Prohibitin在放射照射诱导鼻咽癌细胞凋亡中的表达及亚细胞定位的变化

目的:探讨放射照射诱导鼻咽癌细胞凋亡中prohibitin(PHB)的表达及亚细胞定位的改变。方法:体外培养鼻咽癌细胞系CNE-1和CNE-2,应用流式细胞术测定4 Gy X线照射前后CNE-1和CNE-2的凋亡率,Western blot检测照射前后PHB和凋亡相关蛋白Bax与P53表达水平的变化,同时应用免疫荧光染色分析上述蛋白亚细胞定位的改变。结果:X线照射后24 h,CNE-1和CNE-2细胞凋亡率、PHB蛋白表达以及凋亡相关蛋白Bax与P53的表达均较照射前显著增加(P<0.05或P<0.01)。PHB和P53在照射前均主要定位于细胞核,少量分布于胞浆,照射后胞浆荧光强度明显增加,细胞核荧光强度下降,表现为出核转运。Bax在照射前后未发现明显的细胞定位改变。结论:放射照射诱导的鼻咽癌细胞凋亡可能与PHB和P53表达及亚细胞定位改变有关。     

干扰GTPBP4基因对食管癌EC9706细胞放射敏感性影响

目的 探讨沉默GTPBP4基因对人食管癌EC9706细胞系放射敏感性影响。方法 通过GEO数据库分析食管癌患者组织中GTPBP4的表达情况。利用重组质粒载体介导的RNA干扰(RNAi)技术转染食管癌EC9706细胞系,使细胞中GTPBP4基因沉默,观察GTPBP4基因沉默对EC9706细胞增殖、凋亡及放射敏感性影响。通过qRT-PCR和蛋白质印迹法评估基因沉默效果及检测凋亡相关蛋白表达。应用MTT法检测转染后细胞的增殖变化。采用流式细胞术检测干扰GTPBP4基因表达后细胞凋亡变化。应用克隆形成实验检测细胞照射后放射敏感性变化。结果 GEO数据库分析表明GTPBP4基因在人食管癌组织中的表达明显高于正常邻近食管组织(P<0.001)。与空白对照组和阴性对照组相比,干扰组EC9706细胞的GTPBP4 mRNA及蛋白表达水平明显下降(均 P<0.001),表明质粒成功转染EC9706细胞。MTT检测结果显示干扰组EC9706细胞增殖率受到显著抑制(P<0.001)。流式细胞术结果显示干扰组EC9706细胞凋亡率明显升高(P<0.001),细胞凋亡明显增加(P<0.001);凋亡相关蛋白(Cleaved caspase-9、Cleaved caspase-3、Bax)表达明显升高,抗凋亡蛋白(Bcl-2)表达下降(P<0.001、P=0.001、P=0.0014、P=0.005)。克隆形成实验结果显示干扰组EC9706细胞放射增敏比1.716。结论 GTPBP4基因在人食管癌组织中高表达,RNAi技术可有效抑制EC9706细胞GTPBP4基因表达,从而抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡、增强细胞对放射线的敏感性。     

siRNA干扰Pokemon基因对鼻咽癌CNE-2细胞生长作用的研究

目的:探讨siRNA干扰Pokemon基因对鼻咽癌CNE-2细胞生长作用的影响.方法:利用siRNA预测软件得到3条siRNA编码DNA序列,并制备合成siRNA片段,利用RT-PCR和蛋白质印迹法检测其沉默Pokemon基因的效果,筛选出沉默效果最佳的siRNA片段.利用MTT法和流式细胞术检测CNE-2细胞生长与凋亡情况.结果:筛选出一条≥50％沉默效应的siRNA片段,转染鼻咽癌CNE-2细胞后,Pokemon基因表达明显下降(P＜0.05),p14ARF和p53基因表达上调,P＜0.05.鼻咽癌CNE-2细胞增殖受到抑制(P=0.015),凋亡率升高,P=0.008.结论:Pokemon基因沉默后可抑制CNE-2细胞生长,促进细胞凋亡,其机制可能与p14ARF和p53的表达上调有关.     

