TaqMan实时荧光定量PCR检测肺炎链球菌

目的利用实时荧光定量聚合酶链反应（实时PCR）方法进行肺炎链球茵的检测和流行病学调查。方法用实时PCR技术扩增并检测400例临床标本的肺炎链球菌的自溶素（1yt）基因,并将其与传统的培养法进行对比。结果400例,临床标本中,实时PCR检测肺炎链球菌为阳性的有78例（阳性率为18％）,传统培养法结果为阳性的有29例（阳性率为7．25％）。结论实时PCR是一种灵敏、特异、快速的检测肺炎链球菌方法,其可用于肺炎链球菌的诊断和流行病学调查。     

重组酶聚合酶扩增技术用于脑脊液中肺炎链球菌检测的价值

目的 探讨重组酶聚合酶扩增(RPA)技术用于脑脊液(CSF)中肺炎链球菌检测的价值。方法 利用RPA技术检测CSF中肺炎链球菌。根据肺炎链球菌LepA基因设计RPA反应引物,收集临床确诊和疑似的52例细菌性脑膜炎患者为研究对象,采集CSF标本并提取DNA,采用RPA技术对临床CSF进行LepA基因扩增检测。结果 52例患者的CSF标本经微生物培养有19例(36.5%)为阳性,阳性标本中有7例检出肺炎链球菌,这7例患者CSF标本的RPA检测结果均为阳性。微生物培养为阴性的33例(63.5%)患者中有7例患者CSF标本的RPA检测结果为阳性。共14例患者CSF标本的RPA检测结果为阳性,从中选取10例患者CSF标本的RPA扩增产物经纯化后,与肺炎链球菌LepA基因目的片段进行核酸序列比对,其比对结果一致。结论 RPA技术可用于肺炎链球菌性脑膜炎病原菌的快速检测。     

尿抗原检测联合痰革兰染色诊断儿童肺炎链球菌肺炎

目的探讨尿肺炎链球菌抗原检测联合痰革兰染色诊断儿童肺炎链球菌肺炎的临床价值。方法选择2016年9月—2016年12月在我院住院的儿童肺炎链球菌肺炎427例,采集患儿的尿液及痰液标本,以痰培养作为肺炎链球菌肺炎诊断的金标准,对尿肺炎链球菌抗原检测和痰革兰染色镜检进行诊断性功能评价。结果本研究痰培养检出肺炎链球菌119例(27.9%),痰革兰染色镜检阳性168例(39.3%),尿肺炎链球菌抗原阳性112例(26.2%),且痰革兰染色镜检检出率与痰培养肺炎链球菌检出率差异有统计学意义(P0.001)。尿肺炎链球菌抗原检测与痰革兰染色镜检诊断儿童肺炎链球菌肺炎的敏感性分别为73.1%、86.5%,特异性分别为91.9%、78.9%,两种方法并联使用的敏感性与特异性分别为96.6%、72.4%,串联使用的敏感性与特异性分别为63.0%、98.1%。结论尿肺炎链球菌抗原检测与痰革兰染色镜检并联诊断的敏感性高,适合门诊患者的筛查,而上述检测方法串联特异性高,适合住院患者确诊。     

荆州地区肺炎链球菌流行特点的回顾性研究

目的:了解荆州地区肺炎链球菌患儿分离株的流行特点,为临床经验治疗提供依据。方法:2015年1月至2016年12月荆州市中心医院儿科(除外新生儿科)送检痰培养标本3 415例,共检出肺炎链球菌菌株342例,其中男200例(58.48%),女142例(41.52%)。分析肺炎链球菌的临床分布资料及对各种抗菌素的耐药情况。结果:肺炎链球菌女性患儿的检出率和男性患儿差别不大;肺炎链球菌主要感染5岁以下患儿,季节以冬春季节为主;尚未检出耐万古霉素和利奈唑胺的肺炎链球菌;肺炎链球菌对左氧氟沙星、莫西沙星、厄他培南、氯霉素、氧氟沙星、泰利霉素的敏感性较高;对复方新诺明、四环素、红霉素、青霉素的耐药率较高;美罗培南中介;阿莫西林、头孢噻肟、头孢曲松仍有较高的敏感性。结论:在荆州地区,阿莫西林、头孢噻肟、头孢曲松仍可作本地区肺炎链球菌感染的非脑膜炎的临床一线用药,对于高耐药菌株和重症感染时可以使用万古霉素和利奈唑胺。     

