表皮细胞生长因子对角质形成细胞体外增殖作用的研究

目的：观察重组人表皮生长因（Recombinant human epidermal growth factor,rhEGF）对人角质形成细胞的细胞周期以及促切口愈合作用。方法：运用包皮环切术后收集培养角质细胞,不同浓度的重组人表皮细胞生长因子处理细胞,MTT法、↑3HtdR掺入法测细胞生长率;流式细胞仪检测细胞周期。结果：体外实验表明5～100ng·ml^-1重组人表皮细胞生长因子可促进人角质形成细胞生长,其中浓度为10ng·ml^-1促进细胞生长作用最为显著。流式细胞仪检测10ng·ml^-1重组人表皮细胞生长因子处理后细胞增殖明显,S和G2／M期细胞数明显增加。结论：重组人表皮细胞生长因子可促进细胞生长。     

三七皂甙R1诱导HL-60细胞凋亡的初步研究

目的：观察三七皂甙R1是否能诱导人白血病细胞株HL-60细胞凋亡及相关基因的变化。方法：300～1200μg／ml^-1三七皂甙R1处理HL-60细胞，光镜下观察细胞形态；MTT法测细胞生长抑制率；流式细胞仪检测凋忘峰。结果：300～1200μg／ml^-1三七皂甙R1可抑制HL-60细胞生长，抑制率有剂量依赖性。流式细胞仪检测凋亡峰随药物浓度增大而增加。结论：三七皂甙R1可抑制HL-60细胞生长，诱导其凋亡。     

表皮生长因子干预人羊膜间充质干细胞的增殖和迁移

背景：人羊膜间充质干细胞移植可促进皮肤创伤的愈合。 目的：观察表皮生长因子对体外培养人羊膜间充质干细胞增殖和迁移的影响。 方法：人羊膜间充质干细胞经分离、鉴定并培养至第3代。细胞经过不同浓度的表皮生长因子处理后,用MTT法测量吸光度值从而计算出细胞存活率,通过计数穿过Transwell小室的细胞数测定表皮生长因子对细胞迁移能力的影响;并用表皮生长因子受体的抑制剂AG1478及PI3K的抑制剂LY294002检测其对细胞迁移能力的影响。 结果与结论：表皮生长因子处理后细胞的吸光度值升高1.55倍,穿过膜的数量增高1.5倍;AG1478、LY294002对表皮生长因子引起的迁移有抑制作用。提示表皮生长因子处理后细胞增殖和迁移能力均增强,迁移与EGFR-PI3K信号通路有关。     

PI3K/Akt通路在滋养细胞增殖中的调控机制研究

旨在探讨PI3K/Akt信号转导通路在滋养细胞增殖中的作用及具体调控机制。体外培养滋养细胞系EVT。应用MTT法检测不同浓度表皮生长因子（EGF）刺激后EVT的增殖情况;应用流式细胞技术检测不同处理组EVT凋亡情况。使用PI3K抑制剂LY294002处理细胞后,检测以上各项结果的变化。结果发现：1.随EGF浓度增高,EVT增殖呈现增强趋势,EGF在10ng/ml及其以上时效应明显;2.EGF能够显著降低EVT的凋亡发生;3.使用PI3K抑制剂LY294002明显逆转EGF的促进EVT增殖的效应。提示表皮生长因子可以活化滋养细胞的PI3K/Akt信号通路,进而促进细胞增殖,并且抑制其凋亡,PI3K抑制剂可以明显抑制EGF的促EVT增殖作用。     

人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2双基因共表达腺病毒载体转染人骨髓基质干细胞后的细胞增殖

背景：利用重组腺病毒载体转染外源性基因到组织工程骨的种子细胞是骨缺损基因治疗研究的热点。 目的：用人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2双基因共表达腺病毒载体转染人骨髓基质干细胞,以探讨基因转染对人骨髓基质干细胞增殖的影响。 方法：将Ad-hBMP2-IRES-hFGF2转染至人骨髓基质干细胞中,荧光显微镜观察转染效果,RT-PCR方法观察人骨形态发生蛋白2 cNDA和人成纤维细胞生长因子2 cNDA在人骨髓基质干细胞中的转录情况,Wester blot 方法检测人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2蛋白表达情况,锥虫蓝测定细胞活力,流式细胞仪分析其对细胞增殖的影响。 结果与结论：转染后人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2基因在mRNA水平和蛋白水平均有表达,细胞活力无明显变化,流式细胞仪分析细胞周期中增殖细胞比例明显增加。说明该双基因可高效转染人骨髓基质干细胞,且促进细胞增殖。     

