益肾通络方联合微创手术治疗精索静脉曲张伴弱精子症的疗效评价

目的:观察益肾通络方联合微创手术治疗精索静脉曲张伴弱精子症(肾虚络阻型)患者的临床疗效及安全性。方法:将符合纳入标准的120例精索静脉曲张伴弱精子症患者随机分为3组,治疗组采用益肾通络方联合微创手术(腹股沟外环口显微镜下精索静脉低位结扎术)治疗,对照1组采用益肾通络方治疗,对照2组单纯采用微创手术治疗(手术方式同治疗组)。治疗12周后比较3组总有效率、前向运动精子百分率、精子直线运动速度、精子DNA完整性的改善及患者症状。结果:治疗组总有效率(89.74%)明显高于对照1组(63.16%)、对照2组(64.10%)(P<0.05),3组在改善前向运动精子百分率、精子直线运动速度、精子DNA完整性及患者症状方面,疗效显著(P<0.05),且治疗组均优于对照1组、对照2组(P<0.05)。结论:益肾通络方联合微创手术治疗精索静脉曲张伴弱精子症不育患者,可明显改善精子活力和精子DNA完整性,且有较好的安全性。     

表观遗传学调控对生精功能障碍性不育C57BL/6J小鼠动物模型影响的实验研究

目的:探讨表观遗传学调控对生精功能障碍性不育C57BL/6J雄性小鼠动物模型的作用及影响。方法:60只C57BL/6J雄性小鼠随机均分为对照组和模型组。应用附睾靶向多肽(CSA)结合吲哚青绿包载游离纳米粒(ICG-NPs)联合白消安和二甲基亚砜构建生精功能障碍性不育动物模型。在附睾中检测精子DNA碎片指数(DFI)、精子顶体完整率和自发顶体反应率,FISH检测ERp29基因的扩增,Real time-PCR和Western印迹定量ERp29、PTEN、TSC2 mRNA和蛋白差异,ChIP-Seq分析ERp29、PTEN、TSC2基因差异,甲基化DNA免疫共沉淀测序(MeDIP-Seq)。结果:与对照组相比,干预后模型组的精子DFI[(30.15±2.87)%vs(15.67±1.33)%,P0.05]和精子顶体完整率[(47.16±3.45)%vs(65.33±7.14)%,P0.05]有显著差异;精子自发顶体反应率无显著差异[(11.48±2.27)%vs(11.52±2.31)%,P0.05]。FISH证实5-AZA-DC干预前模型组ERp29基因无扩增,干预后ERp29基因明显扩增,对照组无影响。5-AZA-DC干预后模型组DNMT1 mRNA(9.33±1.15 vs 7.01±1.14,P0.05)和蛋白(15.66±1.45 vs 12.33±1.27,P0.05)显著下调,模型组ERp29(3.04±1.13 vs 6.54±1.18,P0.05)、PTEN(3.25±1.01 vs 5.85±1.04,P0.05)、TSC2(4.27±1.16 vs 6.98±1.13,P0.05)mRNA和(4.37±1.02 vs 6.95±1.03,P0.05)、(3.54±1.01 vs 5.17±1.02,P0.05)、(3.83±1.12 vs 6.98±1.13,P0.05)蛋白显著上调,对照组无显著差异(P0.05)。ChIP-Seq筛选出附睾组织中差异显著基因高表达为18个,低表达为25个。5-AZA-DC干预后,模型组的25个低表达基因均有不同程度的上调,其中ERp29、PTEN和TSC2基因上调最显著。高表达的18个基因均有不同程度下调,对照组差异无统计学意义(P0.05)。MeDIP-Seq结果显示5-AZA-DC干预后模型组附睾组织中ERp29、PTEN和TSC2启动子区域甲基化水平差异显著,有统计学意义(P0.05),对照组差异无统计学意义(P0.05)。结论:稳定高效的动物模型为生精功能障碍性不育诊疗提供了重要的实验研究依据。ERp29是影响不育的重要基因,可作为男性不育治疗的表观遗传学调控潜在靶点。     

