大黄素和大黄酸对角质形成细胞体外培养细胞周期的影响

研究大黄蒽醌衍生物对细胞增殖动力学的影响已有文献报告[1] ,但关于大黄蒽醌衍生物对细胞周期的影响 ,尚未见报告。本文通过体外培养细胞的方法 ,采用流式细胞分析仪检测细胞周期变化 ,观察大黄蒽醌衍生物 (大黄素和大黄酸 )对角质形成细胞株ｃｏｌｏ 16的细胞周期影响 ,进一步探讨大黄蒽醌衍生物的药理作用。1　材料和方法1 1　细胞和药物来源 :选用的人表皮角质形成细胞株ｃｏｌｏ 16 (属鳞癌细胞株 ) ,由美国康奈尔大学医学院Ｅｌｋｏｎ ＫＢ教授惠赠。大黄素和大黄酸 ,由北京医科大学药学院郑俊华教授提供的标准品 (纯度 10 0 % )。1 2…     

人表皮生长因子基因体外转染人角质形成细胞的研究

基因治疗已开始用于多种疾病的治疗，而表皮作为人体最易获取的组织则显示了良好的应用前景 [1]。我们拟采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)扩增人表皮生长因子 (hEGF)及其信号肽 cDNA，并构建到 pBK CMV穿梭质粒中，再经脂质体 LipofectAMINE介导转染培养的人角质形成细胞，以期获得真核表达的 hEGF蛋白，为表皮组织基因治疗的研究打下基础。 一、材料和方法 (一 )主要试剂：限制性内切酶、 T4 DNA连接酶及 PCR试剂盒等均为美国 Bio Rad公司产品；逆转录试剂盒为 Boehringer Mannheim公司产品； DMEM、 Opti MEM…     

角质形成细胞μ-阿片受体表达的研究

目的：研究不同特性的角质形成细胞μ-阿片受体的表达情况。方法：以体外培养的角质形成细胞株HaCaT细胞、人鳞状细胞癌(简称鳞癌)细胞株A431、神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株为对象，采用逆转录(RT)-PCR方法研究细胞μ-阿片受体的表达。结果：在常规体外培养条件下，角质形成细胞株HaCaT细胞、人鳞癌细胞株A431的RT-PCR结果显示有μ-阿片受体mRNA的表达，后者的表达水平略高于前者。结论：μ-阿片受体在角质形成细胞的表达，为神经系统和皮肤通过神经肽直接发生作用提供依据。     

姜黄油对角质形成细胞体外增殖分化影响的研究

目的：探讨姜黄油对角质形成细胞体外增殖分化的影响。方法：以人角质形成细胞株COLO-16细胞为模型，噻唑盐比色法(MTT)检测细胞活性和生长情况；免疫组化SABC法检测姜黄油对增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响；电镜观察姜黄油对细胞超微结构的影响。结果：姜黄油抑制角质形成细胞增殖，随药物浓度增加，其抑制增殖能力增加，PCNA表达逐渐减弱，且对角质形成细胞超微结构有直接损伤作用。结论：姜黄油具有抑制体外角质形成细胞增殖分化的作用，有望成为一种治疗增殖性皮肤病的外用药物。     

MTX对正常人表皮角质形成细胞体外培养增殖的作用及影响

目的　探讨甲氨蝶呤 (MTX)对表皮角质形成细胞的作用及影响 ,进而了解MTX治疗银屑病的机理。方法　将人体离体角质形成细胞培养、分离传代并测定其自然生长曲线作对照 ;将不同浓度MTX与角质形成细胞混合培养 ,测定在MTX作用下的角质形成细胞生长曲线 ,比较MTX对细胞生长的影响。结果　MTX对角质形成细胞的体外生长具有明显的抑制作用 ,不仅明显抑制角质形成细胞的正常生长 ,而且可以促使细胞的提前凋亡。结论　MTX通过抑制角质形成细胞的DNA及RNA合成调节细胞的生长代谢及自然凋亡过程 ,尤其对银屑病患者生长过度活跃的表皮角质形成细胞产生调节作用 ,使细胞的过度生长受到抑制 ,保持角质形成细胞的自然生长平衡     

