β-catenin、APC表达异常在肾上腺皮质腺瘤形成中的作用

目的 观察β-连环素(β-catenin)、APe在肾上腺皮质腺瘤(ACA)发生中的作用.方法 运用免疫组织化学SP法检测36例ACA,10例周围正常肾上腺组织中β-catenin及APC蛋白表达.聚合酶链反应(PCR)-DNA双向测序法分析ACA及正常组织中β-catenin基因外显子3突变.结果 免疫组织化学染色显示正常组织β-catenin为细胞膜着色,无胞质或胞核内染色.ACA中12例存在胞质或胞核内β-catenin异常染色,异位表达率为33.3%(12/36).APC在正常组织中表现为胞质着色(10/10),阳性表达率为100.O%.36例ACA中29例为胞质内正常染色,7例APC胞质内不同程度表达缺失,阳性表达率为80.5%(29/36).PCR-DNA双向测序法检测正常组织中未见β-catenin基因外显子3突变(0/10),ACA中可见5例存在β-catenin外显子3点突变,突变率为13.8%(5/36),ACA细胞中β-catenin、APC的异常表达及β-catenin外显子3突变与正常组织比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 β-catenin外显子3突变及β-catenin、APC蛋白的异常表达在ACA形成过程中是一种频发事件.     

Axin、β-catenin基因在前列腺癌组织中的表达及意义

目的 探讨Wnt信号途径中Axin、β-catenin mRNA在前列腺癌组织中的表达情况,以及与癌肿病理分级的关系.方法 常规采集90例符合实验条件的前列腺癌及前列腺增生患者病理标本以及临床相关资料,采用荧光定量PCR检测方法 检测Axin,β-catenin mRNA在肿瘤和增生组织中表达情况.采用统计学方法 分析两种基因在癌肿组织及增生组织表达的差异以及与肿瘤病理分级的相关性.结果 荧光定量PCR检测发现:Axin、β-catenin的mRNA水平在前列腺癌和增生前列腺组织中表达差异明显.并且β-catenin mRNA的表达与癌肿病理分级密切相关.结论 Axin、β-catenin在前列腺癌组织中表达的差异可能是前列腺癌发生的原因之一.并且进一步证明了Wnt信号途径异常和肿瘤发生密切相关.     

Wnt信号通路为靶点的肿瘤治疗新进展

Wnt信号传导通路与肿瘤的关系一直都是近年来肿瘤研究的热点,Wnt信号通路包含许多信号成员蛋白,其中任何一个成员蛋白的突变或异常均可激活Wnt信号通路引起细胞异常增殖而导致肿瘤的发生。为此,针对Wnt信号通路不同基因靶点的高特异性基因药物开发以及肿瘤的分子诊断也相继出现。目前,Wnt信号通路为靶点的肿瘤基因治疗包括细胞膜水平、胞内通路成员蛋白水平、β-catenin水平和核内TCF/LEFs-β-catenin复合体水平。     

河蚌提取物葡聚糖对软骨细胞Wnt通路的调控作用研究

目的 ：探讨河蚌肉提取物葡聚糖HBP-A（anodonta glucan HBP-A）对体外软骨细胞Wnt通路的调控作用。方法：体外培养大鼠软骨细胞,添加IL-1β（10 ng/ml）诱导分化,分为空白组,IL-1β组,IL-1β＋IWP-2（5μM,Wnt通路抑制剂）组,IL-1β＋HBP-A（0.3 mg/ml）组,IL-1β＋IWP-2＋HBP-A共5组培养,提取各组细胞RNA和蛋白,采用Rt-PCR检测各组细胞Wnt-3a、β-catenin（24、48、72 h）及MMP-13（72 h）的基因表达;采用Western-blot检测β-catenin、MMP-13、Sox-9和Coll-Ⅱ蛋白的表达水平（48 h）。结果：细胞经IL-1β诱导分化,Wnt-3a基因表达升高,β-catenin以及MMP-13基因和蛋白表达升高,Sox-9和Coll-Ⅱ蛋白表达下调。添加HBP-A干预可以抑制IL-1β诱导下软骨细胞Wnt-3a基因的高表达、β-catenin以及MMP-13基因和蛋白的高表达,上调Sox-9和Ⅱ型胶原蛋白的表达。IWP-2和HBP-A合用时,Wnt-3a、β-catenin基因以及β-catenin蛋白表达最低,Sox-9蛋白表达最高。结论：HBP-A可通过降低Wnt/β-catenin信号通路表达,延缓软骨细胞分化,并且可与Wnt抑制剂协同调节Wnt-3a、β-catenin和Sox-9因子的表达。     

