维生素K3和三氧化二砷诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡的协同作用

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)联合维生素K3对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226细胞生长抑制及诱导凋亡作用机制。方法:采用四甲基噻唑氮蓝比色法检测As2O3联合VK3对RPMI8226细胞生长抑制作用、DNA电泳、流式细胞术Annexin V/PI标记法检测凋亡,观察As2O3联维生素K3对RPMI8226细胞的增殖抑制及促凋亡作用;同时通过RT-PCR检测VEGF表达来观察VK3、As2O3对RPMI8226细胞的凋亡诱导作用及两者是否有协同作用。结果:VK3和As2O3二者均可明显抑制RPMI8226细胞系的增殖,其作用机制可能通过降低Bcl-2mRNA的表达、诱导调亡,这种效应具有时间与剂量依赖性;二者间具有协同作用。经VK3和As2O3作用后的RPMI8226细胞出现凋亡细胞的特征;维生素K3(VK3)、As2O3单独及联用作用于RPMI8226细胞DNA凝胶电泳可见明显的梯形条带。与单用As2O3相比,As2O3联合VK3作用于RPMI8226细胞48h后,细胞凋亡率显著增加(P<0.05),G0/G1期细胞比例升高,S期细胞减少。RT-PCR检测表明RPMI8226细胞经VK3、As2O3单独及联合作用后血管内皮生长因子VEGF表达明显降低。结论:VK3、As2O3单用及联用对RPMI8226细胞有明显的增殖抑制作用和诱导凋亡作用,且具有一定的量效和时效关系。可能通过VEGF表达降低而起作用。VK3和As2O3在诱导RPMI8226细胞凋亡中具有明显的协同作用。     

维生素K3增强三氧化二砷诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡的实验研究

目的:探讨维生素K3对三氧化二砷(As2O3)诱导人多发性骨髓瘤(MM)细胞株RPMI8226细胞凋亡的作用及生长抑制。方法:采用四甲基噻唑氮蓝比色法检测As2O3联合维生素K3对人多发性骨髓瘤(MM)细胞株RPMI8226细胞生长抑制作用;流式细胞术检测As2O3联合维生素K3对RPMI8226细胞周期和凋亡率的影响。结果:单用As2O3对RPMI8226细胞的生长有抑制作用,其作用呈时间和剂量依赖性;与单用As2O3相比,As2O3联合维生素K3作用于RPMI8226细胞48h后,细胞凋亡率显著增加(P<0.05),G0/G1期细胞比例升高,S期减低,并有凋亡峰。结论:维生素K3可以增强As2O3对RPMI8226细胞诱导凋亡作用。     

丹参酮诱导多发性骨髓瘤RPMI8226细胞凋亡并降低其VEGF表达

目的 观察丹参酮抑制多发性骨髓瘤(MM)RPMI8226细胞生长及其对VEGF表达的影响.方法 将丹参酮与RPMI8226细胞共培育,采用MTT法观察细胞生长,AnnexinV-FITC/PI双染色流式细胞仪检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞膜表面VEGF的表达.结果 丹参酮对RPMI8226细胞具有明显的生长抑制作用,呈量效关系;丹参酮诱导8226细胞凋亡,丹参酮作用于RPMI8226细胞48 h导致VEGF表达减少.结论 丹参酮抑制RPMI8226细胞的生长诱导其凋亡,同时降低VEGF表达.     

高三尖杉酯碱联合三氧化二砷诱导人多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞株凋亡的实验研究

目的通过体外实验阐述高三尖杉酯碱（HHT）单药及联合亚砷酸（ATO）用药对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226作用及其机制。方法应用四甲基偶氮唑（MTT）比色法,检测HHT、ATO单药及两者联合用药对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226增殖的影响,Hoechst染色法检测细胞凋亡形态学变化,流式细胞仪检测细胞早期凋亡比率。Western blot 检测药物处理后凋亡关键蛋白（Caspase-3、9及PARP）、Bcl-2家族蛋白（Bcl-2、Mcl-1、Bcl-xl）及AKT蛋白的表达。结果HHT、ATO单药可显著抑制RPMI 8226细胞的增殖,其作用呈时间及浓度依赖（P<0.05）,且两药联合具有协同作用（CI<1）。HHT、ATO单药可诱导RPMI 8226细胞凋亡且呈浓度依赖,出现细胞凋亡形态学改变及早期凋亡比率增高,两药联合可加强诱导凋亡作用。HHT可呈浓度依赖性激活Caspase-3、PARP表达;HHT（40 ng/mL）与ATO（8.5 μmol/L）联合用药可显著激活Caspase-3、9,下调抗凋亡蛋白Mcl-1及Bcl-xl的表达,呈时间依赖性降低AKT磷酸化水平。结论HHT、ATO单药或联合用药可诱导RPMI 8226细胞凋亡,其机制可能和激活Caspase通路、调节Bcl-2家族蛋白表达、抑制AKT磷酸化等有关。     

