透明质酸影响人膝骨关节炎滑膜成纤维样细胞骨桥蛋白和CD44的表达

背景：在骨关节炎病程中,透明质酸水平的改变可以使一系列细胞因子和酶表达水平改变,但是滑膜组织中骨桥蛋白、CD44的高表达是否与透明质酸水平改变相关目前尚不清楚。目的：通过透明质酸干预体外培养的人膝骨关节炎滑膜成纤维样细胞,观察透明质酸对骨关节炎滑膜成纤维样细胞骨桥蛋白和CD44表达的影响。方法：选取接受膝关节镜手术和膝关节置换的原发性膝关节骨关节炎患者滑膜标本10例,进行体外培养获取纯化的滑膜成纤维细胞,取第4~6代滑膜成纤维细胞,分为3组：空白对照组不进行任何干预;透明质酸组用100mg/L透明质酸干预24h;透明质酸酶组用300mg/L透明质酸酶干预24h。结果与结论：与空白对照组相比,透明质酸组滑膜成纤维细胞骨桥蛋白mRNA表达水平上升（P〈0.05）,透明质酸酶组滑膜成纤维细胞骨桥蛋白mRNA表达水平下降（P〈0.05）。透明质酸组和透明质酸酶组之间膜成纤维细胞骨桥蛋白mRNA表达水平差异有显著性意义（P〈0.05）。空白对照组、透明质酸组和透明质酸酶组滑膜成纤维细胞CD44mRNA表达水平差异均无显著性意义（P〉0.05）。提示透明质酸可以使骨关节炎滑膜成纤维细胞骨桥蛋白mRNA表达增高,对CD44mRNA表达没有影响。     

透明质酸对人骨关节炎软骨细胞骨桥蛋白和CD44表达的影响

背景：软骨进行性破坏为晚期骨关节炎的特征性病变,骨关节炎相关因子透明质酸、骨桥蛋白、CD44在骨关节炎软骨中表达增加。目的：通过透明质酸干预体外培养的人膝骨关节炎软骨细胞,探讨透明质酸对人膝骨关节炎软骨细胞CD44与骨桥蛋白表达的影响。方法：将软骨标本进行体外培养获取纯化的软骨细胞,分为3组：空白对照组、透明质酸干预组（100 mg/L）和透明质酸酶干预组（200 mg/L）。培养48 h后,采用Real-time Q PCR检测软骨细胞骨桥蛋白mRNA,CD44mRNA表达水平。用SPSS 17.0统计软件包分析骨桥蛋白mRNA和CD44 mRNA经透明质酸干预前后表达的差异。结果与结论：透明质酸组的骨桥蛋白mRNA表达水平较空白组高,透明质酸酶组的骨桥蛋白mRNA表达水平较空白组低;透明质酸组及透明质酸酶组的CD44 mRNA表达水平均较空白组低。结果提示透明质酸可以上调骨关节炎软骨细胞骨桥蛋白的表达;透明质酸在骨关节炎软骨细胞内对CD44表达的影响具有双相性,其影响结果可能与透明质酸的相对分子质量有关。     

不同分期骨关节炎滑膜细胞中COX-2 mRNA表达的差异

背景：COX-2基因实际存在于关节成纤维样滑膜细胞里,影响骨关节炎症的发生、发展。阐明不同分期骨关节炎滑膜细胞中COX-2基因表达量的差异对进一步深入了解骨关节炎的发生与发展,以及滑膜细胞在这一过程中的作用,具有重要的理论意义。 目的：分析COX-2 mRNA在不同分期骨关节炎成纤维样滑膜细胞中表达的差异。 方法：收集膝骨关节炎病变滑膜44例及正常滑膜12例,经原代细胞培养生长至4代的成纤维样滑膜细胞用于实验,应用实时荧光定量RT-PCR检测骨关节炎和正常成纤维样滑膜细胞中COX-2 mRNA的表达情况,最后使用2-ΔΔCt方法进行相对定量分析。 结果与结论：COX-2 mRNA 在骨关节炎的成纤维样滑膜细胞中的表达明显高于正常成纤维样滑膜细胞（P 0.05）。结果说明COX-2mRNA可能是骨关节炎症病变过程中的重要生物学指标,且主要起作用于骨关节炎病变早期。     

