抗分枝杆菌活性成分——丹参酮的胆汁排泄与肝内转化

大鼠由十二指肠给丹参酮Ⅰ、丹参酮Ⅱ_A、隐丹参酮及丹参的乙醇粗提物(总酮)后,药物可由胆汁排出。在胆汁中的含量采用高效液相色谱法测定。实验发现给总酮组胆汁中丹参酮Ⅱ_A的排出量为丹参酮Ⅱ_A组排出量的5～10倍。在给隐丹参酮组,发现隐丹参酮在肝内可能转化为丹参酮Ⅱ_A用抑菌指标亦可在肝内检出抗分枝杆菌607的活性成分。     

输液包装材料对丹参酮ⅡA磺酸钠注射液吸附性的考察

目的 考察玻璃瓶、聚氯乙烯软袋（PVC）、聚丙烯可立袋（PP）、非聚氯乙烯复合膜软袋（NPVC）4种包装材料在葡萄糖和氯化钠两种溶媒大输液中对丹参酮Ⅱ_A磺酸钠注射液的吸附情况。方法 将丹参酮Ⅱ_A磺酸钠注射液分别配制于4种材质的0.9%氯化钠注射液及5%葡萄糖注射液中,于0、0.25、0.5、1、2、4、6 h取样,用紫外可见分光光度法测定丹参酮Ⅱ_A磺酸钠的吸光度值,考察其量的变化。结果 6 h内丹参酮Ⅱ_A磺酸钠在4种材质两种输液中量的变化低于±4%,组间比较差异无显著性（P＞0.05）。结论 丹参酮Ⅱ_A磺酸钠注射液在4种不同材质的输液中稳定性良好。     

HPLC法同时测定妇炎愈合剂中芍药苷、丹参酮ⅡA的含量

摘 要 目的: 建立同时测定妇炎愈合剂中芍药苷、丹参酮Ⅱ_A的方法。方法: 应用高效液相色谱法测定,色谱柱为Agilent XDB C₁₈(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱;流动相为甲醇-0.2%磷酸溶液,梯度洗脱;流速为0.9 ml·min^-1,柱温35℃;检测波长230 nm（检测芍药苷）,268 nm(检测丹参酮Ⅱ_A)。结果:丹参酮Ⅱ_A、芍药苷的线性范围分别为0.516～2.581 μg（r=0.999 3）,0.364～1.819 μg（r=0.999 6）;平均加样回收率分别为96.4%（RSD=1.14%,n=5）,96.2%（RSD=1.04%,n=5）。结论:该方法简便易行、准确、重复性好,可用于妇炎愈合剂中芍药苷、丹参酮Ⅱ_A的含量测定。     

碘甘油联合曲安奈德口腔软膏治疗口腔溃疡的临床研究

目的 建立同时测定枣仁安神胶囊中五味子醇甲、五味子醇乙、隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮II_A、五味子乙素的方法,为枣仁安神胶囊的质量控制提供科学的方法。方法 采用HPLC法,选用Thermo 120Å-C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）;以乙腈-0.1%冰醋酸水溶液为流动相梯度洗脱,对枣仁安神胶囊中6种主要指标性成分的含量进行同时分析测定;检测波长：五味子醇甲、五味子醇乙、五味子乙素为250 nm,隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮II_A为270 nm;体积流量1.0 mL/min,柱温为30℃。结果 五味子醇甲在4.7～3 153.6 ng（r=0.999 9）、五味子醇乙在7.864～314.500 ng（r=0.999 9）,隐丹参酮在14.4～1 256.9 ng（r=0.999 9）、丹参酮I在15.1～1 103.8 ng（r=0.999 9）、丹参酮II_A在15.3～1 532.0 ng（r=0.999 9）、五味子乙素在6.134～204.500 ng（r=0.999 9）内呈良好的线性关系。平均加样回收率分别为五味子醇甲为100.4%、五味子醇乙为98.7%、隐丹参酮为99.4%、丹参酮I为100.0%、丹参酮II_A为99.3%、五味子乙素100.2%,RSD分别为1.4%、2.7%、2.2%、2.2%、2.5%、2.1%;8批样品中各指标成分的质量分数分别为五味子醇甲1.545 7～1.909 9 mg/g、五味子醇乙0.129 8～0.235 1 mg/g、隐丹参酮0.508 4～0.523 4 mg/g、丹参酮I 0.111 7～0.122 3 mg/g、丹参酮II_A 0.755 8～0.874 4 mg/g、五味子乙素0.120 2～0.190 1 mg/g。结论 建立的含量测定分析方法灵敏度高、专属性强,可很好地控制枣仁安神胶囊质量。     