白花蛇舌草注射液对多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226增殖的影响

目的探讨白花蛇舌草注射液（HDI）抑制多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226增殖作用及机制。方法采用四甲基偶氮唑（Mar）比色法检测HDI对RPMI8226抑制作用并筛选研究浓度;通过流式细胞技术使用AnnexinV-PI检测细胞凋亡、PI单染检测细胞周期分布、FITC．CD44、PE—CD49d双标检测黏附分子表达;ELISA检测细胞上清IL-6、VEGF含量;RT-PCR检测Bax、Bcl-2、Caspase-3、Survivin、IL-6、VEGFmRNA的表达。结果HDI可抑制RPMI8226增殖,同时诱导该细胞株早期凋亡,将细胞周期阻滞于G1期,且呈浓度依赖。经0、20、40、60μL／mLHDI作用后RPMI8226上清VEGF含量降低且呈浓度依赖（P〈0．01）,IL-6含量增高（P〈0．01）,细胞表面CD44、CD49d表达水平呈浓度依赖上调。经40μL／mLHDI作用后,该细胞株SurvivinmRNA表达显著下调（P〈0．01）,Bcl-2、IL-6、VEGFmRNA显著上调（P〈0．01）,Bax、Caspase-3mRNA则上调不明显（P〉0．05）。结论HDI可抑制RPMI8226增殖,其机制可能和诱导细胞早期凋亡,细胞周期C1期阻滞,降低VEGF分泌,下调Survivin转录水平等有关。     

川芎嗪联合三氧化二砷对人急性早幼粒细胞白血病HL-60细胞增殖的影响

目的 探讨川芎嗪(TMP)联合三氧化二砷(As2O3)对人急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株HL-60增殖的影响及其治疗APL的作用机制.方法 采用HL-60和脐带内皮细胞系ECV-304两种细胞株,分为空白组、TMP组、As2O3组、TMP+ As2O3组,每组设4个复孔,经TMP单独或联合As2O3作用后,应用噻唑蓝(MTT)实验测定HL-60细胞增殖变化;检测HL-60细胞血管内皮生长因子(VEGF) mRNA和蛋白表达;台盼蓝染色计数绘制ECV-304细胞生长曲线;流式细胞仪检测ECV-304细胞早期凋亡率;倒置显微镜观察ECV-304细胞贴壁情况.结果 TMP能明显抑制HL-60、ECV-304细胞增殖,且能加强As2O3抑制增殖的作用;VEGF mRNA和蛋白表达在TMP与As2O3联合处理后明显减少;TMP与As2O3均能诱导ECV-304细胞早期凋亡,降低细胞贴壁能力,联合作用后效果均明显增强.结论 TMP联合As2O3抑制APL HL-60细胞增殖作用增强,抗血管新生是其治疗APL的可能机制.     

积雪草酸对多发性骨髓瘤细胞增殖活性的影响及其机制探讨

目的探讨积雪草酸对多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期的影响及其机制。方法 MTT法检测积雪草酸对肿瘤细胞的抗增殖作用;Hoechest33258染色法检测细胞凋亡的形态学变化;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡及细胞周期的变化;RT-PCR法检测细胞survivin和bcl-2 mRNA表达水平的变化。结果积雪草酸在浓度10~70μmol/L显著抑制RPMI 8226细胞的增殖,呈时间及浓度依赖性,作用24、487、2 h的IC50值分别为(42.25±4.57)(、24.88±3.51)(、19.83±2.88)μmol/L。积雪草酸可诱导细胞发生凋亡,出现典型的凋亡小体。积雪草酸诱导细胞发生早期凋亡,并呈浓度依赖性。积雪草酸25~40μmol/L能将RPMI 8226细胞阻滞在G2期,G2期细胞比例随积雪草酸浓度增大而逐渐增高。积雪草酸使survivin和bcl-2 mRNA表达下降,并与细胞的凋亡程度呈负相关。结论积雪草酸能通过调控细胞周期的进程和诱导细胞凋亡从而抑制RPMI8226细胞增殖,其诱导凋亡的机制可能与下调survivin和bcl-2的转录水平有关。     