白藜芦醇增强TRAIL对人髓系白血病KG-1a细胞的细胞毒作用

目的:观察白藜芦醇作用前后TRAIL对人髓系白血病KG-1a细胞的细胞毒作用的变化。方法:流式细胞仪检测KG-1a细胞表面CD34和CD38的表达,二甲氧唑黄(XTT)细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒检测白藜芦醇作用前后TRAIL对KG-1a细胞增殖的影响,AnnexinV-FITC/PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡变化。流式细胞仪检测白藜芦醇作用前后KG-1a细胞表面TRAIL死亡受体表达变化。结果:人髓系白血病KG-1a细胞CD34+CD38-占(58.67±2.87)%,10~1 000 ng/ml的TRAIL对KG-1a细胞增殖无明显影响,但对白藜芦醇作用后的KG-1a细胞的增殖有明显抑制作用,白藜芦醇能促进TRAIL诱导KG-1a细胞凋亡,并能上调KG-1a细胞表面TRAIL死亡受体DR5的表达。结论:白藜芦醇能增强TRAIL对人髓系白血病KG-1a细胞的细胞毒作用,其机制可能与白藜芦醇上调KG-1a细胞表面TRAIL死亡受体DR5的表达有关。     

角质细胞生长因子对老龄鼠胸腺细胞增殖作用的研究

目的观察角质细胞生长因子（KGF）通过恢复胸腺上皮细胞（TEC）数量促进老龄鼠胸腺细胞增殖的作用。方法①体内实验：BALB／C小鼠10只，随机分为KGF处理组和对照组，每组各5只，连续7d分别给予皮下注射重组人KGF（5mg·k^-1·d^-1）和生理盐水，4周后检测小鼠胸腺和脾组织的细胞总数，流式细胞仪分别检测胸腺组织中CD4单阳性（CD4SP）、CD8单阳性（CD8SP）、CD4CD8双阳性（DP）、CD4CD8双阴性（DN）以及脾组织中CD4SP、CD8SP各T细胞亚群的比例；②体外实验：鼠胸腺上皮来源的1C6细胞，分别经含不同浓度（25、50、100、200、400、800ng／ml）的重组人KGF和不含重组人KGF的完全培养液（对照组）作用24h，采用噻唑蓝（MTT）法测定细胞增殖率。结果细胞计数和流式细胞仪检测显示，与对照组相比，KGF处理组平均胸腺细胞总数和CD4SP、CD8SP、DP、DN各T细胞亚群的平均细胞数以及KGF处理组平均脾细胞总数和CD4SP、CD8SP各T细胞亚群的平均细胞数均有明显增加（均P〈0．05）。MTT法检测显示，在低浓度（〈200ng／ml）时，1C6细胞增殖率随KGF浓度的增加不断升高；当KGF浓度为200ng／ml时，1C6细胞增殖率达到最高值；而在高浓度（〉200ng／ml）时，1C6细胞增殖率随KGF浓度的增加又逐渐下降；与对照组比较，浓度为100、200、400ng／ml的重组人KGF对1C6细胞具有明显的促增殖作用（均P〈0．05）。结论KGF可通过恢复老龄鼠TEC数量以及促进胸腺细胞生成和增加成熟T细胞向外周输出而增强机体的免疫力。     

深Ⅱ度烫伤创面早期应用重组人表皮生长因子后表皮生长因子受体的表达

背景：有研究表明重组人表皮生长因子能促进烧伤创面愈合,内源性表皮生长因子通过与表皮生长因子受体结合发挥生物学效应。 目的：观察局部应用重组人表皮生长因子对大鼠烫伤创面表皮生长因子受体的影响,分析其促进创面愈合的可能机制。 方法：制备Wistar大鼠背部深Ⅱ度烫伤模型,分为2组,对照组于创面喷洒生理盐水,实验组喷洒重组人表皮生长因子。烫伤后0,1,3,5,7,10,14,21 d取创面组织,采用Western blot检测表皮生长因子受体蛋白表达,并测定两组大鼠创面愈合率。 结果与结论：烫伤后7-21 d 实验组创面愈合率高于对照组(P < 0.05)。两组表皮生长因子受体蛋白表达在1 d明显降低(P < 0.05),随后又升高,7 d达峰值且对照组比实验组高(P < 0.05);峰值过后,对照组逐渐下降,21 d接近烫伤前水平,实验组迅速下降,14 d达谷值,随后上升,21 d接近烫伤前水平,两组差异有显著性意义(P < 0.05)。说明早期局部应用重组人表皮生长因子可影响表皮生长因子受体的表达规律,并显著促进大鼠深Ⅱ度烫伤创面愈合。     

