补肾活血泄浊汤对体外培养肾小球上皮细胞增殖影响

目的:探讨脂多糖(LPS)、硫酸鱼精蛋白、表皮生长因子(EGF)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及补肾活血泄浊汤对体外培养大鼠肾小球上皮细胞生长的影响。方法:应用LPS、硫酸鱼精蛋白、EGF及TNF-α作为刺激因子,观察其对肾小球上皮细胞(GEC)增殖的影响;并采用血清药理学方法,提取动物的含药血清作用于上述受刺激的上皮细胞,观察补肾活血泄浊汤对GEC增殖的影响。结果:LPS、EGF+TNF-α和硫酸鱼精蛋白均可抑制GEC掺入[³H]-TdR,并呈一定的量效和时效关系;而补肾活血泄浊汤可使GEC掺入[³H]-TdR增加。结论:GEC是补肾活血泄浊汤发挥治疗作用的重要靶细胞,这可能是该方防治以蛋白尿为主要临床表现的肾小球疾病的机制之一。     

转化生长因子-β1对肾小球上皮细胞金属蛋白酶及其抑制因子表达的影响

目的 :探讨大鼠肾小球上皮细胞MMP - 2、- 9/TIMP - 1、- 2的表达情况 ,以及TGF - β1体外对GEC表达MMP/TIMP的影响。方法 :(1)明胶酶谱法测定体外培养大鼠的肾小球上皮细胞株的MMP - 2、MMP - 9的活性。 (2 )Northernblot/RT -PCR方法观察TGF - β1影响上皮细胞表达TIMP - 1、TIMP - 2、MMP - 2及MMP - 9的时间效应和浓度效应。结果 :(1)明胶酶谱分析显示 :①大鼠肾小球上皮细胞能分泌MMP - 2及MMP - 9等明胶酶 ,并受TGF - β1的调节。TGF - β1对GECMMP - 2、MMP - 9酶活性的调节具有量效、时效关系。②TGF…     

高浓度rIL-2对休止PBL IL-2R_α口的诱导作用

本文利用~(125)I标记的抗IL-2R_α单克隆抗体,探讨了rIL-2对IL-2R_α的调节作用。结果显示,rIL-2除可增加已活化的T淋巴细胞IL-2R_α表达外,高浓度情况下可直接诱导休止的PBL IL-2_α表达,表达高峰在第5天以后,B_(maxc)为7200位点/每细胞。高浓度IL-2诱导的PBL ~3H-TdR和~3H-UR掺入水平与IL-2_α表达量呈正相关,表明高浓度rIL-2通过诱导IL-2_α表达而引起休止细胞的增殖。     

rhIL-1受体拮抗剂对大鼠肾小球系膜细胞增殖和合成细胞外基质-胶原的影响

采用肾小球系膜细胞(GMC)培养、~3H-TdR掺入及羟脯氨酸测定的方法,首次观察了重组人白细胞介素-1受体拮抗剂(rhIL-1Ra)对白细胞介素1β(IL-1β)诱导的大鼠GMC增殖和合成细胞外基质-胶原的影响。结果表明:rhIL-1Ra能拮抗hIL-1β诱导的GMC的增殖和胶原的合成;其拮抗增殖的剂量是rhIL-1β的2～50倍,拮抗胶原合成者为rhIL-1β的25～50倍。提示:rhIL-1Ra有望用于治疗由IL-1参与、介导的以系膜细胞增殖和系膜基质扩大为主要病理改变的肾小球肾炎。     

IL—10抑制肾病患儿PBMC培养上清对肾小球上皮细胞粘附的影响

探讨IL-10抑制肾病患儿外周血单个核细胞(PBMC)培养上清液对大鼠肾小球上皮细胞(GEC)粘附的影响.应用同位素标记的方法检测GEC粘附率.结果显示,未治疗组初发肾病患儿PBMC上清液显著降低GEC粘附率,与激素治疗组及正常对照组比较,差异有非常显著性意义(P值均＜0.01);人重组IL-10明显减弱肾病极期患儿PBMC上清液对GEC粘附的抑制性影响,GEC粘附率显著升高,并呈剂量依赖效应.表明肾病患儿PBMC产物抑制GEC对胶原基质的粘附,而IL-10能负向调节此抑制过程.     