丹参酮ⅡA通过抑制PI3K/Akt通路逆转人喉癌细胞顺铂耐药的机制研究

目的 研究丹参酮Ⅱ_A对人喉癌细胞顺铂耐药的影响作用及机制。方法 以不同质量浓度（0、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、32.0 mg/L）顺铂干预对数生长期人喉癌Hep-2细胞和人喉癌顺铂耐药细胞（Hep-2/DDP）48 h,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,计算半数抑制浓度（IC₅₀）和耐药指数（RI）。以不同质量浓度（0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0 mg/L）丹参酮Ⅱ_A干预对数生长期Hep-2细胞48 h,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,计算IC₅₀;采用丹参酮Ⅱ_A（IC₅₀5.32 mg/L）＋不同质量浓度（0、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、32.0 mg/L）顺铂干预对数生长期Hep-2/DDP细胞48 h,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,计算2种药物联用的IC₅₀和逆转倍数（RF）。取对数生长期Hep-2/DDP细胞,设置对照组、顺铂组、丹参酮Ⅱ_A＋顺铂组、丹参酮Ⅱ_A＋顺铂＋胰岛素样生长因子-1（IGF-1）组。各组分别给药干预48 h后,采用CCK-8法、Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞增殖抑制率和凋亡率,Western blotting法检测B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）,Bcl-2相关X蛋白（Bax）、激活型半胱氨酸蛋白酶-3（cleaved Caspase-3）、cleaved Caspase-9、磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、p-PI3K、蛋白激酶B（Akt）蛋白表达情况。结果 顺铂对Hep-2细胞的IC₅₀为4.58 mg/L,对Hep-2/DDP细胞的IC₅₀为14.09 mg/L,RI为3.08;丹参酮Ⅱ_A对Hep-2细胞的IC₅₀为5.32 mg/L;丹参酮Ⅱ_A联合顺铂对Hep-2/DDP细胞的IC₅₀为3.34 mg/L,RF为4.22。与对照组比较,顺铂组Hep-2/DDP细胞增殖抑制率、凋亡率显著升高（P<0.01）;与顺铂组比较,丹参酮Ⅱ_A＋顺铂组Hep-2/DDP细胞增殖抑制率、凋亡率显著升高（P<0.05）;与丹参酮Ⅱ_A＋顺铂组比较,丹参酮Ⅱ_A＋顺铂＋IGF-1组Hep-2/DDP细胞增殖抑制率、凋亡率显著降低（P<0.05）。与对照组相比,顺铂组Hep-2/DDP细胞Bcl-2表达量显著降低,Bax、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9表达量和Bax/Bcl-2值显著升高（P<0.05）。与顺铂组比较,丹参酮Ⅱ_A＋顺铂组Hep-2/DDP细胞Bcl-2表达量显著降低,Bax、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9表达量和Bax/Bcl-2值显著升高（P<0.05）。与丹参酮Ⅱ_A＋顺铂组比较,丹参酮Ⅱ_A＋顺铂＋IGF-1组Hep-2/DDP细胞Bcl-2表达量显著升高,Bax、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9表达量和Bax/Bcl-2值显著降低（P<0.05）。与对照组相比,顺铂组Hep-2/DDP细胞p-PI3K、p-Akt表达量及PI3K、Akt磷酸化（p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt）水平显著降低（P<0.05）。与顺铂组比较,丹参酮Ⅱ_A＋顺铂组Hep-2/DDP细胞p-PI3K、p-Akt表达量及PI3K、Akt磷酸化水平显著降低（P<0.05）。与丹参酮Ⅱ_A＋顺铂组比较,丹参酮Ⅱ_A＋顺铂＋IGF-1组Hep-2/DDP细胞p-PI3K、p-Akt表达量及PI3K、Akt磷酸化水平显著升高（P<0.05）。结论 丹参酮Ⅱ_A可逆转人喉癌细胞顺铂耐药,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt通路活化而促进喉癌细胞凋亡有关。     

