人端粒酶逆转录酶启动子介导的靶向性肿瘤基因治疗

由于人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子区域已被克隆,其特点也已被鉴定,hTERT启动子介导的靶向性肿瘤基因治疗成为研究的热点.现综述hTERT启动子介导的靶向性肿瘤基因治疗最新研究进展.     

靶向人端粒酶逆转录酶启动子在肿瘤基因治疗中的研究进展

人端粒酶逆转录酶（hTERT）启动子具有在端粒酶阳性的肿瘤细胞中特异高表达的特点,使其成为肿瘤基因治疗较为理想的靶点。国内外学者利用hTERT启动子构建靶向肿瘤细胞的特异性表达载体也已经取得了较大进展。全文就hTERT启动子靶向治疗肿瘤的一些策略作一综述。     

Survivin启动子与肿瘤

利用特异性启动子介导的基因治疗是肿瘤靶向性治疗的一种有效途径.Survivin启动子既有肿瘤细胞的靶向性,又有增殖性血管内皮细胞的靶向性,且能有效介导目的基因表达,展示了其在肿瘤靶向性治疗研究中的良好前景.     

hTERT启动子的克隆及在MCF7乳腺癌细胞中的特异转录活性

背景与目的：利用肿瘤特异性启动子增强肿瘤细胞中治疗基因的转录选择性是达到基因治疗靶向性的有效途径。人端粒酶催化亚基（hTERT）在大部分肿瘤细胞中呈特异性高表达，有可能成为肿瘤特异性启动子。本文扩增了hTERT基因启动子并分别克隆于报告基因重组质粒pEGFP-1和pGL3-Basic，检测并证实hTERT启动子在乳腺癌细胞MCF7中的特异转录活性。方法：采用套式PCR法扩增hTERT启动子，将其分别克隆到含报告基因增强绿色荧光蛋白（EGFP）的重组质粒pEGFP-1和含Luciferase的重组质粒pGL3-Basic，经脂质体分别转染人乳腺正常上皮细胞系HBL100和乳腺癌细胞MCF7，荧光显微镜观察EGFP的表达情况，并测定两种细胞中荧光素酶转录表达差异。结果：与正常细胞HBL100相比，hTERT启动子在MCF7细胞呈现强的绿色荧光表达；荧光素酶活性检测与其一致，hTERT启动子在MCF7乳腺癌细胞的荧光素酶相对活性RLU／U值（33784）约相当于HBL100细胞中（2400）的15倍。结论：hTERT启动子在乳腺癌MCF7细胞中具有很强的特异性，为进一步开发肿瘤的特异性基因治疗奠定实验基础。     

靶向端粒酶治疗肿瘤研究进展

近年来，随着对端粒酶的研究深入，应用靶向端粒酶的方法治疗肿瘤成为热点，并有较多的新进展，如：应用端粒酶hTERT的免疫抗原性进行肿瘤的免疫治疗；端粒酶启动子驱动的肿瘤基因治疗等。本文简要介绍端粒酶与肿瘤的密切关系，并就针对端粒酶靶向治疗肿瘤的研究进展进行综述。     

用原核增强子提高hTERT启动子介导的基因表达

目的:探讨原核增强子能否提高hTERT启动子的转录活性及对其肿瘤特异性的影响。方法:将增强子SV40、CMV分别或组合构建一系列GFP和荧光素酶报告基因载体,转染人肝癌、鼻咽癌、宫颈癌、结直肠癌细胞、成纤维肉瘤和正常成纤维细胞,流式细胞仪计数和双荧光酶分析系统检测基因的表达效率。结果:在正常成纤维细胞中这些载体均不能有效表达;而在肿瘤细胞中hTERT启动子能介导基因表达但效率不高,增强子能使基因表达增强3~26倍,特别是单独CMV增强子和SV40-CMV双增强子使荧光素酶表达提高20~26倍,是常用的CMV增强子/启动子的2~7倍;完整CMV增强子/启动子对hTERT启动子的活性影响因不同细胞而异。结论:增强子能显著增强hTERT启动子的转录活性并对其肿瘤特异性没有影响,CMV增强子或SV40-CMV双增强子/hTERT启动子是高效特异的通用调控元件,用于靶向性肿瘤基因治疗具有巨大潜力。     