某院妇产科住院患者的无乳链球菌感染情况及耐药性研究

目的研究本院产科、妇科住院患者中的无乳链球菌感染情况,尤其在首胎产妇和二胎产妇中的无乳链球菌感染情况,并对培养出的阳性菌株进行药敏试验,了解其耐药情况。方法将阴道拭子标本接种于血平板上,用Vitek2compact全自动细菌鉴定及药敏分析系统对异常菌落进行鉴定,并对培养出的无乳链球菌进行药敏分析。结果培养产科孕妇阴道拭子标本共730份,其中无乳链球菌培养阳性为12例,阳性率为1.64%;培养妇科患者阴道拭子标本共583份,其中无乳链球菌培养阳性为6例,阳性率为1.03%。首胎孕妇为505例,无乳链球菌培养阳性为8例,阳性率1.59%;二胎孕妇为227例,无乳链球菌培养阳性为4例,阳性率1.76%。首胎孕妇与二胎孕妇的无乳链球菌感染率进行比较,差异无统计学意义(P0.05)。所有无乳链球菌阳性菌株对头孢菌素类抗菌药物有较高的敏感性,未出现头孢哌酮、头孢呋辛钠、头孢曲松的耐药菌株,敏感率为100%。无乳链球菌阳性菌株对环丙沙星和左旋氧氟沙星的耐药率较高,分别为38.89%、27.78%。结论产科患者的无乳链球菌感染率较妇科患者的高,临床上仍需加强对孕产妇的无乳链球菌感染监测。无乳链球菌培养阳性的菌株对头孢菌素类抗菌药物有较高敏感性,对喹诺酮类抗菌药物有较高的耐药性。     

细菌培养法与核酸（荧光PCR法）检测肺炎克雷伯菌的对比分析

目的：探讨培养及核酸检测两种不同方法进行肺炎克雷伯菌检测分析的相关性，为临床提供及时准确的结果。方法对本院68例疑似肺炎克雷伯菌感染病人采集送检的痰标本，采用细菌培养法及核酸(荧光PCR法)检测，结果进行对比统计分析。同时对荧光PCR法的特异性和敏感性进行研究。结果在68例痰标本中肺炎克雷伯菌检出的结果，常规细菌培养法检出阳性33例，阴性35例，阳性率48.53%；荧光PCR法检出阳性49例，阴性19例，阳性率72.06%。对肺炎克雷伯菌标本DNA检测得扩增产物，对非肺炎克雷伯菌无交叉反应，其检测敏感性为1×103copies/ml。结论荧光PCR法检出肺炎克雷伯菌的阳性率高于常规细菌培养法，具有很高的敏感性和特异性，检测时间短，能为临床诊断提供及时准确的结果。     

Optochin试验和胆汁溶解试验及MALDI-TOFMS在肺 炎链球菌鉴定中的应用价值

摘要:目的以分子生物学检测方法为金标准,对奥普托辛(Optochin)试验和胆汁溶解试验及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱( MALDI-TOF MS)3种鉴定肺炎链球菌的方法进行比较研究,探讨适合临床微生物实验室应用的准确快速鉴定肺炎链球菌的方法。方法282株疑似肺炎链球菌的a溶血链球菌分别用Optochin试验、胆汁溶解试验和MALDI-TOFMS质谱进行鉴定,并与肺炎链球菌特异性基因SPN0001 PCR 扩增结果比较。以行X列队卡方检验统计分析3种方法在鉴定肺炎链球菌中的检测性能。结果282 株a溶血链球菌SPN0001基因检测阳性234株,阴性为48株;Optochin敏感(Opt° )213株,耐药(Opt'')69株;胆汁溶解试验阳性235株,阴性47株;经MALDI-TOF MS鉴定为肺炎链球菌247株,鉴定为非肺炎链球菌35株。单独胆汁溶解试验.Optochin试验或MALDI-TOFMS联合胆汁溶解试验检测的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和约登指数达到最高,均为100.00%. .97.92% .99. 57%、100% .0.98。Optochin试验、胆汁溶解试验及MALDI-TOF MS对282株a溶血链球菌鉴定结果的差异有统计学意义(X =14.381,P<0.05)。结论在鉴定肺炎 链球菌方法中,MALDI-T0F MS鉴定肺炎链球菌快速且敏感性高,胆汁溶解试验的特异性最高, Optochin试验的敏感性和特异性均不理想,临床实验室可以用MALDI-T0FMS进行初筛,并用胆汁溶解试验进行验证。     