丹参酮IIA通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路对食管癌细胞放疗敏感性的影响

目的 研究丹参酮II_A对人食管癌细胞放疗敏感性的影响，并基于磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（PI3K/Akt/mTOR）信号通路探讨其潜在机制。方法 以人食管癌Eca-109细胞为受试细胞，分别采用不同浓度丹参酮II_A和不同放射剂量处理Eca-109细胞，48 h后MTT法检测细胞增殖活力，计算丹参酮II_A半数抑制浓度（IC₅₀）和放射的IC₅₀，分别作为后续实验丹参酮II_A浓度和放射剂量。取对数生长期Eca-109细胞，设对照组、丹参酮II_A组、放射组、丹参酮II_A＋放射组、丹参酮II_A＋放射＋PI3K抑制剂（LY294002）组。通过平板克隆实验、MTT法、流式细胞术、荧光质粒转染法检测细胞克隆形成能力、增殖活力、凋亡率和自噬状况，RT-PCR、Western blotting法检测细胞中PI3K/Akt/mTOR信号通路相关mRNA和蛋白表达。结果 丹参酮Ⅱ_A和放射对人食管癌Eca-109细胞增殖活力的抑制作用均呈现剂量相关性，丹参酮II_A IC₅₀为8.75 mmol/L，放射量IC₅₀为4.63 Gy。与对照组相比，丹参酮II_A组、放射组、丹参酮II_A＋放射组、丹参酮II_A＋放射＋LY294002组细胞克隆形成能力和增殖活力明显降低，凋亡率和自噬体数量明显升高（P＜0.05）；PI3K、Akt、mTOR mRNA和蛋白表达量明显降低（P＜0.05）；Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-3、LC3-I、LC3-II蛋白表达量及Bax/Bcl-2、Cleaved Caspase-3/Caspase-3、LC3-II/LC3-I明显升高（P＜0.05）。与丹参酮II_A组或放射组相比，丹参酮II_A＋放射组和丹参酮II_A＋放射＋LY294002组对各检测指标的调控作用明显增强（P＜0.05）。与丹参酮II_A＋放射组相比，丹参酮II_A＋放射＋LY294002组对各指标的调控作用明显增强（P＜0.05）。结论 丹参酮II_A可能通过下调PI3K/Akt/mTOR信号通路，抑制细胞增殖并促进其凋亡与自噬，进而增强人食管癌细胞放疗敏感性。     

