地塞米松对大鼠肾小球系膜细胞增生水平的影响

目的：探讨地塞米松(DXM)对大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)增生作用的影响。方法：培养大鼠GMCs细胞,分空白对照组、LPS组和DXM组。DXM选用3种浓度,分别为250 ng/孔、1 000 ng/孔和4 000 ng/孔。LPS终浓度为5 mg/孔。采用MTT掺入方法,于 24 h 和48 h观察3组中GMCs增生水平。结果：DXM组在浓度为4 000 ng/孔时48 h的增生水平为(0.251±0.056) ng/L,低于LPS组和GMCs组［(0.787±0.110),(0.678±0.101) ng/L］,差异有显著性(P<0.05)。DXM浓度为4 000 ng/孔时GMCs增生水平于48 h抑制最为显著。结论：DXM能抑制大鼠GMCs增生。     

维生素E对脂多糖诱导的大鼠系膜细胞增生的影响

目的　探讨维生素E(VitaminE ,VitE)对大鼠肾小球系膜细胞 (GMCs)增生的影响及可能机制。方法　应用不同剂量 ( 5 0mg/L、10 0mg/L、2 0 0mg/L)VitE在不同时间 ( 2 4h、48h、72h)对GMCs增生的影响 ;选定最佳剂量与最佳时间 ,将GMCs分为脂多糖 (LPS)组、对照组、VitE组、激素组与激素+VitE组共 5组分瓶培养 ,后三组加LPS诱导实验末 ,收集培养细胞 ,涂片 ,应用免疫组化法检测GMCs的增生细胞核抗原 (PCNA)阳性表达率 ,TUNEL法检测GMCs有效凋亡率 ;应用生化法对培养上清液进行羟自由基 ( OH)、总超氧化物歧化酶 (tSOD)、丙二醛 (MDA)的测定。结果　 10 0mg/LVitE组在 48h( 3 3 3± 2 3 )对GMCs增生的抑制效果好于其他浓度与时间组 ;VitE组细胞上清中 OH( 2 0 5±3 8)、MDA( 5 7± 0 6)低于LPS组 ( 2 93± 42 ,19 3± 6 0 ) ,tSOD( 10 4± 3 1)活性高于LPS组 ( 15 6± 2 1) (P均 <0 0 1) ;VitE组培养细胞PCNA阳性率 [( 3 3 3± 8 8) % ]低于脂多糖组 [( 46 8± 5 3 ) % ],有效凋亡率高于脂多糖组 (P均 <0 0 1)。PCNA阳性率与 OH、MDA正相关 (r =0 880 ,0 70 2 ,P均 <0 0 1) ,与tSOD活性负相关 (r=- 0 682 ,P <0 0 1)。结论　VitE可以上调tSOD的活性 ,抑制系膜细胞 OH的分泌与MDA的过度积聚     

糖皮质激素抑制实验性肾炎大鼠肾组织中核因子-κB活化及单核细胞趋化蛋白-1表达

目的：探讨核因子-κB(NF-κB)活化在肾小球肾炎发病机制中的作用及糖皮质激素对NF-κB活化的调节作用。方法：肾毒血清肾炎应用兔抗鼠肾小球基底膜肾毒血清制备。模型组：注射肾毒血清后不加任何治疗,第14 d处死;糖皮质激素干预组(治疗组)：于肾毒血清注射后第1～14 d给予地塞米松每日0.125 mg/kg腹腔注射。采用免疫组化及医学图像分析系统观察肾小球及肾小管中NF-κB活化和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的表达,并分析其与蛋白尿和肾小球细胞数之间的关系。结果：模型组肾小球及肾小管中NF-κB活化较正常对照组显著上调,分别为(38.27±8.83)% vs (1.82±0.68)%和(68.46±12.94)% vs (16.89±4.47)%,P均<0.01;模型组肾小球及肾小管中MCP-1表达分别为(24.37±7.06)个/gcs和(54.78±11.49)%,较正常对照组显著升高(P<0.01),肾小球中NF-κB活化和MCP-1表达与单核细胞浸润和蛋白尿密切相关;糖皮质激素干预组肾小球及肾小管中NF-κB活化和MCP-1表达均显著下调。结论：NF-κB活化在肾小球肾炎发病机制中发挥重要作用,抑制NF-κB活化可能是糖皮质激素抗肾炎作用的机制之一。     

