胸腺鳞癌微卫星不稳定和杂合性缺失的初步探讨

目的 检测胸腺鳞癌微卫星不稳定(MSI)和杂合性缺失(LOH)发生频率,以探讨胸腺鳞癌MSI现象的合适微卫星(MS)位点.方法 选择5个微卫星多态性标记,从石蜡包埋的存档标本中选取9例肿瘤组织和其对应的自身正常组织,提取DNA后用PCR扩增,6%聚丙稀酰胺凝胶电泳,银染显色后进行MSI和LOH分析.结果 9例胸腺鳞癌均出现MSI或LOH.在所检5个位点中D6S1708、TP53、DM、D11S988和D8S136微卫星不平衡发生率分别为66.7%(6/9)、33.3%(3/9)、33.3%(3/9)、33.3%(3/9)和0%(0/9).D6S1708遗传学改变多为LOH(5/6),D11S988位点仅见于LOH.结论 D6S1708、TP53、DM和D11S988可以作为研究胸腺鳞癌微卫星的位点;微卫星不平衡可能在胸腺鳞癌的发生中起一定作用,其与胸腺鳞癌临床病理特点的关系尚需进一步探讨.     

中国汉族瘢痕疙瘩家系易感基因位点的定位分析研究

目的 定位中国汉族瘢痕疙瘩家系的易感基因位点.方法 采集2个4代发病的中国汉族瘢痕疙瘩大家系51例成员的外周静脉血样.提取基因组DNA;假定Fas基因为该家系致病基因的候选基因位点.选取位于10q23.31上Fas基因周围共约10Mbp范围内与细胞凋亡障碍有关的已知基因相邻的微卫星标记D10S1687、D10S1765、D10S1735和D10S1562,对这些微卫星位点进行PCR扩增,产物片断基因分型,再进行连锁分析.结果 在重组率θ=0～0.5时,这些微卫星标记的两点LOD值绝大部分都小于1,排除连锁关系存在.结论 研究发现中国汉族瘢痕疙瘩家系易感基因位点不在染色体10q23.31区域.     

散发性结直肠癌微卫星不稳定与hMHL1和hMSH2基因突变的研究

目的:探讨散发结直肠癌组织微卫星不稳定性与错配修复基因hMHL1和hMSH2蛋白表达的关系。方法:结直肠癌患者病理标本和正常肠壁组织(距肿瘤边缘10cm取材各40例)。选取微卫星位点(D2S123、BAT-26、D17S261、D17S799)进行PCR,PCR产物行毛细管电泳法检测。用免疫组化染色方法分析错配修复基因hMHL1和hMSH2在肿瘤组织的蛋白表达情况。结果:1)4个位点(D2S123、BAT26、D17S261、D17S799)的微卫星不稳定性检出率分别为:12.5%、17.5%、10%、7.5%。总的微卫星不稳定率为9/40(22.5%)。MSI-H表达为7例,均表现BAT26位点不稳定。MSI-L表达2例。2)所有标本错配修复基因hMSH2检测均正常表达。错配修复基因hMHL1表达阴性11份,结肠比直肠hMLH1蛋白的阴性表达率高(P0.01)。3)hMLH1表达阴性,是出现MSI的重要分子因素,hMLH1不表达和MSI相关显著(P0.01)。结论:1)错配修复基因突变引起微卫星不稳定性是散发性结肠癌发生的重要机制;2)部分微卫星不稳定性是由错配修复基因hMLH1不表达引起,其余的微卫星不稳定性可能涉及到其它错配修复基因。     