青蒿琥酯对骨髓瘤RPMI 8226细胞增殖、凋亡及对Survivin、Caspase-3、Caspase-7的影响

目的探讨青蒿琥酯对体外培养的人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226的增殖、凋亡及对凋亡相关基因survivin及caspase-3、caspase-7表达的影响。方法采用MTT法检测青蒿琥酯对RPMI8226细胞增殖的抑制作用,光镜下观察细胞形态学变化,流式细胞仪分析细胞凋亡率,荧光定量PCR(FQ-PCR)检测survivin和caspase-3、caspase-7mRNA表达水平变化,Western blotting检验Survivin蛋白表达变化,应用Caspase-3/7试剂盒检测Caspase-3、Caspase-7蛋白活性。结果青蒿琥酯质量浓度从2.5μg/mL增加至50μg/mL时,青蒿琥酯体外对RPMI8226细胞的抑制率由33.55%增加到74.71%。细胞凋亡率呈剂量依赖性增加,50μg/mL青蒿琥酯诱导RPMI8226细胞最大凋亡率达(68.1±5.9)%。不同质量浓度青蒿琥酯干预48h后Survivin mRNA及蛋白表达水平明显降低,Caspase-3、Caspase-7mRNA及蛋白活性明显升高(P0.01)。结论青蒿琥酯对RPMI8226细胞有生长抑制和诱导凋亡作用,其机制可能与增强Caspase-3、Caspase-7活性,抑制抗凋亡分子survivin表达有关。     

和厚朴酚联合三氧化二砷诱导骨髓瘤细胞凋亡的作用机制

〔摘 要〕 目的：探究和厚朴酚（HNK）联合三氧化二砷（As2O3）诱导人多发性骨髓瘤 RBMI8226 细胞株的凋亡作用机制。 方法：不同浓度的 HNK、As2O3 单药作用于细胞 24 h、48 h、72 h 后，采用 CCK–8 法检测细胞增殖抑制率；应用 Annexin V–FITC/PI 双染及 PI 单染法流式细胞术检测各处理组细胞凋亡和周期分布情况；采用 Western blot 法检测细胞中 Bcl–2、 Bax、Caspase–3 蛋白表达水平。结果：HNK 与 As2O3 单药对 RBMI8226 细胞增殖具有抑制作用，呈时间和剂量依赖性； HNK 与 As2O3 单药能有效诱导细胞凋亡，两药联合后对细胞的诱导凋亡作用较单药显著，差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）； HNK 和 As2O3 单药可使骨髓瘤细胞阻滞在 S 期，两药联合可增强诱导细胞分化作用，使细胞由 G1、G2 期进入 S 期，差异 具有统计学意义（P ＜ 0.01）。联合用药时能够降低细胞的 Bcl–2 水平、增加 Caspase–3 以及 BAX 水平表达。结论：HNK 及 As2O3 联合对人多发性骨髓瘤 RBMI8226 细胞株具有协同杀伤作用，该作用可能通过激活凋亡相关信号通路来诱导凋亡。     

锯叶棕提取物与AG490合并应用对MM细胞增殖作用的影响

目的：探讨锯叶棕提取物与AG490合并应用后对MM细胞增殖的影响。方法：将体外培养的U266和PRM182：26细胞与0—2uL／mL的不同浓度锯叶棕提取物共孵育,应用MTT比色法测定细胞增殖活性;同时应用台盼蓝不相容实验检测锯叶棕提取物与AG490单独使用或合并使用时的细胞成活率。结果：锯叶棕提取物抑制U266与RPM18226细胞的增殖,其抑制生长50％（ED50S）的有效剂量分别为1．2和0．7灿L／mL;U266细胞用锯叶棕提取物（0．5uL／mL）或AG490（20nM）预处理,其细胞成活率分别为（79．7±1．1）％和（67．2±6．1）％,两者联合应用细胞成活率为（42．9±12.0）％（P〈0．001）;RP—M18226细胞用锯叶棕提取物（0．5ul／mL）或AG490（20nM）预处理,其细胞成活率分别为（74．7±2．1）％和（37．2±5．1）％,两者联合应用细胞成活率为（42．9±4．1）％（P〈0．001）。结论：锯叶棕提取物与AG490合并应用抑制MM细胞的增殖作用较单独使用效果好。     