ERK/MAPK信号通路活性表达与鼻咽癌细胞增殖凋亡的关系

目的:探讨鼻咽癌细胞中ERK/MAPK信号传导通路异常激活与细胞增殖凋亡的关系.方法:SP法检测36例鼻咽癌、42例对照鼻咽黏膜上皮中p-ERK,Cyelin D1 和Ki-67蛋白的表达.用不同浓度阻滞刺PD98059处理CNE-2Z细胞,Hoechst33342/PI荧光双染法观察细胞凋亡,流式细胞仪检测凋亡,蛋白质印迹法检测Cyclin D1蛋白表达,免疫细胞化学法检测tyERK、Cyclin D1 和Ki-67蛋白的表达.结果:鼻咽癌组织中p-ERK、Cyclin D1和Ki-67的阳性表达率分别为69.44%(25/36)、80.56%(29/36)和80.56%(29/36),鼻咽黏膜上皮组织中则分别为23.80%(10/42)、19.05%(8/42)和9.52%(4/42),P<0.01.鼻咽癌组织中p-ERK-与Cyelin D1、Ki-67蛋白的表达呈正相关,r分别为0.604和0.668,P均<0.01.不同浓度PD98059作用于CNE-2Z细胞后,可观察到凋亡细胞,检测到凋亡峰,Cyclin D1蛋白表达的减少呈剂量依赖性,p-ERK、Cyclin D1和Ki-67蛋白的阳性表达细胞数减少.结论:鼻咽癌组织及CNE-2Z细胞中存在p-ERK蛋白的高表达和活化异常,p-ERK可能通过上调Cyclin D1和Ki-67的表达促进鼻咽癌细胞增殖并抑制凋亡.ERK信号通路有可能成为鼻咽癌治疗的新靶点.     

姜黄素对人鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖及 凋亡的影响

 目的探讨姜黄素对人鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖及凋亡的影响及其相关的分子机制。方法体外培养的 CNE-2Z细胞经不同剂量姜黄素处理后,用MTT法观察对细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期和凋亡 率的改变,Western blot检测姜黄素处理后相关蛋白Bcl-2、Bax表达水平的变化。结果姜黄素对CNE-2Z细 胞的生长和增殖都具有一定程度的抑制作用,阻断细胞于S期和G2/M期。姜黄素处理后CNE-2Z细胞凋亡抑 制基因Bcl-2蛋白表达减少,同时促凋亡基因Bax蛋白表达增加。 结论姜黄素可抑制CNE-2Z细胞增殖并促进 其凋亡。     

塞来昔布对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究特异性环氧化酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对人鼻咽癌细胞株CNE-2是否具有抑制增殖、诱导凋亡的作用并初步探讨其作用机制。方法 用塞来昔布作用于体外培养的人鼻咽癌CNE-2细胞,采用四甲基偶氮陛蓝比色法（MTT）测定细胞增殖活力的改变;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot 检测细胞Bcl-2、Bax蛋白的表达情况。结果 MTT结果显示不同浓度塞来昔布（25～100μmol/L）均能抑制鼻咽癌CNE-2 细胞生长,呈浓度和时间依赖性。流式细胞术结果显示塞来昔布（25～75μmol/L）浓度范围内能诱导鼻咽癌CNE-2 细胞凋亡,呈浓度和时间依赖性。Western blot 结果显示塞来昔布作用于鼻咽癌CNE-2 细胞后,Bcl -2 蛋白表达水平下调和Bax蛋白表达上调呈浓度依赖方式。结论 塞来昔布具有抑制人鼻咽癌CNE-2细胞增殖和诱导其凋亡的作用,其机制可能与下调Bcl-2 蛋白表达,上调Bax蛋白表达有关。     

红松松塔提取物多聚苯丙素-多糖复合物诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡

目的 研究红松松塔提取物多聚苯丙素-多糖复合物(Polyphenylpropenoid-polysaccharide complex,PPC)诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的机制。方法 用体外培养的MCF-7细胞与不同浓度PPC作用不同时间,应用MTT法、荧光染色法、凋亡检测试剂盒、DNA凝胶电泳及Western blot检测PPC对MCF-7细胞增殖的影响和诱导凋亡的作用。结果 PPC可诱导MCF-7细胞发生凋亡。细胞凋亡时Caspase-3和Caspase-9的酶活力升高,Caspase-3前体酶蛋白表达下降;Caspase-3抑制剂(z-DEVE-fmk)可部分抑制PPC诱导的细胞凋亡,并抑制Caspase-3前体酶的活化。结论 PPC通过激活Caspase家族诱导MCF-7细胞凋亡。     