IL-10抑制肾病患儿PBMC培养清对肾小球上皮细胞粘附的影响

探讨IL-10抑制肾病患儿外周血单个核细胞(PBMC)培养上清液对大鼠肾小球上皮细胞(GEC)粘附的影响.应用同位素标记的方法检测GEC粘附率.结果显示,未治疗组初发肾病患儿PBMC上清液显著降低GEC粘附率,与激素治疗组及正常对照组比较,差异有非常显著性意义(P值均＜0.01);人重组IL-10明显减弱肾病极期患儿PBMC上清液对GEC粘附的抑制性影响,GEC粘附率显著升高,并呈剂量依赖效应.表明肾病患儿PBMC产物抑制GEC对胶原基质的粘附,而IL-10能负向调节此抑制过程.     

几种细胞因子对成年小鼠CD4^—CD8^—胸腺细胞的增殖作用

本实验观察了多种细胞因子对成年小鼠CD4~-CD8~-(Double negative,DN)胸腺细胞增殖和分化的影响。结果表明,IL-7能诱导DN细胞增殖;IL-2只在高浓度下轻度支持其增殖。IL-1α、IL-4、IL-6、SCF(干细胞因子)、TGF(转化生长因子)-β_1和TGF-β_2单独作用不能支持DN细胞生长。IL_2、IL—6和SCF与IL—7联合应用不同程度地协同促进DN细胞增殖。TGF—β_1和TGF—β_2则抑制IL—7诱导的DN细胞增殖。PMA活化的DN细胞能对IL—2、IL—4或IL—7应答进行增殖。     

肝素及PDGF对肾小球上皮细胞金属蛋白酶及其抑制因子表达的影响

目的 :探讨大鼠肾小球上皮细胞MMP - 2、- 9/TIMP - 1、- 2的表达情况 ,以及肝素、PDGF体外对GEC表达MMP/TIMP的影响。方法 :(1)明胶酶谱法观察肝素对上皮细胞分泌的MMP - 2、MMP - 9酶活性的影响。 (2 )应用RT -PCR半定量法观察肝素对上皮细胞表达TIMP - 1、TIMP - 2的影响。结果 :(1)明胶酶谱分析显示 :①大鼠肾小球上皮细胞能分泌MMP - 2及MMP- 9等明胶酶 ,肝素能双向调节GECMMP - 2酶活性 ,当肝素浓度为 3mg/L时 ,MMP - 2酶活性降低 ,30mg/L时MMP - 2酶活性降低更加明显 (P <0 0 1) ;但当肝素浓度为 30 0mg/L…     

NF-κB介导脂氧素A4拮抗TNF-α所致的系膜细胞白介素的合成

为研究脂氧素A4(LXA4)拮抗肿瘤坏死因子α(TNF-α)对肾小球系膜细胞的白介素(IL)-1β(IL-1β)、IL-6合成的作用。对体外培养大鼠肾小球系膜细胞,用不同浓度的LXA4预刺激,再加入TNF-α共同孵育;或单用TNF-α刺激肾小球系膜细胞。在孵育后用ELISA法检测培养上清中的IL-1β、IL-6蛋白表达量;用RT-PCR法检测IL-1β、IL-6的mRNA表达量。应用凝胶电泳迁移率试验(EMSA)测定核因子-κB(NF-κB)的DNA结合活性。结果发现,LXA4呈剂量依赖性地抑制TNF-α诱导的肾小球系膜细胞IL-1β和IL-6蛋白的合成与mRNA表达,抑制NF-κB的DNA结合活性。说明LXA4通过下调NF-κB的DNA结合活性,拮抗TNF-α对肾小球系膜细胞的IL-1β、IL-6合成的促进作用。     