兔骨关节炎滑膜组织血管内皮生长因子mRNA表达及透明质酸钠的影响

背景:骨关节炎的发病机制目前还未完全清楚,研究发现血管内皮生长因子参与骨关节炎的发生发展.目的:观察血管内皮生长因子在滑膜组织表达的改变及透明质酸钠对滑膜血管内皮生长因子基因表达的影响.方法:24只大耳白兔随机正常对照组、生理盐水组和透明质酸钠组行单膝前交叉韧带切断术,4周后生理盐水组关节腔注射生理盐水0.3 mL,透明质酸钠组注射等量的高分子量10 g/L透明质酸钠,1次/周,连续5周.第10周处死动物,比较各组股骨内髁关节软骨的大体变化,采用实时定量聚合酶链反应方法检测滑膜VEGF mRNA的表达水平.结果与结论:大体评分显示生理盐水组软骨退变的程度明显重于正常对照组和透明质酸钠组(P＜0.05);生理盐水组滑膜血管内皮生长因子mRNA表达较正常组显著下降(P＜0.05),透明质酸钠组滑膜血管内皮生长因子mRNA表达较生理盐水组有升高,但比正常对照组低(P＜0.05).结果表明,滑膜组织血管内皮生长因子表达下降可能参与透明质酸钠的发生发展,关节腔注射透明质酸钠对透明质酸钠滑膜组织血管内皮生长因子表达有上调作用,有利于滑膜组织修复,可能是其治疗透明质酸钠机制之一.     

黄芪对糖尿病足溃疡处成纤维细胞合成透明质酸的影响

目的 探讨黄芪对糖尿病足溃疡处成纤维细胞透明质酸合酶mRNA及透明质酸的影响.方法 用含/未含黄芪的培养液培养糖尿病足溃疡处成纤维细胞.RT-PCR检测透明质酸合酶mRNA表达.放免法检测培养上清液中透明质酸含量.结果 用含黄芪的培养液培养的糖尿病足溃疡处成纤维细胞透明质酸合酶mRNA表达及培养上清液中透明质酸含量高于未含黄芪的培养液培养的细胞.且差异有统计学意义(P＜0.05).结论 黄芪能上调糖尿病足溃疡处成纤维细胞透明质酸合酶mRNA表达和促进透明质酸的合成.     

Mdivi-1对膝骨关节炎患者滑膜成纤维细胞增殖的抑制作用及可能机制

目的探讨线粒体分裂抑制剂-1(mitochondrial division inhibitor-1, Mdivi-1)在骨关节炎患者滑膜成纤维细胞增殖中的抑制作用及可能机制。方法取膝骨关节炎患者关节置换术中切除的滑膜组织,提取原代滑膜成纤维细胞进行传代培养,取对数生长期细胞随机分为观察组和对照组,分别应用摩尔浓度为50μmol/L Mdivi-1溶液、体积分数0.1%DMSO溶液干预24 h,采用MitoTracter Green染色法观察2组细胞线粒体形态,CCK-8法检测细胞增殖,DHE染色法检测活性氧表达,实时荧光定量PCR法检测环氧化酶2(cyclooxygenase-2, COX-2)mRNA、基质金属蛋白酶-13(matrix metalloprotein-13, MMP-13)mRNA相对表达量。结果干预24 h,与对照组比较,观察组滑膜成纤维细胞线粒体片段减少,长度明显延长。干预24 h,观察组滑膜成纤维细胞增殖吸光度值(1.13±0.10)、活性氧表达吸光度值(0.037±0.008)、COX-2 mRNA相对表达量(0.69±0.11)、MMP-13 mRNA相对表达量(0.54±0.21)均低于对照组(1.38±0.62、0.070±0.012、1.00±0.00、1.00±0.00)(P0.05)。结论 Mdivi-1可抑制膝骨关节炎滑膜成纤维细胞增殖,其机制可能与抑制活性氧过量产生及COX-2、MMP-13表达有关。     