益肾生精胶囊对邻苯二甲酸二丁酯致生殖功能损伤大鼠精子质量及生殖激素水平的影响

目的:探讨邻苯二甲酸二丁酯(DBP)所致不育症的可能病理机制,观察益肾生精胶囊对DBP所致Wistar雄性大鼠生殖功能受损的干预调节,以揭示其治疗DBP所致不育症的可能作用机制。方法:将100只Wistar雄性大鼠随机分为空白组20只和DBP造模组80只。于造模4周后,行模型评价。模型验证成功后,随机分为模型组、益肾生精胶囊高、中、低剂量组和空白组共5组。药物干预4周后,处死各组大鼠,检测精子活力、浓度、畸形率,放射免疫法检测血清睾酮(T)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)水平;光镜观察睾丸组织形态结构。结果:与空白组相比,模型组大鼠睾丸组织结构有明显的病理学改变,精子活力、浓度、畸形率,血清T、LH、FSH水平有统计学差异(P0.01);与模型组相比,益肾生精胶囊高、中剂量组大鼠睾丸组织损伤有不同程度的恢复,精子活力、浓度、畸形率及血清T、LH、FSH水平有统计学差异(P0.01);与益肾生精胶囊高剂量组相比,中、低剂量组大鼠精子活力、浓度、畸形率及血清T、LH、FSH水平差异有统计学意义(P0.01)。结论:DBP可致大鼠精子活力、浓度降低,精子畸形率增高;可致大鼠睾丸形态结构损伤;DBP可致血清T、LH水平降低,FSH水平增高。益肾生精胶囊可不同程度地提高DBP所致生殖功能受损大鼠精子活力、浓度,降低精子畸形率,提高血清T、LH水平,降低血清FSH水平;改善睾丸形态结构,并可能通过此途径提高大鼠生殖功能。     

长链非编码RNA在脂多糖刺激的大鼠肠巨噬细胞中的差异表达

目的:探讨脂多糖(LPS)诱导的肠巨噬细胞炎症反应与长链非编码RNA(lncRNA)表达的关系。方法:分离培养大鼠肠巨噬细胞,用lncRNA表达谱芯片技术检测LPS处理的大鼠肠巨噬细胞(实验组)和无处理的大鼠肠巨噬细胞(对照组)之间差异表达的lncRNA,并用分层聚类的方法分析了基因芯片数据;构建差异表达的lncRNA-mRNA共表达网络,利用GO分析和通路分析预测其生物学功能;最后用RT-qPCR对部分差异表达的lncRNA进行验证。结果:与对照组比较,实验组共检测出357个差异表达的lncRNA(差异表达倍数1.5),其中上调的有245个,下调的有112个。GO分析和通路分析显示差异表达的lncRNA参与多种生物过程,包括炎症反应,免疫应答和细胞凋亡,其中lncRNA NONMMUT024673、NONMMUT047081在网络中可能起重要作用。RT-qPCR验证NONMMUT024673、NONMMUT047081的表达,结果与基因芯片数据一致。结论:LPS可诱导大鼠肠巨噬细胞lncRNA表达改变,这些差异表达的lncRNA可能参与调控LPS诱导的肠巨噬细胞的炎症反应。     

氰戊菊酯体外对大鼠精子运动能力的影响

目的:观察氰戊菊酯(Fen)对大鼠精子运动能力的直接作用。方法:收集7只健康成年雄性SD大鼠附睾尾精子,用Fen进行体外染毒,剂量分别为1、4、16、64μmol/L,以Fen溶剂(二甲亚砜)作为对照组。在染毒1、2、4 h后用计算机辅助精子分析(CASA)系统对精子运动速度[曲线运动速度(VCL)、直线运动速度(VSL)、平均路径速度(VAP)、鞭打频率(BCF)]和运动方式[前向性(STR)、直线性(LIN)]进行检测,观察Fen对离体大鼠精子运动能力的影响。结果:Fen染毒1、2 h后,可见64μmol/L组的VSL、BCF、LIN和STR与对照组相比差异有显著性(P<0.01或P<0.05)。染毒4 h后,除上述指标外,VCL在16、64μmol/L组与对照组相比也呈现出明显的下降(P<0.01)。时间-效应关系分析显示,Fen(16、64μmol/L)染毒4 h组与染毒1 h组相比,VCL和STR显著下降(P<0.01或P<0.05)。结论:Fen可作用于大鼠附睾尾精子,并对大鼠精子运动有直接毒性效应。     

MBD1甲基化调控胰腺癌BxPC-3细胞株mdr1转录及其表达的研究

目的 观察MBD1通过对mdr1转录区域结合位点甲基化影响,在转录水平间接调控胰腺癌mdr1基因表达.方法 应用RNA干扰技术对人胰腺癌细胞株BxPC-3中MBD1基因进行抑制;应用定量荧光聚合酶链式反应(FQ-PCR)技术、MSP(甲基化专用聚合酶链式反应)方法分别检测转染前后细胞株中的mdr1 mRNA的表达差异和转录区域结合位点甲基化变化.结果 成功构建并转染MBDI siRNAs至人原位胰腺腺癌细胞BxPC-3(BxPC-3)细胞中,证实MBDI mRNA水平明显下调(下调幅度为93.19%).MBD1下调后,mdr1 DNA转录区域(-110GC和-50GC)甲基化分别上调(上调幅度分别为181.98%和409.57%);mdr1 mRNA表达明显下调(下调幅度为97.79%).结论 MBD1可通过对mdr1转录区域结合位点甲基化的影响,在转录水平间接调控胰腺癌mdr1基因表达.     