丹酚酸B-丹参酮ⅡA-甘草次酸微乳凝胶微针透皮给药的评价

目的 优化丹酚酸B （SalB）-丹参酮Ⅱ_A（TSNⅡ_A）-甘草次酸（GA）（STG）微乳凝胶的处方工艺,并考察微针给药对其促透和抗炎药效的影响。方法 以微乳凝胶的综合评分为响应值,选取卡波姆用量、微乳用量、pH值作为考察因素,通过Box-Behnken响应面法筛选最佳处方工艺。采用透皮扩散试验仪考察STG微乳凝胶、STG微乳凝胶+微针（长度分别为500、750、1 000μm）给药的体外经皮渗透特性,高效液相色谱（HPLC）测定TSNⅡ_A、Sal B和GA的含量。采用10%蛋清诱导小鼠足肿胀考察STG微乳凝胶（每次l g,每天2次,给药3 d）、STG微乳凝胶+微针（长度分别为500、750、1000μm）背部给药的抗炎作用,同时考察给药7d对小鼠皮脂腺斑组织的作用。结果 STG微乳凝胶的最佳制备工艺中卡波姆用量为1.00%、微乳用量为0.10 g、pH值为6,制备的STG微乳凝胶中含TSNⅡ_A、SalB、GA分别为0.18、1.05、1.53 mg·g^-1。与TSNⅡ_A比较,SalB和GA的透皮吸收较好;STG微乳凝胶经过与不同长度微针配合使用后的累积透皮量：STG微乳凝胶+1 000μm微针组>STG微乳凝胶+700μm微针组>STG微乳凝胶+500μm微针组>STG微乳凝胶组;3种药物在皮肤中的滞留量相对较高。与空白凝胶组比较,STG微乳凝胶组小鼠足肿胀度有所减轻,但无显著性差异;与STG微乳凝胶组比较,STG微乳凝胶+微针组小鼠足肿胀程度均明显减轻,以1 000μm微针组作用最显著（P<0.05、0.01）。小鼠皮脂腺斑组织HE染色结果表明,与空白凝胶组比较,各组小鼠皮脂腺数目减少且体积变小,以微针长度1 000μm组效果最显著。结论 STG微乳凝胶+微针给药具有良好的透皮特性和缓释效果,发挥抗炎及控制皮脂腺分泌作用,微针长度与透皮率的增加呈正相关。     

基于网络药理学和分子对接的丹参酮IIA治疗糖尿病肾病的机制研究

目的 基于网络药理学和分子对接的方法研究丹参酮II_A治疗糖尿病肾病的分子的机制。方法 利用Swiss Target Prediction、TCMSP、PharmMapper、GeneCards平台预测丹参酮II_A的作用靶点,从OMIM、DrugBank、TTD、GeneCards数据库中筛选获得糖尿病肾病的相关靶点。将得到的丹参酮II_A的作用靶点与疾病靶点取交集得到潜在靶点,构建蛋白质相互作用（PPI）网络,并通过网络拓扑分析筛选核心靶点。采用Metascape平台分析对交集靶点进行基因本体（GO）功能富集分析与京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。最后运用AutoDock Vina 1.1.2对丹参酮II_A和核心靶点之间进行分子对接验证。结果 共筛选出96个丹参酮II_A调控糖尿病肾病的潜在靶点,通过网络拓扑分析中的度（degree）值筛选出白蛋白（ALB）、蛋白激酶B1（AKT1）、白细胞介素-6（IL-6）、血管内皮生长因子（VEGFA）、肿瘤坏死因子（TNF）、肿瘤蛋白p53（TP53）、丝裂原激活蛋白激酶8（MAPK8）、胱天蛋白酶3（CASP3）8个核心靶点;GO富集分析筛选出活性氧代谢过程、细胞迁移的正向调节、氧化应激反应、细胞死亡的正向调节等20个生物学过程,KEGG富集筛选出流体剪切应力和动脉粥样硬化通路、肿瘤坏死因子信号通路、叉头转录因子（FoxO）信号通路、VEGF等20条通路。分子对接验证结果显示,核心靶点与丹参酮II_A之间均有良好的结合活性。结论 本研究表明丹参酮II_A可能通过多靶点、多通路调控糖尿病肾病。     

HPLC-ELSD法同时测定四逆散不同配伍中柴胡皂苷a、b2、c的含量

摘 要 目的: 建立高效液相色谱 蒸发光散射检测（HPLC ELSD）法同时测定四逆散不同配伍中柴胡皂苷a,b₂,c的含量。 方法: 采用Hypersil BDS C₁₈ 色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm),以乙腈 水为流动相进行梯度洗脱;流速：1.0 ml ·min^-1,ELSD检测器,漂移管温度：100℃,气体：空气,气体流速：2.0L ·min^-1,柱温：室温。结果:柴胡皂苷a,b₂,c分别在7.74～129.00,7.86～131.00,5.12～85.30 μg的范围内线性关系良好（r分别为0.999 2,0.999 2,0.999 3）;平均回收率分别为98.6%,99.3%,100.7%,RSD分别为2.5%,1.8%,2.7%(n=6)。结论:白芍中的成分可降低柴胡皂苷a、c的煎出量;枳实中的成分可提高柴胡皂苷a、b₂、c的煎出量;与单味柴胡药材相比,配伍组合中柴胡皂苷b₂的含量均显著增加。     

