人淋巴细胞的凋亡与适应性反应

目的:检测小剂量辐射或膜氧化剂处理的淋巴细胞对其后的辐射或膜氧化剂引起的细胞凋亡效应,以确定适应性反应是否改变辐射或膜氧化剂引起人淋巴细胞凋亡的敏感性。方法:自供血者静脉取血,分离出单核细胞,在RPMI1640培养液中培养。在37℃用60Coγ射线适应性剂量0.1Gy(剂量率为0.01Gy·min-1)照射,攻击剂量2Gy(剂量率为1.0Gymin-1)照射离开37℃培养的细胞。膜氧化剂诱导适应性实验,以叔丁基过氧化氢加入细胞悬液内,分别在0℃或37℃培养30min,用冰预冷的培养液洗去药物,再培养一定时间。用DNA解螺旋荧光分析(FADU)和末端转移酶反应测定…     

电离辐射和过氧化氢诱导中国仓鼠卵巢(CHO)细胞DNA损伤效应的比较

目的 :阐明在过氧化氢 (H2 O2 )和电离辐射的作用下 ,DNA损伤的诱导、修复和细胞失活之间的关系。方法 :1CHO- 10 A细胞在α基本培养基加胎牛血清培养 ,指数生长 ,用 3H -胸苷标记 (2 .2× 10 3Bq/ml)。 X线照射细胞 ,剂量率 4Gy/m in。用一定浓度 H2 O2 的培养基经 4℃、30min培养细胞后 ,多次冲洗。2细胞种植于培养皿中 ,8d后经乙醇固定并染色 ,大于 5 0个细胞的群落作为存活者。 3单链断裂 (ssb) :DNA培养液换 5 m l碱性溶液 ,避光 30 min,用2 ml HCl溶液阻止 DNA变性 ;2 ml DNA悬液进行超声波处理 ,再加 1.2 m l的 1%十二烷…     

WR-1065在CHO AA8细胞G_2期的聚积

观察WR-1065对CHO AA8细胞DNA代谢和细胞周期的影响.方法和结果:培养细胞照前30min加WR-1065,最终浓度为4mmol/L,用~(137)Cs γ射线照射后立即移去WR-1065,用37℃PBS洗细胞,加新鲜培养基培养7天后,染色细胞集落并计数,结果经WR-1065处理细胞的D_0值为2.5Gy,对照组为1.25Gy,防护系数为2.0,再次证实WR-1065对细胞有很好的辐射防护能力.细胞在4mmol/L WR-1065中培     

非致死热疗对低剂量率照射的增敏作用

中国仓鼠V_(79)原代细胞在F_(12)培养基中培养(37℃、潮湿、5%CO_2、95%空气、pH=7.3),取指数生长细胞经处理置于T75瓶(2.5×10~5细胞/瓶),37℃培养12h,细胞于Lauda WGW/B水浴中作加热处理,温度变化小于0.05℃;经胰蛋白酶处理、冲洗、计数、形成集落,培养7～9天后固定、染色、测存活率,部分细胞用流式细胞光度计测细胞周期位置.高剂量率照射用15MeV线性加速器,5Gy/min,热处理后立即照射,低剂量率照射用~(60)Co,0.8Gy/min,与加热同时进行,源距细胞180cm.     

辐射诱导对小鼠巨噬细胞钙结合蛋白S100A8表达及调控影响的初步研究

目的 探讨辐射诱导后小鼠巨噬细胞中钙结合蛋白S100A8 mRNA的表达情况及其调控机制.方法 体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,按处置方法不同分为4组:A组正常培养48h;B组经10Gy射线照射后培养48h;C组用5g/ml LPS培养24h后,更换新鲜培养基继续培养24h;D组经10Gy射线照射后培养24h,然后添加5g/ml LPS继续培养24h.采用RT-PCR及定量PCR方法检测各组细胞S100A8 mRNA表达的变化.分别采用H2O2和喜树碱处理细胞,定量PCR检测S100A8 mRNA表达的变化.构建上游5′端系列报告基因表达载体并转染细胞,采用双荧光素酶法榆测报告基因的表达水平.结果 经γ射线或LPS刺激后,RAW264.7细胞S100A mRNA表达明显增加,二者联合作用后增加更为明显(P<0.05);H2O2处理后S100A8 mRNA表达增加,而喜树碱处理后其表达没有明显变化.单独经γ射线或LPS刺激后,报告基因的表达无明显变化,而二者联合作用后报告基因表达明显增加(P<0.05).结论 辐射诱导可促进RAW264.7细胞中钙结合蛋白S100A8 mRNA的表达.     