谷胱甘肽S-转移酶P1对小鼠肺癌细胞放射敏感性调控作用

目的 探讨谷胱甘肽S-转移酶P1(GSTP1)对小鼠路易斯肺癌细胞放射敏感性的调控作用。方法 使用shRNA干扰表达慢病毒和阴性对照病毒分别感染路易斯肺癌(LLC)细胞,并筛选出稳转株;应用RT-PCR和蛋白免疫印迹(WB)法检测LLC细胞GSTP1 mRNA和蛋白质表达水平,验证敲低效果;使用细胞增殖检测(CCK-8)法检测照射后细胞活力;使用克隆形成实验检测照射后细胞克隆形成能力;使用流式细胞术检测照射后细胞的凋亡水平。构建荷瘤小鼠并进行照射,检测照射后肿瘤体积变化;TUNEL染色检测照射后肿瘤细胞凋亡水平;免疫荧光检测照射后肿瘤内CD⁺₄CD⁺₈T细胞数量。结果 RT-PCR和WB结果显示shRNA慢病毒干扰后,GSTP1的mRNA和蛋白表达水平均明显下降。下调GSTP1能降低照射后细胞活力及克隆形成能力,并提高照射后细胞凋亡率。GSTP1敲低组荷瘤小鼠照射后肿瘤体积明显小于对照组,而肿瘤凋亡水平高于对照组,肿瘤内浸润CD⁺₄CD⁺₈T细胞数量亦高于对照组。结论 下调GSTP1能够显著增加LLC细胞的放射敏感性,并增加肿瘤组织中淋巴细胞的浸润。     

miR-424-5p通过靶向抑制HMGA1表达提高宫颈癌放射敏感性

目的 探讨miR-424-5p对宫颈癌放射敏感性的影响及作用机制。方法 RT-qPCR检测miR-424-5p在宫颈癌组织和Hela细胞中表达;流式细胞术检测Hela细胞凋亡率;CCK-8检测Hela细胞增殖活性;蛋白印迹法检测Hela细胞中蛋白表达水平。结果 相较于正常组织和细胞,宫颈癌组织和Hela细胞中miR-424-5p表达量降低(1.03∶0.88,P<0.01;1.00∶0.75,P<0.001)。过表达miR-424-5p会抑制经放射处理后Hela细胞增殖活性(P<0.01),同时增加放射处理后Hela细胞凋亡率(24.82%∶49.94%,P<0.001)。过表达miR-424-5p会抑制HMGA1表达(1.01∶0.63,P<0.01),miR-424-5p会直接作用HMGA1进而影响宫颈癌放射敏感性。结论 miR-424-5p通过直接靶向HMGA1提高宫颈癌放射敏感性。     

SKA1对肾细胞癌细胞增殖凋亡的影响及其分子机制研究

目的 研究SKA1在肾细胞癌中的表达情况,探讨其表达对肾细胞癌细胞增殖凋亡的影响及其分子机制。方法 从癌症基因组图谱(TCGA)数据库收集肾细胞癌数据集,分析SKA1在肾细胞癌组织和正常肾组织中的表达差异及其与临床病理特征的关系和对预后的影响。收集2016年1月—2018年9月在新疆医科大学附属肿瘤医院就诊的72例肾透明细胞癌患者切除的肿瘤组织及癌旁组织,利用实时荧光定量PCR法检测SKA1的表达水平。体外培养的人肾细胞癌细胞系786-O和ACHN分别用shSKA1干扰慢病毒和对照病毒载体感染。CCK-8法检测细胞增殖活性;平板克隆实验检测细胞克隆形成能力;Annexin V-FITC检测细胞凋亡率。运用IPA@在线生物信息学软件,对基因表达谱芯片检测的差异基因进行信号传导通路及生物学功能分析。Western blot法检测各组细胞TNF-α、cleaved-caspase 3、cleaved-caspase 9、p-Akt、p-mTOR蛋白水平变化。结果 在各病理亚型肾细胞癌组织中SKA1的表达水平明显高于正常肾组织(P＜0.01),与肾透明细胞癌和肾乳头状细胞癌患者的T、N、M(TNM)及AJCC分期有关(P＜0.01)。SKA1高表达患者总生存期明显短于低表达患者(P＜0.001)。组织样本研究结果证实,SKA1在肾透明细胞癌组织中表达水平高于癌旁组织,与TCGA数据库分析结果一致。与对照组相比,感染shSKA1慢病毒的肾细胞癌细胞增殖能力明显下降,凋亡细胞比例增加(P＜0.01)。IPA@分析发现,生物功能富集排名第一的是细胞生长与增殖,TNF被强烈激活,PI3K/Akt/mTOR通路信号分子被显著抑制。Western blot实验结果证实,SKA1干扰组中TNF-α、Caspase 3和Caspase 9表达水平显著上升,而与细胞增殖相关的通路信号分子Akt和mTOR的磷酸化表达水平显著下调,与富集分析结果相一致。结论 SKA1是肾细胞癌预后不良因素。降低肾细胞癌中SKA1表达能减弱肾细胞癌细胞增殖,同时促进凋亡,其机制可能与TNF-α激活和PI3K/Akt/mTOR通路分子磷酸化水平抑制有关。     