中波紫外线诱导皮肤角质形成细胞凋亡机制的研究进展

紫外线照射表皮后引起DNA损伤的表皮细胞通过日晒伤细胞(凋亡的角质形成细胞)的形成来清除。p53、Fas、Trp53等基因的表达促进角质形成细胞凋亡,而survivin的表达则抑制角质形成细胞凋亡。紫外线照射后皮肤可产生环丁烷嘧啶二聚体和6-4光产物,这两种光产物可以作为UVB诱导凋亡的起始信号。凋亡在清除DNA损伤的皮肤起着重要作用。在皮肤中通过凋亡清除DNA损伤的细胞,防止日光诱导癌变,而不是依赖于DNA损伤的校正修复。silibinin对中波紫外线引起人HaCaT永生化角质形成细胞凋亡具有双向调控作用。对UVB引起角质形成细胞凋亡的调控药物,值得进一步研究。     

银屑病患者角质形成细胞凋亡以及维A酸与榄香烯的影响

目的 探讨银屑病患者角质形成细胞凋亡以及维A酸与榄香烯对体外培养的角质形成细胞凋亡的影响.方法 用TUNEL法测定28例银屑病患者角质形成细胞凋亡;流式细胞仪和DNA片段化观察维A酸与榄香烯对体外培养的角质形成细胞凋亡的影响.结果 28例银屑病患者中19例有大量凋亡细胞分布于表皮各层,另9例较少,分布于棘细胞层和颗粒层.浓度为1、5、10、20μg/mL的维A酸和浓度为20、40、60、80μg/mL的榄香烯可促进人角质形成细胞株Colo16细胞凋亡.结论 银屑病患者角质形成细胞凋亡异常增多,一定浓度的维A酸与榄香烯可在实验室内促进人角质形成细胞株Colo-16细胞凋亡.     

环孢素A及雷公藤内酯醇对CD4＋T细胞、角质形成细胞和HeLa细胞增殖的影响

目的比较环孢素A(CyA)和雷公藤提取物T0 对CD4 T细胞、角质形成细胞和HeLa细胞增殖的影响。方法采用人外周血单一核细胞(PBMC)、人表皮角质形成细胞和HeLa细胞培养 ,3H TdR掺入法测定药物对细胞DNA合成的影响。结果T0 和CyA都能抑制ConA诱导的人外周血T淋巴细胞增殖。T0 在体外可抑制生长于低钙无血清角质形成细胞培养基中的正常人角质形成细胞和HeLa细胞株的生长 ,而CyA在药理浓度下无抑制作用。结论T0 与CyA均能抑制T细胞增殖 ,但对上皮细胞的作用不同。     

UVB对角质形成细胞表达内皮素－1的调节作用

UV照射可引起黑素细胞 ( MC )的增殖及黑素产生增多,出现皮肤色素沉着。最近的研究表明角质形成细胞（ KC）分泌的内皮素－ 1( ET 1）对 MC具有明显的调节作用 [1]。本研究在基因水平及蛋白水平观察 UVB对培养 KC合成 ET－ 1的调节作用; 将有助于阐明 UVB是否通过对 KC分泌 ET 1的调节而对黑素细胞进行间接调控。 一、材料和方法 1.KC培养：方法见文献 [2],采用原代细胞培养至 70％～ 80％融合时进行实验。 2.cDNA探针的制备：重组有 ET 1 cDNA的 pBOB质粒由瑞典 Aifred Wav Hahn惠赠。具体探针制备步骤见文献 …     

角蛋白K14反义寡核苷酸对角质形成细胞增殖的影响

目的：研究角蛋白K14反义寡核苷酸(ASODN)对人角质形成细胞(KC)体外增殖活性的影响。方法：利用脂质体将人工合成的正义、反义及错配K14寡核苷酸基因片段导人体外培养的角质形成细胞，应用细胞生长抑制实验、透射电镜(TEM)和流式细胞仪(FCM)检测ASODN对角质形成细胞的增生、超微结构改变和细胞增殖周期的影响。结果：脂质体介导的K14反义寡核苷酸组KC增殖活性受到明显抑制；电镜下可见KC增殖活性受到抑制的改变，角蛋白合成明显减少；流式细胞仪检测见细胞周期发生明显改变，G1期细胞百分率上升，S期细胞百分率下降。而正义寡核苷酸组、错义寡核苷酸组及空白对照组均无此改变。结论：K14反义寡核苷酸可抑制KC体外增殖活性，应用反义寡核苷酸技术封闭K14基因，有望为银屑病的基因治疗提供新的思路。     