尿微卫星不稳定性研究对膀胱肿瘤诊断的探讨

目的：探讨尿微卫星不稳定性改变(MSI)与膀胱移行细胞癌(TCC)临床病理特征的关系及其在早期诊断中的价值。方法：选择36例TCC患者5个微卫星位点,应用聚合酶链反应-变性聚丙烯酰胺凝胶银染法分析尿微卫星的改变。结果：36例中有22例(61．11%)出现微卫星不稳定性改变(LOH/MSI),并与肿瘤的分期、分级无关(P＞0．05)；尿脱落细胞学检查的阳性率为22．22%(8/36),两者相比差异有统计学意义(P＜0．05)。结论：尿沉渣微卫星不稳定性分析对膀胱癌的早期诊断有一定的意义,是尿脱落细胞学检查的重要补充。所选微卫星位点为本地区膀胱癌的进一步研究奠定了基础。     

胃癌BRCA1基因D17S579位点遗传不稳定性与临床病理关系的研究

研究表明基因的微卫星不稳定性（microsatelliteinstability,MSI）和杂合性缺失（loss of heterozygosity,LOH）可能是引起肿瘤发生的重要因素.中国人胃癌BRCA1基因.的遗传不稳定性研究鲜见报道.本实验对中国人胃癌患者17号染色体D17S579位点的MSI、LOH和BRCA1蛋白表达进行检测,为揭示BRCA1基因作用机制提供实验依据.     

散发性结直肠癌1号染色体等位基因杂合缺失精细定位研究

目的抑癌基因的杂合缺失（LOH）被认为是结直肠癌形成的通路之一。本实验通过对1号染色体1p36．33～36．31、1q31．1～32、1区域进行杂合缺失精细定位分析，以发现更精确的高频杂合缺失区域。方法在1p36．33～36．31、1q31．1～32．1区域分别选择7个、6个荧光标记微卫星引物与83例结直肠癌的肿瘤和正常组织进行聚合酶链反应（PCR）反应。产物在电泳后进行LOH分析。LOH结果与临床病理参数之间的关系比较采用X^2检验。结果1p36．33～36．31区域平均杂合缺失率是31．47％，以D1S243位点最高，为47．22％（34／72），最低是D1S1347，为7．35％（5／68）。存在两个高频杂合缺失区域：D1S243位点（1p36．33）以及D1S468-D1S2660区域（1p36．32～36．31）。1q31．1～32．1区域平均杂合缺失率是22．98％，以D1S2622位点最高，为36．73％（18／49），最低是D1S412，为16．42％（11／67）。更精确的缺失范围定位在D1S413和D1S2622之间（1q31．3—32．1），大约2cm的遗传距离范围内。1p36．33～36．31、1q31．1～32．1区域各位点的杂合缺失率与性别、年龄、肿瘤大小、生长方式以及Dukes分期无显著相关。提示该区域上的杂合缺失现象普遍存在于各种类型的散发性结直肠癌中。结论1号染色体上存在3个高频杂合缺失区域，D1S243位点（1cm）、D1S468和D1S2660位点之间（3cm）以及D1S413和D1S2622之间（2cm），提示在这些区域存在与结直肠癌相关的抑癌基因。     

中国汉族一瘢痕疙瘩家系易感基因的定位研究

目的定位中国汉族瘢痕疙瘩家系的易感基因。方法采集1个5代发病的中国汉族瘢痕疙瘩大家系32名成员的外周静脉血样,提取基因组DNA;设定Fas基因为导致该家系发病的一个候选基因,选取位于10q23.31上Fas基因周围共约10Mbp范围内与细胞凋亡障碍或肿瘤发生有关的所有已知基因相邻的微卫星标记D10S1687、D10S1765、D10S1735和D10S1562共4个,对这些微卫星位点进行PCR扩增,产物片断基因分型和连锁分析。结果连锁分析发现微卫星标记D10S1765LODZMAX为1.74,D10S1735LODZMAX为1.51,支持连锁;D10S1562LODZMAX为0.59,不排除连锁;在θ=0.0～0.10时,D10S1687标记的所有LOD值都小于-2,排除连锁。结论我们的研究首次发现了该中国汉族瘢痕疙瘩家系的易感基因可能位于10q23.31上D10S1765与D10S1735两位点间约1Mbp区域的遗传学证据。     