人端粒酶催化亚单位(hTERT)启动子的克隆及其在人肺癌细胞中转录活性的研究

目的克隆人端粒酶催化亚单位(hTERT)的启动子，并检测它在多种人肺癌细胞株和人胚肺成纤维细胞株中的转录活性，为肺癌靶向性基因治疗的研究奠定基础。方法以人胚肾293细胞基因组DNA为模板，应用PCR方法克隆hTERT 5’端上游旁侧序列长约1．1kh的启动子片段，经DNA测序无误后克隆人荧光素酶报告质粒pGL3-Basic的荧光素酶基因上游，构建pGL3-hTER Tp重组质粒，用脂质体法瞬时转染人肺癌细胞株A549、SPC-A-1、LTEPa-2、NCI—H446、YTMLC、GLC-82、A2，以及人胚肺成纤维细胞株MRC5，转染48h后检测hTERT启动子在各细胞株中的转录活性。结果琼脂糖凝胶电泳显示PCR克隆的hTERT启动子片段长约1.1kb。DNA测序结果与GenBank中hTERT启动子DNA序列完全一致，其5’端和3’端分别位于hTERT基因转录起始位点上游1126bp和43bp，片段长度为1084bp。采用双酶切和PCR两种方法鉴定pGL3-hTERTp重组质粒，均显示构建成功。瞬时转染及荧光素酶活性检测实验显示，hTERT启动子在所检测的肺癌细胞株中均有高低不同的转录活性，而在MRC-5细胞株中无转录活性。结论该实验克隆的1084bp大小的hTERT启动子在多种肺癌细胞株中均有转录活性，在人胚肺成纤维细胞中无转录活性。hTERT启动子有可能作为调控元件用于肿瘤靶向性基因治疗。     

肿瘤端粒酶靶向腺病毒载体的表达活性

目的　构建针对端粒酶阳性肿瘤的特异性腺病毒载体 ,研究其介导目的基因在肿瘤细胞内的定向表达能力。方法　将端粒酶逆转录酶 (hTERT )启动子克隆入质粒 pDC3 12的多克隆位点构成外源基因表达盒 ,在基因表达盒上下游分别插入 1个绝缘子序列 ,构建针对端粒酶阳性肿瘤的特异性腺病毒载体pSG TPE ;采用Luciferase报告基因进行hTERT启动子的活性分析 ;以pSG TPE携带绿色荧光蛋白 (EGFP)报告基因 ,重组腺病毒AdTPE EGFP ,观察其介导EGFP在肿瘤细胞内的定向表达能力 ,并与CMV启动子控制的腺病毒AdCMV EGFP作对照。结果　hTERT启动子在正常细胞内几乎没有活性 ,而在肿瘤细胞内的活性与SV 40启动子相近。腺病毒AdTPE EGFP能介导EGFP在肿瘤细胞内定向而稳定表达 ,在正常细胞内不表达 ,而对照腺病毒AdCMV EGFP在肿瘤和正常细胞内均表达EGFP。结论　靶向端粒酶阳性肿瘤的腺病毒载体 pSG TPE ,不但提高了对基因表达调控的特异性 ,而且降低了对正常细胞毒性作用。绝缘子的应用隔断了外源基因表达盒和病毒基因表达调控序列之间的互相干扰 ,进一步提高目的基因的表达效率。该载体对肿瘤的靶向基因治疗具有重要的应用价值。     

hTERT启动子的克隆及hTERT启动子/SV40增强子在食管癌细胞中的转录活性

目的 克隆hTERT启动子核心序列,研究hTERT启动子/SV40增强子在食管癌细胞中的联合转录活性。 方法 以人基因组DNA为模板,PCR扩增hTERT启动子核心片段;将其分别插入荧光素酶基因报告质粒pGL3-Basic和pGL3-Enhancer中,构建hTERT启动子调控的表达载体pGL3-hTERTp和由hTERT启动子/SV40增强子联合调控的表达载体pGL3-hTERTp-SV40en,将上述重组质粒分别瞬时转染食管癌细胞Eca-109、EC1和人胚肺成纤维细胞MRC-5,用荧光素酶检测试剂盒检测转染细胞中荧光素酶基因的表达水平并以此计算hTERT启动子和hTERT启动子/SV40增强子在各种细胞中的转录活性。结果 克隆出长213 bp的hTETR启动子核心片段,DNA测序结果与GenBank中hTERT启动子的碱基序列完全一致;成功构建真核表达载体pGL3-hTERTp和pGL3-hTERTp-SV40en;hTETR启动子在食管癌细胞Eca-109和EC1中均有转录活性,在MRC-5细胞中无明显转录活性;hTERT启动子/SV40增强子在食管癌细胞Eca-109和EC1中的转录活性显著高于hTETR启动子的单独转录活性。结论 hTERT启动子在食管癌细胞中具有靶向性转录活性,SV40增强子能显著增强hTERT启动子在食管癌细胞中的转录活性,有可能作为肿瘤靶向性基因治疗的转录调控元件。     

组织特异性启动子及其在肿瘤基因治疗中的应用

随着基因治疗研究的深入，愈来愈多的组织特异性启动子已被用于调控目的基因在靶器官中的表达，尤其是携带治疗性基因可以实现对肿瘤组织的特异性杀伤作用，组织特异性启动子的应用已成为基因治疗中的一个重要手段，现综述各系统启动子的分类及其应用。     

基因矫正治疗中的启动子研究

利用组织或器官特异性启动子限制目的基因只在靶肿瘤或靶器官中表达是基因治疗的一种有效途径,如AFP启动子、CEA启动子、Tyr启动子等.而利用应激刺激的可诱导启动子则可能解决组织或器官特异性启动子的弱表达问题,如Hsp启动子、hTERT启动子等.现综述基因矫正治疗在肿瘤基因治疗领域有应用价值的启动子研究进展.     

