小剂量红霉素对香烟烟雾诱导肺气肿中缺氧诱导因子-1α的抑制作用及其机制

目的探索小剂量红霉素对慢性阻塞性肺疾病(Chronic obstructive pulmonary disease,COPD)的抗炎作用及其潜在机制。方法将实验大鼠(雄性Wistar大鼠)随机分为3组,每组8只:正常对照组(C组),香烟烟雾模型组(CS组),红霉素+香烟烟雾模型组(ERY+CS组)。通过香烟烟雾诱导制备大鼠肺气肿模型,同时通过灌胃给予大鼠小剂量红霉素治疗。对比三组肺病理组织形态学改变,肺功能,肺泡灌洗液(BALF)中炎症介质(TNF-α及IL-8)表达以及肺组织缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达。结果与C组相比,CS组肺平均内衬间隔(MLI)及平均肺泡数(MAN)均明显增加(P<0.05);与CS组相比,ERY+CS组MLI及MAN均明显好转(P<0.05)。与C组相比,CS组大鼠BALF中炎症介质TNF-α及IL-8表达均明显增高(P<0.01)。经红霉素干预后,ERY+CS组TNF-α及IL-8表达有所降低(P<0.01);香烟烟雾暴露后,CS组大鼠肺功能呈现明显的阻塞性通气功能障碍,FEV0.3及FEV0.3/FVC均降低(P<0.01)。经红霉素干预治疗后,ERY+CS组大鼠肺功能明显改善(P<0.01);免疫组化及Western blot结果表明,香烟烟雾诱导后,CS组大鼠肺气肿组织HIF-α蛋白表达均明显增高(P<0.01);红霉素干预后,ERY+CS组香烟烟雾诱导的HIF-α增高较前降低(P<0.05)。结论小剂量红霉素可通过调控抑制肺部HIF-1α的表达,从而发挥对香烟烟雾诱导的肺气肿的保护性作用,进而改善患者的肺部炎症反应,改善肺功能。     

miR-429对烧伤小鼠肺组织炎性反应和氧化应激的影响

目的 探讨miR-429对烧伤小鼠肺组织炎性反应和氧化应激的影响及可能的机制。方法 24只C57BL/6小鼠,按随机数表法分为对照组、模型组、阴性对照组和miR-429抑制剂组,每组6只。除对照组外,其他3组小鼠通过热水烫伤法构建小鼠烧伤模型。其中,miR-429抑制剂组和阴性对照组小鼠通过尾静脉分别注射等量的miR-429抑制剂miR-429 antagomir以及阴性对照miR-NC;对照组和模型组小鼠给予等体积0.9%氯化钠溶液。qRT-PCR实验检测肺组织中miR-429的表达水平;ELISA法检测肺组织中肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)水平;HE染色评估肺组织病理变化;TUNEL法检测肺组织细胞凋亡情况;Western blotting检测肺组织中Nrf2和HO-1蛋白表达情况。结果 与对照组小鼠比较,模型组小鼠肺泡壁变宽,并出现明显的组织水肿和炎症细胞浸润;肺组织中凋亡细胞数量明显增多,且miR-429表达、TNF-α、IL...     

ω-3鱼油脂肪乳剂通过醛类应激激活Nrf2/HO-1信号通路减轻肺缺血再灌注损伤

目的 研究ω-3鱼油脂肪乳剂(ω-3FOFE)通过醛类应激激活抗氧化通路,探讨其对大鼠肺缺血再灌注的保护作用。方法 选择24只SD雄性大鼠,随机分成4组(n=6):NS5组(生理盐水注射5 d)、FO5组(ω-3FOFE注射5 d)、FO3组(ω-3FOFE注射3 d)、FO1组(ω-3FOFE注射1 d)。确定ω-3FOFE预处理通过醛类应激激活抗氧化信号通路时间。实验结束取大鼠肺组织,检测肺组织丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量及Nrf2和HO-1抗氧化信号通路蛋白表达。再另外选择18只大鼠,随机分成3组(n=6):Sham组(假手术组)、I/R组(缺血再灌注组)、FO组(ω-3FOFE预处理模型+缺血再灌注组)。测定各组肺组织湿干重比(W/D)、肺组织病理改变、细胞凋亡情况、GSH含量、Nrf2和HO-1蛋白表达。结果 与NS5组、FO3组及FO1组相比,FO5组的MDA含量、GSH含量、Nrf2和HO-1蛋白表达均显著增加(P<0.05)。与Sham组相比,I/R组肺组织W/D值明显升高(P<0.05),肺泡结构明显破坏,细胞凋亡显著增加,肺组织GSH含量、Nrf2和HO-1蛋白表达均显著下降(P<0.05);与I/R组相比,FO组肺组织W/D值明显下降(P<0.05),肺泡结构显著改善,细胞凋亡显著降低;肺组织GSH含量、Nrf2和HO-1蛋白表达均显著增加(P<0.05)。结论 ω-3FOFE通过醛类应激激活抗氧化信号通路从而减轻了肺缺血再灌注损伤。     