Effects of RNA interference targeting four different genes on the growth and proliferation of nasopharyngeal carcinoma CNE-2Z cells

To explore the effects of RNA interference targeting four different genes (VEGF, C-myc, Survivin, hTERT) on the growth and proliferation of nasopharyngeal carcinoma (NPC) CNE-2Z cells. Fluorescein-labeled short-hairpin (sh)RNA plasmids together and separately targeting VEGF, C-myc, Survivin and hTERT were built and respectively called plasmid-shVEGF-shC-myc-shSurvivin-shhTERT, plasmid-shVEGF, plasmid-shC-myc, plasmid-shSurvivin, plasmid-shhTERT. These plasmids were respectively transfected into human NPC CNE-2Z cells and xenograft tumors in nude mice. The expression of plasmids in NPC CNE-2Z cells and xenograft tumors was observed. Cell proliferation was detected with MTT assay. The mRNA and protein expression were determined by real-time PCR and western blot, respectively. The effects of plasmids on the biological behavior of CNE-2Z cells were observed with transwell invision chamber models. Apoptosis was determined with flow cytometer. The inhibitory effect of plasmids on xenograft tumors was observed in nude mice. The plasmid containing four different shRNAs could significantly inhibit CNE-2Z cell proliferation and decrease invasion ability in vitro compared with plasmids with each single shRNA (P<0.05). The plasmid containing four different shRNAs could simultaneously downregulate VEGF, C-myc, surviving, hTERT mRNA and protein expression in the CNE-2Z cells. The multiple gene shRNA could more significantly induce cell apoptosis than each single shRNA, respectively (P<0.05). The combinative silencing of these four genes had a better inhibitory effect on xenograft tumors than the silencing of each single shRNA (P<0.05). RNA interference targeting multiple genes can effectively inhibit NPC proliferation and induce apoptosis, which provides an experiment basis for NPC gene therapy.     

miR-10b Promotes Migration and Invasion in Nasopharyngeal Carcinoma Cells

MicroRNA-10b (miR-10b) has been reported to play an important role in some types of cancer, but the effectsand possible mechanisms of action of miR-10b in the metastasis of nasopharyngeal carcinoma cells (NPC) havenot been explored. The aim of the present study was to investigate the function of miR-10b in nasopharyngealcarcinoma and to determine the molecular mechanisms underlying its action. The MTT assay was used toassess proliferation of CNE-2Z cells. Wound healing and transwell migration assays were applied to assesscell migration and invasion, while and expression of E-cadherin and MMP-9 were detected using Western blotanalysis. Real-time PCR was employed to detect the expression of genes related to migration and invasion andthe 2-ΔΔCt method was used to calculate the degree of expression. MTT assay showed the expression of miR-10bto have no effect on the proliferation of NPC cell lines. The wound healing assay showed that miR-10b mimicspromoted the mobility and invasion of NPC cell lines. Inhibitors of miR-10b reduced the ability of NPC cell linesto migrate and invade. In addition, the expression of genes related to migration and invasion, such as E-cadherin,vimentin, and MMP-9, were confirmed to be different in the CNE-2Z NPC cell line transfected with miR-10bmimics and with miR-10b inhibitors. In the present study, miR-10b was found to upregulate the expression ofMMP-9 and knockdown of miR-10b was found to significantly downregulate the expression of E-cadherin. Onthe whole, these results showed that miR-10b plays an important role in the invasion and metastasis of NPCcells.     