Yes相关蛋白通过Wnt/β-catenin信号通路调控软骨细胞SOX9表达的实验研究

目的 研究Yes相关蛋白（YAP）通过Wnt/β-catenin信号通路调控软骨细胞SOX9表达的机制。 方法 用siRNA分别沉默YAP基因和LATS1基因来调控YAP的活性,通过Real-time PCR 检测软骨特异性基因和Wnt/β-catenin信号通路下游基因的表达;通过Western Blot检测GSK3β的磷酸化水平、活化β-catenin的蛋白水平以及SOX9的蛋白水平;并通过阿利新蓝染色检测软骨细胞外基质的分泌情况。用siRNA沉默YAP基因后,再用氯化锂干预细胞,通过Western Blot检测SOX9的表达和GSK3β的磷酸化水平。 结果 沉默YAP基因后,磷酸化GSK3β和活化β-catenin的蛋白水平减少,c-Myc和Nanog基因表达减少,SOX9、COL2和Aggrecan基因表达升高,并且软骨细胞分泌基质增多;沉默LATS1基因后,磷酸化GSK3β和活化β-catenin的蛋白水平增加,c-Myc和Nanog基因表达增加,SOX9、COL2和Aggrecan基因表达减少,并且软骨细胞分泌基质减少。此外,氯化锂可以阻断沉默YAP引起的SOX9表达上调。 结论 YAP通过Wnt/β-catenin信号通路调控软骨细胞SOX9的表达。     

狼疮性肾炎小鼠肾脏组织中Wnt3a、β-catenin基因的异常表达

目的:探索Wnt3a、β-catenin基因在系统性红斑狼疮小鼠(MRL/lpr小鼠)狼疮性肾炎肾脏组织中的表达。方法:购买6周龄MRL/lpr小鼠15只作为模型组,C57BL/6雌性小鼠15只作为对照组,两组小鼠16周龄后,用代谢笼法收集小鼠24 h尿,在麻醉下,摘眼处死小鼠,留取小鼠血,用酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)小鼠血液中抗核抗体(antinuclear antibody,ANA)、抗双链DNA抗体(anti-double stranded DNA,ds DNA)浓度,应用生化仪测定小鼠24尿蛋白。取肾脏组织行HE染色、PASM染色、Masson染色,观察两组小鼠肾脏组织病理改变,免疫荧光法观察两组小鼠肾脏组织中免疫复合物Ig G的沉积。运用实时定量PCR(quantitative real-time PCR,q PCR)技术测定模型组和对照组小鼠肾脏组织中Wnt3a及β-catenin基因的表达情况。结果:与对照组比较,模型组小鼠肾脏组织中肾小球系膜细胞增生、炎症细胞浸润,肾小球中可见免疫复合物Ig G沉积,Wnt3a及β-catenin基因表达升高(P 0. 05)。结论:狼疮肾炎小鼠组织中Wnt/β-catenin信号通路可能处于异常活化状态,Wnt/β-catenin信号通路可能参与了狼疮肾炎的发生发展。     