体外培养人皮肤鳞状细胞癌A431细胞Smad2和Smad3 mRNA的表达

目的:探讨体外培养的人皮肤鳞状细胞癌(简称鳞癌)细胞的转化生长因子(TGF)β受体活化Smad--Smad2和Smad3 mRNA的表达水平.方法:采用反转录-实时荧光定量聚合酶链反应,分别检测体外培养的人皮肤鳞癌A431细胞与人皮肤角质形成细胞(HaCaT细胞)中Smad2和Smad3 mRNA的表达水平.结果:人皮肤鳞癌A431细胞Smad2和Smad3的mRNA表达水平均显著低于对照的角质形成细胞.结论:Smad2和Smad3表达下调不但见于人类皮肤鳞癌的在体形成过程中,还见于能持续传代的体外培养的鳞癌细胞中.Smad2和Smad3表达下调可能代表了鳞癌细胞所固有的TGF-B信号转导通路的异常变化.有助于鳞癌的形成.     

抗角蛋白自身抗体对角质形成细胞凋亡的影响

目的 探讨抗角蛋白自身抗体(AK auto Ab)对角质形成细胞凋亡的影响。方法 以不同浓度AK auto Ab作用体外培养人角质形成细胞后,用光镜及透射电镜观察细胞形态变化、用流式细胞仪分析细胞周期变化以及提取角质形成细胞DNA作电泳特征分析。结果 AK auto Ab作用后培养的角质形成细胞光镜、电镜下形态发生凋亡特有的改变,出现核固缩、染色质凝聚,并形成凋亡小体;细胞周期分析图中出现凋亡峰;DNA电泳呈有一定间隔的梯状条带。结论 AK auto Ab对角质形成细胞的凋亡具有诱导作用。     

CD147在角质形成细胞分化过程中的表达和作用

目的 明确CD147在正常角质形成细胞和鳞状细胞癌细胞分化过程中的表达和作用。方法 运用免疫组化法检测不同分化水平的寻常疣以及良性、癌前和恶性表皮肿瘤中CD147的表达。运用免疫印迹法观察CD147在培养角质形成细胞(HaCaT)和鳞状细胞癌细胞(HSC-5)钙诱导分化过程中的表达变化。并观察高钙培养和CD147抗体对HaCaT和HSC-5细胞分化相关形态学的影响。结果 寻常疣及脂溢性角化病的CD147表达方式与正常表皮相同。光线性角化病及Bowen病中部分病例阳性。鳞状细胞癌中CD147的表达随分化降低而显著升高。HaCaT及HSC-5细胞中CD147的表达均随钙诱导的分化过程而降低。CD147抗体可与高钙培养一样诱导HaCaT及HSC-5细胞的分化。结论 CD147分子是一种新的低分化角质形成细胞标志蛋白,并可能抑制正常角质形成细胞和鳞状细胞癌细胞的分化。     

卡泊三醇、维A酸及雷公藤内酯醇对角质形成细胞及COLO16细胞中血管内皮生长因子生成的影响

目的 探讨卡泊三醇、维A酸及雷公藤内酯醇对角质形成细胞及COLO16细胞中血管内皮生长因子(VEGF)生成的影响.方法 采用RT-PCR法检测原代培养的人角质形成细胞及COLO16细胞中VEGFmRNA的水平.结果 卡泊三醇作用于正常人角质形成细胞4h和24h后,以及作用COLO16细胞24h后,均可抑制VEGFmRNA的表达,呈剂量依赖性,IC₅₀值分别为1.19×10^-4μg/mL、1.51×10^-4μg/mL和3.16×10^-5μg/mL.维A酸作用于正常人角质形成细胞4h后可抑制VEGFmRNA的表达,作用于正常角质形成细胞24h后及作用于COLO16细胞4h和24h均无抑制作用.雷公藤内酯醇对正常角质形成细胞和COLO16细胞中VEGFmRNA表达均无抑制作用.结论 在转录水平抑制VEGF生成可能是维A酸与卡泊三醇抗银屑病的作用机制之一.     