腺病毒介导的白介素-24转移对脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞凋亡和周期调节蛋白p21、p27及CyclinE的影响

目的 探讨腺病毒介导的IL-24转移对脂多糖（LPS）诱导的大鼠肾小球系膜细胞（GMCs）和细胞周期调节蛋白p21、p27及CyclinE的影响。方法 采用10%FBS/DMEM培养293细胞,扩增腺病毒载体, GMCs培养4~6代细胞后用于分析。①观察IL-24对LPS诱导的GMCs凋亡影响：分为对照组、Ad.IL-24组、LPS组和LPS+ Ad.IL-24组,其中对照组和LPS组GMCs不转染携带IL-24腺病毒（Ad.IL-24）,Ad.IL-24组和LPS+Ad.IL-24组以Ad.IL-24转染GMCs,LPS组和LPS+Ad.IL-24组加LPS培养,以流式细胞术检测培养后24和48 h的GMCs凋亡率;②考察IL-24对GMCs周期蛋白影响：对照组为5%FBS/DMEM培养GMCs,Ad-GFP组采用携带绿色荧光蛋白的对照载体（Ad.GFP）转染GMCs,Ad.IL-24+LPS组以Ad.IL-24转染GMCs,采用Western-blot检测p21、p27及CyclinE表达。结果 ①GMCs在培养后24和48 h细胞凋亡率：对照组分别为(0.86±0.15)%和(0.98±0.4)%;IL-24组分别为(1.02±0.22)%和(1.43±0.31)%;LPS组分别为(2.19±0.81)%和(2.49±0.12)%,LPS+Ad.IL-24组分别为(18.01±1.17)%、(26.82±5.01)%;2个观察时间点细胞凋亡率对照组与IL-24组差异无统计学意义, LPS组显著高于对照组（P＜0.05）,LPS+ Ad.IL-24组细胞凋亡率最高（P＜0.05）。②Ad-GFP组p21、p27表达显著低于对照组（P<0.05）,CyclinE表达显著高于对照组（P<0.05）;Ad.IL-24+LPS组p21、p27表达较Ad-GFP组显著上调（P<0.05）,CyclinE表达较Ad-GFP组下调。结论 IL-24腺病毒载体对正常GMCs无影响,但可使LPS诱导增生的GMCs凋亡增加,其可能机制是上调关键细胞周期负调控蛋白p21、p27及下调CyclinE。     

肠三叶因子在内毒素致幼鼠肠损伤中的作用及意义

目的：探讨内毒素(LPS)致幼鼠肠损伤中二胺氧化酶(DAO)及肿瘤坏死因子(TNF-α)的变化及基因重组肠三叶因子(rITF)的保护作用,为临床治疗提供实验依据。方法：Wistar幼鼠10日龄96只分为3组,A组:生理盐水对照组;B组:LPS组;C组:LPS+rITF组,每组32只。以生理盐水(1mL/kg),EcoliO55:B5(1mL/kg)、rITF(0.1mL/只、配制浓度5g/L)腹腔注射后2,6,24,72h断头处死动物,取动静脉混合血,测血DAO活性。留取肠组织,免疫组化法检测TNF-α蛋白含量,PCR法检测TNF-αmRNA表达。同时作电镜观测肠组织超微结构变化。结果：B组血浆DAO活性自LPS作用后2h即开始升高,至6h达到最高值,较A组差异有显著性(1.519±0.13U/Lvs1.081±0.04U/L,P<0.01),72h仍持续高值;C组血浆DAO活性较B组明显下降(P<0.01或P<0.05);与A组6h比较差异有显著性(P<0.01),其余各时间点差异无显著性(P>0.05);B组TNF-α积分光密度含量明显高于A组,以LPS作用后6h达高峰(37247.64±3387.59vs6191.02±482.32,P<0.01),C组TNF-α含量较B组明显降低,但仍高于A组(P<0.01);TNF-αmRNA在A组各时间点有微弱的表达,在B组各时间点表达明显增强,较A组差异显著(P<0.01);而C组各时间点表达明显减少,较B组差异显著(P<0.01或P<0.05)。电镜下肠组织超微结构:A组正常,B组变化明显,C组变化较B组减轻。结论：ITF可降低血浆DAO活性,抑制肠组织TNF-αmRNA及蛋白表达,减轻LPS所致幼鼠肠损伤,发挥保护作用。     