MCP—1对培养的人肾小球内皮细胞表达ICAM—1的影响

目的研究单核细胞趋化蛋白 - 1(MCP- 1)对培养的人肾小球内皮细胞 (HU GEC)表达细胞间粘附分子 - 1(ICAM- 1)的影响。方法采用细胞 EL ISA法。结果 1培养的 HU GEC表面有少量 ICAM- 1表达 ,在 10 ng/ m L MCP- 1刺激后 ICAM- 1表达量增多 (P<0 .0 5 ) ,6 h即有 ICAM- 1表达增强 ,12 h达高峰 ,不同浓度的 MCP- 1(10、2 0、40 ng/ m L)刺激HU GEC18h后 ,ICAM- 1表达与对照组比较差异显著 (P<0 .0 1) ;2加入抗 MCP- 1抗体后 ,ICAM- 1表达量下降 ,与对照组比较无差异 (P>0 .0 5 )。结论 MCP- 1可刺激 HU GEC表达 ICAM- 1增加。     

白细胞介素-35在Vogt-小柳原田综合征患者中的表达及其对CD4+CD25+CD127dim/-调节性T细胞的调控作用

目的观察白细胞介素(IL)-35在Vogt-小柳原田(VKH)综合征患者外周血中的表达及其对CD4~+CD25~+CD127~(dim/-)调节性T细胞(Treg)功能的影响。方法收集37例VKH综合征患者(活动期16例,静止期21例)和11例健康对照者(healthy control, HC),分离血浆和外周血单个核细胞,酶联免疫吸附试验检测血浆IL-35水平,流式细胞术检测CD4~+CD25~+CD127~(dim/-)Treg比例。分选CD4~+CD25~+CD127~(dim/-)Treg,检测Treg分泌IL-35的水平和Treg中p35、EBI3 mRNA的相对表达量。使用重组人IL-35刺激分选的Treg后与自体CD4+CD25-T细胞共培养,检测细胞增殖和分泌细胞因子的水平。结果活动期VKH综合征患者血浆IL-35水平低于静止期患者和HC(P0.000 1);活动期VKH综合征患者外周血CD4~+CD25~+CD127~(dim/-)Treg的比例(5.34±0.96%)也低于静止期患者和HC(P0.01)。活动期VKH综合征患者分选的CD4~+CD25~+CD127~(dim/-)Treg分泌IL-35的水平(P=0.003 6)以及Treg中p35和EBI3 mRNA的相对表达量(P0.000 1)均显著低于HC。重组人IL-35刺激不影响活动期VKH综合征患者CD4~+CD25~+CD127~(dim/-)Treg的增殖(P=0.323),但可增强Treg的免疫抑制功能,主要表现为共培养系统细胞增殖的下降(P=0.000 5),抑制性细胞因子IL-10和IL-35的分泌增加(P0.001),而促炎因子IFN-γ和TNF-α的水平降低(P0.05)。活动期VKH综合征患者接受糖皮质激素治疗后,血浆IL-35水平和外周血CD4~+CD25~+CD127~(dim/-)Treg比例均显著升高(P0.05)。结论 IL-35和Treg在VKH综合征患者中水平降低,IL-35可调控Treg的免疫抑制功能,参与VKH综合征的发病。     

1,25二羟维生素D3对人淋巴细胞免疫功能的调节作用

通过淋巴细胞增殖试验、混合淋巴细胞反应及分析淋巴细胞表面IL-2R 和TfR 表达等研究了1.25-(OH)_2D_3对人淋巴细胞的免疫调节作用。结果表明,1,25-(OH)_2D_3对PHA 诱导的淋巴细胞增殖有抑制作用,IC_(50)为19.1nmol/L 外源性IL-2可部分逆转这种作用;低浓度的1,25-(OH)_2D_3能显著增强MLR 诱导的细胞增殖;在由PHA 和MLR 诱导的淋巴细胞表面IL-2R 和TfR 表达中,对TfR 的表达呈抑制作用,对IL-2R 的表达无影响。     

IL-10抑制肾病患儿PBMC培养上清对肾小球上皮细胞粘附的影响

探讨IL 10抑制肾病患儿外周血单个核细胞 (PBMC )培养上清液对大鼠肾小球上皮细胞 (GEC )粘附的影响。应用同位素标记的方法检测GEC粘附率。结果显示 ,未治疗组初发肾病患儿PBMC上清液显著降低GEC粘附率 ,与激素治疗组及正常对照组比较 ,差异有非常显著性意义 (P值均 <0 0 1) ;人重组IL 10明显减弱肾病极期患儿PBMC上清液对GEC粘附的抑制性影响 ,GEC粘附率显著升高 ,并呈剂量依赖效应。表明肾病患儿PBMC产物抑制GEC对胶原基质的粘附 ,而IL 10能负向调节此抑制过程     