丹参酮ⅡA磺酸钠注射液联合奥拉西坦对卒中后认知障碍患者认知功能、血清炎性因子和氧化应激指标的影响

目的 探讨丹参酮Ⅱ_A磺酸钠注射液联合奥拉西坦治疗卒中后认知障碍的疗效。方法 选择2019年2月—2020年9月重庆市九龙坡区人民医院收治的83例卒中后认知障碍患者作为研究对象,根据治疗方法将患者分为对照组（41例）和观察组（42例）。对照组患者口服奥拉西坦胶囊,800 mg/次,2次/d,连续治疗2周。观察组在对照组基础上静脉滴注丹参酮Ⅱ_A磺酸钠注射液,80 mg加入5%葡萄糖注射液250 mL中,1次/d,连续治疗2周。观察两组认知功能、记忆功能、生活能力、事件相关电位P300、炎性因子、氧化应激和不良反应差异。结果 两组治疗后MMSE、RBMT评分、BI指数、P300波幅、血清总抗氧化能力（T-AOC）水平均较治疗前显著增高,P300潜伏期、血清白细胞介素-6（IL-6）、C反应蛋白（CRP）、丙二醛（MDA）水平较治疗前显著降低（P<0.05）。治疗后,观察组MMSE、RBMT评分、BI指数、P300波幅、血清T-AOC水平显著高于对照组,P300潜伏期、IL-6、CRP、MDA水平显著低于对照组（P<0.05）。结论 丹参酮Ⅱ_A磺酸钠注射液联合奥拉西坦治疗卒中后认知障碍可提高认知、记忆功能和生活能力,安全性高,优于单纯奥拉西坦治疗。     

高效液相色谱法测定王不留行中王不留行环肽A和王不留行环肽B

目的:建立HPLC法测定王不留行中王不留行环肽A和王不留行环肽B含量。方法:采用超声辅助提取王不留行环肽A和王不留行环肽B,选用Agilent C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 mL·min-1,检测波长为220 nm。结果:王不留行环肽A和王不留行环肽B进样浓度分别在2.57～12.85μg·mL-1和0.95～13.54μg·mL-1范围内线性关系良好(r≥0.9996);平均加样回收率(n=6)分别为97.1%和95.9%,RSD分别为1.3%和1.7%。结论:该方法简便、准确,重复性好,可用于王不留行中王不留行环肽A和王不留行环肽B的含量测定。     

Enhancement of solubility and dissolution rate of cryptotanshinone, tanshinone I and tanshinone IIA extracted from Salvia miltiorrhiza

Cryptotanshinone, tanshinone I and tanshinone IIA are three major components in the extract of Salvia miltiorrhiza with pharmacological significance. However, their effective utilization is limited due to poor water solubility and bioavailability. Solid dispersion (SD) of the extract of Salvia miltiorrhiza was prepared to enhance solubility and dissolution of the three major components. Various carriers were screened for SD preparation by conventional solvent method. Dissolution of the components from selected SD systems was compared with commercial tablets of the extract from Salvia miltiorrhiza. The solubility of three components viz., cryptotanshinone, tanshinone I and tanshinone IIA, after forming SD with either of povidone K-30 (PVP K-30) or poloxamer 407, exhibited enhanced solubility in pH 6.8 buffer. Dissolution test revealed that the amount of three components released was higher from SD tablets as compared to the commercial tablets. Pharmacokinetic profile was evaluated using cryptotanshinone as a representative compound. AUC of cryptotanshinone was significantly increased when administered as a solid dispersion.     