苦参碱对脂多糖诱导人胚肾小球系膜细胞STAT1、3及CTGF、PDGF表达的影响

目的观察苦参碱(Ma)对脂多糖(LPS)诱导的肾小球系膜细胞(MC)中信号转导子与转录激活子(STAT)分子1、3,结缔组织生长因子(CTGF)及血小板源性生长因子(PDGF)表达的影响,探讨苦参碱抑制增殖的机制。方法原代培养人胚肾小球系膜细胞并鉴定。实验分为正常对照组、脂多糖(10μg/ml)组、脂多糖(10μg/ml)+苦参碱(320μg/ml)组,分别于12、24、48h采用Real-TimePCR检测STAT1、3、CTGF及PDGF mRNA表达及Western blot检测p-STAT1、3蛋白表达。结果与正常对照组相比,在12、24、48h时间段,10μg/ml的LPS能够促进人肾小球系膜细胞增殖,320μg/ml的Ma对MC均有抑制增殖作用(P<0.01);在12、24、48h,LPS组STAT1、3、CTGF及PDGF mRNA增高,苦参碱处理组较LPS组表达明显降低,且在24、48h抑制明显(P<0.01);LPS组P-STAT1在12、24、48h蛋白表达均上调,p-STAT3在24、48h蛋白表达明显上调(P<0.01),与LPS组相比,苦参碱处理组p-STAT1、3蛋白表达均下调,但...     

黄芪对实验性IgA肾病大鼠肾小管间质损害及NF-κB MCP-1表达的影响

目的：观察黄芪对实验性IgA肾病大鼠肾间质损害及肾组织核转录因子-κB （NF-κB）、单核细胞趋化蛋白（MCP-1）表达的影响,探讨黄芪防治IgA肾病肾小管间质损害的作用机制。方法：28只SD大鼠分为模型组、干预组、对照组3组。模型组和干预组复制IgA肾病模型,干预组给予黄芪颗粒剂口服,并以正常SD大鼠为对照组。应用全自动生化分析仪检测尿红细胞、24 h尿蛋白定量、尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）活性;应用免疫荧光法检测肾组织冰冻切片IgA免疫复合物沉积情况,利用免疫组织化学方法,观察大鼠肾组织NF-κB p65,MCP-1表达的影响;半定量评分法计算病理积分以观察肾脏病理损害程度。结果：①干预组大鼠的尿红细胞、尿蛋白、尿NAG酶含量较模型组明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);②模型组大鼠肾组织NF-κB、MCP-1的表达与干预组、对照组相比均明显增高(P<0.01),差异有统计学意义;③干预组大鼠肾脏病理评分较模型组明显降低,差异有统计学意义(P<0.01 )。结论：黄芪能减轻模型组大鼠的尿红细胞数、尿蛋白和尿NAG酶活性;能减轻IgA肾病模型大鼠肾小管间质病理损害,其减轻肾小管间质损害作用可能与下调NF-κB,MCP-1表达有关。     