BRAFV600E突变蛋白及β-catenin、cyclin D1在cN0期甲状腺微小乳头状癌中的表达及意义

背景与目的 虽然甲状腺微小乳头状癌（PTMC）进展缓慢,但仍常伴有颈部淋巴结转移。有研究提示,BRAF^V600E突变及Wnt/β-catenin信号通路中相关蛋白表达异常,可能与PTMC发生发展、颈部淋巴结转移有关。因此,本研究进一步探讨临床淋巴结阴性（cN0）PTMC病变组织中BRAF^V600E突变及β-catenin、cyclin D1表达及意义。方法 收集2018年3月—2021年9月120例确诊为cN0期PTMC患者的手术标本及临床病理资料,用免疫组化法检测BRAFV600E突变及β-catenin、cyclin D1蛋白在标本中的表达,并分析其与患者临床病理特征的关系。结果 BRAFV600E突变蛋白、β-catenin、cyclin D1蛋白表达阳性率在PTMC组织中阳性表达均明显高于癌旁组织（70% vs. 31.7%、35.8% vs. 20.8%、57.5% vs. 34.2%,均P<0.05）。cyclin D1蛋白阳性表达与肿瘤直径有关,BRAFV600E突变蛋白阳性表达与病灶数目有关,BRAFV600E、β-catenin、cyclin D1蛋白阳性表达均与中央区淋巴结转移有关（均P<0.05）。结论 cN0期PTMC组织中BRAFV600E突变及β-catenin、cyclin D1蛋白表达明显增强,它们的表达可能是PTMC进展及中央区淋巴结转移的重要原因。     

β-连环素基因在乳腺增生及癌组织中表达和突变的研究

目的检测β-连环素基因在乳腺增生及癌组织中的表达和突变情况,探讨其在乳腺癌发生中的作用。方法应用免疫组织化学染色法和PCR-SSCP检测42例乳腺癌组织、15例乳腺单纯性增生组织及15例乳腺非典型增生组织中β-连环素基因的表达及突变情况。结果乳腺单纯性增生组织中β-连环素表达正常,异常表达率为0。乳腺非典型增生组织和乳腺癌组织中β-连环素表达出现异质性,异常表达率分别为26.7%(4/15)和59.5%(25/42),明显高于单纯性增生组织(P<0.05),且前两者间差异亦有统计学意义(P<0.05)。乳腺单纯性增生、非典型增生和癌组织中均未发现β-连环素基因外显子3的突变。结论β-连环素异常表达在人乳腺癌发生过程中起到重要作用,但β-连环素基因突变并不是该蛋白异常表达的原因,需要进一步研究该蛋白异常表达的机理。     

乳腺癌中β-catenin基因突变和表达的研究

摘要：目的 探讨β-catenin（β-cat）基因在乳腺癌发生中的作用。方法 应用PCR SSCP和免疫组织化学法检测42例乳腺癌组织中的β cat基因突变及表达。结果 乳腺癌组织中β-cat异常表达率为59.5%(25／42)；但在其中未发现β cat基因突变。结论 β-cat异常表达在人乳腺癌发生过程中可能起重要作用，但该蛋白异常表达的原因并非是β cat基因突变。     

Pygo2在经典Wnt信号通路中的作用及其研究进展

Wnt信号通路在正常组织发育以及肿瘤形成中起着重要作用.经典wnt信号通路通过促进关键蛋白β-catenin进入细胞核,与TCF/LEF结合,从而激活靶基因转录.Pygo是Wnt信号通路中新发现的成员,通过BCL9/Lgs与β-catenin结合,从而促进靶基因的转录.Pygo2的异常表达,与发育异常、肿瘤的形成有着紧密的联系.Pygo2在经典Wnt信号通路中的作用机制模式已经确定,但是与染色质重塑方面的机制有待进一步研究.最近研究发现Pygo2参与H3K56Ac,从而促进基因的表达.     