高功率脉冲微波辐射对小鼠机体氧化应激及巨噬细胞氧耗的影响

目的:探讨高功率脉冲微波(hish power pulse microwave,HPPM)辐射对小鼠脑、肝、脾氧化应激效应及巨噬细胞氧耗的影响.方法:雄性昆明小鼠30只,随机分为3组(每组10只):正常对照组(A),辐射1次组(B),辐射3次组(C).采用S波段HPPM,平均表面功率10 mW/cm2;照射时间2 min/次,隔日辐射1次.末次辐射完毕,立即处死小鼠,取脑、肝、脾、心、肾脏制作匀浆.采用比色法测定脏器匀浆的超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性、谷胱甘肽(GSH)含量.收集大鼠腹腔巨噬细胞,调整浓度为1×107/ml,将细胞悬液分为两组(n=12):对照组和HPPM组.微波辐射持续时间15 min.结果:HPPM作用后,与辐射1次组和对照组比,辐射3次组脑组织SOD活性、GSH含量明显降低.有统计学差异,而CAT、GSH-px活性变化不明显.脾组织GSH含量在HPPM作用后均明显降低,其中HPPM辐射1次组降低程度较HPPM辐射3次组更为明显,脾组织SOD活性变化不明显.肝组织SOD活性、GSH含量在HPPM作用后均呈辐射剂量依赖性降低,CAT活性变化不明显.而心、肾组织在辐照前后各指标均无显著性变化.巨噬细胞在HPPM作用15 min后,氧耗明显增加.结论:高功率脉冲微波辐射可以引起小鼠脑、肝、睥等脏器产生氧化应激的改变,体外巨噬细胞氧耗增加.     

X线照射大鼠离体胸腺、脾细胞后核质体粘度的变化

辐射诱发的DNA损伤和修复,不仅影响到多聚核苷酸链,对DNA的超螺旋也有作用.本文通过对大鼠胸腺(T)细胞和脾(S)细胞核质体粘度和沉降率的检测,比较了经X线照射后,T、S细胞DNA超螺旋的损伤和修复.实验用的T、S细胞取自雌性Sprague-Dawley大鼠,悬浮于无Ca~(++)、Mg~(++)的Hank's液中(25×10~6细胞/ml).制备好的细胞悬液应尽快用于照射,辐照采用西门子710H X线机,剂量率为1.75Gy/min,一次照射剂量范围为0.6～19.2Gy,对照用模拟照射,研究修复现象的细胞照射后应在37℃下温浴适     

人胎盘和脐带血巨核系集落形成细胞的辐射敏感性

目的 :用重组人细胞因子刺激血浆凝块培养法评价人胎盘和脐带血巨核细胞系集落形成单位 (CFU- Meg)的体外辐射敏感性。方法 :1征得产妇同意的脐带血在密度为 1.0 77g/m L细胞分离液中离心分离 ,收集低密度的单个核细胞 ,再用磁性细胞分选富集 CD34 + 细胞 ,其纯度从 88%至 93%之间。 2用 X射线照射 CD34 +细胞从 0至 5 Gy或 7Gy(73c Gy/m in) ;或照射 2 Gy,剂量率从 8.9c Gy/m in至 5 .3Gy/min。 3用去除血小板的人血浆以血浆凝块培养技术测定 CFU- Meg,其中含 CD34 +细胞浓度为 1× 10 3/m L,THPO(血小板生成素 )单用或与 FL T…     