高效液相色谱-一测多评法测定肝爽颗粒中虎杖苷、白藜芦醇、氧化芍药苷、芍药苷和柴胡皂苷a、b1、d

目的 建立高效液相色谱-一测多评法(HPLC-QAMS)测定肝爽颗粒中虎杖苷、白藜芦醇、氧化芍药苷、芍药苷和柴胡皂苷a、b1、d的方法.方法 采用Agilent SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.1％磷酸溶液,梯度洗脱;检测波长分别为306 nm(0～17 min,测定虎杖苷和白藜芦醇)、230 nm(17～28 min,测定氧化芍药苷和芍药苷)、210 nm(28～55 min,测定柴胡皂苷a、b1、d);体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;进样量10μL.以芍药苷为内参物,建立其他6个成分的相对校正因子(RCF)计算.结果 虎杖苷、白藜芦醇、氧化芍药苷、芍药苷和柴胡皂苷a、b1、d分别在6.37～159.25、4.91～122.75,1.88～47.00、7.99～199.75、0.56～14.00、2.19～54.75、2.87～71.75μg/mL线性关系良好,平均回收率分别为100.08％、98.95％、97.87％、99.52％、96.97％、98.88％、99.07％,RSD值分别为0.72％、1.1％、1.4％、0.99％、1.2％、1.2％、0.84％.肝爽颗粒中各成分的一测多评法所得结果与外标法结果无明显差异.结论 所建立的HPLC-QAMS法可用于肝爽颗粒中虎杖苷、白藜芦醇、氧化芍药苷、芍药苷和柴胡皂苷a、b1、d的同时测定.     

A facile three-step total synthesis of tanshinone I

A facile synthetic approach for total synthesis of tanshinone I has been accomplished. The key precursor is a novel compound, epoxy phenanthraquinone. And this synthesis of tanshinone I is achieved in only three simple stages, which include Diels–Alder reaction, Δ²-Weitz–Scheffer-type epoxidation, and Feist–Bénary reaction from commercially available styrene.     

Comparative pharmacokinetics and tissue distribution of cryptotanshinone,tanshinone IIA,dihydrotanshinone I,and tanshinone I after oral administration of pure tanshinones and liposoluble extract of Salvia miltiorrhiza to rats

Salvia miltiorrhiza is one of the most commonly used traditional Chinese medicines in the treatment of cardiovascular and cerebrovascular diseases. Cryptotanshinone (CTS), tanshinone IIA (Tan IIA), dihydrotanshinone I (diTan I), and tanshinone I (Tan I) are the main active compounds in the liposoluble extract of Salvia miltiorrhiza. The differences in the pharmacokinetic and tissue distribution behaviors of the four tanshinones after oral administration of the liposoluble extract of Salvia miltiorrhiza and pure compounds are not clear. This study aims to compare the pharmacokinetics and tissue distribution of the four tanshinones after oral administration of pure tanshinone monomers and the liposoluble extract of Salvia miltiorrhiza. An ultra-performance liquid chromatography–tandem mass spectrometry (UPLC–MS/MS) analysis method was developed for the determination of the four tanshinones. The results showed that the AUC and C_max of tanshinones in rats receiving the extract of Salvia miltiorrhiza were significantly increased compared with those receiving the pure tanshinones. In the tissue distribution experiments, the AUC of the four tanshinones in the extract was much greater than the AUC of the monomers in the lung, heart, kidney, liver, and brain, and the coexisting constituents particularly promoted the distribution of tanshinones into tissues that the drug cannot sufficiently penetrate. These findings suggested that the coexisting constituents in the liposoluble extract of Salvia miltiorrhiza play an important role in the alteration of plasma concentration and tissue distribution of the four tanshinones. Understanding these differences could be of significance for the development and application of Salvia miltiorrhiza extract and tanshinone components.     