瘢痕疙瘩易感基因的家系连锁分析定位研究

目的:探讨瘢痕疙瘩(keloid)家系中易感基因与15q22.31￣q23及18q21.1区域的连锁关系。方法:1个中国东北地区4代瘢痕疙瘩家系,采集家系中32名成员的外周血标本提取DNA,选择位于15q22.31￣q23及18q21.1区域7个微卫星标记,应用聚合酶链式反应(PCR)得到扩增产物片断,测定PCR产物片段大小,得到每个样本的基因型。运用连锁分析软件LINKAGE的MLINK程序计算每个标记的LOD值,根据两点间LOD值判断连锁关系。结果:D15S108、D15S216、D15S534、D18S363、D18S846五个位点的两点LOD值在重组率为0时均小于-2,可以排除此家系疾病候选基因与上述位点的连锁关系,而D18S460、D18S467两位点在重组率为0.05和0.10时的两点LOD值均大于1,且外显率为90%的条件下,D18S460在θ=0时LOD值大于2,提示此家系瘢痕疙瘩易感基因与这两个位点存在一定的连锁关系。结论:此瘢痕疙瘩家系的易感基因可能位于18q21.1区域内。     

福建省两个汉族瘢痕疙瘩家系易感基因的定位研究

目的：开展汉族瘢痕疙瘩家系易感基因定位研究。方法：收集来自福建省不同地区的两个汉族瘢痕疙瘩家系，分别命名为A和B家系，从中选出26名具有较高遗传学研究意义的成员作为研究对象，采集他们的外周静脉血样，提取基因组DNA；设定Fas基因为导致家系发病的一个候选基因，选取位于10q23．31上Fas基因周围共约10Mbp范围内与细胞凋亡障碍或肿瘤发生有关的所有已知基因相邻的微卫星标记D10S1687、D10S1765、D10S1735和D10S1562共4个，对这些微卫星位点进行PCR扩增，产物片断基因分型和连锁分析。结果：A家系微卫星标记D10S1765LODZMAX为1．86，D10S1735LODZMAX为1．29，支持连锁；D10S1562LODZMAX为0．42，不排除连锁；在O=0．0～0．10时，D10S1687标记的所有LOD值都小于-2，排除连锁。B家系微卫星标记D10S1765LODZMAX为1．63，D10S1735LODM为1．37，支持连锁；D10S1562LODZMAX为0．25，不排除连锁；在0=0．0～0．10时，D10S1687标记的所有LOD值都小于-2，排除连锁。结论：本研究提示这两个来自福建的汉族瘢痕疙瘩家系的易感基因可能位于10q23．31上D10S1765与D10S1735两位点间约1Mbp区域。     

染色体杂合性缺失在肝细胞癌根治术后预后预测中的价值

目的 通过生存分析探讨染色体杂合性缺失(LOH)在肝细胞癌(HCC)患者根治术后预后预测中的价值.方法 选取1 p、8p、17p、4q、13q及16q共6条染色体上24个具有高度多态性的微卫星标记,对1999年1月至2000年5月225例行根治术的HCC石蜡标本应用微切割技术,获取纯净肿瘤DNA进行LOH检测,并分析LOH与HCC患者根治术后5年总体生存(OS)、无瘤生存(DFS)的关系.结果 LOH在检测的染色体位点上发生明显.在单因素分析中,D8S298位点LOH的患者根治术后5年OS、DFS率皆明显低于无LOH的患者[(39±6)比(54±5),P＜0.05;(36±7)比(60±6),P＜0.01].同样,在D1S199基因位点,LOH患者术后5年OS、DFS率亦显著低于无LOH者[(28±7)比(55±5),P＜0.01;(29±8)比(53±5),P＜0.05].在其他22个检测位点,未发现LOH与HCC术后生存相关.在多因素分析中,Cox比例风险模型显示D8S298、D1S199位点LOH分别是HCC患者根治术后DFS、OS较差的独立因素(P均＜0.05).结论 D8S298、D1S199位点LOH有可能分别成为HCC患者根治术后预测转移复发及总体生存的分子标记.     