EBSS饥饿人鼻咽癌CNE-2细胞株诱导自噬的机制研究

目的:观察饥饿状态下永生化正常鼻咽上皮NP69细胞、鼻咽癌CNE-2细胞的自噬变化及自噬与凋亡的相互作用,为Baf-A1在鼻咽癌中的应用前景提供证据。方法:EBSS溶液替代DMEM溶液在NP69和CNE-2细胞中制造体外饥饿环境,Baf-A1抑制细胞自噬。应用Western blot及透射电镜检测细胞自噬,MTT检测细胞存活率,qRT-PCR检测mRNA表达。结果:与NP69细胞相比,EBSS制造的饥饿环境显著促进CNE-2细胞发生自噬,处理24时后出现大量细胞凋亡,100 nmol/L Baf-A1抑制细胞自噬可延缓饥饿诱导的细胞凋亡。qRT-PCR检测结果:EBSS作用下,LKB1、AMPK、ULK1、Beclin1、ATG5 mRNA水平均显著上升(P<0.05)。结论:EBSS通过LKB1/AMPK/mTOR通路显著诱导CNE-2细胞自噬的发生。     

微小RNA hsa-miR-93靶向STAT3提高鼻咽癌对放疗敏感性的机制研究

目的 研究hsa-miR-93在鼻咽癌放疗抗拒过程中的作用及分子机制。方法 以人鼻咽癌细胞株CNE-1、CNE-2、CNE-2R、HONE1、C666.1以及鼻咽上皮永生细胞NP460为研究对象,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组细胞经放疗后hsa-miR-93的表达;采用Western blot法检测各组细胞经放疗后STAT3蛋白的表达;通过miRWalk软件和RNAHybrid软件预测hsa-miR-93和STAT3的结合作用及结合位点;通过双荧光素酶报告基因法检测hsa-miR-93对STAT3靶向结合情况;瞬时转染小分子模拟物或抑制剂调控hsa-miR-93的表达后,采用qRT-PCR和Western blot法检测STAT3的表达;转染siSTAT3沉默STAT3的表达后,通过细胞集落形成实验检测鼻咽癌细胞经放疗后的集落形成能力。结果 与CNE-1、CNE-2细胞(相对放疗敏感)相比,hsa-miR-93在HONE1、CNE-2R细胞(相对放疗抗拒)中表达降低(P＜0.001),且各组鼻咽癌细胞经放疗后hsa-miR-93的表达呈剂量及时间依赖性降低(P＜0.05);与CNE-1、CNE-2细胞相比,STAT3在HONE1、CNE-2R细胞中表达升高,且各组鼻咽癌细胞经放疗后表达呈剂量及时间依赖性升高;经预测,hsa-miR-93可直接靶向结合STAT3。过表达hsa-miR-93可以在mRNA以及蛋白水平上显著抑制STAT3的表达(P＜0.05),而抑制hsa-miR-93的表达可以显著上调STAT3的表达(P＜0.05);过表达hsa-miR-93或沉默STAT3均使鼻咽癌细胞的集落形成显著减少(P＜0.001);抑制hsa-miR-93减弱了鼻咽癌对放疗的敏感性,而同时抑制hsa-miR-93和STAT3后,可提高鼻咽癌对放疗的敏感性。结论 hsa-miR-93可能通过靶向STAT3提高鼻咽癌对放疗的敏感性。     

鼻咽癌细胞系中核迁移蛋白的表达及作用

背景与目的:核迁移是真核生物生长发育和细胞功能所必需的,核迁移蛋白(nucleardistributionC,NUDC)在核迁移中起着重要作用。本研究旨在检测NUDC在鼻咽癌细胞系CNE-2、HNE-2中的表达情况,初步探讨其抗体对癌细胞活性的影响。方法:在大肠杆菌中表达GST-NUDC重组蛋白并制备其多克隆抗体,间接免疫荧光染色法明确NUDC蛋白在鼻咽癌细胞中的亚细胞定位,Westernblot确定NUDC蛋白在鼻咽癌细胞系中表达情况,MTT法检测NUDC抗体对鼻咽癌细胞生长的影响。结果:鼻咽非癌组织及鼻咽癌细胞中均有NUDC蛋白表达,且其在鼻咽癌细胞中的表达量明显高于鼻咽非癌组织。NUDC蛋白在鼻咽癌细胞中主要位于细胞质核区附近,细胞核也可见少量表达。NUDC蛋白抗体可抑制鼻咽癌细胞生长,且存在着剂量-反应关系。结论:NUDC蛋白在鼻咽癌细胞系中高度表达,且NUDC蛋白抗体在体外可抑制鼻咽癌细胞的生长。     