甲状腺滤泡细胞对γ射线与质子照射反应的比较:1.DNA损伤、微核形成、细胞凋亡、细胞存活和细胞周期分布等的基本特征

目的 :研究不同质的辐射对甲状腺滤泡上皮细胞 DNA和染色体损伤、细胞杀死及细胞周期的影响。方法 :大鼠甲状腺细胞 FRTL - 5在 DMEM/ F12培养基中培养 ,以 6 0 Co源照射 0～ 12 Gy(剂量率 1.5 Gy/ min)和同步加速器产生的 2 5 0 Me V质子照射 (剂量率约 0 .7Gy/ min)。照射后不同时间收获 FRTL- 5细胞。用末端脱氧核苷酸转移酶介导的荧光素 (FITC)共轭溴脱氧尿苷 (Brd U)参入核酸的自由 3′端 ,以激光扫描细胞仪测量 DNA链的断裂 ;用胞质分裂阻断方法测定微核 ;以荧光素共轭 annexin V标记 ,用激光扫描细胞仪测定细胞凋亡 ;用…     

镍和亚砷酸盐抑制辐射诱发DNA双链断裂的修复

目的 :研究环境有毒物质镍和亚砷酸盐对辐射引起的DNA双链断裂 (dsb)修复的影响。方法 :取 3× 10 5 中国地鼠卵细胞在 6 0 mm组织培养皿中 (5 m L Ham′s F- 12培养液 )于 37℃培养 4d,另取 1.5× 10 5细胞在 35 m m组织培养皿中加 2 m L培养液和 0 .74k Bq/ m L1 4 C-胸苷培养 2 4～ 2 8h,之后加 1m L新鲜培养液和 0 .1m L不同浓度的氯化镍或亚砷酸钠溶液 ,2 h后用 1 37　 Cs源照射 40 Gy(剂量率 10 .2 Gy/ min)。照射后未修复组立即用胰蛋白酶消化 1.5～ 2 min,用脉冲场凝胶电泳分析 DNA dsb;修复组继续在 37℃培养 30 m in使 ds…     

大鼠肺巨噬细胞对X线的辐射敏感性

以大鼠肺臣噬细胞的³H-TdR标记细胞百分比(简称标记细胞百分比)和分裂细胞百分比为生物指标,观察了大鼠肺巨噬细胞对x线的辐射敏感性。胸部接受x线照射后2天洗肺获取的细胞,其辐射敏感性参数,标记细胞(%):D_o=1.02G)r,Dq=0.12Gy,n=1.12; 分裂细胞(%):D_o=0.68Gy,Dq=0.06Gy,n=1.1.胸部接受x线照射后立即获取的细胞辐射敏感性参数,标记细胞(%):D_o=3.56Gy,Dq=0.77Gy,n:1.24.分裂细胞(%):D_o=3.69Gy,Dq=0.35Gy,n=1.1.从上述结果看出,照后2天的肺巨噬细胞增殖受抑制的效立比照看立即出现的效应重些。文内对这两批实验结果进行了扼要的讨论。     

p~(53)依赖途径的辐射诱导潜在致死损伤的研究

目的 :研究潜在致死损伤 (PL D)是否与 p5 3有关。方法 :采用 12种肿瘤细胞株和 3种人二倍体纤维原细胞株分析辐射敏感性、DNA双链断裂重连接、PL D表达及修复 (PL DR)。其中 7种细胞株 p5 3正常表达 ,8种 p5 3功能缺陷 (6种基因突变 ,2种 HPV 16 E6转染 p5 3表达正常的细胞株 )。取指数生长期 (辐射前低密度培养 18h)和高峰生长期细胞 (待细胞长满后继续培养 3 d以上 ) ,1 3 7　 Csγ射线或 X射线 (剂量率为 1Gy/ min,剂量为 7Gy)照射后立即或于 2 4h以后消化成单细胞悬液 ,培养 2～ 3周 ,固定 ,0 .2 5 %结晶紫染色 ,观察细胞克隆…     