青娥丸调控Wnt1/β-catenin信号通路治疗糖尿病骨质疏松

目的 探究青娥丸对糖尿病骨质疏松（diabetic osteoporosis，DOP）小鼠模型Wnt/β-catenin通路的影响。方法 采用高糖高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲菌素建立DOP小鼠模型，对小鼠进行药物干预，分为空白组、模型组、青娥丸低、中、高剂量组及阿仑膦酸钠组，进行一般状态观察，股骨组织进行HE染色，验证造模成功情况。生化检测各组小鼠碱性磷酸酶（ALP）、尿素氮（BUN）、天冬氨酸转氨酶（AST）的水平，免疫组化检测股骨Wnt/β-catenin信号传导通路中相关蛋白Wnt1、β-catenin、Runx2表达水平，HE染色观察各组股骨组织细胞形态，qPCR检测股骨组织中GSK-3β、低密度脂蛋白受体相关基因5(LRP5)、COL1A1 mRNA水平。结果 与对照组相比，模型组小鼠骨小梁间隔增大，骨小梁之间连接减少，小鼠多饮多尿少动，尾静脉血糖值增加（P＜0.01），血清中ALP、BUN、AST含量和GSK-3β mRNA水平均增加（P＜0.01），体重和LRP5、COL1A1 mRNA水平下调（P＜0.01），Wnt1、β-catenin、Runx2蛋白呈少量阳性表达（P＜0.01）。与模型组相比，青娥丸组和阿仑膦酸钠组骨小梁间隔变小，骨小梁间的连接增多，尾静脉血糖值下降（P＜0.01），血清中ALP、BUN、AST含量和GSK-3β mRNA水平均减少（P＜0.01），体重和LRP5、COL1A1 mRNA水平上调（P＜0.01），Wnt1、β-catenin、Runx2蛋白阳性表达增多（P＜0.01）。结论 青娥丸可增强DOP小鼠骨组织的修复作用，其机制可能与Wnt1/β-catenin信号通路的激活有关。 关键词：中医中药；青娥丸；糖尿病性骨质疏松；骨组织；Wnt1/β-catenin信号通路     

经典Wnt信号通路在原发性肝癌发生中的作用

原发性肝癌（HCC）是世界第5大肿瘤,死亡率高,其发病率呈上升趋势。研究表明,多种信号通路参与了HCC的发生发展如p53信号通路、Rb信号通路、经典Wnt信号通路等[2]。Wnt基因家族编码蛋白的异常表达可引起经典Wnt信号通路的激活,进而导致核心因子β-catenin稳态并定位于核内,激活下游靶基因的转录,与肿瘤发生有关。了解该通路在HCC发生发展中的作用有重要意义。     

orexin-1受体抑制剂通过Wnt通路促进骨髓间充质干 细胞的成骨分化

目的研究Wnt/β-catenin信号通路对orexin-1受体抑制剂介导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的影响。方法(1)分离提取SD大鼠股骨、胫骨的BMSCs,用流式细胞仪进行细胞表型鉴定;(2)实验分组:对照组、10-5mol/L、10-6mol/L质量浓度的orexin-1受体抑制剂溶液,于成骨诱导第5天免疫印迹法和实时荧光定量PCR法观察Wnt/β-catenin信号通路关键靶点蛋白Dickkopf-1、Gsk3β、β-catenin以及基因Gsk3β、β-catenin mRNA表达,以观察Wnt信号通路对orexin-1受体抑制剂诱导大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响。结果 10~(-5)mol/L、10~(-6)mol/L的orexin-1受体抑制剂处理BMSCs5天后,Dickkopf-1、β-catenin和GSK3β蛋白表达升高,β-catenin和GSK3βmRNA表达升高。结论 orexin-1受体抑制剂促进大鼠骨髓基质干细胞向成骨细胞方向分化的作用可能与调控Wnt/β-catenin信号通路有关。     