程序性细胞死亡分子5在类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中的表达与意义

目的:程序性细胞死亡分子5作为一个重要的凋亡正调控分子,在许多疾病的发生发展过程中起着重要的作用,但有关其在类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中的作用研究甚少.实验拟验证程序性细胞死亡分子5在类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中的表达水平及细胞定位分布,探讨程序性细胞死亡分子5在类风湿关节炎发病中的可能作用.方法:实验于2005-06/2006-10在北京大学人民医院关节病诊疗研究中心完成.①实验材料:滑膜均取材于北京大学人民医院关节病诊疗研究中心行人工全膝关节表面置换术的类风湿关节炎或骨关节炎患者.所有患者均参照美国风湿病学会标准确诊.术前获得患者知情同意,并经北京大学人民医院伦理委员会批准.②实验方法:原代培养并传代分离获得型别均一的成纤维样滑膜细胞,提取细胞RNA和蛋白.③实验评估:实时定量聚合酶链反应及蛋白免疫印迹检测类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞和骨关节炎成纤维样滑膜细胞中程序性细胞死亡分子5 mRNA和蛋白的表达水平:制备细胞爬片采用免疫组织化学技术分析程序性细胞死亡分子5在成纤维样滑膜细胞中的定位分布特征.结果:①相对于骨关节炎,分离培养的类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中程序性细胞死亡分子5在mRNA和蛋白水平上表达下调.②类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中程序性细胞死亡分子5的下调与抗凋亡分子Bcl-2的上调是协调一致的.③程序性细胞死亡分子5蛋白主要定位于体外培养的成纤维样滑膜细胞的胞浆中.结论:程序性细胞死亡分子5可能参与类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞对凋亡刺激信号所产生的凋亡抑制过程,在类风湿关节炎的病理演变过程中可能具有抑制凋亡的作用.     

电针干预膝骨关节炎过程中转化生长因子β的调控作用

背景:电针治疗膝骨关节炎具有良好的中枢和外周镇痛作用.研究显示转化生长因子β在膝骨关节炎发生中具有重要作用.目的:从转化生长因子β调控角度,认识电针治疗膝骨关节炎的可能作用机制.方法:健康3月龄雄性SD大鼠,随机分为正常组、模型组、电针组和药物组.通过结扎大鼠股静脉并强迫运动的方法,建立膝骨关节炎动物模型.造模1个月后,电针组刺激内膝眼(EX-LE4)和犊鼻(ST 35)穴位,深0.1寸,脉冲2 Hz刺激20 min,1次/d,药物组为关节腔内注射药物透明质酸钠,0.1 mL/次,1次/周.治疗2周后,采集各组动物膝关节滑膜组织,观察转化生长因子β1、转化生长因子β1受体Ⅰ、转化生长因子β受体Ⅱ的表达.结果与结论:膝关节骨关节炎动物膝关节滑膜中转化生长因子β1水平增加(P < 0.05),经电针或透明质酸钠治疗后,膝关节滑膜中转化生长因子β1水平降低(P < 0.05),且转化生长因子β1受体Ⅰ,Ⅱ含量出现显著降低(P < 0.05).提示电针治疗膝骨关节炎是通过下调转化生长因子β1的含量来改善骨关节炎症状的,受体含量的减少有助于膝骨关节炎的恢复.     

CD44介导透明质酸酶抑制人牙周膜成纤维细胞增殖

目的探讨透明质酸(HA)酶对人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)增殖的影响及作用机制。方法从健康人前磨牙中刮取根中部1/3的牙周膜组织,分离HPDLFs。干预方式:(1)采用15 U/ml、75 U/ml和150 U/ml的HA酶干预HPDLFs,对照组加入同剂量的PBS溶液。(2)采用2μg/ml的CD44抗体干预HPDLFs,阴性对照为2μg/ml的Ig G干预,对照组加入同剂量的PBS溶液。于干预的第1、2、3、5、7、9、11天采用MTT法检测细胞增殖。采用实时定量PCR检测75 U/ml的HA酶或CD44抗体干预HPDLFs 24 h后透明质酸合成酶(HASs)、HA酶(HYALs)和CD44 mRNA的表达。结果与对照组相比,15 U/ml、75 U/ml和150 U/ml的HA酶均呈剂量依赖式抑制HPDLFs的增殖(P 0. 05)。与对照组相比,CD44抗体可显著抑制HPDLFs的增殖(P 0. 05)。与对照组相比,75 U/ml的HA酶或CD44抗体均可显著抑制HAS1、HAS2和HAS3 mRNA的表达,增加HYAL 1、HYAL 2和HYAL 3 mRNA的表达(P 0. 05),但对CD44 mRNA的表达无显著影响。结论 CD44可介导HA酶抑制HPDLFs的增殖。     