T98G人恶性胶质瘤细胞株对低剂量辐射的超敏感性

目的 :为探讨人恶性胶质瘤细胞株 ( T98G)的低剂量辐射反应 ,利用动态显微镜图像处理扫描仪 ( DMIPS)或细胞分选仪 ( CS)两种方法测定细胞存活分数及确定细胞周期时相对这种反应的影响。方法 :1使用非同步化生长细胞实验。第 1组 :处于指数生长的细胞置于 3× 10 3细胞 / 5 ml培养液 [10 %胎牛血清的伊格尔氏最低限度必需介质 ( EMEM)培养基 ]培养瓶内 ,用0 .0 5～ 5 Gy X射线单次照射 ,剂量率为 0 .2～ 0 .4Gy·min- 1 。然后用 DMIPS扫描记录 2 0 0～ 30 0个细胞方位 ,在37℃培育 7天后再用 DMIPS扫描 ,在记录的细胞方位上检测…     

表皮干细胞体外分离与培养

探索和建立表皮干细胞体外分离与培养的技术方法。通过酶消化法获得幼鼠表皮 ,并制成单表皮细胞悬液 ,以表皮干细胞培养基 ,即无钙EMEM培养基 (添加 9%FBS ,0 0 5mmol/LCaCl2 ,4ng/mlEGF ,0 5ng/ml硫酸庆大霉素及 5 0 %成纤维细胞条件培养基 )置细胞培养箱内培养。成纤维细胞条件培养基为无钙EMEM培养基(添加 9%FBS、0 0 5mmol/LCaCl2 、0 5 μg/ml硫酸庆大霉素 )培养幼鼠皮肤块 4 8h后所得培养液。将 1×10 6/ml上述培养的角质形成细胞经TGG细胞消化液 37℃下振荡消化后 ,接种至鼠Ⅳ型胶原包被的培养瓶内 ,37℃下静置 10～ 15min,留用快速贴壁细胞继续培养 ,所得细胞分别以能否呈克隆状生长和透射电镜观察其超微结构及β1整合素、K19免疫细胞化学染色进行鉴定。结果显示 ,鼠Ⅳ型胶原包被的培养瓶内快速贴壁细胞经继续培养 ,可见细胞呈克隆状生长。电镜观察其超微结构示非成熟细胞特征 ,β1整合素、K19免疫细胞化学染色阳性。研究表明 ,表皮干细胞可在体外分离与培养 ,本实验方法为较好方法之一。     

通过诱导胞核金属硫蛋白保护辐射所致的DNA单链断裂

目的 :研究在有氧和乏氧状态下胞核金属硫蛋白 (MT)对辐射诱导的 DNA损伤的保护程度。方法 ;1选用 ME180和 Si Ha鳞状宫颈癌细胞株 ,均培养于含 10 %新生牛血清和 0 .1mg/ m L 卡那霉素的最低必需培养基中。 2在照前 2 4h向培养瓶中加乙酸锌 (终浓度10 0 μL/ L) ,照前再将 10 0 μL 细胞悬液加至预气化 (5 % CO2的空气 )的培养基中 (10 5细胞 / m L) ,6 0 Co照射 ,剂量率为 1.1Gy/ min。 3应用半定量荧光图像分析法检测两种细胞株在正常生长条件及乙酸锌诱导后胞核 MT含量。4应用流式细胞术检测细胞总 MT含量。5以高效液相色谱为…     

辐射诱发神经元细胞微核率与克隆活存不相关

验证如下假设 :在胞质分裂阻滞细胞中辐射诱发微核(MN)的多少是细胞辐射敏感性大小的表现 ,所以 ,辐射敏感细胞将有高的 MN率 ,而辐射抗性细胞将显示较低水平的MN率。方法 :1用辐射敏感性大不相同的 13种神经元细胞系进行实验。其中人成神经细胞瘤有 N2 α、SHSY5 Y、SK- N-SH、KEL L Y及 SK- N- BE(2 c) ,鼠成神经细胞瘤有 OP- 6及OP- 2 7,人成胶质细胞瘤有 G12 0、G6 0、G2 8、G112、G44及G6 2。 2用 0 .5～ 0 .6 Gy6 0 Coγ射线照射各细胞系 ,剂量率为1.2 1Gy/ min,然后分别以胞质分裂阻滞法测定双核细胞的MN数。 30 .5…     