内毒素诱导新生大鼠肾脏损害及地塞米松的干预作用

目的：探讨新生大鼠内毒素血症时肾脏损害的部分机制及地塞米松(Dex)的干预作用。方法：取7日 Wistar大鼠150只,随机分为A组(对照组)：等体积生理盐水腹腔注射;B组(LPS组)：内毒素(LPS)5 mg/kg腹腔注射制成内毒素血症模型;C组(治疗组)：LPS 5 mg/kg+Dex 5 mg/kg共同腹腔注射。各组于注射前(0 h)及注射后2,4,6,24 h分别断头处死留取肾脏。肾组织一氧化氮(NO)采用硝酸还原酶法测定,肾组织一氧化氮合酶(NOS)采用底物催化法测定,通过电镜观察肾脏超微结构变化。结果：①B组NO于2 h高于A组同时间点NO浓度(1.69±0.44 nmol/mg vs 1.20±0.36 nmol/mg),差异有显著性(P<0.05)。于24 h为同时间点A组的 2.3倍(3.12±0.41 nmol/mg vs 1.35±0.38 nmol/mg),差异有显著性(P<0.01);C组NO也于2 h明显高于A组同时间点NO浓度(1.63±0.27 nmol/mg vs 1.20±0.36 nmol/mg),(P<0.05),但于24 h升高程度低于B组(2.10±0.27 nmol/mg vs 3.12±0.41 nmol/mg) (P<0.05);②B组肾NOS于2 h明显高于A组同时间点NOS浓度(0.47±0.15 U/ml vs 0.38±0.12 U/ml) (P<0.05),于4 h短暂下降后于24 h明显高于同时间点A组NOS浓度(0.65±0.27 U/ml vs 0.38±0.15 U/ml) (P<0.05);C组NOS浓度自6 h逐渐升高,至24 h均明显低于B组 0.51±0.07 U/ml vs 0.65±0.27 U/ml) (P<0.05);③电镜下A组肾小球基底膜(GBM)完整,上皮细胞足突清晰,肾小管上皮细胞完整,可见刷状缘。B组6 h肾小球GBM完整,部分上皮细胞足突融合,肾小管上皮细胞线粒体空泡变性;24 h肾小球GBM断裂,上皮细胞足突明显融合,系膜细胞线粒体嵴断裂,空泡变性。肾小管上皮细胞线粒体扩张成大泡。C组24 h肾小球GBM基本正常,上皮细胞足突部分轻度融合,系膜细胞内少数线粒体空泡变性,肾小管可见刷状缘。 结论：新生鼠内毒素血症时肾脏NOS产生增加,诱导合成过量的NO参与肾损伤。Dex通过调节肾脏NOS而抑制NO的大量合成,具有肾脏保护作用。     

TNF-α和IκBα在内毒素致新生大鼠肺出血中的作用研究(英文)

目的：探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和核因子-κB抑制 蛋白α(IκBα)在内毒素脂多糖(LPS)致新生大鼠肺出血发生机制中的作用。方法：将48只7～10日龄Wistar大鼠分为LPS组和生理盐水(NS)组。LPS组腹腔注射LPS 5 mg/kg,按LPS⑸浜蠊鄄斓氖奔浞治0 min,1 h,2 h,4 h,8 h,16 h和24 h组,每组6只;NS组腹腔注射等量生理盐水作为对照。对鼠肺进行大体和光镜观察,分别采用酶联免疫 吸附(ELISA)、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western Blot杂交法动态观察肺组织TNF-α蛋白和mRNA表达及IκBα表达的变化。结果：LPS注射后1 h可引起新生 大鼠明显的肺出血及炎性改变。肺组织TNF-α蛋白含量从LPS注射后1 h增加,2 h达高峰; TNF-α mRNA的表达从LPS注射后 0.5 h 明显增强(P<0.01),2 h达高峰;而I κBα于LPS注射后 1 h 起表达很快减弱,明显低于NS组(P<0.05),8 h表达最 弱(P<0.01)。结论：LPS可致新生大鼠肺出血。新生大鼠肺出血可 能与肺组织IκBα蛋白表达减弱,导致NF-κB活化、TNF-α基因转录上调及蛋白合成增加有关。     