乌司他丁通过Nrf2/HO-1抗氧化途径在OVA诱导的支气管哮喘小鼠中发挥治疗作用

目的课题组之前的研究已证实在OVA诱导的哮喘小鼠模型中,乌司他丁通过抑制ROS的产生、诱导抗氧化酶的表达,起到治疗哮喘的作用,但具体机制尚不清晰;此研究将以Nrf2/HO-1这一氧化应激的关键通路为切入点,深入探讨乌司他丁抗氧化作用的潜在机制。方法建立OVA诱导的小鼠哮喘模型,腹腔注射乌司他丁(100 k U·kg-1·d-1)进行治疗,对照组用PBS(p H 7.4)代替;检测气道高反应性;ELISA法检测小鼠BALF中IL-4、IFN-γ、总Ig E及特异性Ig E的表达水平;双氢罗丹明(DHR)-123方法检测小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞中ROS含量;检测小鼠肺组织中蛋白羰基含量(protein carbonyl)和丙二醛(MDA)水平;抗氧化酶试剂盒检测小鼠BALF中的抗氧化酶;Western blot及Real-time PCR检测小鼠肺组织中HO-1在蛋白和基因的表达水平;Western blot、IF及EMSA检测Nrf2核转移及结合活性。结果乌司他丁治疗组明显降低气道高反应;降低BALF中IL-4、特异性Ig E及ROS的表达水平,降低小鼠肺组织Protein carbonyl含量和MDA水平,提高IFN-γ、SOD、GSH和TAOC等抗氧化酶的表达水平,其治疗作用可被HO-1抑制剂Znpp逆转;乌司他丁诱导小鼠肺组织中的HO-1在蛋白水平的表达呈明显剂量和时间依赖性;乌司他丁诱导Nrf2的核转移,增强Nrf2的结合活性并提高HO-1基因水平表达。结论乌司他丁在OVA诱导的哮喘小鼠模型发挥抗氧化治疗作用,其作用机制可能是通过Nrf2/ARE途径诱导HO-1的表达实现。     

慢性阻塞性肺疾病大鼠支气管上皮MRP1 mRNA及蛋白水平变化及化痰降气方逆转的作用

目的:研究慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠支气管上皮MRP1mRNA及蛋白水平变化及化痰降气方逆转的作用。方法:采用烟熏复合木瓜蛋白酶雾化吸入法制备COPD大鼠模型,将造模后的大鼠随机分为治疗组和模型组,另以正常大鼠作为对照组。治疗组予以化痰降气方(生药5.8g/kg)i.g.治疗给药,2次/d,连续15d后,分别采用RT-PCR、Western blot技术检测各组大鼠肺支气管上皮MRP1mRNA及蛋白水平的表达。结果:化痰降气方治疗能明显改善COPD模型大鼠的肺功能;COPD模型组MRP1mRNA及蛋白水平较正常对照组显著降低(P<0.01);与COPD模型组比较,化痰降气方治疗组MRP1mRNA及蛋白水平显著升高(P<0.01)。结论:化痰降气方能逆转COPD状态下MRP1mRNA及蛋白水平表达的降低,这可能是其治疗COPD作用机制之一。     

人参皂苷Rg1对大鼠阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征引起的肺损伤及Nrf2/HO-1信号通路的影响

