同时检测三种Myc基因的聚合酶链反应技术

目的建立同时检测Ｍｙｃ基因３个成员Ｌｍｙｃ、Ｎｍｙｃ及Ｃｍｙｃ异常扩增的简便方法。方法采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，用一对引物同时扩增Ｍｙｃ基因３个成员第２外显子中的高度保守区，扩增产物经非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及激光扫描。结果此法可以检测Ｍｙｃ基因家族中３个成员的扩增情况。经检测，正常组织细胞没有Ｍｙｃ基因扩增，３２例喉癌组织中４７％有Ｌｍｙｃ和Ｃｍｙｃ扩增，４１％有Ｎｍｙｃ扩增，与正常比差异均有显著意义（χ２＝６．７６４，７．６０９，５．９６１；Ｐ均＜００５）。Ｃｍｙｃ扩增率与用ＰＣＲ琼脂糖凝胶电泳检测的结果基本相符（χ２＝０．２５４，Ｐ＞００５）。结论此法对检测肿瘤组织中Ｍｙｃ基因３个成员提供了简易、特异、无放射污染，并且适于临床应用的、优于ＰＣＲ琼脂糖凝胶电泳的方法。     

RT—PCR一步法检测慢性粒细胞白血病bcr／abl融合基因

应用ＲＴ－ＰＣＲ一步法检测了４２例慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）患者的ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因，均显示ｂｃｒ／ａｂｌ基因阳性，其中２１例为１６８ｂｐ扩增带，１８例为９３ｂｐ扩增带，３例同时具有１６８ｂｐ和９３ｂｐ二条扩增带。ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因检测，对ＣＭＬ的诊断、治疗及预后判断均有重要意义。ＲＴ－ＰＣＲ一步法特异性好，敏感性高，简单快速，可节省试剂，值得推广应用。     

实验性大鼠急性心肌梗死心肌细胞中Bcl2与Cmyc的表达

目的：探讨实验性大鼠性心肌梗死中心肌细胞凋亡与Ｂｃｌ－２,Ｃ－ｍｙｃ表达的关系。方法：利用末端标记技术（ＴＵＮＥＬ）标记凋亡的心肌细胞,免疫组织化学法研究Ｂｃｌ－２与Ｃ－ｍｙｃ的表达。结果：ＴＵＮＥＬ法发现：大鼠急性心肌梗死模型中存在心肌细胞凋亡。冠状动脉结扎１小时后出现Ｂｃｌ－２蛋白阳性表达,３小时后逐渐下降,结扎６小时后出现Ｃ－ｍｙｃ阳性表达,２４小时内呈现上升趋势。相关分析表明：心肌细胞凋亡数与Ｂｃｌ－２表达呈负相关,与Ｃ－ｍｙｃ表达呈正相关。结论：急性心肌梗死时心肌细胞的凋亡与Ｂｃｌ－２、Ｃ－ｍｙｃ表达有密切关系,为进一步探讨急性心肌梗死的发病机制提供了一条新思路。     

凋亡相关基因Bcl-2和C-myc在阴茎癌组织中的表达

目的 探讨Ｂｃｌ－２和Ｃ－ｍｙｃ在阴茎癌组织中的表达及其意义。方法 应用免疫组化法（ＳＡＢＣ）对４９例阴茎癌组织和９例正常阴茎组织标本进行ｂｃｌ－２和ｃ－ｍｙｃ蛋白产物检测。结果 ４９例阴茎癌标本中２６例ｂｃｌ－２检测阳性（５３．１％）,２５例ｃ－ｍｙｃ检测阳性（５１％）,９例正常阴茎２例ｂｃｌ－２检测阳性（２２．２％）,Ｃ－ｍｙｃ未见阳性染色。Ｂｃｌ－２阳性率在高、中、低分化肿瘤中分别为８３．３     

苯乙酸对胶质瘤细胞C6的C-myc基因蛋白水平表达的抑制作用及意义

目的 观察诱导分化剂苯乙酸对胶质瘤细胞Ｃ６的增殖分化过程中癌基因Ｃ－ｍｙｃ的蛋白水平变化。方法 〖＾３Ｈ〗ＴｄＲ掺入法测细胞增殖率，免疫组化ＳＰ法检测Ｃ－ｍｙｃ基因蛋白水平的表达。结果 应用苯乙酸后，细胞ＣＰＭ降低；Ｃ－ｍｙｃ基因胞浆阳性表达显著下降。结论 苯乙酸对胶质瘤细胞存在剂量依赖性抑制作用机制可能为直接抑制胞浆中ＲＮＡ合成。这些作用与苯乙酸抑制Ｃ－ｍｙｃ基因对细胞恶性增殖的转录调节作用有关     