抑制MAPK介导bcl-2抗低剂量电离辐射诱发白血病细胞凋亡

目的:利用髓性白血病细胞HL60细胞,研究低剂量电离辐射(1Gy)对MAPK(丝裂原激活的蛋白激酶)和JNK(c-JUN末端激酶)活性的影响,确定MAPK介导与细胞辐射敏感性以及bcl-2表达与细胞存活的关系。方法:在辐照前和辐照中用MEK1/2(MAPK激酶)的抑制剂PD98059处理转化的HL60/pCEP4(对照质粒)和HL60/bcl-2细胞,1Gyγ射线照射后测定MAPK、JNK、Cdc2激酶活性,流式细胞仪测定细胞周期,以细胞凋亡和细胞集落形成能力作为辐射敏感性指标。结果:1低剂量电离辐射后20min,HL60/pCEP4和HL60/bcl-细胞MAPK活性升高至峰值,而JNK激酶活性无显…     

γ线全身照射小鼠T淋巴细胞光密度特性的研究

在酶细胞化学染色的基础上,对0、1、5、10Gy照射小鼠淋巴结悬液中的T细胞及其亚群进行显微扫描光度分析.结果表明,T细胞在其总光密度和相对面积分布图上均可显示5个子集,各子集斜率不同.T细胞的第4个子集其特征参数与应用双肽氨基肽酶染色所显示的T辅助细胞(T_H)接近,属于同一类T细胞亚群.照射后资料表明,T细胞的第4个子集显示出T_H细胞辐射抗性的性质;T细胞各个"亚群"所具有的辐射敏感性不同;总光密度特征量能较好地反映淋巴细胞的辐射敏感性.     

DNA损伤在电离辐射诱导凋亡中的重要性:重度联合免疫缺陷突变和DNA倍体对小鼠淋巴细胞系辐射敏感性的影响

目的 :通过研究重度联合免疫缺陷 ( scid)突变和 DNA倍体对电离辐射诱导小鼠淋巴细胞系凋亡敏感性的影响 ,判定 DNA损伤是否是凋亡的关键始动因子。方法 :采用γ射线 ( 1 3 7　 Cs,剂量率约为 0 .9Gy/ min)或DNA相关的 1 2 5 　 I衰变 (细胞在培养基内培育约 2 4小时 ,其中含 5 0～ 10 0 Bq/ m l的 1 2 5 　 I-碘代脱氧尿苷 )比较野生型及 scid纯合或杂合突变小鼠前 B和前 T细胞系在照射后致死的敏感性和凋亡产生速率。用小鼠前 T细胞系假 2倍体和倍体克隆研究 DNA倍体的不同对细胞的辐射敏感性和凋亡的影响。应用荧光显微镜观察凋…     

SKP2表达对食管癌细胞辐射敏感性的影响

目的 探讨S期激酶相关蛋白2(SKP2)高表达和低表达对食管癌细胞辐射敏感性的影响.方法 用Western-blotting方法筛选SKP2低表达和高表达的食管癌细胞系;构建SKP2正义表达载体p-pcDNATM3.1/myc-His A-SKP2和RNA干扰载体SKP2 RNAi,分别转染SKP2低表达和高表达的食管癌细胞系,用5 Gyγ射线照射各组细胞,通过克隆形成实验检测细胞辐射敏感性的差异.结果 SKP2在4种食管癌细胞中的表达水平依次为KYSE510＞KYSE450＞EC9706＞KYSE150.用p-pcDNATM 3.1/myc-His A-SKP2表达载体转染KYSE 150细胞后SKP2表达水平升高,5 Gyγ射线照射后细胞的克隆形成能力显著高于对照组(F=3.53,P＜0.01),表明SKP2高表达可以降低食管癌细胞的辐射敏感性.RNA干扰载体转染KYSE510细胞后SKP2表达水平降低,5 Gyγ射线照射后细胞的克隆形成能力显著低于对照组(F=5.23,P＜0.05),表明敲降SKP2表达可以增加食管癌细胞的辐射敏感性.结论 SKP2表达与食管癌细胞的辐射敏感性密切相关,具体机制还需要进一步研究.