骨桥蛋白对骨关节炎软骨细胞缺氧诱导因子-2α mRNA表达的影响

[目的]本研究探讨在体外实验中,骨桥蛋白(OPN)对缺氧诱导因子-2α(HIF-2α)在软骨细胞表达的影响,揭示OPN在骨关节炎(OA)发病中的作用机制.[方法]从OA患者胫骨表面切取软骨,并在体外培养纯化软骨细胞.用重组人类骨桥蛋白(rh OPN组)和小干扰RNA(siRNA组)对软骨细胞进行干预(对照组不予激活及干预),检测HIF-2α mRNA表达的变化.用抗-CD44单克隆抗体检测可能的配体-受体的相互作用.通过实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)同时定量软骨细胞OPN mRNA和HIF-2α mRNA的表达.[结果]rh OPN组与对照组相比,HIF-2α mRNA的表达水平显著降低,相反,siRNA组HIF-2α mRNA表达增加.同时,CD44抗体可以抑制OPN对HIF-2α mRNA的表达的影响.[结论]OPN可能通过CD44的相互作用,抑制OA软骨细胞HIF-2α mRNA的表达,从而发挥对OA的保护性作用.     

骨关节炎滑膜成纤维细胞与皮肤成纤维细胞差异性基因表达

目的比较骨关节炎滑膜成纤维细胞与皮肤成纤维细胞基因表达的差异，以进一步研究滑膜成纤维细胞在骨关节炎中的作用。方法选取骨关节炎患者滑膜，经原代培养获得滑膜成纤维细胞，采用正常志愿者原代培养皮肤成纤维细胞作为对照。使用限制性酶切片段差异展示技术分离滑膜成纤维细胞与皮肤成纤维细胞差异表达之基因。结果骨关节炎患者滑膜成纤维细胞与正常志愿者皮肤成纤维细胞相比，SOD、TFP12、CXCL2、CXCL6、TCF-β基因表达水平较高。结论SOD、TFPI2、CXCL2、CXCL5、TCF-β基因在骨关节炎滑膜成纤维细胞表达水平高于皮肤成纤维细胞中相应基因的表达水平，表明这些基因在骨关节炎疾病的发生过程中可能起到一定的作用，为进一步研究骨关节炎以及治疗骨关节炎提供了新的对象。     

人胎盘间充质干细胞体外向胆碱能样神经元的分化

背景:胎盘中含有与骨髓中类似的间充质干细胞,也可能具有多向分化能力.目的:探讨人胎盘间充质干细胞体外能否定向诱导分化为胆碱能样神经元.方法:采用酶消化法分离培养人胎盘间充质干细胞,传至第4代,先用胎牛血清+碱性成纤维细胞生长因子诱导培养2 d,然后分为3组:方案Ⅰ加入含碱性成纤维细胞生长因子、2-巯基乙醇、维甲酸、神经生长因子的DMEM/F12继续诱导19 d;方案Ⅱ在其基础上,诱导液中另加入表皮生长因子、Heparin;阴性对照组仅加入含胎牛血清的DMEM/F12培养液,不添加任何诱导剂.结果与结论:胎盘组织消化后获得的贴壁细胞,经2周培养后逐渐形成扁平单层细胞,呈平行排列或漩涡样成簇生长,为梭形,传至第3代细胞形态较均一.第4代人胎盘间充质干细胞强表达CD44,CD29,不表达CD34,CD45,CD106及HLA-DR.人胎盘间充质干细胞经方案Ⅰ和方案Ⅱ诱导2周后,均可检测到nestin、chat mRNA的表达,且chat,Ache,nestin阳性率显著高于阴性对照组细胞(P < 0.05).与阴性对照组比较,经两种方案诱导的人胎盘间充质干细胞培养上清液中乙酰胆碱浓度均明显升高(P < 0.05),且方案Ⅰ诱导组升高幅度明显大于方案Ⅱ诱导组(P < 0.05).提示联合多种生长因子分阶段进行诱导,人胎盘间充质干细胞可在体外分化为具有合成及释放降解乙酰胆碱能力的胆碱能样神经元细胞.     