肝细胞癌微卫星不稳定和杂合性缺失分析

目的 通过检测肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)微卫星不稳定（microsatellite instability,MSI)和杂合性缺失（loss of heterozygosity,LOH)发生频率,探讨上述遗传学改变与HCC临床病理的关系。方法 选择5个微卫星多态性标记对32例HCC进行了MSI与LOH分析。结果 32例HCC中有14例出现MSI,其中有6例出现2个位点MSI,后者癌肿转移率明显低于其他的组（P＝0．001）,在所检5个位点中D1S484和TP53 MSI发生频率最高,而D9S1604昨D8S555遗传学改变多为LOH且发生频率较低。结论 MSI是部分HCC发生、发展进程中一个重要的遗传改变,尤其在在无癌肿转移的肿瘤中。D1S484和TP53是HCC中对MSI敏感的检测位点。     

胃癌染色体1q43区域等位基因杂合缺失精细定位研究

目的 对胃癌1号染色体1q43区域的微卫星位点进行杂合缺失(LOH)研究,为筛选此区域内可能存在的胃癌相关抑癌基因提供依据.方法 4对荧光标记的微卫星引物(D1S1594、D1S2785、D1S304、D1S321)覆盖1q43区域与96例胃癌患者的肿瘤组织及正常组织进行多重聚合酶链反应(PCR).产物经毛细管电泳后进行LOH分析.结果 该区域所测位点平均杂合缺失率17.9%,其中D1S1594位点最高,杂合缺失率为26.5%;D1S2785位点杂合缺失率最低为7.7%.1q43区域各位点的杂合缺失率与性别、年龄、肿瘤大小及TNM分期无明显相关.结论 在1q43区域内发现一个高频LOH区域,即D1S1594及D1S2785位点之间约1 cm区域,提示该区域内存在与胃癌相关的抑癌基因.     

散发性结直肠癌22q13区域杂合缺失的精细定位分析

目的在染色体高频杂合缺失区22q13精细定位，以筛查可能与结直肠癌相关的肿瘤抑制基因。方法荧光标记的微卫星引物与83例结直肠癌的肿瘤和正常组织进行PCR反应。产物在ABI Prism 377自动荧光测序仪进行电泳、扫描以及杂合缺失分析。其结果与临床病理因素进行相关性检验。结果8个位点平均杂合缺失率为35．6％。发现两个高频缺失区域：一个在D22S1171和D22S274之间，约2．7厘摩（cM）；另一个在D22S1160和D22S1149位点之间，约1．8cM。D22S1171位点与肿瘤发生部位显著相关（P=0．020）；D22S114位点与肝转移显著相关（P=0．008）；D22S1160位点与淋巴结转移显著相关（P=0．016）；其余位点与临床病理因素无显著相关性（P〉0．05）。筛选发现ARHGAP8基因和PPARA基因可能是肿瘤抑制基因。结论散发性结直肠癌22q13区域存在两个高频杂合缺失区，分别约2．7cM及1．8cM。ARHGAP8基因和PPARA基因可能是22q13区域与散发性结直肠癌相关的肿瘤抑制基因。     

Prognostic influence of microsatellite alterations of muscle-invasive bladder cancer treated with radical cystectomy