环介导等温扩增检测肺炎链球菌方法的建立及临床应用

目的 建立环介导等温扩增(LAMP)快速检测肺炎链球菌的方法.方法 根据美国国家生物信息中心(GenBank)上提交的肺炎链球菌R6株的lytA基因序列(登录号AF2)08540)设计特异LAMP引物,以盐酸胍一苯甲醇法提取阳性血培养瓶中细菌DNA,然后以LAMP技术扩增lytA基因,反应条件为63℃45 min,采用肉眼观察浊度和琼脂糖电泳的方法来观察结果.结果 在196份阳性血培养瓶中,采用LAMP法检测到肺炎链球菌16株,与传统方法比较,其检测肺炎链球菌的灵敏度和特异度均达到100%,且检测时间缩短为1 h左右.模拟标本的检测结果显示该方法的最低检测限为102CFU/ml.结论 该方法灵敏度高,特异性强,操作方便快速,适合从临床标本中检测肺炎链球菌.     

TaqMan荧光定量PCR检测流感嗜血杆菌和肺炎链球菌方法的建立及应用

目的 建立TaqMan荧光定量PCR检测方法 ,用于流感嗜血杆菌和肺炎链球菌的检测和鉴别诊断.方法 针对流感嗜血杆菌种属特异性基因bexA和肺炎链球菌种属特异性基因lytA,设计合成引物和TaqMan探针,研究不同引物和探针荧光定量PCR检测的特异性和灵敏度,确定标本检测中循环阈值(Ct)的临界值(cut-off值).将荧光定量PCR、乳胶凝集和细菌培养3种检测方法 同时应用于278份细菌性脑膜炎患者脑脊髓液标本的检测.结果 bexA基因引物和探针能特异性检测流感嗜血杆菌a、b、c、d血清型的菌株,检测灵敏度为每个反应10个基因组DNA拷贝;lytA基因引物和探针能特异性检测肺炎链球菌常见致病的血清型肺炎链球菌菌株,检测灵敏度为每个反应90个基因组DNA拷贝.通过荧光定量PCR方法 ,278份脑脊髓液标本中共检测出 4份流感嗜血杆菌阳性和7份肺炎链球菌阳性,其中各有2份培养出相应的病原菌,另有1份流感嗜血杆菌和2份肺炎链球菌乳胶凝集结果 阳性.结论 TaqMan荧光定苗PCR方法 能特异地检测和鉴定流感嗜血杆菌和肺炎链球菌,具有较高的灵敏度和快速检测的特点,能提高临床流感嗜血杆菌和肺炎链球菌感染患者标本的阳性检出率.     

盒式聚合酶链反应对青霉素中介值的肺炎链球菌的监测

许多分子生物学方法已经成功地应用于细菌感染调查,虽然大多技术能产生满意的结果,但分辨率 可重复性和速度尚待提高。本研究建立的BOX PCR ,用于检测肺炎链球菌时,其特异性高、重复性好且操作简便,为肺炎链球菌的流行病学调查提供了一个切实可行的方法。一、材料和方法1.标本来源:肺炎链球菌来自武汉市2 0 0 1年11月～2 0 0 2年7月四家教学医院,共84株。实验中无来自同一患者的分离株。通过典型菌落 涂片镜检 奥普托辛(OP)敏感等进行分离鉴定,用琼脂稀释法测定菌株对青霉素的MIC后,挑选0 12～1μg/ml的青霉素MIC中介值肺炎链球菌(P…