重组人表皮生长因子在肛瘘术后的临床应用

目的 探讨重组人表皮生长因子(rhEGF,商品名:金因肽)应用于肛瘘术后对创面愈合的疗效和机理.方法 选120例低位肛瘘切除术病人,随机分成治疗组和对照组各60例.治疗组用重组人表皮生长因子纱条换药,并与同期用油纱换药(对照组)作比较研究.结果 治疗组创面水肿渗出轻,肉芽组织生长快,创面愈合时间明显短于对照组(P＜0.01).结论 重组人表皮生长因子有明显促进肛瘘术后创面愈合的作用,且愈合时间短,无瘢痕过度生长.     

重组人表皮生长因子联合前列地尔作用于糖尿病溃疡创面

背景：人内源性表皮生长因子的缺乏以及血流动力学的改变会导致创面不愈合的发生。 目的：观察重组人表皮生长因子联合前列地尔作用于糖尿病溃疡动物模型创面的疗效。 方法：Wistar大鼠40只建立糖尿病溃疡动物模型,随机等分为模型组、重组人表皮生长因子组、前列地尔组和重组人表皮生长因子+前列地尔组,分别予以1%碘伏清创、重组人表皮生长因子凝胶外敷、前列地尔静脉滴注、重组人表皮生长因子凝胶外敷和前列地尔静脉滴注联合治疗。 结果与结论：干预后3,7,10,14 d观察发现,相比于模型组,重组人表皮生长因子和/或前列地尔治疗后,糖尿病皮肤溃疡大鼠溃疡面积减小、愈合时间缩短、创面动态愈合率上升(P < 0.01),且两者联合治疗的效果优于重组人表皮生长因子和前列地尔单独治疗(P < 0.01),而重组人表皮生长因子或前列地尔单独治疗的效果接近,提示重组人表皮生长因子与前列地尔联合使用比单纯使用前列地尔或单纯使用重组人表皮生长因子更能显著促进糖尿病溃疡创面的愈合。     

胰岛素促进体外培养的小鼠卵巢颗粒细胞增殖

目的：研究胰岛素对体外培养的小鼠卵巢颗粒细胞增殖的影响，探讨胰岛素的促增殖作用是否与浓度相关。方法：未成熟小鼠卵巢颗粒细胞原代培养，四甲基偶氮唑蓝法（MTT）测定颗粒细胞增殖指数，观察不同浓度胰岛素对颗粒细胞增殖的影响。结果：与对照组相比，5ng·ml^-1。胰岛素对颗粒细胞没有促增殖作用（P〉0.05），10ng·ml^-1有促增殖作用（P〈0.05），100ng·ml^-1、1000ng·ml^-1的促增殖作用更强（P〈0.01），100ng·ml^-1、1000ng·ml^-1作用无明显差异（P〉0.05）。结论：生理浓度的胰岛素能促进颗粒细胞增殖，高浓度胰岛素促增殖作用更强，本实验为进一步研究高胰岛素血症在多囊卵巢综合症（PCOS）的卵泡发育停滞机制奠定基础。     

重组人表皮生长因子凝胶与碘伏油纱治疗小面积Ⅱ度烧伤的比较

目的观察和比较重组人表皮生长因子（rhEGF）凝胶与碘伏油纱用于治疗小面积Ⅱ度烧伤的临床效果。方法95例小面积Ⅱ度烧伤患者,分成2组：其中使用rhEGF凝胶治疗的患者为rhEGF凝胶组,使用碘伏油纱治疗的患者为对照组,观察创面愈合时间、患者疼痛度、换药工作量及预后色素沉着情况并留取照片,1年后对部分患者进行随访。结果rhEGF凝胶组的治疗效果明显优于对照组。凝胶组的愈合时间【（9.82±1.52）d】明显短于对照组【（14.42±2.10）d】（P﹤0.01）,平均愈合时间提前3～5d;患者疼痛度明显减轻（VRS-5评分分别是：1.56±0.07和3.23±0.14,P﹤0.01）;换药工作量也明显缩小（治愈每1%TBSA所需要的时间分别是：（57.2±0.8）min和（84.9±4.3）min,P﹤0.01）;1年后部分患者随访证实凝胶组远期色素沉着较轻,并较少引起疤痕增生。结论rhEGF凝胶用于治疗小面积Ⅱ度烧伤效果确切,患者愈合时间缩短、疼痛度减小、换药工作量减少、预后色素沉着减轻,并且1年后随访发现多数患者效果良好。     