β—catenin基因突变及表达与肝癌的关系

β-连环素（β-catenin)是由CTNNB1基因编码的一种多功能蛋白质，具有介导细胞间粘附及信号转导两大功能，近来的研究发现其编码基因在多种肿瘤中存在突变，对肝癌的研究表明β-catenin基因突变和蛋白的过表达与肿瘤的发生，发展及预后密切相关。阻断β-catenin信号通路的异常激活可能是治疗肝癌的一种新途径。     

split eGFP在Wnt7a与Fzd5之间的相互作用及信号活化分析中的应用

Wnt是一种调节包括细胞增殖、分化以及细胞命运的分泌性糖蛋白。在β-catenin／canonical信号途径中，Wnt分子与Fzd受体相互作用后抑制了β-catenin的降解，促进了其核转位，并调节一系列靶基因的表达。该信号通路的调节异常将会导致包括肿瘤在内的多种疾病。同时对β-catenin／canonical信号途径中的相关组分的更进一步的了解也会提供新的治疗手段和方法。在本研究中，将来自于过表达Wnt7a的细胞溶解液与含有赖氨酸富集区（CRD）并与IgG的FC片段相连的Fzd5共培养于A／G蛋白琼脂糖上，蛋白点阵技术分析证实了前人关于Wnt7a通过与Fzd5的CRD结合而启动Wnt经典途径的说法。应用斯卡查德法进一步证实了上述观点，     

肝细胞癌中β-链接素基因突变及异常表达

目的检测乙型肝炎病毒(HBV)相关肝细胞癌(HCC)组织及癌旁组织中β链接素(βcatenin)基因第3外显子突变及其表达异常,探讨其在HBV相关肝细胞癌中的作用。方法采用聚合酶链单链构象多态性(PCRSSCP)、直接测序、逆转录聚合酶链反应(RTPCR)、免疫组织化学技术等方法,检测27例HBV相关肝细胞癌及27例癌旁组织βcatenin基因第3外显子点突变以及βcateninmRNA表达差异性。结果(1)HCC组织中,βcatenin基因第3外显子的点突变率约26%(7/27),分别为密码子37(TCT→TGT),丝氨酸→半胱氨酸;密码子45(TCT→TTT),丝氨酸→苯丙氨酸;密码子35(ATC→ATG),异亮氨酸→蛋氨酸。癌旁组织均未发现突变(P<0.05)。(2)βcateninmRNA在癌组织中的表达量明显高于癌旁组织(0.86±0.07比0.33±0.04,P<0.05)。(3)βcatenin蛋白在癌细胞胞浆及核内聚集。结论βcatenin基因第3外显子突变及βcatenin的过度表达对HBV相关肝细胞癌发生起到重要作用。     

姜黄素拮抗瘦素损伤小鼠足细胞的实验研究

目的：探讨瘦素对小鼠足细胞的损伤效应,及姜黄素拮抗这一效应的可能.方法：小鼠足细胞分为四组,分别为空白对照组,瘦素刺激组,姜黄素加瘦素组,及姜黄素对照组.mRNA检测采用实时定量PCR方法,蛋白检测采用免疫印迹法.结果：瘦素（15 ng/ml）能显著抑制足细胞nephrin,podocin,podoplanin,podocalyxin表达,与对照组比较,mRNA表达的抑制率分别为31％、28％、33％及29％;蛋白质表达的抑制率分别为26％、30％、24％及32％,P均＜0.05.加入姜黄素（5μmol/L）后,上述足细胞标志蛋白均被上调,与瘦素组比较,mRNA表达分别上调1.25、1.15、1.34及1.20倍;蛋白质表达分别上调1.15、1.31、1.14及1.32,P均＜0.05.瘦素（15 ng/ml）能显著活化Wnt/β-catenin信号通路,与对照组比较,Wnt1、Wnt2b和Wnt6及其下游蛋白β-catenin的mRNA表达分别上调1.54、1.29、1.52及1.25倍,P均＜0.05.β-catenin的蛋白磷酸化水平抑制率为17％,P＜0.05.加入姜黄素（5μmol/L）后,上述信号通路分子均被抑制,与瘦素组比较,Wnt1、Wnt2b和Wnt6及β-catenin的mRNA表达抑制率分别为12％、12％、22％及10％,P＜均0.05.磷酸化的β-catenin上调1.13倍.结论：瘦素能通过Wnt/β-catenin信号通路损伤足细胞,而姜黄素能逆转这一反应.     

