2 1/60 ) ,鳞癌为48 5 % ( 3 3 /68)。肺腺癌与肺鳞癌发病均集中于产业工人、农民及文职人员。腺癌以Ⅳ期最多 5 6 7% ( 3 4/60 ) ,鳞癌以Ⅲ期最多 5 8 9% ( 4 0 /68) ;腺癌发生转移占 65 0 % ( 3 9/60 ) ,鳞癌发生转移占 3 0 9% ( 2 1/68)。结论 :男性肺癌的发病仍体现出腺癌比鳞癌患者年龄轻、分期晚及转移早的特点 ,但腺癌和鳞癌患者在职业构成比例上差异无统计学意义 ,在确诊时两者的可手术治疗率均不高     

1,25（OH）2D3联合顺铂对原代肺腺癌细胞周期及调控因子的影响

目的:探讨1,25（OH）2D3联合顺铂对原代肺腺癌细胞周期及周期相关调控因子的影响。方法:体外培养手术切除的肺腺癌组织细胞，经药物作用后CCK-8法测定细胞抑制率，流式细胞仪检测细胞周期，RT-PCR检测细胞周期调控因子Cyclin D1、CDK4转录水平。结果:不同浓度的1,25(OH)2D3、顺铂单药作用于肺腺癌细胞均有明显的抑制作用,两药联合表现为协同作用,与单药相比，差异有统计学意义(P＜0.05)。细胞周期分析显示，经药物联合处理后的肺癌细胞，G0/G1期细胞数增多，Ｓ期和G2/M期细胞减少。细胞周期调控因子Cyclin D1、CDK4转录水平均有所降低，差异有统计学意义(P＜0.05)。结论:1,25（OH）2D3联合铂类抗癌药物抑制原代肺腺癌细胞的增殖能力、诱导细胞周期阻滞，与下调Cyclin D1和CDK4 的表达有关。     

NS-398协同顺铂作用人肺腺癌差异蛋白质组分析

背景与目的 实验证明一种高度选择性的COX-2抑制剂--NS-398能增强传统化疗药物顺铂对肺腺癌细胞的生长抑制作用,但其机制尚不清楚.本研究的目的是探讨NS-398与顺铂协同抑制肺腺癌细胞增殖的作用机制.方法 采用二维聚丙烯酰胺凝胶电泳分离NS-398和顺铂作用下肺腺癌细胞的蛋白质,质谱分析法(MALDI-TOF-MS)和数据库查询鉴定其中部分差异蛋白质.结果 NS-398与顺铂联合组表达量下调的差异蛋白点22个,表达量上调蛋白点2个.选择其中17个表达量下调蛋白点、2个表达量上调蛋白点进行质谱鉴定,初步鉴定了NS-398与顺铂联合组6个表达下调的差异蛋白质,其中部分为细胞骨架蛋白,部分为与细胞增殖和凋亡相关的蛋白,部分为细胞代谢途径相关酶.结论 热休克蛋白90和磷酸丙糖异构酶可能参与了NS-398和顺铂对肺腺癌细胞增殖的协同抑制作用.     

rAd-p53联合顺铂体外抑制肺腺癌细胞增殖的最佳作用时序研究

目的:研究rAd-p53(商品名:今又生)与顺铂以不同序贯方式联合应用对肺腺癌细胞的增殖抑制作用,明确rAd-p53与顺铂联合的协同效应关系和最佳作用时序.方法:采用MTT法测定不同感染强度rAd-p53联合顺铂以及rAd-p53不同时序联合顺铂对人肺腺癌细胞A549的生长抑制率;采用流式细胞术检测细胞周期.结果:rAd-p53具有明显的肿瘤抑制作用,随着感染强度增加抑制作用增强;在较低感染强度下联合顺铂,即有显著的相加或协同作用(Q>0.85或Q>1.15),与单药组比较差异显著(P＜0.05);两药不同序贯方式联合抑制作用均大于各时间点单药作用(P＜0.01),尤以rAd-053后48h加入顺铂Q值最高(Q=1.38),该时间细胞被更多的阻滞在G0/G1期,而S期细胞比例减少.结论:rAd-p53与顺铂联合对肺腺癌细胞具有显著的协同抑制作用,并随剂量增加协同作用增强;联合应用时顺铂在rAd-p53作用48h时加入可最大发挥两者的协同抑制作用,其机制与细胞周期阻滞有关.     