IL-2/IL-2R对单核来源树突状细胞的体外分化发育和功能的作用

目的 分别比较抗人CD40单抗和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)对单核来源树突状细胞(monocyte-derived dendritic cell,Mo-DC)体外诱导表达CD25(IL-2Rα)的作用,并进一步探讨了IL-2在Mo-DC分化成熟和功能介导中的生物学效应.方法 采用联合粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)和IL-4体外诱导Mo-DC的培养方法 ,分别加入CD40单抗和TNF-α诱导Mo-DC成熟;免疫荧光标记分析Mo-DC表型;ELISA法测定γ干扰素(interferon-r,IFN-γ)的分泌水平;3H-TdR掺入法分析Mo-DC对自体T细胞的促增殖效应.结果 (1)CD40信号能有效诱导成熟Mo-DC上调表达CD25(IL-2Rα),而TNF-α则无此作用;(2)Mo-DC在CD40激发后,加入不同剂量的IL-2继续培养可促进Mo-DC对IFN-γ的分泌,同时3H-TdR掺入法的结果也显示,在Mo-DC培养时加入IL-2可以增强Mo-DC对T细胞的促增殖作用.结论 CD40激发的Mo-DC上调表达CD25(IL-2Rα),外源性IL-2能促进Mo-DC分泌IFN-γ和介导T细胞的促增殖效应.     

Exendin-4通过拮抗钙超载改善Aβ_(31-35)诱导的HT22海马神经细胞per1基因异常表达

目的:探讨Exendin-4对Aβ_(31-35)所致的HT22神经细胞per1基因异常表达的影响及可能作用机制。方法:本研究采用海马神经细胞HT22作为实验对象。以1%血清饥饿1 h来诱导细胞同步化(CT0)。MTT实验检测细胞存活率;倒置显微镜下观察细胞形态变化;Real-time PCR检测各CT时间per1基因的表达变化;选择per1表达差异最显著的CT时间点,采用流式细胞术检测细胞内钙离子浓度的变化情况。结果:(1)Exendin-4可以明显提高Aβ_(31-35)所致的HT22细胞存活率的下降;(2)镜下观察可见,经Exendin-4预处理后部分改善了Aβ_(31-35)对细胞的损伤作用,细胞形态有所恢复;(3)Aβ_(31-35)使per1基因在CT16时各处理组的相对表达量明显不同;与对照组相比,Aβ_(31-35)使per1基因表达量明显升高;经Exendin-4预处理后,per1基因的表达得到一定程度的恢复,差异具有统计学意义;(4)在CT16时各处理组细胞荧光强度值明显不同,与对照组相比,Aβ_(31-35)使细胞荧光强度明显增强;经Exendin-4预处理后,细胞荧光强度值明显降低,差异具有统计学意义,此结果与加入尼莫地平的结果类似。加入尼莫地平预处理后,检测各个CT时间per1基因表达变化,与Exendin-4预处理组得到的结果类似。结论:Exendin-4通过拮抗钙超载改善Aβ_(31-35)诱导的HT22海马神经细胞per1基因的异常表达。     

NF-kB介导脂氧素A4拮抗TNF-α所致的系膜细胞白介素的合成

为研究脂氧素A4(LXA4)拈抗肿瘤坏步E因子α(TNF-α)对肾小球系膜细胞的白介素(IL）-β(IL-1β)、IL-6合成的作用。对体外培养大鼠肾小球系膜细胞，用不同浓度的LXA4预刺激，再加入TNF-α共同孵育；或单用TNF-α刺激肾小球系膜细胞。在孵育后用ELISA法检测培养上清中的IL-1β,IL-6蛋白表达量；用RT-PCR法检测IL-1β、IL-6的mRNA表达量。应用凝胶电泳迁移率试验（EMSA)测定核因子-kB(NF-KB)的DNA结合活性。结果发现，LXA4呈剂量依赖性地抑制TNF-α诱导的肾小球系膜细胞IL-1β和IL-6蛋白的合成与mRNA表达，抑制NF-kB的DNA结合活性。说明LXA4通过下调NF-kB的DNA结合活性，拮抗TNF-α对肾小球系膜细胞的IL-1β、IL-6合成的促进作用。     