Simultaneous determination of cryptotanshinone, tanshinone I and tanshinone IIA in traditional Chinese medicinal preparations containing Radix salvia miltiorrhiza by HPLC

A reversed-phase high performance liquid chromatographic method was established for the simultaneous determination of tanshinones in five kinds of traditional Chinese medicinal preparations (TCMPs) containing Radix salvia miltiorrhiza (Chinese herbal name: Danshen). Tanshinones including cryptotanshinone, tanshinone I and tanshinone IIA were successfully separated on a Diamonsil C18 column (150 mm x 4.6 mm i.d., 5 microm). The mobile phase was a mixture of methanol, tetrahydrofuran, water and glacial acetic acid (20:35:44:1, v/v/v/v), employing isocratic elution at a flow rate of 1.0 mL/min. Detection was accomplished at 254 nm. The compounds were identified by comparing their retention times and UV spectra in the 200-400 nm range with authentic standards. Regression equations revealed good linear relationship between the peak areas of the constituents and their concentrations (correlation coefficients: 0.9998 for cryptotanshinone, 0.9999 for tanshinone I and 1.0000 for tanshinone IIA). The relative standard deviations (n=6) of retention time and peak area were less than 0.25% and 1.00%, respectively. The recoveries were between 96.2% and 102.5%. The proposed method has been successfully applied to the simultaneous determination of the tanshinones in five kinds of Chinese herbal preparations containing Danshen within 20 min.     

柴胡提取物及其所含皂苷 a和皂苷 d对小鼠骨骼增长的作用比较

目的比较柴胡提取物及其所含皂苷 a和皂苷 d促进骨骼增长的作用及其机制研究。方法自 2021年 3月至 2022年 1月进行了高效液相色谱法测定柴胡提取物中柴胡皂苷 a与 d含量;然后将昆明种小鼠 40只采用随机数字表法分为健康对照组、柴胡皂苷 a组(简称皂苷 a组)、柴胡皂苷 d组(简称皂苷 d组)、柴胡提取物组(简称提取物组)和阳性对照组,每组 8只。健康对照组灌胃去离子水,皂苷 a组灌胃柴胡皂苷 a 1.15 μg/g体质量,皂苷 d组灌胃柴胡皂苷 d 0.2 μg/g体质量,柴胡提取物组按照 0.94 mg/g体质量灌胃,阳性对照组灌胃酸枣仁皂苷 a0.013 mg/g体质量灌胃。灌胃 25 d后于末次给药 30 min后取脑组织,蛋白质印迹法检测脑组织色氨酸羟化酶 2(TPH2)含量, ELISA法检测脑组织 5-羟色胺( 5-HT)、生长激素( GH)含量的变化和 5-HT与 5-羟色胺 1A受体( 5-HT1AR)结合活性,并测量各组药物对小鼠胫骨长度的影响。结果柴胡提取物中柴胡皂苷 a含量为 1.22 mg/g,柴胡皂苷 d含量为 0.22 mg/g;提取物组和皂苷 a组的脑组织 5-HT含量( 60.93±11.09,59.51±11.02)μg/L、GH含量(68.91±9.10,68.42±9.03)μg/L、5-HT1AR与 5-HT结合活性( 39.90±8.36,37.27±6.59)及胫骨长度( 10.56±0.53,10.55±0.54)cm均较健康对照组［(40.89±8.74)μg/L,(44.87±8.92)μg/L,27.34±3.45,(9.48±0.63)cm］明显增高( P<0.01),同时这两组 TPH2含量较健康对照组升高( P<0.01)均差异有统计学意义。皂苷 d组脑组织 TPH2蛋白含量、 5-HT含量( 47.46±8.62)、 GH含量( 45.81± 7.14)、 5-HT1AR与 5-HT结合,活性( 30.87±5.52)及胫骨长度( 9.88±0.56)cm较健康对照组差异无统计学意义( P>0.05)。与皂苷 a组比较,皂苷 d组的脑组织 TPH2蛋白含量、 5-HT含量、 5-HT1AR与 5-HT结合活性及胫骨长度减少( P<0.05)GH含量明显减少( P<0.01),差异有统计学意义。与皂苷 d组比较,提取物组 GH含量、 5-HT1AR与 5-HT结合活性及胫骨长度增,加明显增高(P<0.01),5-HT含量增高( P<0.05),差异有统计学意义。结论柴胡提取物延缓慢波睡眠时长的主要成分为柴胡皂苷 a,其可     