Combination of nigericin with cisplatin enhances the inhibitory effect of cisplatin on epithelial ovarian cancer metastasis by inhibiting slug expression via the Wnt/β-catenin signalling pathway

Epithelial ovarian cancer (EOC) is the most lethal cancer among female genital tumours. Standard therapies, including postoperative chemotherapy, exhibit high proportions of recurrence and resistance. Novel therapeutic strategies are combined with chemotherapy. Emerging studies have demonstrated that nigericin, an H⁺, K⁺ and Pb²⁺ ionophore, exhibits promising anticancer activity in various types of malignancy, such as colorectal and epithelial ovarian cancer. Our previous study suggested that nigericin could regulate EOC cell proliferation, migration and invasion, and may be a novel chemotherapy candidate for EOC. However, to the best of our knowledge, the effects of combined therapy with cisplatin, and the associated underlying mechanisms, are not yet fully understood. The present study aimed to clarify the effects of combined chemical therapy with nigericin and cisplatin on EOC cells and to reveal its mechanism. Wound healing, Transwell, cell viability and colony formation assays were used to measure the migration, invasion and proliferation of EOC cells. Western blotting was used to detect protein expression. A slug overexpression lentivirus was used to create a slug overexpression model in SK-OV-3 cells. Small interfering RNA was used to knock down slug expression. Nigericin combined with cisplatin enhanced the inhibitory effects of cisplatin on the migration and colony formation of EOC cells. Nigericin also enhanced the inhibitory effects of cisplatin on the expression levels of MMP7, as well as the inhibitory effects of cisplatin on the expression levels of β-catenin and GSK-3β, indicating that nigericin and cisplatin regulated in the Wnt/β-catenin signalling pathway. When slug was knocked down, the effect of nigericin was weakened. Overexpression of slug could repress the inhibitory effect of nigericin on the Wnt/β-catenin signalling pathway. Furthermore, nigericin inhibited slug expression by enhancing its modification through small ubiquitin-like modifiers (SUMOs; referred to as SUMOylation). Overall, the present results demonstrated that nigericin combined with cisplatin might serve as a novel therapeutic strategy in patients with metastatic EOC because the combined therapy had higher effectiveness than single drug use. The underlying mechanism of combined therapy maybe the enhanced inhibitory effect of slug through its nigericin-induced SUMOylation.     

苹果粗多糖抑制胃腺癌SGC7901细胞增殖的研究*

目的:经多年实验研究，多糖具有体外及体内抗肿瘤作用，而体外抗肿瘤实验是抗肿瘤药物进行初步筛选的主要方法。我国苹果资源丰富，苹果粗多糖具有一定开发价值，从新鲜苹果中提取苹果粗多糖，并对其进行体外抗胃腺癌SGC 7901肿瘤细胞增殖的研究。方法:采用醇沉法从新鲜苹果中提取粗多糖。新鲜苹果榨汁，取果汁经透析法除色素、Sevage 法除蛋白、乙醇沉淀、冰冻干燥后得苹果粗多糖。采用MTT 法观察苹果粗多糖不同作用时间、不同剂量对胃腺癌SGC 7901肿瘤细胞增殖的抑制作用；采用集落形成实验法观察苹果粗多糖对胃腺癌SGC 7901肿瘤细胞克隆形成率的影响。结果:获取苹果粗多糖，多糖获取率为0.1% 。MTT 法显示，苹果粗多糖（0.5，0.1，0.02mg/mL）在48h 对体外胃腺癌SGC 7901肿瘤细胞均有不同程度抑制作用（P<0.05），其中中浓度组和高浓度组的肿瘤抑制率分别达到10.8% 和18.9% 。在24h 及72h 抑制作用不明显。集落形成实验法显示，随着多糖给药量增加（0.02、0.1、0.5mg/mL）胃腺癌SGC 7901肿瘤细胞集落形成率依次呈现97.10± 2.33、95.30± 3.62、93.6 ± 5.66的下降趋势。结论:苹果粗多糖对胃腺癌SGC 7901肿瘤细胞有较强的体外抗肿瘤作用，并呈现一定的量效关系。      

EXPERIMENTAL RESEARCH OF EFFECTIVENESS OF siRNA- Her-2/neu ON DRUG SENSITIVITY OF Her-2/neu-OVEREXPRESSING LUNG ADENOCARCINOMA CELL LINE

Lung cancer is a potentially systemic disease. Despite improvements in the detection and treatment of lung cancer in the past two decades, the overall 5-year survival remains <15%. Constitutive overexpression for Her-2/neu gene is a frequent event in a variety of human tumors, including non-small cell lung cancer (NSCLC), but not small cell lungcancer[1-5]. In recent years, many studies have explored the effects on chemosensitivity resulting from altered expression and activation of the Her…     