牛初乳短链胰岛素样生长因子对脂蛋白(a)诱导的肾小球系膜细胞增生与转化生长因子-β1表达的影响

目的探讨牛初乳短链胰岛素样生长因子(Bct-IGF)对脂蛋白(a)[Lp(a)]诱导的肾小球系膜细胞(GMCs)增生与转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法将GMCs分为6组培养:对照组,Lp(a)组和不同浓度的Bct-IGF组,后5组培养时均加入5.0 mg.L-1Lp(a),后4组培养时分别加入100μg.L-1、200μg.L-1、400μg.L-1、800μg.L-1Bct-IGF。利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖率,末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)测定GMCs凋亡率;ELISA法测定培养上清TGF-β1水平,反转录-PCR法检测TGF-β1 mRNA表达。结果与400μg.L-1Bct-IGF组比较,Lp(a)组、100μg.L-1Bct-IGF组、200μg.L-1Bct-IGF组GMCs细胞增殖率均明显增高,差异有统计学意义(Pa<0.05);800μg.L-1Bct-IGF组较之降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。与400μg.L-1Bct-IGF组比较,LP(a)组、100μg.L-1Bct-IGF组、200μg.L-1Bct-IGF组GMCs细胞凋亡率均明显降低,差异有统计学意义(Pa<0.05);800μg.L-1Bct-IGF组较之增高,但差异无统计学意义(P>0.05)。Lp(a)组培养上清中TGF-β1水平显著高于400μg.L-1Bct-IGF组(P<0.01);Lp(a)组培养细胞TGF-β1 mRNA表达显著高于400μg.L-1Bct-IGF组(P<0.01)。结论 Lp(a)可以促进GMCs增生及TGF-β1的过表达,Bct-IGF可以抑制Lp(a)诱导的GMCs的异常增生,促进Lp(a)诱导的GMCs的凋亡。     

银杏叶提取物对大鼠肾小球系膜细胞中细胞外基质及β1整合素表达的影响

目的 观察银杏叶提取物(EGB)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)中细胞外基质(ECM)分泌及β1整合素( Itgβ1)表达的影响.方法 体外培养的大鼠GMC鉴定后第3～ 10代用于实验.实验分为5组:对照组,LPS组,EGB高、中、低剂量组.酶联免疫吸附试验法测定6h、12h和24h细胞培养上清液中ECM层黏连蛋白、纤维连接蛋白和Ⅳ型胶原蛋白水平;荧光半定量-PCR法检测Itgβ1mRNA表达的变化.结果 1.正常培养的大鼠GMC可分泌一定量的ECM,LPS组在各时间点分泌ECM均高于对照组(Pa＜0.01),而EGB各剂量组分泌ECM均低于LPS组(Pa＜0.01);2.正常培养的大鼠GMC可表达一定量Itgβ1mRNA,LPS组各时间点Itgβ1mRNA表达量均高于对照组(Pa＜0.01),EGB各剂量组Itgβ1mRNA表达量均低于LPS组(Pa＜0.01).结论 LPS可诱导GMCItgβ1mRNA表达及ECM分泌增加,EGB可抑制LPS诱导的GMC Itgβ1 mRNA表达及ECM分泌增加,EGB可通过抑制细胞因子及ECM分泌等分子生物学机制对肾脏起保护作用.     

谷氨酰胺对脓毒症幼年大鼠心肌基质金属蛋白酶及其组织抑制因子的影响

目的 探讨谷氨酰胺对脓毒症大鼠心肌胶原的保护机制。方法 选健康18日龄Wistar大鼠121只,每个时间点随机取11只按腹腔注射药物不同分为：（1）生理盐水对照组（0h）;（2）内毒素（LPS）;（3）谷氨酰胺治疗（Gln）组。后两组又分为2、4、6、24及72h时点。在各时点分离心脏,8只用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法测定基质金属蛋白酶组织抑制因子3（TIMP-3）mRNA表达,另3只用于石蜡切片,用免疫组化方法测定金属心肌基质蛋白酶3（MMP-3）及其TIMP-3,以及用原位杂交方法测定MMP-3mRNA表达。结果 （1）LPS组各时点MMP-3及其mRNA表达较0h组增强,在6h达高峰,到72h虽然有所下降仍高于对照组,P〈0．01;Gln组各时点MMP-3mRNA及其蛋白质表达也较0h组增强,但较LPS组各时点为弱,最高点在24h,P〈0．01;（2）LPS组各时点TIMP-3以及mRNA表达较0h组明显减弱,在6h最低,P〈0．01;Gln组各时点TIMP-3以及mRNA表达也较0h组减弱,但较LPS组为强,最低点在24h,P〈0．01。（3）脓毒症组比Gln组心脏,超微结构改变明显。结论 （1）在脓毒症时MMP-3及其mRNA表达增强,而TIMP-3及其mRNA表达受抑制。（2）谷氨酰胺可以减轻这种影响,而且使这种损伤作用时间向后推迟。     