Fas及FasL和Caspase-3在青蒿琥酯诱导人胚肺成纤维细胞凋亡中的表达

背景:青蒿琥酯具有减轻肺纤维化的作用,但相关机制的研究罕见报道.目的:探讨青蒿琥酯对人胚肺成纤维细胞凋亡的作用及其与Fas,FasL,Caspase-3表达的关系.方法:用1,10,100 mg/L青蒿琥酯分别干预体外培养的人胚肺成纤维细胞.采用CCK-8法检测青蒿琥酯对人胚肺成纤维细胞增殖的影响,流式细胞术测定细胞凋亡率,RT-PCR法测定Fas,FasL,Caspase-3 的mRNA的表达.结果与结论:青蒿琥酯呈浓度依赖性抑制人胚肺成纤维细胞增殖,细胞经青蒿琥酯作用后凋亡率明显增加(P < 0.05或P < 0.01),Fas,FasL,Caspase-3 mRNA的表达显著高于对照组(P < 0.05).结果证实,青蒿琥酯可通过上调Fas,FasL,Caspase-3 mRNA的表达抑制人胚肺成纤维细胞增殖、并促进细胞凋亡,发挥抗肺纤维化作用.     

黄芪对糖尿病足溃疡处成纤维细胞合成透明质酸的影响

目的探讨黄芪对糖尿病足溃疡处成纤维细胞透明质酸合酶mRNA及透明质酸的影响。方法用含/未含黄芪的培养液培养糖尿病足溃疡处成纤维细胞,RT-PCR检测透明质酸合酶mRNA表达,放免法检测培养上清液中透明质酸含量。结果用含黄芪的培养液培养的糖尿病足溃疡处成纤维细胞透明质酸合酶mRNA表达及培养上清液中透明质酸含量高于未含黄芪的培养液培养的细胞,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论黄芪能上调糖尿病足溃疡处成纤维细胞透明质酸合酶mRNA表达和促进透明质酸的合成。     

重组慢病毒载体转染羊骨髓间充质干细胞及成骨基因表达量的变化简

背景：碱性成纤维细胞生长因子具有促进骨髓基质细胞分裂增殖作用,而骨形态发生蛋白2在诱导新骨形成方面有重要的研究意义。目的：分析骨形态发生蛋白2和碱性成纤维细胞生长因子基因单独和联合转染对体外培养的骨髓间充质干细胞的增殖和骨向分化的影响,比较Ⅰ型胶原蛋白、骨钙蛋白、骨桥蛋白等非特异性成骨基因于转染前后骨髓间充质干细胞相对表达量的差别,为构建组织工程骨的种子细胞做理论依据。 方法：构建碱性成纤维细胞生长因子、骨形态发生蛋白2慢病毒载体,分别转染羊骨髓间充质干细胞,得到碱性成纤维细胞生长因子组、骨形态发生蛋白2组、联合组、对照组细胞,提取RNA后采用实时定量PCR的方法检测Ⅰ型胶原蛋白、骨钙蛋白、骨桥蛋白等非特异性成骨基因的mRNA水平相对表达量的变化。 结果与结论：对照组、碱性成纤维细胞生长因子、骨形态发生蛋白2及联合组4组间非特异性成骨基因表达量存在明显差异（P ＜0.05）,且碱性成纤维细胞生长因子和骨形态发生蛋白2具有交互作用（P ＜0.05）,碱性成纤维细胞生长因子、骨形态发生蛋白2联合组的Ⅰ型胶原蛋白和骨钙蛋白基因表达量明显高于其他3组,且差异有显著性意义（P ＜0.05）;但是骨桥蛋白基因中差异无显著性意义（P ＞0.05）。体外实验结果显示联合转染组中的Ⅰ型胶原蛋白、骨钙蛋白、骨桥蛋白等非特异性成骨基因mRNA水平相对表达量较多,该组细胞的成骨功能最强,适合作为组织工程骨的种子细胞。     