链球菌抗原刺激的银屑病外周血单个核细胞培养上清液对角质形成细胞的作用

目的 了解链球菌抗原刺激的银屑病外周血单个核细胞(PBMCs)培养上清液对角质形成细胞的作用以探讨链球菌感染后的银屑病的发病机制。方法 ^3H—TdR掺入法检测PBMCs培养上清液对角质形成细胞DNA合成的影响；免疫组织化学方法检测细胞间教附因子1(ICAM—1)和人类白细胞抗原DR分子(HLA—DR)表达。结果 银屑病患者链球菌抗原刺激的PBMCs培养上清液对角质形成细胞的促增殖作用较对照组显著增强，并能诱导角质形成细胞表达HLIA—DR和ICAM—1分子。结论 受链球菌抗原刺激的银屑病PBMCs培养上清液可促进角质形成细胞增殖和活化，可能是链球菌感染之后银屑病发病的重要原因。     

肿瘤坏死因子与角质形成细胞

肿瘤坏死因子(ＴＮＦ)是一类由巨噬细胞和激活的淋巴细胞等分泌的细胞因子,具有广泛的生物学活性。近年来,随着对ＴＮＦ理论和临床研究的深入,发现ＴＮＦ与角质形成细胞有密切的关系;角质形成细胞可以产生ＴＮＦ,ＴＮＦ又可影响角质形成细胞的形态、功能。现综述如下。一、角质形成细胞ＴＮＦ的产生及影响因素人类正常皮肤角质形成细胞、肿瘤及一些自身免疫性疾病的角质形成细胞均能通过自分泌或旁分泌的方式产生ＴＮＦα[1],抑制正常人和银屑病皮损角质形成细胞的生长。培养的人角质形成细胞亦可表达ＴＮＦ受体(ＴＮＦ-Ｒ),对ＴＮＦ引起的…     

反义p53寡核苷酸对阿霉素诱导的培养人皮肤角质形成细胞凋亡的影响

目的 探讨反义p53寡核苷酸(ODN)对阿霉素诱导的培养人皮肤角质形成细胞凋亡的影响.方法 用MTT法检测不同浓度脂质体和0.5mg/L反义p53 ODN转染角质形成细胞后对2mg/L阿霉素抑制细胞增殖的影响;RT-PCR方法 测定p53 mRNA水平的变化;用流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 阿霉素抑制体外培养的人皮肤角...     

反义寡核苷酸阻遏角蛋白14的表达

目的 研究脂质体介导角蛋白K14反义寡核苷酸(ASODN)阻遏人角质形成细胞K14基因和蛋白的表达及抑制体外增殖活性的效果.方法 人表皮角质形成细胞原代培养,3~10代用于实验,利用脂质体将人工合成的正义、反义及错配K14寡核苷酸基因片段导入角质形成细胞,应用流式细胞仪、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化(SABC)方法检测反义寡核苷酸对角质形成细胞的细胞周期、K14基因和蛋白表达的影响.结果 脂质体介导的K14反义寡核苷酸转染角质形成细胞后,能有效地抑制角质形成细胞中K14基因的表达;48h后可阻遏K14蛋白表达;流式细胞仪检测见反义寡核苷酸处理组细胞周期发生明显改变,G₁期细胞百分率上升,S期细胞百分率下降.而正义寡核苷酸1组、错义寡核苷酸组及空白对照组均无此变化.结论 应用反义技术封闭K14基因,可以阻遏角蛋白K14基因和蛋白的表达,并可以抑制体外培养的角质形成细胞的增殖.     

p53抑制剂PFT-α对阿霉素诱导的人皮肤角质形成细胞凋亡的影响

目的探讨p53抑制剂PFT-α对阿霉素诱导的人皮肤角质形成细胞凋亡的影响。方法用MTT法通过比色分析测定吸光度(OD)值,检测0,4,8,12mg/LPFT-α和阿霉素给药对角质形成细胞增殖的影响,用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果阿霉素抑制体外培养的人皮肤角质形成细胞增殖,先给予8,12mg/LPFT-α处理细胞,然后给予阿霉素,与对照组比较,PFT-α升高OD值(P<0.05),降低细胞凋亡率(P<0.05)。结论先行给予适当剂量PFT-α处理人皮肤角质形成细胞,能一定程度减轻阿霉素对人皮肤角质形成细胞的损伤,表现出对阿霉素致凋亡的保护作用。     

皮肤科学基础

20111477人角质形成细胞与MV3人黑素瘤细胞体外构建人工皮肤黑素瘤组织模型/卜晓琳(贵阳医学院附院皮肤科),陆洪光∥中华皮肤科杂志.-2011,44(4).-256～258将人角质形成细胞(KC)和MV3人黑素瘤细胞混合接种于去表皮的真皮(DED),采用液下培养和空气-液面培养相结合方式进行混合培养,2周后取出进行HE染色、S-100蛋白、HNB45及角蛋白免疫组化染色。