HPLC-MSMS测定小柴胡颗粒中柴胡皂苷a与柴胡皂苷d

目的：建立小柴胡颗粒中柴胡皂苷 a 与柴胡皂苷 d 含量的 HPLC-MSMS 方法。方法采用液相色谱电喷雾串联质谱对小柴胡颗粒中的柴胡皂苷 a 与柴胡皂苷 d 进行含量测定,采用 Agilent ZORBAX SB C18（4．6 mm ×100 mm,3．5μm）为色谱柱,流动相为乙腈—0．05％乙酸铵（40∶60）,流速为0．4 mL·min －1,柱温为30℃,质谱条件：ESI（电喷雾离子源）,采集模式：负模式,柴胡皂苷 a 定量定性离子对为779．4＞617．0,779．4＞145．0,柴胡皂苷 d 定量定性离子对为779．4＞617．1,779．4＞161．0。结果柴胡皂苷 a 线性范围为20～1000μg·L －1,平均加样回收率为99．1％（n ＝6）,RSD ＝1．6％,柴胡皂苷 d 线性范围为20～1000μg·L －1,平均加样回收率为98．7％（n ＝6）,RSD ＝1．4％。结论该方法操作简单,迅速,能够控制小柴胡颗粒的质量。     

Protective properties of tanshinone I against oxidative DNA damage and cytotoxicity

Tanshinone I, a naturally occurring diterpene from Danshen, has been shown to possess hepatocyte protective, anticancer, and memory enhancing properties. However, there are few stringent pharmacological tests for neuroprotection of tanshinone I thus far. Since peroxynitrite is involved in the pathogenesis of neurodegenerative disorders, this study was undertaken to investigate whether the neuroprotective effect of tanshinone I is associated with inhibition of peroxynitrite-caused DNA damage, a critical event leading to peroxynitrite-induced cytotoxicity. Our results show that tanshinone I can significantly inhibit peroxynitrite-induced DNA damage both in φX-174 plasmid DNA and rat primary astrocytes. EPR spectroscopy indicates that tanshinone I potently diminished the DMPO-hydroxyl radical adduct signal from peroxynitrite. Taken together, these results demonstrate for the first time that tanshinone I can protect against peroxynitrite-induced DNA damage, hydroxyl radical formation and cytotoxicity, which might have implications for tanshinone I-mediated neuroprotection.     

PF2401-SF, standardized fraction of Salvia miltiorrhiza and its constituents, tanshinone I, tanshinone IIA, and cryptotanshinone, protect primary cultured rat hepatocytes from bile acid-induced apoptosis by inhibiting JNK phosphorylation.

Bile acid-induced hepatocyte apoptosis plays an important role in cholestatic liver disease, and the role of apoptosis may be of therapeutic interest in preventing liver disease. The dried root of Salvia miltiorrhiza Bunge (Labiatae) has been used traditionally to treat liver diseases. We investigated the antiapoptotic effects of a standardized fraction of S. miltiorrhiza (PF2401-SF) and its components, tanshinone I, tanshinone IIA, and cryptotanshinone, in primary cultured rat hepatocytes. PF2401-SF was enriched with tanshinone I (11.5%), tanshinone IIA (41.0%), and cryptotanshinone (19.1%). Glycochenodeoxycholic acid (GCDC)-induced apoptosis, as shown by DNA fragmentation, poly(ADP-ribose) polymerase cleavage, and activation of caspases-8, -9, and -3. PF2401-SF and its components, tanshinone I, tanshinone IIA, and cryptotanshinone showed antiapoptotic activity. Treatment with PF2401-SF or with its components significantly inhibited the generation of intracellular reactive oxygen species. Hydrophobic bile acids activate c-Jun-NH(2)-terminal kinase (JNK), p38 mitogen-activated protein kinases (MAPK), and extracellular signal-regulated kinase 1/2, and PF2401-SF inhibited the phosphorylation of JNK and p38. All three components of PF2401-SF inhibited JNK phosphorylation. Addition of inhibitors of MAPK showed that inhibition of JNK decreased apoptosis. These data indicate that PF2401-SF and its components protect hepatocytes from GCDC-induced apoptosis in vitro by inhibiting JNK.