ObjectiveTo examine the prognostic effect of microsatellite instability (MSI) and loss of heterozygosity (LOH) on cancer-specific survival (CSS) in patients with muscle-invasive bladder cancer (MIBC).Patients and methodsThe liquid nitrogen-preserved specimens of 220 patients between March 2009 and December 2012 were analyzed for the presence of MSI and LOH in 12 loci (ACTBP2, D16S310, D16S476, D18S51, D4S243, D9S162, D9S171, D9S747, FGA, INF-α, MBP, MJD) using polymerase chain reaction. MSI was defined as MSI-stable, MSI-Low, or MSI-High if instability was detected in 0, 1, or 2 or more of the examined markers, respectively. The association between MSI-High and LOH and CSS was analyzed using uni- and multivariate analyses and the degree of agreement between tumor and urine samples were determined.ResultsMSI were found in 1030 (39%) and 1148 (43.5%) in tumor and urine specimens, respectively (Kappa = 0.77). On the other hand, LOH was found in 163 (6.2%) of tumor tissues and 44 (1.7%) in urine specimens (Kappa = 0.34). Microsatellite alterations were significantly associated with worse CSS at 1- and 5-year in tumor tissue (95% and 83.7% vs. 65.8% and 3.5%, respectively; P < 0.001) and in urine sample (90% and 64% vs. 46.5% and 9.3%, respectively; P < 0.001). MSI and/or LOH was an independent predictor of CSS (HR: 9.8; 95%CI: 5.1–18.9; P < 0.001).ConclusionsMicrosatellite alterations were potentially an independent predictor of CSS in patients with MIBC. The agreement was good between tumor and urine MSI but weak for LOH.     

散发性胆管癌患者染色体3p21.3区段微卫星位点不稳定性分析

目的研究散发性胆管癌患者染色体3p21．3区段的微卫星不稳定性（MSI）及杂合性缺失（LOH），探讨染色体3p21．3区段遗传不稳定性与散发性胆管癌发生发展的关系，定位该区段上散发性胆管癌相关肿瘤基因。方法用聚合酶链反应一单链构象多态性分析（PCR—SSCP）方法检测24例散发性胆管癌患者染色体3p21．3区段上D3S1568、D3S1621、D3S1578和D3S1289四个微卫星位点的MSI和LOH发生率，分析其与临床病理因素之间的关系。结果24例散发性胆管癌组织中，4个微卫星位点的MSI和LOH平均发生率分别为7．23％和15．63％。其中D3S1621位点的LOH最高（45．83％，11／24），并与TNM分期、是否伴有局部／淋巴结转移相关（P〈0．05）。结论染色体3p21．3区段133S1621位点高频率杂合性缺失，提示3p21．3区段定位有散发性胆管癌的候选抑癌基因，并在散发性胆管癌的发生发展过程中发挥重要作用。     

Microsatellite analysis of allelic imbalance in tumour and blood from patients with prostate cancer

OBJECTIVE

To investigate whether a high frequency of allelic imbalance (AI) is associated with clinicopathological variables of patients with prostate cancer.

PATIENTS AND METHODS

We analysed loss of heterozygosity (LOH) and microsatellite (MS) instability (MSI) on circulating plasma DNA in a polymerase chain reaction (PCR)‐based MS study of 230 patients with prostate cancer and 43 with benign prostatic hyperplasia (BPH) using a panel of 13 polymorphic MS markers.

RESULTS

The overall incidence of AI was significantly higher in primary tumours (34%) than in blood plasma samples from patients with prostate cancer (11%). Although LOH (2.0%) and MSI (1.5%) were also found in BPH plasma samples, their frequencies were low. AI identified in plasma samples from patients with prostate cancer could be retrieved in 63% of the paired tumour samples. The highest concordance of AI and retention of heterozygosity between tumour and plasma samples was 83% at the marker D8S360. There were high frequencies of LOH at the markers THRB, D7S522 and D8S137 in both types of specimens. The markers D11S898 and D11S1313 on the chromosome arm 11q showed frequent MSI. The comparison with established risk factors showed significant associations of an increase in prostate volume with AI at the combined markers D6S474/D7S522 in tumour tissues and at D7S522 in plasma samples (P < 0.04). In the primary tumours there was a further correlation of LOH at D11S1313 with increasing tPSA value (P = 0.005). The combination of total prostate‐specific antigen (PSA) and % free PSA was associated with LOH at THRB in plasma samples.