锯叶棕提取物增强多烯紫杉醇抗MM细胞增殖作用

[目的]探讨锯叶棕提取物对多烯紫杉醇抗MM细胞增殖的影响。[方法]将体外培养的U266和PRMI8226细胞与0-2μL/mL的不同浓度锯叶棕提取物共孵育,应用MTT比色法测定细胞增殖活性;同时应用台盼蓝不相容实验检测锯叶棕提取物与多烯紫杉醇单独使用或合并使用时的细胞成活率。[结果]锯叶棕提取物对U266细胞与RP-M18226细胞的增殖具有明显的抑制作用,抑制生长50%(ED_(50S))的有效剂量分别为1.2和0.7μL/mL;U266细胞用锯叶棕提取物或多烯紫杉醇预处理,其细胞成活率分别为79.7%或90.1%,两者联合应用细胞成活率为51.6%(P<0.001);RPMI8226细胞用锯叶棕提取物或多烯紫杉醇预处理,其细胞成活率分别为73.7%或80.1%,两者联合应用细胞成活率为55.6%(P<0.001)。[结论]锯叶棕提取物抑制MM细胞增殖并增强多烯紫杉醇抗MM细胞增殖作用。     

白花蛇舌草诱导骨髓瘤8226细胞凋亡的研究

目的:通过对白花蛇舌草(hedyotis diffusa,HD)在体外抑制骨髓瘤细胞株RPMI8226的增殖作用的观察,探讨HD治疗骨髓瘤患者的作用机制。方法:以多发性骨髓瘤细胞株(RPMI8226)为研究对象,应用MTT法观察不同浓度HD对RPMI8226细胞增殖的影响作用,用AV/PI流式细胞检测术观察细胞凋亡,Hoechst染色观察形态学改变。结果:HD在1~4mg/mL浓度范围内对RPMI8226细胞有明显的增殖抑制作用,最高抑制率达到了92.68%,呈时间、剂量依赖关系。以1、2、3mg/mL的HD分别作用RPMI8226细胞24h后,AV/PI流式细胞仪分析结果显示早期凋亡率分别为:22.52%、62.31%、69.94%,高于空白对照组8.93%。HD诱导RPMI8226细胞凋亡时,细胞核可见凋亡小体,且凋亡小体数量随HD浓度增加而增加。结论:HD在一定浓度下可抑制骨髓瘤细胞增殖,其作用机理可能是诱导细胞凋亡。此实验研究结果为HD作为治疗多发性骨髓瘤的辅助药物提供实验依据。     

龙葵总碱对骨髓瘤细胞凋亡及NF-KB表达的影响

目的：探讨龙葵总碱对人骨髓瘤RPMI-8226细胞的凋亡作用以及对NF-KB表达的影响。方法：选用人骨髓瘤RPMI-8226细胞株为研究对象,以龙葵总碱为被试对象,采用MTT法检测细胞增殖活性,AnnexinV-FITC/PI双标记法分析细胞凋亡的改变;免疫荧光细胞化学染色分析NF-KB的表达情况。结果：在25mg/L龙葵总碱处理RPMI-8226细胞48h后,RPMI-8226细胞的生长出现明显的抑制作用,且随着浓度加大及时间延长,其抑制作用逐步增强;药物浓度〈25mg/L时,诱导凋亡作用不明显,当药物浓度达到25mg/L时,早期凋亡明显增多;当药物浓度达25mg/L（此时细胞凋亡明显）时,NF-KB表达水平的降低具有统计学意义。结论：龙葵总碱可抑制骨髓瘤RPMI-8226细胞增殖,促进骨髓瘤细胞凋亡,并且表现为剂量和时间依赖性;NF-KB表迭量在人多发性骨髓瘤RPMI-8226细胞株随龙葵总碱的药物浓度增大而降低。     