目的探究人参皂苷Rg1对大鼠阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)引起的肺损伤及Nrf2/HO-1信号通路的影响及机制。方法60只SD大鼠分为对照组(control组)、慢性间歇性缺氧组(CIH组)、人参皂苷Rg1低剂量组(CIH+GRg1-L)和人参皂苷Rg1高剂量组(CIH+GRg1-H),每组15只。使用低氧舱建立CIH模型,并对CIH模型进行鉴定;动物肺功能分析系统测定各组大鼠的肺功能;试剂盒检测各组大鼠肺组织中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性;ELISA检测各组大鼠肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6)的含量;HE染色观察各组大鼠肺组织的病理变化;qRT-PCR和Western blot检测各组大鼠肺组织中环氧合酶-2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、核转录因子2(Nrf2)和血红素加氧酶-1(HO-1)的表达。结果造模组大鼠的生理特征接近OSAHS病理生理特点,因此CIH动物模型建立成功。CIH组大鼠的深吸气量(IC)、最大呼气流速(PEF)、第0.3秒用力呼气后的容积(FEV0.3)及每分钟呼气量(VE)明显降低(P<0.01),而人参皂苷Rg1使大鼠的IC、PEF、FEV0.3及VE升高(P<0.01);CIH组大鼠肺组织中MDA的含量明显增加(P<0.01),SOD的活性和GSH的含量明显降低(P<0.001,P<0.01),TNF-α、IL-1β和IL-6的含量显著增加(P<0.01),人参皂苷Rg1使大鼠肺组织中MDA的含量降低(P<0.05),SOD活性和GSH含量升高(P<0.05),TNF-α、IL-1β和IL-6的含量降低(P<0.05);CIH组大鼠肺组织严重受损,肺泡中可见炎性细胞浸润,而人参皂苷Rg1使大鼠肺组织受损减轻,炎性细胞浸润减少;CIH组大鼠肺组织中COX-2、iNOS、Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白表达水平显著上调(P<0.001),人参皂苷Rg1使大鼠肺组织中COX-2、iNOS、Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白表达水平下调(P<0.05)。结论人参皂苷Rg1能改善大鼠肺功能,减轻氧化应激反应和炎症因子的表达,下调Nrf2和HO-1蛋白的表达。     

叔丁基对苯二酚对糖尿病小鼠肾脏氧化应激损伤及Nrf2蛋白表达的影响

目的研究叔丁基对苯二酚(tBHQ)对早期糖尿病小鼠肾脏Nrf2-ARE信号通路表达及氧化应激的影响,探讨tBHQ保护肾脏的部分机制。方法CD-1♂小鼠随机分为3组,对照组(C组)、糖尿病组(DM组)、tBHQ干预组(DM+tBHQ组)。腹腔注射STZ诱发糖尿病小鼠模型,DM+tBHQ组在成模3d后给予添加了1%tBHQ(W/W)的饲料喂养,4wk后检测3组动物的血糖、肾功能、24h尿白蛋白定量、血清及肾皮质丙二醛(MDA)含量。免疫组化和Westernblot检测Nrf2,HO-1蛋白在肾组织的定位和表达水平。结果①DM组小鼠血尿素氮、24h尿白蛋白定量、肾重/体重,血清及肾皮质MDA含量较C组升高。tBHQ干预组上述指标均降低。②与DM组相比,tBHQ干预组肾皮质总蛋白Nrf2、HO-1及核蛋白Nrf2表达水平明显增高;免疫组织化学检测显示Nrf2于肾小管及肾小球的胞质及胞核内均有表达;HO-1主要表达于肾小管上皮细胞胞质中。结论tBHQ减轻了早期糖尿病小鼠肾脏的氧化应激损伤,其作用机制可能是部分通过激活Nrf2-ARE信号通路进而增强抗氧化蛋白HO-1的表达而实现的。     