Amorphigenin联合顺铂对人肺腺癌A549/DDP细胞的协同抗肿瘤作用

背景与目的 Amorphigenin是从紫穗槐属植物的种子中分离提取的鱼藤酮类化合物,研究发现amorphigenin对多种肿瘤细胞具有增殖抑制作用。本研究拟探讨amorphigenin对人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP的抗肿瘤作用及其可能的分子机制。方法采用CCK-8法测定A549/DDP细胞的增殖;克隆形成实验测定A549/DDP细胞的克隆形成;流式细胞术检测细胞的凋亡率;Western blot技术检测caspase-3、PARP和LRP蛋白的表达。结果Amorphigenin可抑制A549/DDP细胞的增殖48 h[半数抑制浓度（half maximal inhibitory concentra-tion, IC50）]为（2.19±0.92）μmol/L、抑制克隆形成及诱导细胞凋亡。此外,Amorphigenin与顺铂联合可协同地抑制A549/DDP细胞生长和促进凋亡;降低耐药蛋白LRP蛋白的表达。结论 Amorphigenin可抑制A549/DDP细胞增殖和促进细胞凋亡;amorphigenin可能是通过抑制耐药蛋白LRP蛋白表达,进而与顺铂对A549/DDP细胞产生协同抑制作用。     

survivin反义寡核苷酸提高人肺腺癌A549耐药细胞系对顺铂敏感性的研究

目的探讨存活素反义寡核苷酸(ASODN)体外转染对耐顺铂人肺腺癌细胞A549/ CDDP凋亡及其对顺铂(CDDP)敏感性的影响。方法常规体外培养A549/CDDP细胞,以脂质体包裹的survivin ASODN转染细胞,采用RT-PCR法和免疫细胞化学法检测survivin mRNA及蛋白表达。通过形态学观察、DNA琼脂糖凝胶电泳、caspase-3酶活性及细胞凋亡率(AI)的测定,评价细胞凋亡程度。采用MTT法测定细胞存活率和生长抑制率,计算半效抑制浓度(IC_(50))及耐药倍数(RI)。结果转染组survivin mRNA及蛋白表达下调明显,分别达41．56%和0．864±0．045,与其他各组比较,差异均有统计学意义(P＜0．05)。细胞形态学显示有细胞凋亡改变,表现为细胞核固缩、核边集和核碎裂等;DNA凝胶电泳可见DNA梯形条带;ASODN转染组细胞凋亡率和caspase-3相对活性分别增高至34．03%和1．1298±0．2502,而ASODN+CDDP组增高更为明显,分别达65．85%和1．6805±0．2758,与其他各组比较,差异均有统计学意义(P＜0．05)。ASODN转染组和ASODN+CDDP组生长抑制率分别增高至59．3%和83．7%(P＜0．05);而ASODN转染组细胞对CDDP的IC_(50)由对照组的(225．03±10．59)μmol/L减低至(158．84±4．26)μmol/L,RI由11．9减至8．4。结论survivin ASODN通过下调survivin的表达,自身诱导了细胞凋亡,并逆转细胞对CDDP诱导的细胞凋亡的耐受,降低凋亡阈值,从而增强了人肺腺癌细胞对CDDP的敏感性。     

低氧环境下肺腺癌A549细胞对顺铂化疗抵抗的实验研究

目的:探讨低氧对肺癌A549细胞顺铂化疗抵抗作用,并分析可能机制.方法:将A549细胞分为常氧、常氧顺铂、低氧、低氧顺铂组.在常氧顺铂组和低氧顺铂组,加入不同浓度顺铂(10、40、80、100、200 μmol/L)后,采用CCK8法测定半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)和抑制率.流式细胞仪检测各组细胞周期和凋亡率.RT-PCR和Western Blot检测各组缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及切除修复交叉互补基因1(excision repair cross complementation group 1,ERCC1)的转录和蛋白表达变化.结果:常氧顺铂组IC50为25.82nmol/L,低氧顺铂组为39.98 nmol/L,常氧顺铂组和低氧顺铂组之间各个浓度顺铂抑制率有统计学差异(P＜0.05).低氧顺铂组的细胞凋亡和G2/M期细胞阻滞较常氧顺铂组减少.RT-PCR和Western Blot显示,低氧组HIF-1α、VEGF、ERCC1转录和表达水平较常氧组明显上升(P＜0.01),顺铂作用后表达均下降,在常氧顺铂组和低氧顺铂组之间有显著差异性(P＜0.01).相关分析显示HIF-1α、VEGF、ERCC1之间有显著正相关关系(P＜0.01).结论:低氧诱导A549细胞对顺铂化疗抵抗,与低氧激活HIF-1α、VEGF及ERCC1高表达有关.     