赫赛汀对鼻咽癌细胞株体内外生长的影响

 目的 探讨赫赛汀（Herceptin）对鼻咽癌细胞株体内外生长的影响. 方法 采用免疫组化技术检测鼻咽癌组织HER-2/neu基因表达;采用3H-TdR细胞掺入法测定Herceptin对鼻咽癌细胞株体外生长的影响;用荷瘤裸鼠模型观察Herceptin对鼻咽癌细胞株体内生长的影响. 结果 HER-2/neu基因在鼻咽癌组织中有过表达; Herceptin可抑制HER-2/neu基因过表达的鼻咽癌细胞株CNE-2Z 3H-TdR掺入和影响荷瘤裸鼠肿瘤的生长. 结论 Herceptin可抑制CNE-2Z细胞株体外3H-TdR掺入,并影响CNE-2Z细胞株体内的生长.     

整合素αV对鼻咽癌CNE-2Z细胞放疗敏感性的影响

目的：探讨粘附分子整合素αV通过细胞间相互作用，是否对鼻咽癌CNE-2Z细胞的放疗敏感性产生影响，进而初步探讨其可能机制。方法：采用liquid overlay技术进行CNE-2Z细胞三维立体（多细胞球）培养；血球计数器计数法比较在阻断整合素αV作用前后CNE-2Z细胞的放射敏感性；AnnexinV／PI双标流式细胞术检测细胞凋亡。结果：（1）成功建立CNE-2Z多细胞球培养模型；（2）CNE-2Z多细胞球在接受X射线照射后，并在一定的照射剂量下，其表达的整合素αV量，随着照射剂量的增加而增加；（3）阻断整合素αV作用后CNE-2Z多细胞球放疗敏感性增强、细胞凋亡率上调。结论：以多细胞球培养模型模拟体内实体瘤情况，证实粘附分子整合素αV的表达情况可以影响鼻咽癌CNE-2Z细胞的放疗敏感性，抑制细胞凋亡是其可能的作用机制。     

整合素αⅤ对鼻咽癌CNE-2Z细胞放疗敏感性的影响

目的:探讨粘附分子整合素αV通过细胞间相互作用,是否对鼻咽癌CNE-2Z细胞的放疗敏感性产生影响,进而初步探讨其可能机制。方法:采用liquid overlay技术进行CNE-2Z细胞三维立体(多细胞球)培养;血球计数器计数法比较在阻断整合素αV作用前后CNE-2Z细胞的放射敏感性;AnnexinV/PI双标流式细胞术检测细胞凋亡。结果:(1)成功建立CNE-2Z多细胞球培养模型;(2)CNE-2Z多细胞球在接受X射线照射后,并在一定的照射剂量下,其表达的整合素αV量,随着照射剂量的增加而增加;(3)阻断整合素αV作用后CNE-2Z多细胞球放疗敏感性增强、细胞凋亡率上调。结论:以多细胞球培养模型模拟体内实体瘤情况,证实粘附分子整合素αV的表达情况可以影响鼻咽癌CNE-2Z细胞的放疗敏感性,抑制细胞凋亡是其可能的作用机制。     

甘草素通过影响鼻咽癌CNE-2 细胞的自噬增强其放疗敏感性

[摘要] 目的：探讨甘草素（licorice）对鼻咽癌CNE-2 细胞放疗增敏的影响及其作用机制。方法：体外培养构建放射抵抗性的鼻咽癌细胞株CNE-2-RR。MTT细胞实验检测不同浓度的甘草素对鼻咽癌细胞增殖活性的影响,透射电镜检测甘草素处理鼻咽癌细胞后自噬体的变化情况,Western blotting 检测甘草素对鼻咽癌细胞自噬蛋白水平的影响,彗星实验检测不同组鼻咽癌细胞DNA损伤修复情况,流式细胞术检测鼻咽癌细胞株凋亡率的变化。结果：成功构建放射抵抗细胞株CNE-2-RR,20 mmol/L甘草素对鼻咽癌细胞的最高抑制率为（58.86±5.02）%。甘草素处理鼻咽癌CNE-2-RR细胞后胞内自噬体数量增加,线粒体和细胞核形态异常;细胞中自噬体蛋白LC3-II 水平升高、LC3-I 水平降低（P<0.05）;甘草素作用CNE-2-RR细胞后彗星尾距长度大于对照组,表明对DNA损伤修复能力明显降低。甘草素作用导致CNE-2-RR细胞的凋亡率明显增加（P<0.05）。结论：甘草素通过影响鼻咽癌CNE-2-RR细胞的自噬行为及DNA修复能力增强其对放疗的敏感性。