Ph^—／bcr^—慢性粒细胞白血病：是真的慢粒吗？

Ｐｈ＾－慢性粒细胞白血病文献已有较多阐述，而随着分子生物学技术的进展，仍在部分病例不能检测到Ｐｈ染色体，而ｂｃｒ基因重排即Ｐｈ＾－／ｂｃｒ＾－ＣＭＬ，药占全部ＣＭＬ的３％－６％，而在Ｐｈ＾－１ＣＭＬ中占５０％以上，对这些ｂｃｒ＾－ＣＭＬ病例的临床及实验研究，发现与Ｐｈ＾－ＣＭＬ病例的临床及实验研究，发现与Ｐｈ＾＋ＣＭＬ相比无论临床，血液学及生物学均有其自身的特点，发病年龄明显增大，白细胞明显增高者     

TCR独特型DNA疫苗诱导抗淋巴系统肿瘤免疫反应的实验研究

本研究观察ＴＣＲ独特型ＤＮＡ疫苗诱导ＢＡＬＢ／ｃ小鼠抗肿瘤免疫反应的情况。用ＣＥＭ淋巴瘤细胞系和ＢＡＬＢ／ｃ小鼠作模型,ＲＴ－ＰＣＲ扩增ＣＥＭ系特异性重排的ＴＣＲ Ｖβ基因,克隆到真核表达载体ｐｃＤＮＡ３中作为ＤＮＡ疫苗。用肌内注射法免疫小鼠,间接免疫荧光法检测小鼠抗体生成和用ＭＴＴ法测定ＣＴＬ活性以检测抗独特型的细胞免疫。结果发现,接种ＤＮＡ疫苗后第４周开始小鼠血清中即可检测到特异性抗独特型抗体     

不同rhIL—2浓度与CD3McAb诱导LAK细胞的协同作用

本研究表明，单纯使用不同浓度的人重组白细胞介－２（ｒｈＩＬ－２）培养诱导ＬＡＫ细胞，ＬＡＫ细胞的增殖与ｒｈＩＬ－２呈效应剂量关系，加入ＣＤ３－ＭｃＡｂ与不同浓度ｒｈＩＬ－２联合培养诱导ＬＡＫ细胞，效应剂量关系无明显差异。５０ｕ／ｍｌ ｒｈＩＬ２与ＣＤ３ＭｃＡｂ联合诱导ＬＡＫ细胞，其刺激指数及杀瘤活性非常显著高于单纯ｒｈＩＬ－２５００ｕ／ｍｌ诱导的ＬＡＫ细胞。ｒｈＩＬ－２与ＣＤ３ＭｃＡｂ联合诱导ＬＡ     

三种反义c-myc RNA对HL-60细胞分化的影响

ＨＬ 6 0是一种ｃ ｍｙｃ高表达的恶性肿瘤细胞。大量研究显示 ,当ＨＬ 6 0细胞被多种化学诱导剂诱导产生分化、凋亡及生长抑制时几乎都有ｃ ｍｙｃ表达的明显下降 ,甚至在自发产生分化的ＨＬ 6 0细胞中也有ｃ ｍｙｃ基因扩增消失的现象 ,提示ｃ ｍｙｃ表达与ＨＬ 6 0细胞分化之间有密切关系。我们将构建成功的三种反义ｃ ｍｙｃ逆转录病毒表达载体ａＭ1、ａＭ2和ａＭ3(分别载有ｃ ｍｙｃ的第 1,2和 3外显子反义片段 )导入ＨＬ 6 0细胞 ,并观察基因导入对靶细胞分化的影响。材料和方法1　材料　ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ、Ｇ418、硝基四氮…     