骨关节炎滑膜成纤维细胞与皮肤成纤维细胞基因表达的差异

背景:近年来,发现一些基因的单核苷酸多态性可能与骨关节炎的易感性有关,以往研究主要集中于骨关节炎与类风湿性关节炎滑膜细胞基因表达差异,滑膜成纤维细胞与其他组织成纤维细胞基因表达差异与骨关节炎的关系有待研究。目的:观察骨关节炎滑膜成纤维细胞与皮肤成纤维细胞基因表达的差异。设计:观察对比分析。单位:深圳市人民医院。材料:骨关节炎患者(均符合1995年美国风湿病学会的骨关节炎诊断标准)滑膜及正常志愿者皮肤由深圳市人民医院骨科提供,所有提供皮肤者均对实验项目知情同意。RPMI 1640培养基、胎牛血清、TRIZOL试剂(美国Invitrogen Life Technologies公司),pGEM-T质粒系统(美国Progema公司),Display PROFILE-BASIC及Display PROFILEProbe试剂盒(美国Qbiogen公司)。方法:实验于2005-01/06在深圳市人民医院完成。选取骨关节炎患者滑膜,经原代培养获得滑膜成纤维细胞,采用正常志愿者原代培养皮肤成纤维细胞作为对照。采用限制性酶切片段差异展示技术分离骨关节炎患者滑膜成纤维细胞与皮肤成纤维细胞差异表达的基因,使用blast比对将所得序列与Genbank中所有序列进行比对分析。主要观察指标:关节炎患者滑膜成纤维细胞与皮肤成纤维细胞基因表达的差异。结果:骨关节炎患者滑膜成纤维细胞与正常志愿者皮肤成纤维细胞相比,超氧化物歧化酶、TFPI2、CXCL2、CXCL6、转化生长因子基因表达水平较高。结论:超氧化物歧化酶、TFPI2、CXCL2、CXCL6、转化生长因子基因在骨关节炎滑膜成纤维细胞表达水平高于皮肤成纤维细胞中相应基因表达水平,表明这些基因在骨关节炎疾病的发生过程中可能起到一定作用。     

重组人酸性成纤维细胞生长因子关节腔注射预防骨关节炎软骨退行性变

目的:验证重组人酸性成纤维细胞生长因子关节腔内注射对兔实验性早中期骨关节炎软骨退行性变的防治作用。方法:实验于2005-10/2006-04在暨南大学附属第一医院中心实验室完成。选用健康新西兰大白兔30只,切断膝关节前、后交叉韧带建立兔骨关节炎模型后,按随机数字表法分为3组,空白组、透明质酸钠组和重组人酸性成纤维细胞生长因子组。重组人酸性成纤维细胞生长因子组术后第8周起于手术侧膝关节腔内注射人酸性成纤维细胞生长因子8000IU/(只·周),透明质酸钠组关节腔内注射透明质酸钠1mL/(只·周)。空白组不进行干预。术后第16周空气栓塞法处死动物,大体观察及手术显微镜下观察软骨表面分级;取股骨髁负重面软骨标本进行苏木精-伊红、沙黄染色及骨关节炎组织病理学评分(正常为0～1,重度为10分以上)、分级。结果:30只动物全部进入结果分析。①重组人酸性成纤维细胞生长因子组和透明质酸钠组标本股骨髁负重软骨有轻度粗糙,关节软骨可见浅表溃疡形成。空白组标本股骨髁负重面软骨有轻～中度溃疡形成。②3组动物关节软骨表面分级差异有显著性意义(χ2=22.97,P=0.000)。③3组动物骨关节炎软骨的组织病理学分级差异有显著性意义(χ2=16.84,P=0.005),透明质酸钠组和重组人酸性成纤维细胞生长因子组的骨关节炎组织病理学评分均显著低于空白组(P<0.05)。结论:关节腔注射重组人酸性成纤维细胞生长因子可以较好的延缓兔膝骨关节炎软骨退行性变和预防骨关节炎的发展。     