姜黄素抑制脂多糖刺激的系膜细胞增殖及其白细胞介素1β和巨噬细胞趋化蛋白1基因的表达

目的　观察姜黄素对系膜细胞增殖以及对系膜细胞基质蛋白分泌的影响 ,并进一步探索姜黄素对系膜细胞白细胞介素 (IL 1β)和巨噬细胞趋化蛋白 (MCP 1)基因表达的改变。 方法　采用不同浓度姜黄素处理体外培养的人肾小球系膜细胞后 ,分别收集上清液及细胞 ,应用ELISA的方法测定上清液中胶原Ⅳ和Ⅲ的蛋白分泌量 ,MTT法测定系膜细胞活性 (吸光度值 ) ,RT PCR的方法测定系膜细胞IL 1β和MCP 1基因的相对表达量 ,以未加LPS及姜黄素和仅加LPS不加姜黄素作为对照组。结果　当姜黄素浓度大于或等于 6 2 5 μmol/L时 ,系膜细胞增殖明显受到抑制 (P <0 0 1) ,且表现为浓度依赖性。在基础状态下 ,系膜细胞分泌一定量的胶原Ⅳ和Ⅲ [(10± 9 13)ng/ml和 (2 9 5± 0 5 8)ng/ml],亦有MCP 1mRNA表达 [(42 1± 14 98) % ],但IL 1βmRNA几乎不表达 ;经LPS刺激后其胶原Ⅳ和Ⅲ分泌增加 [(138 75± 2 3 2 3)ng/ml和 (38 2 5± 5 38)ng/ml],同时IL 1β和MCP 1基因表达上调 [分别为 (16 91± 1 6 8) %和 (76 6± 6 5 9) % ],而姜黄素浓度为 4 μmol/L时即能明显抑制LPS刺激的系膜细胞胶原Ⅳ和Ⅲ的蛋白分泌 (P <0 0 5 ) ,且在高浓度时作用更为明显 ;同时姜黄素还能消除LPS上调系膜细胞IL 1β和MCP 1基因表达的作用 (P <     

高迁移率族蛋白1在新生儿败血症中的表达与机制

目的 探讨高迁移率族蛋白1（HMGB1）在新生儿败血症中的表达与机制。方法 选取62例新生儿败血症患儿为败血症组,66例局部感染新生儿为局部感染组,70例健康新生儿为健康对照组。检测三组新生儿血清中IL-6、IL-8、IL-17、IL-23、C反应蛋白（CRP）和降钙素原（PCT）的含量,外周血单个核细胞中HMGB1、Toll样受体4（TLR4）、核转录因子κB（NF-κB）mRNA及TLR4、NF-κB蛋白的表达。将健康新生儿的外周血单个核细胞分为对照组、HMGB1处理组、HMGB1+TAK-242（TLR4抑制剂）组、HMGB1+PDTC（NF-κB抑制剂）组,检测各组TLR4、NF-κB、IL-8 mRNA及TLR4、NF-κB蛋白的表达。将健康新生儿的外周血单个核细胞分为对照组、LPS处理组、LPS+甘草甜素（HMGB1抑制剂）组,检测HMGB1、TLR4、NF-κB、IL-8 mRNA及TLR4、NF-κB蛋白的表达。结果 败血症组患儿血清中IL-6、IL-8、IL-17、IL-23、CRP、PCT含量均显著高于局部感染组和健康对照组（P < 0.05）。败血症组患儿外周血单个核细胞中HMGB1、TLR4、NF-κBmRNA及TLR4、NF-κB蛋白的相对表达量均显著高于局部感染组和健康对照组（P < 0.05）。HMGB1可以显著诱导外周血单个核细胞高表达TLR4、NF-κB mRNA及其蛋白（P < 0.05）;使用TAK-242可抑制TLR4、NF-κBmRNA及其蛋白的高表达,并进而抑制IL-8 mRNA的表达（P < 0.05）;使用PDTC可抑制NF-κB mRNA及其蛋白的高表达,并进而抑制IL-8 mRNA的表达（P < 0.05）。LPS可显著诱导HMGB1 mRNA,以及TLR4、NF-κBmRNA及其蛋白的高表达,进而刺激IL-8 mRNA的表达（P < 0.05）;使用甘草甜素可抑制HMGB1 mRNA的高表达,抑制TLR4、NF-κB mRNA及其蛋白的高表达,进而降低IL-8 mRNA的高表达（P < 0.05）。结论 HMGB1可能通过激活TLR4/NF-κB信号通路诱导IL-8等炎症因子的高分泌在新生儿败血症的发病中起重要作用,HMGB1阻断剂甘草甜素可抑制TLR4/NF-κB信号通路的活化及炎症因子的分泌。     