急性T淋巴细胞白血病中SIL－TAL－1融合基因的分子生物学研究

ＴＡＬ－１基因位于１号染色体短臂１ｐ３２。在急性Ｔ淋巴细胞白血病（Ｔ－ＡＬＬ）中，２５％的患者该基因５’端发生丢失（约１００ｋｂ），与ＳＩＬ基因５’端相融合，形成ＳｉＬ－ＴＡＬ－１融合基因。我们用筑巢式逆转录／多聚酶链反应（ｎｅｓｔｅｄＲＴ／ＰＣＲ）方法检测ＳＩＬ－ＴＡＬ－１融合基因转录本。在１７例Ｔ－ＡＬＬ中４例检测到该融合ｍＲＮＡ，并证明该转录本由ＳＩＬ基因第１外显子与ＴＡＬ－１基因第３外显子拼接而成。对该法的敏感度测定显示，可从１０￣６个正常细胞中检测出１个肿瘤细胞，并在２例缓解期标本中检测到微量残留白血病（ＭＲＤ）。此外，对３例有融合转录本患者的ＤＮＡ进行ＰＣＲ检测发现，其ＴＡＬ－１基因５’端丢失的位点相同，均为Ｔａｌ￣（ｄ１）重组。可见，ＴＡＬ－１基因的改变是Ｔ－ＡＬＬ一个有用的克隆标志，为其诊断和残留白血病检测提供了十分重要的依据。     

聚合酶链反应检测携带N－ras癌基因点突变的急性髓细胞白血病残留细胞的观察

我们建立了用于检测以Ｎ－ｒａｓ癌基因点突变为克隆标志的急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）患者骨髓内微量残留白血病细胞（ＭＲＬＣ）的聚合酶链反应和寡核苷酸探针杂交法。它可扩增出１０ｐｇ的微量ＤＮＡ，检测ＭＲＬＣ的敏感性是０．５％～０．１％，特异性强。临床筛选检测了１０例ＡＭＬ患者证实其中３例出现Ｎ－ｒａｓ基因第１３位点突变，随访其中２例，初步表明Ｎ－ｒａｓ点突变可作为白血病克隆标志，可用于检测ＭＲＬＣ。     

慢性粒细胞白血病异基因骨髓移植后残留白血病观察

目的：观察慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）异基因骨髓移植（ａｌｏ－ＢＭＴ）后残留白血病情况。方法：用逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术测定４６例经ａｌｏ－ＢＭＴ植活的ＣＭＬ患者骨髓细胞Ｍ－ｂｃｒ／ａｂｌｍＲＮＡ表达。结果：ａｌｏ－ＢＭＴ能使约７０％ＣＭＬ患者在移植后３个月ｂｃｒ／ａｂｌｍＲＮＡ转阴。其中４例患者在移植后＋１．５～２．０个月时为ｂｃｒ／ａｂｌｍＲＮＡ（＋），于＋３个月转为阴性；１例于＋９个月转阴。１例无病存活６年以上患者，其ｂｃｒ／ａｂｌｍＲＮＡ为阳性；另１例无病存活４年以上患者ｂｃｒ／ａｂｌｍＲＮＡ为阴性。结论：ＲＴ－ＰＣＲ是当前检测残留白血病最灵敏的方法，但不能忽视其局限性。     

应用筑巢式RT—PCR检测BCR—ABL融合基因的探讨

应用筑巢式ＲＴ－ＰＣＲ检测２０例ＣＭＬ血或／及骨髓中ＢＣＲ／ＡＢＬ基因的表达，证实较普通ＲＴ－ＰＣＲ其为一种快速、敏感而准确的检测方法。同时以ＡＢＬ基因为ＲＮＡ及ｃＤＮＡ质量对照，有效地排除了因标本质量欠佳而致的假阴性或因标本污染所致的假阳性。我们还发现在ＣＭＬ中Ｐ２１０ＢＣＲ／ＡＢＬ的表达接近为１００％，且与化疗无明显相关。     

人骨肉瘤中c—myc基因表达的研究

目的：为了研究ｃ－ｍｙｃ基因和国人骨从瘤的关系。方法：应用ＬＳＡＢ免疫组织化学染色技术检测了ｃ－ｍｙｃ蛋白在３０例人骨肉瘤和１５例正常骨组织中的表达。结果：与正常骨组织相比，骨肉瘤组织中ｃ－ｍｙｃ蛋白表达水平增高，其差异有显著意义（Ｐ〈０．０１），结论：提示ｃ－ｍｙｃ基因的异常导致ｃ－ｍｙｃ蛋白表达水平的增强和骨肉瘤的发生有关。     

应用荧光原位杂交技术筛选bcr基因探针及分析微小残留病

目的 定量检测慢性髓细胞白血病（ＣＭＬ）造血干细胞移植（ＨＳＣＴ）后ｂｃｒ基因重排。方法 应用荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）技术，从ＣＥＰＨ酵母人工染色体（ＹＡＣ）文库的３个ｂｃｒ相关候选克隆中筛选探针，并对７例造血干细胞移植后病人进行检测，同时进行细胞遗传学和逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）分析。     