基因矫正治疗中的启动子研究

利用组织或器官特异性启动子限制目的基因只在靶肿瘤或靶器官中表达是基因治疗的一种有效途径,如AFP启动子、CEA启动子、Tyr启动子等.而利用应激刺激的可诱导启动子则可能解决组织或器官特异性启动子的弱表达问题,如Hsp启动子、hTERT启动子等.现综述基因矫正治疗在肿瘤基因治疗领域有应用价值的启动子研究进展.     

hTERT启动子介导肿瘤凋亡研究进展

在细胞永生化和肿瘤发展过程中，端粒酶的激活是一个关键性的步骤。人类端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的表达是端粒酶激活的限速步骤。现综述hTERT基因启动子介导肿瘤凋亡的最新研究进展。     

肿瘤靶向性腺病毒研究进展

腺病毒是目前恶性肿瘤基因治疗中应用最广泛的基因转移载体，但由于其缺乏靶向性而严重限制了其介导基因治疗的临床应用。开发具有肿瘤靶向性的病毒载体是腺病毒载体的发展方向与研究热点，而对腺病毒衣壳进行改造使其能够靶向性感染肿瘤细胞是靶向性腺病毒研究的重点。现综述近年来腺病毒载体的研究进展。     

hTERT启动子介导肿瘤凋亡研究进展

在细胞永生化和肿瘤发展过程中,端粒酶的激活是一个关键性的步骤.人类端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的表达是端粒酶激活的限速步骤.现综述hTERT基因启动子介导肿瘤凋亡的最新研究进展.     

组织特异性启动子及其在肿瘤基因治疗中的应用

随着基因治疗研究的深入,愈来愈多的组织特异性启动子已被用于调控目的基因在靶器官中的表达,尤其是携带治疗性基因可以实现对肿瘤组织的特异性杀伤作用,组织特异性启动子的应用已成为基因治疗中的一个重要手段,现综述各系统启动子的分类及其应用.     

肿瘤靶向性腺病毒研究进展

腺病毒是目前恶性肿瘤基因治疗中应用最广泛的基因转移载体,但由于其缺乏靶向性而严重限制了其介导基因治疗的临床应用.开发具有肿瘤靶向性的病毒载体是腺病毒载体的发展方向与研究热点,而对腺病毒衣壳进行改造使其能够靶向性感染肿瘤细胞是靶向性腺病毒研究的重点.现综述近年来腺病毒载体的研究进展.     

放射诱导HSV—TK基因肺癌靶向性表达的研究

目的：构建由Egr-1启动子驱动HSV－TK基因表达的重组质粒，通过放射诱导调控HSV－TK基因的肿瘤靶向表达，以提高肺癌基因治疗的选择性和有效性。方法：利用基因重组方法构建tgEgr-HyTK表达载体；脂质体介导转染肺癌A549，SHG44细胞系，给以不同剂量γ射线照射，观察照射前后各时相点肺癌细胞HSV－TK表达情况；以及不同浓度前药GCV作用下肺癌细胞相对存活率的变化。结果：γ射线可诱导HSV－TK基因在被染肺癌细胞表达显著增强，呈剂量依赖性；照射后3h HSV－TK基因表达增强，于第8小时达峰值，第36小时恢复至照射前水平。经放射诱导后，tgEgr-HyTK转染肺癌细胞对GCV的敏感性明显升高（P＜0．05）；进一步发现，HSV－TK／GCV系统对放射线有较明显的增敏作用。放射和HSV－TK／GCV在肿瘤杀伤作用上存在明显协同效应。结论：利用Egr-1启动子调控HSV－TK基因的肿瘤靶向性表达，是一种高效，特异的肺癌基因治疗新策略。     

端粒酶催化亚基hTERT在肿瘤治疗中的研究进展

人端粒酶催化亚基hTERT基因转录的从头激活是端粒酶活化的限速步骤，受到多种癌基因和抑癌基因产物的精密调控。构建hTERT启动子调控抗肿瘤基因的逆转录病毒载体，使抗肿瘤基因在端粒酶阳性的肿瘤细胞内定向表达，有望用于肿瘤基因治疗。本文首先简单介绍了hTERT蛋白的结构和表达调控机制，然后对其在肿瘤发生发展中的生物治疗的功能作一简要综述。