MBD1甲基化调控胰腺癌BxPC-3细胞株mdr1转录及其表达的研究

目的 观察MBD1通过对mdr1转录区域结合位点甲基化影响,在转录水平间接调控胰腺癌mdr1基因表达.方法 应用RNA干扰技术对人胰腺癌细胞株BxPC-3中MBD1基因进行抑制;应用定量荧光聚合酶链式反应(FQ-PCR)技术、MSP(甲基化专用聚合酶链式反应)方法分别检测转染前后细胞株中的mdr1 mRNA的表达差异和转录区域结合位点甲基化变化.结果 成功构建并转染MBDI siRNAs至人原位胰腺腺癌细胞BxPC-3(BxPC-3)细胞中,证实MBDI mRNA水平明显下调(下调幅度为93.19%).MBD1下调后,mdr1 DNA转录区域(-110GC和-50GC)甲基化分别上调(上调幅度分别为181.98%和409.57%);mdr1 mRNA表达明显下调(下调幅度为97.79%).结论 MBD1可通过对mdr1转录区域结合位点甲基化的影响,在转录水平间接调控胰腺癌mdr1基因表达.     

MBD1甲基化调控胰腺癌BxPC-3细胞株mdr1转录及其表达的研究

目的 观察MBD1通过对mdr1转录区域结合位点甲基化影响,在转录水平间接调控胰腺癌mdr1基因表达.方法 应用RNA干扰技术对人胰腺癌细胞株BxPC-3中MBD1基因进行抑制;应用定量荧光聚合酶链式反应(FQ-PCR)技术、MSP(甲基化专用聚合酶链式反应)方法分别检测转染前后细胞株中的mdr1 mRNA的表达差异和转录区域结合位点甲基化变化.结果 成功构建并转染MBDI siRNAs至人原位胰腺腺癌细胞BxPC-3(BxPC-3)细胞中,证实MBDI mRNA水平明显下调(下调幅度为93.19%).MBD1下调后,mdr1 DNA转录区域(-110GC和-50GC)甲基化分别上调(上调幅度分别为181.98%和409.57%);mdr1 mRNA表达明显下调(下调幅度为97.79%).结论 MBD1可通过对mdr1转录区域结合位点甲基化的影响,在转录水平间接调控胰腺癌mdr1基因表达.     

川芎嗪预处理急性缺血性肾衰竭基因谱研究

目的:探讨川芎嗪对大鼠缺血再灌注损伤基因表达谱的影响,筛选出肾损伤的相关基因.方法:将大鼠随机分为实验组与对照组.实验组以川芎嗪经大鼠尾静脉注射6周后,建立缺血性肾衰竭模型,运用基因总结技术检测川芎嗪对肾损伤相关基因表达的影响.结果:川芎嗪能使大鼠缺血再灌注损伤肾相关基因表达上调和下调,其中川芎嗪下调已命名的大鼠肾基因(Ratio＜0.5)67个;川芎嗪上调已命名的大鼠肾基因(Ratio＜0.5)26个.结论:川芎嗪通过下调或上调缺血再灌注损伤肾相关基因表达的活性对急性缺血再灌注损伤肾发生药理作用.     

维生素E对邻苯二甲酸二异辛酯致雄性大鼠生殖毒性的拮抗作用

目的:探索维生素E(VE)对青春期邻苯二甲酸二异辛酯(DEHP)暴露致雄性大鼠生殖毒性的干预作用以及其机制。方法:将30只35日龄雄性SD大鼠(体重96~122 g)随机分为对照组(玉米油),低[10 mg/(kg·d)]、中[100 mg/(kg·d)]、高[500 mg/(kg·d)]DEHP组,以及VE干预组[(500 mg/(kg·d)DEHP+100 mg/(kg·d)VE],各组给予相应食物30 d。在染毒干预结束后,分别检测大鼠睾丸组织氧化应激指标、附睾尾部精子参数、血清生殖激素水平、凋亡相关靶基因及蛋白的表达。结果:与对照组比较,中、高DEHP组血清中FSH、LH和T水平明显降低,精子运动参数VAP、VCL明显降低,SOD和GSH-Px活力显著降低,Bak、Bax基因表达和Bax/Bcl-2基因表达比值显著升高,细胞色素C mRNA表达及细胞色素C和Caspase-3蛋白表达均显著上调(P均0.05);高DEHP组MDA含量[(3.32±0.87)nmol/mg pro vs(2.13±0.49)nmol/mg pro]明显升高,精子运动参数VAP、VCL、VSL、STR、LIN、WOR均明显降低(P0.05)。与高DEHP组比较,VE干预组的LH和T水平明显升高;VAP、VSL、VCL、STR和WOB明显升高;SOD和GSH-Px活力显著升高;MDA含量明显降低;Bak、Bax基因表达和Bax/Bcl-2基因表达比值显著降低;细胞色素C、Caspase-3 mRNA表达及蛋白表达均显著下调(P均0.05)。结论:青春期DEHP暴露可抑制生殖激素分泌或释放,导致雄性大鼠睾丸组织氧化损伤,激活细胞线粒体凋亡通路,也可导致附睾精子质量下降;而VE对DEHP所诱导的雄性生殖毒性具有一定的拮抗作用。