外套细胞淋巴瘤细胞周期蛋白D1基因原位检测及病理形态学研究

外套细胞淋巴瘤 (ｍａｎｔｌｅｃｅｌｌｌｙｍｐｈｏｍａ,ＭＣＬ)是一种具有特殊病理形态学、特异免疫表型及特征性分子遗传学改变[ｔ(11;14) ]的Ｂ细胞淋巴瘤。 1994年 ,国际淋巴瘤研究组制定的淋巴组织肿瘤欧美修订分类方案已将ＭＣＬ作为一种独立的淋巴瘤亚型列出[1] 。 90年代初 ,有作者注意到ＭＣＬ存在细胞周期蛋白Ｄ1(ＣｙｃｌｉｎＤ1)的过度表达 ,并认为是ＭＣＬ特征性的分子遗传学改变[2 ] 。我们用ＦＩＴＣ标记的ＣｙｃｌｉｎＤ1基因组探针 ,检测来自于一例ＭＣＬ患者的肿瘤组织切片中Ｃｙ ｃｌｉｎＤ1基因拷贝 ,并对ＭＣＬ的组织…     

p16、CyclinD1及nm23在非小细胞肺癌中的表达

目的 研究非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）组织中ｐ１６、Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１及ｎｍ２３基因蛋白的表达和意义。方法 应用免疫组化ＳＰ方法检测６４例ＮＳＣＬＣ中ｐ１６、Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１及ｎｍ２３蛋白的表达。结果 ｐ１６、Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１及ｎｍ２３在ＮＳＣＬＣ中的表达率分别为４２．２％、６５．６％、５３．１％;ｐ１６蛋白阳性表达率与ＮＳＣＬＣ的分化程度和患者术后生存期呈正相关（Ｐ〈０．０５）;ｐ１６、ｎｍ２     

慢性特发性血小板减少性紫癜患者骨髓巨核细胞中c－myc和c－sis的表达

应用原位杂交的方法，结合血小板释放产物β－ＴＧ和ＰＦ＿４测定及巨核祖细胞体外培养，对３３例慢性ＩＴＰ患者骨髓巨核细胞中原癌基因ｃ－ｍｙｃ和ｃ－ｓｉｓ的表达及其与β－ＴＧ、ＰＦ＿４和ＣＦＵ－ＭＫ的关系进行了研究。发现，巨核细胞ｃ－ｓｉｓ表达较对照组明显降低，ｃ－ｍｙｃ表达无显著差异。ｃ－ｓｉｓ表达与β－ＴＧ和ＰＦ＿４含量呈负相关。ｃ－ｍｙｃ表达与ＣＦＵ－ＭＫ呈正相关。ＭＫ数增高组的ＣＦＵ－ＭＫ正常，ｃ－ｍｙｃ表达增高，而ＭＫ数正常组的ｃ－ｍｙｃ、ｃ－ｓｉｓ表达和ＣＦＵ－ＭＫ均降低，提示多数ＩＴＰ患者骨髓巨核细胞增生，伴有成熟障碍，少数患者巨核细胞的增殖能力降低。     

胆固醇酯转运蛋白基因15显子D442G突变的检测

应用聚合酶链反应－限制性片段长度多态性分析（ＰＣＲ－ＲＥＬＰ）的方法检测１１０例脑动脉粥样硬化患者胆固醇酯转运蛋白（ＣＥＴＰ）基因１５外显子Ｄ４２Ｇ错义突变。首先用聚合酶链反应行异性扩增包含人ＣＥＴＰ基因１５外显子第１５０６位碱基的基因序列，扩增产和用限制性内切酶ＭｓｐⅠ酶切，聚丙烯酰胺凝胶电泳后分析结果。１１０例脑动脉粥样硬化患者中发现４例杂俣突变。突变率３．６％，与对照组４％比较无明显差异。该     

人骨肉瘤中c-myc基因表达的研究

目的：为了研究ｃ－ｍｙｃ基因和国人骨肉瘤的关系。方法：应用ＬＳＡＢ免疫组织化学染色技术检测了ｃ－ｍｙｃ蛋白在３０例人骨肉瘤和１５例正常骨组织中的表达。结果：与正常骨组织相比，骨肉瘤组织中ｃ－ｍｙｃ蛋白表达水平增高，其差异有显著意义（Ｐ＜００１）。结论：提示ｃ－ｍｙｃ基因的异常导致ｃ－ｍｙｃ蛋白表达水平的增强和骨肉瘤的发生有关。