1,25-二羟基维生素D_3——一种新的免疫调节激素

早年知道,1,25-二羟基维生素D_3〔1,25(OH)_2D_3〕参与钙磷骨骼代谢;近年又发现,1,25(OH)_2D_3具有更广泛的生物学作用.正常人单核细胞及恶性淋巴细胞均有1,25(OH)_2D_3受体;然而休止T、B细胞并无此受体,但被致分裂原活化或EB病毒感染后即可表达.本文报道,1,25(OH)_2D_3抑制PHA诱导的淋巴细胞增殖与IL_2生成.正常成人PBL、1%PHA及浓度递增的组胺(16~(-13)～10~(-8)M)在37℃共孵48小时,上清液中IL_2含量采用Smith等的生物测定法测定;淋巴细胞增殖以~3H-TdR     

LPS及IL-1ra对系膜细胞产生一氧化氮及增殖的影响

目的:观察脂多糖(LPS)对体外培养的系膜细胞(GMC)产生NO的影响及这一过程对GMC增殖的影响。方法:用培养的第一、二代SD大鼠肾小球系膜细胞进行实验,分别加入LPS或LPS加白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1ra),24h后用经典的Griess方法测定培养上清中亚硝酸盐含量,用[³H]-TdR掺入率测定GMC的增殖,狭缝和Northern杂交测定iNOSmRNA表达。结果:LPS刺激后,GMC出现iNOSmRNA的表达及亚硝酸盐增多[(0.64±0.25)nmmol/10⁴细胞vs(0.12±0.06)nmmol/10⁴细胞],GMC增殖(3735±1177.9vs1785±280.6);LPS加IL-1ra组,iNOSmRNA表达比LPS组减少40%,上清亚硝酸盐含量更高[(3.28±0.33)nmmol/10⁴细胞],GMC增殖被抑制(818±77.27)。结论:LPS诱导GMCiNOSmRNA表达及亚硝酸盐增多,并有GMC增殖。IL-1ra部分拮抗iNOSmRNA的表达,但亚硝酸盐产量更高,GMC增殖被抑制。     

IL-23通过PI3K/AKT途径诱导甲状腺上皮细胞凋亡

目的探讨白细胞介素23(IL-23)对人甲状腺上皮细胞增殖、凋亡的影响。方法用(10、50、100)ng/m L IL-23处理Nthy-ori 3-1甲状腺上皮细胞24 h后,用MTT法检测细胞增殖能力改变,藻红蛋白标记的膜联素Ⅴ/7-氨基放线菌素D(annexinⅤ-PE/7-AAD)双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡水平变化,Western blot法检测磷酸化的蛋白激酶B(p-AKT)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、Bcl-2、Bcl-x L、活化caspase-3蛋白的水平。结果与对照组相比,随着IL-23剂量增加,甲状腺上皮细胞的增殖能力逐渐下降;IL-23下调PI3K/AKT信号蛋白的磷酸化水平并促进甲状腺上皮细胞凋亡。结论 IL-23通过调节PI3K/AKT途径促进甲状腺上皮细胞凋亡。     

白三烯D_4在促进培养的人气管平滑肌细胞增殖中的作用

目的和方法 :研究白三烯D4 (LTD4 )是否剌激培养的人气管平滑肌细胞 (ASMC)增殖。将分离的人ASMC进行传代培养 ,在培养基中加入各种浓度的LTD4 ,计数细胞并测定 [3 H]-胸腺嘧啶核苷 ([3 H]-TdR)掺入量和三磷酸肌醇 (IP3 )累积量。结果 :LTD4 在一定范围内 (0 1nmoL·L-1～ 10nmoL·L-1)以浓度依赖的方式增加人ASMC(P <0 0 1)。LTD4 也增加 [3 H]-TdR的掺入量和IP3 累积量 (P <0 0 1)。磷脂酶C抑制剂新霉素(1μmol·L-1)阻止IP3 累积量的增加 (P <0 0 1)。结论 :LTD4 剌激培养的人ASMC增殖并且可能在哮喘的气道重塑中起了作用。