锯叶棕提取物对RPMI8226细胞凋亡相关蛋白表达的影响

[目的]探讨锯叶棕提取物对RPMI8226细胞凋亡的影响以及对细胞凋亡相关蛋白表达的影响。[方法]①体外培养的RPMI8226细胞加入到不同浓度的锯叶棕提取物(0.5或1.0μL/mL)培养24h,利用流式细胞仪测定位于前G1时期的细胞百分比以检测细胞凋亡;②体外培养的RPMI8226细胞加入到锯叶棕提取物(1.0μL/mL)培养24h,应用Western Blot检测PARP、MCl-1蛋白表达。[结果]①锯叶棕提取物诱导RPMI8226细胞凋亡具有剂量依赖性(P<0.05);②RPMI8226细胞暴露于锯叶棕提取物(1.0μL/mL)培养24h,PARP蛋白水平表达明显增加,但不能调整Mcl-1。[结论]锯叶棕提取物诱导RPMI8226细胞凋亡。     

人多发性骨髓瘤裸鼠皮下移植瘤模型的建立

目的:探索人多发性骨髓瘤裸鼠皮下移植瘤模型建立的方法。方法:Balb/c裸鼠进行3GyX线照射预处理后24h,于其皮下接种2×107人多发性骨髓瘤细胞RPMI8226,每2~3d观察裸鼠体重的变化、肿瘤生长的情况、裸鼠的生存时间等,待裸鼠濒死或死亡,或者超过观察时间仍未死亡时,处死裸鼠,取其皮下结节及器官进行病理检测,同时摘眼球取血行血清免疫固定电泳检测。结果:荷瘤裸鼠出现皮下结节的高峰为荷瘤后第2~3周,结节体积基本达到高峰为荷瘤后第5~6周;裸鼠死亡高峰出现在荷瘤后第7周,荷瘤小鼠中位生存时间为荷瘤后52d;裸鼠处死后血清中未检测到人源单克隆免疫球蛋白;皮下结节HE染色证实瘤组织为浆细胞来源,器官HE染色显示肝脏部分炎性损伤。结论:采用RPMI8226人骨髓瘤细胞于Balb/c裸鼠皮下接种(接种细胞数为2×107个细胞)造模的方法,具有操作过程较简单、技术要求低,观察肿瘤生长较为直观等优点;同时采用X线照射预处理的方法可降低裸鼠免疫力,明显提高模型的成瘤率;人多发性骨髓瘤细胞RPMI8226皮下接种于裸鼠,肿瘤生长过程中很难有人源单克隆免疫球蛋白分泌入血;荷瘤裸鼠出现肝脏的损伤,也许可作为今后抗肿瘤药物疗效研究的指标之一。     

鱼藤素对人骨髓瘤细胞RPMI-8226增殖和凋亡的影响及对核受体共激活因子-3的调控作用

目的 观察鱼藤素对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI-8226细胞增殖和凋亡的影响及其对核受体共激活因子-3(SRC-3)的调控作用,研究鱼藤素诱导凋亡作用与其调节SRC_3的相互关系.方法 采用MTT法检测细胞增殖活性,Annexin-V FITC/PI双标法及Hoechst 33258染色法分析细胞凋亡的改变,RT-PCR法检测鱼藤素对RPMI-8226细胞内SRC-3基因表达的影响;免疫组化法检测鱼藤素对RPMI-8226细胞SRC-3蛋白的影响和分布情况.结果 鱼藤素能明显抑制RPMI-8226细胞的增殖,其抑制作用呈时间、剂量依赖性,其作用24 h的IC50为(54.55±0.40)nmol/L.此外,鱼藤素具有较强的诱导RPMI-8226细胞凋亡的效应,25 nmol/L即能诱导(17.04±0.73)%的RPMI-8226细胞发生凋亡;当药物浓度达到100 nmol/L时,总凋亡率达(63.57±1.36)%.在RPMI-8226细胞中SRC-3高表达,且主要分布于细胞核,经鱼藤素干预后,SRC-3的mRNA和蛋白表达水平明显下降.结论 鱼藤素能明显抑制RPMI-8226细胞的增殖,并诱导其凋亡.而鱼藤素诱导的SRC-3表达量的下调可能参与了其诱导凋亡作用.