局部麻醉药对抗癌药物的体内外增效作用的研究

用体外培养的Eca-109细胞观察了阿霉素(ADM)和平阳霉素(PYM)单用或与局麻药普鲁卡因和利多卡因合用时的细胞毒作用,结果表明:局麻药在本身无细胞毒性浓度下与ADM或PYM联合应用时,可显著加强ADM和PYM的细胞毒作用,且随局麻药剂量增加增效作用加强,但各联合用药组之间的增效程度没有差异。普鲁卡因和利多卡因在本身无体内抑瘤活性的剂量下与顺铂合用,能显著地增强顺铂对实体型S_(180)肉瘤的抑瘤作用,并能延长荷S_(180)腹水瘤小鼠的生存期。     

培美曲塞二钠联合洛铂或顺铂在晚期肺腺癌中的疗效观察

目的：比较洛铂和顺铂联合培美曲塞二钠治疗晚期肺腺癌的近期疗效及不良反应。方法65例晚期肺腺癌患者,随机分为2组,A组为顺铂联合培美曲塞二钠,共32例;B组为洛铂联合培美曲塞二钠,共33例。 A组常规水化利尿处理,培美曲塞二钠500 mg／m2,滴注10 min,培美曲塞给药结束30 min后再给予顺铂滴注,顺铂75 mg／m2滴注超过2 h,21天为1个周期。 B组培美曲塞二钠500 mg／m2,滴注10 min,后静脉滴注洛铂30 mg／m2,21天为1个周期。2组常规预服地塞米松（或相似药物）并接受叶酸和维生素B的补充治疗。每周评价一次不良反应,2个周期后评价近期疗效。结果2组治疗近期客观有效率比较,差异无统计学意义（χ2＝0．373,P＞0．05）;A、B组骨髓抑制导致白细胞减少率分别为87．50％和81．82％,且白细胞减少均以Ⅰ～Ⅱ度为主。血小板减少A组发生率为71．88％,而B组为84．85％,也是均以Ⅰ～Ⅱ度为主。恶心呕吐发生率A组为90．63％,B组为72．73％,通过比较,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论洛铂联合培美曲塞二钠疗效较好,不良反应较小且易控。     

p73基因过量表达对人肺癌细胞A549凋亡及其化疗敏感性的作用

背景与目的：部分非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）表达野生型p53基因（wild-type p53,wt-p53）,因此在基因治疗中克服这些NSCLC对wt-p53的抵抗机制就非常重要。P53基因家族的新成员p73是p53的同源体,本研究旨在探讨对wt-p53基因治疗抵抗的人肺腺癌细胞A549在外源p73基因转染或联用化疗药后凋亡程度和对化疗药物敏感性的变化。方法：将真核表达重组质粒pcDNA3-HA-p53或pcDNA3-HA-p73α转染入A549细胞,G418筛选,Western blot检测P53或P73α的表达。MTT法分析转染细胞对顺铂和阿霉素的敏感性,用流式细胞术、TUNEL法和DNA片段法分析化疗药作用下转染细胞的凋亡变化,克隆形成实验观察细胞生物学性状的改变。结果：转染p53或p73α基因的A549细胞可以稳定高表达p53或p73α蛋白。转染p73α的A549细胞在原本没有明显抑制和杀伤作用的药物浓度（6．25μmol／L的顺铂或0．25μmol／L的阿霉素）作用下生长明显受到抑制。顺铂的IC50值从22．65μmol／L降至3．75μmol／L,阿霉素的IC50值从4．20μmol／L降至0．06μmol／L。p73能使A549细胞受顺铂和阿霉素诱导的细胞凋亡增加。而p53没有明显作用。流式细胞术显示p73α基因转染后,顺铂诱导的细胞凋亡率从10．6％升高到36．8％（P〈0．01）,阿霉素诱导的细胞凋亡率从13．0％升高到41．1％（P〈0．01）。克隆形成实验显示．p73α基因转染能明显降低顺铂和阿霉素作用后A549细胞的克隆形成数（P〈0．01）。对顺铂和阿霉素的化疗增效倍数分别为2．0和2．4倍。结论：外源性p73基因的导入增加了wt-p53型A549细胞对顺铂和阿霉素等化疗药的敏感性。该作用可能与p73基因能不依赖于p53基因诱导细胞凋亡有关。p73基因可用于治疗wt-p53不能发挥作用的恶性肿瘤。