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??WANG Yan*??YU Jie??LI Xiao-jing??ZHOU Min??HUANG Cheng??WANG Xue-mei.* Key Laboratory of Child Development and Disorders Cofounded by Chongqing and Ministry of Education ??Chongqing Key Laboratory of Pediatrics??Chongqing International Science and Technology Cooperation Center for Child Development and Disorders??Children’s Hospital of Chongqing Medical University??Chongqing 400014??China
Objective To explore the inhibition effect of Tanshinone IIA on the activation of nuclear factor-kappa B ??NF-κB?? and the expression of TNF-α??IL-8 in peripheral blood mononuclear cells ??PBMC?? of the acute phase of Kawasaki disease??KD?? and to explore the pathogenesis of KD and to explore the anti-inflammatory effect of Tanshinone IIA. Methods PBMCs were isolated and purified from peripheral blood of 20 KD children and 20 healthy children by density gradient centrifugation. In every sample PBMC were divided into five groups.The first group was cultured naturally?? the second one was stimulated by phorbol 12-myristate-13-acetate ??PMA????while other groups were stimulated by PMA and TanshinoneIIA which was treated with different concentrations.Each group was cultured in carbon dioxide incubator. Activation of NF-κB in PBMCs was determined by immunocytochemistry?? and ELISA was used to measure the concentration of TNF-α??IL-8 in supernatant. Results Under PMA culturing?? the activation of NF-κB was significantly higher than the blank group both in KD and control group??P??0.05???? in supernatant of the two?? the expression of TNF-α??IL-8 was significantly higher than the blank group??P??0.05??P??0.01??.Under PMA+ final concentration of 3mg / l Tan II A culturing?? the activation of NF-κB in KD and control group was significantly lower than the PMA group??P??0.05???? the expression of IL-8 in KD and control group and the expression of TNF-α in KD group were significantly lower than the PMA group??P??0.05????while the control group??concerning of TNF-α?? there was no significant decline??P??0.05??. Under PMA+ final concentration of 10mg / l Tan II A culturing?? the activation of NF-κB in KD and control group was significantly lower than the PMA group??P??0.05???? in supernatant of the KD and control group the expression of TNF-α and IL-8 was significantly lower too?? and the PMA+ final concentration of 10mg / l Tan II A group was lower than the PMA+ final concentration of 3mg / l Tan II A group??P??0.05?? both in the KD and control group. There was obvious positive correlation between the activation of NF-κB in PBMCs and the expression of TNF-α??IL-8 in the cultured supernatant??r = 0.817??r = 0.782??P??0.01????and there was also obvious positive correlation between the expression of TNF-α and IL-8??r = 0.709?? P??0.01??.Conclusion The activation of NF-κB is enhanced and the expression of TNF-α??IL-8 is increased in PBMC of the acute phase of Kawasaki disease??which may be involved in immune inflammatory response and may mediate immune vasacular injury. The anti-inflammatory mechanism of TanshinoneIIA in PBMC of the acute phase of Kawasaki disease may inhibit the activation of NF-κB and the subsequent expression of TNF-α and IL-8??and this anti-inflammatory effect has a dose-dependence     