N-cadherin、 β-连环素在肝癌组织中的表达及与Wnt信号途径的关系

目的 观察肝癌(HCC)中N-cadherin分子是否调控β-连环素(β-catenin)的表达及Wnt信号途径的活化。方法 免疫组织化学分析64例肝癌组织中N-cadherin及β-catenin的表达及相互关系。调控肝癌细胞株HCCLM3、SMMC-7721中N-cadherin表达并检测β-catenin的表达及Wnt信号途径的活化。结果 64例肝癌中,N-cadherin表达缺失34例;β-catenin在细胞膜上表达,无细胞核内聚集,且13例细胞膜表达缺失;细胞膜上β-catenin表达缺失与N-cadherin表达缺失呈正相关(P＜0.05)。下调HCCLM3细胞或上调SMMC-7721细胞中的N-cadherin表达导致细胞膜上β-catenin表达减弱或增强,但均未导致Wnt信号途径的活化。结论 在肝癌中,N-cadherin表达与细胞膜上β-catenin的表达水平呈正相关,但N-cadherin分子并不参与Wnt信号途径的调控。     

靶向Wnt10b的小干扰RNA抑制胚胎皮肤毛囊发育的初步研究

目的 利用小干扰RNA(siRNA)抑制皮肤Wnt10b基因的表达,观察Wnt10b基因沉默能否抑制毛囊的发育并探讨其潜在机制.方法 化学合成siRNA-Wnt10b,将siRNA转染体外培养的胎鼠背部皮肤,荧光定量PCR检测转染后不同时间段皮肤组织Wnt10b和p-连环蛋白(β-catenin) mRNA的表达,Western blot检测转染后72 h皮肤组织的Wnt10b和β-catenin蛋白含量.将转染后72 h的皮肤组织石蜡包埋、切片,HE染色,镜下观察各组毛囊发育情况并做统计学处理.结果 siRNA-Wnt10b转染后的24、48 h,胎鼠背部皮肤Wnt10b mRNA的表达呈不同程度下降;但β-catenin mRNA表达未随Wnt10b mRNA水平的起伏而明显波动;转染后72 h,Wnt10b蛋白和β-catenin的蛋白表达同时减少,新形成毛囊数量也随之减少(t=3.254,P=0.002).结论 在体外器官培养的环境中,siRNA-Wnt10b能够抑制胎鼠背部皮肤组织Wnt10b蛋白的表达,减少新形成毛囊的数量;Wnt10b可能只在蛋白水平上调控细胞β-catenin的表达.     

β-catenin和Cyclin D1在分化型甲状腺癌中的表达及其意义

目的探讨甲状腺正常组织和分化型甲状腺癌（DTC）中β—catenin和Cyclin D1的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学链霉菌抗生素蛋白-过氧化物酶连接法（SP法）检测10例腺瘤旁正常甲状腺组织和57例DTC标本中β—catenin和Cydin D1的表达。结果β-catenin在甲状腺正常组织中均为正常表达，Cydin D1均呈阴性。DTC中β—catenin和Cyclin D1的异常表达率分别为57．9％和64．9％。DTC中β-catenin异常表达与淋巴结转移密切相关；Cyclin D1表达与淋巴结转移和病理高分期有关。DTC中B—catenin和Cyclin D1表达呈明显正相关（P〈0．01）。结论β-catenin异常表达可能激活靶基因Cydin D1的表达，并在甲状腺癌发生发展中起到重要作用。