姜黄素上调caspase-3和p53表达后对人肺癌干细胞增殖与侵袭的影响

目的:探讨姜黄素干预人肺癌干细胞caspase-3与p53后对肺癌细胞增殖和侵袭的影响.方法:采用流式细胞仪分选技术从肺癌细胞株A549中分选出CD44 +/CD133+的肺癌干细胞(carcinoma-initiating cells,CICS);用四甲基偶氮唑蓝比色法检测不同浓度姜黄素对肺癌干细胞增殖的影响;用实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测肺癌干细胞系中caspase3和p53的mRNA和蛋白水平;Transwell小室侵袭实验检测姜黄素对肺癌干细胞体外侵袭能力的影响.结果:姜黄素浓度增加至40 μmol/mL后,姜黄素处理组的肺癌干细胞增殖抑制率大于阴性对照组和空白对照组(P＜0.01),姜黄素对肺癌干细胞体外增殖抑制呈显著的剂量依赖性(IC50为61.06 μmol/mL).姜黄素处理组肺癌干细胞中caspase-3和p53基因mRNA的表达水平(3.64±0.59,4.98±0.82)高于阴性对照组(1.00±0.04,0.99±0.07)和空白对照组(0.99±0.07,1.03±0.27),差异有统计学意义(P均＜0.01).姜黄素处理组肺癌干细胞中caspase-3和P53蛋白表达水平(0.65±0.12,0.43±0.05)高于阴性对照组(0.05±0.02,0.08±0.03)和空白对照组(0.09±0.03,0.12±0.17),差异有统计学意义(P＜0.01和0.05).姜黄素处理组侵袭细胞数(26±15)少于阴性对照组(82±13)和空白对照组(78±12),差异有统计学意义(P＜0.01).结论:姜黄素能上调caspase-3及p53的表达,能显著抑制人肺癌干细胞在体外的增殖及侵袭.     

IPAF和NALP1在RA-FLS中的蛋白表达情况及意义

目的：研究人IL-1β转换酶蛋白激活因子（IPAF）和富含亮氨酸重复结构域蛋白（NALP）1在类风湿关节炎（RA）成纤维样滑膜细胞（FLS）中的表达及其意义。方法：收集来自4例骨关节炎、6例RA患者、3例关节创伤患者的滑膜组织标本,分为骨关节炎组、RA组、正常对照组。分离培养FLS,应用蛋白免疫印迹法检测并比较3组IPAF、NALP1蛋白表达水平,比较3组FLS中IPAF和NALP1蛋白表达。6份RA-FLS分别加入胎牛血清培养液（空白对照组）、脂多糖、脂多糖加ZVAD-FMK、TNF-α、TNF-α加ZVAD—FMK处理24h,比较各样本IPAF和NALP1的蛋白表达水平。结果：IPAF蛋白表达水平由高至低依次为骨关节炎组、RA组、正常对照组,骨关节炎组IPAF蛋白表达水平明显高于RA组及正常对照组（P〈0．05）。NALP1蛋白表达水平由高至低依次为骨关节炎组、RA组、正常对照组,但3组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。RA-FLS经不同药物干预后,TNF-α处理组IPAF蛋白表达水平均高于其他4组（P〈0．01或0．05）;各组NALP1蛋白表达水平比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：RA-FLS中IPAF蛋白表达水平升高,TNF-α可促进RA—FLS中IPAF表达。     

Furin基因对高血压心肌梗死细胞增殖、迁移以及作用机制的研究

目的初步探索Furin与心肌成纤维细胞增殖、迁移的关系以及作用机制。方法 RNAi技术沉默心肌成纤维细胞中Furin基因的表达,分为空白对照组、阴性对照组(转染siRNA-NC)和Furin干扰组(转染siRNA Furin)。四甲基偶氮唑(MTT)实验检测细胞增殖的情况,Transwell法检验细胞的迁移能力,采用荧光定量PCR(RT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)检测Furin、α-平滑肌细胞肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(Col-1)mRNA、蛋白水平。结果 Furin干扰组心肌成纤维细胞中Furin mRNA、蛋白的表达量均显著低于空白对照组(P0.05),阴性对照组与空白对照组差异无显著性(P0.05)。沉默Furin表达显著抑制细胞的增殖和迁移(P0.05),显著下调Col-1、α-SMA的表达水平(P0.05),阴性对照组细胞增殖、迁移与空白对照组差异无显著性(P0.05)。结论沉默Furin能通过抑制心肌成纤维细胞增殖、迁移、胶原合成,增加细胞外基质分解和抑制细胞外基质沉积,降低心肌梗死过程中的心肌纤维化过程。