大剂量免疫球蛋白对免疫性周围神经病治疗机理的实验研究

目的　探讨静脉注射免疫球蛋白 (IVIg)对空肠弯曲菌脂多糖 (CJLPS)诱导的免疫性周围神经病的治疗机理。方法　 ( 1)在CJLPS免疫大鼠后的不同时间 ,按 40 0mg/ (kg·d)注射IVIg。第3 5天取坐骨神经进行病理学检查 ,ELISA方法检测血清中抗CJLPS抗体滴度 ,免疫组化及原位杂交技术检测神经上特异性IgG及TNF αmRNA表达 ;( 2 )在CJLPS刺激下体外培养外周血单核细胞(PBMC) ,并分别在培养液中加入 1、2 5、5、10mg/mlIVIg。将上清分别注入同种大鼠的神经外膜下 ,7d后进行病理学检查 ;采用原位杂交技术检测培养PBMC的TNF αmRNA表达。结果　 ( 1)IVIg干预下 ,经CJLPS免疫大鼠神经原纤维病变率仅为 1 0 % ,未干预者达 15 0 % ,差异有显著性 (P <0 0 1)。未干预组血清中抗CJLPS特异性IgG滴度比干预组高 9倍。IVIg干预组神经上无明显特异性IgG及TNF αmRNA表达 ,而未用IVIg者表达强阳性 ;( 2 )CJLPS免疫的大鼠PBMC的TNF αmRNA ,IVIg干预组 ( 1 0 % )比IVIg未干预免疫组 ( 9 5% )减少 ;( 3 )CJLPS刺激下健康鼠PBMC体外培养 ,5mg/ml和 10mg/ml大剂量IVIg干预组的TNF αmRNA阳性表达率 ( 3 %和 2 % ) ,较 2 5mg/ml和 1mg/ml小剂量组阳性率 ( 13 %和 11 5% )为低 (P <0 0 1)。其上清液神经外膜下注射后 ,大剂量干     

视黄酸对小儿淋巴结B细胞发育的作用及其途径

目的探讨视黄酸(RA)对儿童淋巴结B细胞成熟分化的影响,及其与视黄酸受体基因表达水平变化的关系。方法本组24例,按年龄分为<1岁组、1～3岁组和～5岁组,每组8例。取患儿正常淋巴结分离细胞进行体外培养,分为RA组,RA+视黄酸受体α(RARα)拮抗剂(Ro415253)组(RA+Ro),脂多糖组(LPS),(LPS+RA)组和对照组。分别加入atRA、Ro415253、LPS。培养24、48h收集细胞。采用流式细胞术分析细胞表面标志,观察B细胞的成熟分化;RT荧光定量PCR测定视黄酸受体基因mRNA。结果<1岁组,RA组成熟B细胞的百分比明显高于对照组(24h:23%±5%vs17%±3%;48h:28%±6%vs22%±4%)(P均<0.05);LPS+RA组活化B细胞数明显高于LPS组(24h:82%±10%vs76%±8%;48h:83%±8%vs78%±10%)(P均<0.05)。同时,RARα基因表达水平也显著上调,而该受体拮抗剂可抑制RA的调节作用。1～3岁组淋巴结B细胞的成熟和活化呈现完全相同的调节变化,而～5岁组RA的这些调节作用不明显。结论RA能促进体外培养的淋巴结B细胞的分化发育和活化,该作用在3岁以下小儿明显。RARα基因的表达调节可能是介导RA作用的主要途径。     

IgA肾病患者单核细胞趋化蛋白-1含量及其意义

目的探讨IgA肾病患者血液、尿液中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的含量变化及其临床意义。方法选取20例8～18岁IgA肾病患者为实验组,20例健康体检者为对照组。用流式细胞仪检测两组血液中CD14+单核细胞的含量;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血液、尿液MCP-1的含量,并进行比较。结果 IgA肾病患者血液中CD14+单核细胞的含量低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。其尿液中MCP-1的含量较对照组明显增高,差异有统计学意义(P<0.01),而其血液MCP-1的含量与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 IgA肾病的发病与趋化因子MCP-1有关。监测尿液MCP-1的浓度可望作为临床上评价IgA肾病肾小管间质功能的一项无创伤性指标。