CONCLUSIONS

Plasma‐based MS analysis may have clinical value for the molecular staging of prostate cancer.     

睾丸肿瘤染色体杂合性丢失及微卫星不稳定性研究

目的　探讨睾丸肿瘤的发生、发展与微卫星不稳定性（ ＭＳＩ） 及染色体杂合性丢失（ＬＯＨ）的关系。　方法　利用ＰＣＲＭＩＡ技术,选用８ 种微卫星标记位点,分析２２ 例睾丸肿瘤ＬＯＨ及ＭＳＩ的变化。　结果　２２ 例中１４ 例出现ＬＯＨ（６４％ ）。定位于第９ 号染色体上的Ｄ９Ｓ６３ 位点的ＬＯＨ 发生率最高为４５％ ,次为第５ 号染色体上的ＡＰＣ位点（４３ ％） 及第１８ 号染色体上的ＤＣＣ位点（２５ ％） ;８ 例表现为ＭＳＩ（３６ ％） ,１７ 例表现为ＬＯＨ 或（ 和）ＭＳＩ,总阳性率为７７％ 。　结论　染色体９ｑ 及５ｑ 上存在的抑癌基因的失活以及微卫星不稳定性改变可能在睾丸肿瘤的发生发展中起重要作用。     

散发性结直肠癌染色体4p15等位基因杂合缺失的精细定位研究

目的通过在染色体4p15精细定位高频杂合缺失区域的范围．为筛选高频杂合缺失区内存在的散发性结直肠癌相关肿瘤抑制基因提供依据。方法7个荧光标记的微卫星引物与83例散发性结直肠癌的肿瘤和正常组织进行聚合酶链反应。微卫星之间的的平均遗传距离是1．02cM（centi—Morgon，里摩）。产物进行电泳、扫描及杂合缺失分析，并与临床、病理因素进行相关性检验。结果染色体4p15的平均杂合缺失率为21，34％，最高的是D4S3103位点（35．62％）；最低的是D4S2933位点（12．50％）。可能的肿瘤抑制基因的范围在D4S3017-D4S2933之间约1．7cM的遗传距离内，该区域内有PPARGC1A和GBA3两个基因。D4S1546位点杂合缺失与肿瘤直径显著相关（P〈0．05），其余位点与临床病理因索均无显著相关（P〉0．05）。结论染色体4p15精细定位后高频杂合缺失区域的范围限定在D4S3017-D4S2933之间约1．7cM的范围内。该区域内PPARGC1A和GBA3两个基因可能是散发性结直肠癌相关的肿瘤抑制基因。     

Comprehensive loss of heterozygosity analysis and identification of a novel hotspot at 3p21 in salivary gland neoplasms.

OBJECTIVES: We sought to assess loss of heterozygosity (LOH) profiles of 3p, 6q, 8q, 10q, 12q, 13q, and 17p and to identify the tumor suppressor genes involved in salivary gland neoplasms. STUDY DESIGN: LOH analysis was performed using 26 microsatellite markers by polymerase chain reaction-polyacrylamide gel electrophoresis method in 20 benign and 6 malignant salivary gland tumors. RESULTS: Overall, LOH was detected in at least one informative locus in 18 of 20 (90%) of benign tumors and in all of 6 cases of malignant tumors. High LOH frequencies were revealed at the loci D3S1307 (22%, 3p26), D3S966 (41%, 3p21), D6S255 (27%, 6q25), D8S166 (25%, 8q12), D8S199 (21%, 8q24), and D10S1765 (28%, 10q23) in benign tumors, defining the hotspot regions for putative tumor suppressor genes. CONCLUSIONS AND SIGNIFICANCE: The hotspot regions defined by the present study suggest that new tumor suppressor genes related to the development of salivary gland tumors may reside at several chromosomal loci, including loci at 3p, 6q, 8q and 10q.