睡莲酚对小鼠酒精性肝损伤的保护作用

目的 研究睡莲花中标识性成分睡莲酚对急性酒精性肝损伤(ALI)的保护作用。方法 72只雄性昆明种小鼠随机分为：正常组、模型组、阳性药联苯双酯组(DDB)、睡莲酚低、中、高剂量组(25、50、100 mg·kg^-1),每组12只。根据分组给药,每天灌胃给药1次,每次给药2 h后,除正常组外,其余各组小鼠灌胃给予52°白酒(13 mL·kg^-1),连续7 d。16 h后取血并收集肝组织,HE染色观察小鼠肝脏病理情况,检测小鼠血清ALT、AST、TG和TC含量,测定小鼠肝组织MDA、GSH、SOD、TNF-α、IL-6、IL-1β及TG水平,RT-PCR检测Keap1、Nrf2、NQO1的mRNA表达水平。结果 与正常组相比,模型组血清AST、ALT活性、肝组织MDA、TG、TC水平增高(P<0.01),GSH和SOD活性显著降低(P<0.01)、TNF-α、IL-1β、IL-6水平显著增加(P<0.01),Nrf2 mRNA、NQO1 mRNA表达降低(P<0.01),肝组织出现明显的空泡和细胞坏死。与模型组相比,睡莲酚给...     

Nrf2在丙泊酚抑制内毒素性急性肺损伤中的作用

目的 观察丙泊酚对内毒素诱发的急性肺损伤的保护作用及与肺上皮细胞核内Nrf2表达的关系.方法 腹腔注射内毒素建立小鼠急性肺损伤模型,实验动物分为对照组、内毒素组、内毒素+丙泊酚组、内毒素+脂肪乳剂组和丙泊酚组,分别检测小鼠生存率、肺湿重/干重比、支气管肺泡灌洗液蛋白浓度和白细胞计数、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量、肺上皮细胞核内Nrf2水平.结果 腹腔注射内毒素导致小鼠生存率降低,肺湿重/干重比、支气管肺泡灌洗液蛋白浓度和白细胞计数增加,SOD活性降低和MDA含量增加,丙泊酚能明显提高小鼠肺上皮细胞核内Nrf2表达.结论 丙泊酚对内毒素诱发的急性肺损伤具有保护作用,这可能与丙泊酚激活肺上皮细胞核内Nrf2表达有关.     

基于TGF-β1/Smads信号通路观察异丙托溴铵雾化液对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺功能、气道重塑的影响

目的：异丙托溴铵雾化液对慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease, COPD）大鼠肺功能、气道重塑的影响以及其对于转化生长因子β1(transforming?growth?factor-β1，TGF-β1)/母体抗生物皮肤生长因子同源物2/3（mothers?against?decapentaplegic?homolog 2/3，Smad2/3）通路信号通路的调控机制。方法：将SD大鼠按照随机数字表法将大鼠分为正常组、模型组、实验组、对照组，每组15只；其中模型组、实验组、对照组中的大鼠以泰山茉莉香烟烟熏法复制COPD大鼠模型：将大鼠放入烟熏箱内，点燃15只泰山茉莉香烟，持续1h，每日3次，连续90天，正常组大鼠不进行烟熏操作，常规喂养。成功复制COPD模型后，实验组大鼠每日在自制微小动物密闭箱内以雾化器吸入用异丙托溴铵溶液1mg/4mL，每日一次，每次2h，对照组大鼠皮下注射TGF-β1 抑制剂LY2157299（20 mg/kg），每日一次，正常组、模型组大鼠分别皮下注射等剂量的生理盐水。在给药28天后，使用小微动物肺功能测定仪依次检测各组大鼠的肺功能。TUNEL染色各组大鼠肺组织中的细胞凋亡，免疫荧光检测各组大鼠肺组织中气道重塑标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）的表达，Western blot检测各组大鼠肺组织中TGF-β1、p-Smad2/3的表达。结果：与正常组相比，模型组、实验组、对照组大鼠的呼吸频率、肺组织的细胞凋亡率、α-SMA的荧光强度、TGF-β1、p-Smad2/3的表达出现了明显升高，大鼠的通气量和潮气量出现了明显下降（均P＜0.05），与模型组相比，实验组和对照组大鼠的呼吸频率、肺组织的细胞凋亡率、α-SMA的荧光强度、TGF-β1、p-Smad2/3的表达出现了明显下降，大鼠的通气量和潮气量出现了明显升高（均P＜0.05）。结论：异丙托溴铵能抑制肺组织的细胞凋亡，缓解COPD大鼠的气道重塑，改善其肺功能，这可能与抑制TGF-β1/Smads通路有关。