外用重组人表皮生长因子凝胶治疗浅Ⅱ度烧伤创面的临床观察

目的观察重组人表皮生长因子在促进浅Ⅱ度烧伤创面愈合中的疗效。方法将32例四肢浅Ⅱ度烧伤患者64个烧伤部位随机分成两组,对照组32个部位应用凡士林油纱换药方法治疗,治疗组32个部位在凡士林油纱的基础上加用重组人表皮生长因子治疗,观察比较创面的愈合时间。结果治疗组较对照组创面愈合时间缩短：治疗组（8.4±1.2）d,对照组（11.6±1.8）d,两组差异有统计学意义（P〈0.01）。结论局部外用重组人表皮生长因子治疗浅Ⅱ度烧伤能加速创面愈合。     

白芨胶载外源性重组人表皮生长因子促进伤口愈合机制

BACKGROUND: How to promote wound healing is always the research focus of the surgical physicians in the clinic. Recombinant human epidermal growth factor (rhEGF) can effectively promote wound healing. However, as a biological agent, it is easy to be decomposed under normal temperature. OBJECTIVE: To explore the mechanisms underlying the promotion of wound healing in the back of rabbits by bletilla carrying exogenous rhEGF. METHODS:Model rabbits with full-thickness skin defects in the back were treated with bletilla carrying exogenous rhEGF (combined treatment group), bletilla, rhEGF, or saline (control group). RESULTS AND CONCLUSION:The time of wound healing was the shortest (P < 0.05) and the wound healing rate was the highest (P < 0.05) in the combined treatment group. On postoperative days 3 and 10, newly formed granulation tissue, capillaries, and collagenous fibers showed by hematoxylin-eosin staining staining and Masson staining and the strongest immunoreactivity of vascular endothelial growth factor determined by immunohistochemical staining were found in the combined treatment group (P < 0.05). These findings confirm that bletilla carrying exogenous rhEGF promotes wound healing by accelerating the forming of granulation tissue, new-born capillaries, and collagenous fibers, and the effects are superior to either of them alone.     

积雪草苷通过抑制NF-κB核转移影响糖尿病大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的：观察积雪草苷是否通过抑制核因子-κB（NF-κB）核转移而影响糖尿病大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）增殖。方法：通过连续喂养高脂饮食8w后一次性腹腔注射链脲佐菌素40mg.kg^-1建立2型糖尿病大鼠模型,取模型成功大鼠胸主动脉中膜血管平滑肌细胞进行培养,倒置显微镜下观察细胞形态,SMA免疫组化染色鉴定细胞后给予40、80、160、320μg·ml^-1积雪草苷干预,计数法描绘血管平滑肌细胞生长曲线,共聚焦显微镜下观察积雪草苷对NF-κB核转移影响,CCK-8法测定积雪草苷IC50。结果：与正常组对比,糖尿病组VSMC生长速度快;同模型组比较,积雪草苷40μg.ml-1以上剂量组能明显抑制糖尿病VSMC中NF-κB从胞浆转移到胞核。积雪草苷抑制糖尿病血管平滑肌细胞增殖IC50为209.26μg·ml^-1。结论：积雪草苷抑制糖尿病VSMC增殖可能与NF-κB核转移有关。     

LPS诱导HUVEC细胞凋亡最适浓度与时间选择

目的：探讨脂多糖诱导HUVEC细胞凋亡的最适浓度和时间。方法：体外培养人脐静脉血管内皮细胞株（HU—VEC）,将脂多糖（LPS）分为100、10、1、10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5μg·ml^-18个浓度,分别刺激0．5、1、2、6、12、24h后,采用CCK-8法观察细胞活力,荧光显微镜观察Hochest33342／PI双染后细胞形态。结果：同阴性对照组比较,药物浓度≥10^-2μg·ml^-1刺激24h均可引起细胞活力明显下降（P〈0．05）。100μg·ml^-1刺激1h,10μg·ml^-1与1μg·ml^-1刺激6h可引起HUVEC细胞活力下降,但12h与24hHUVEC细胞活力下降更明显（P〈O．05）,10^-1μg·ml^-1刺激12h可引起HUVEC细胞活力下降（P〈0．05）。Hochest33342／PI双染可见明显核浓缩和凋亡小体的产生,甚至出现死亡现象。结论：LPS刺激后引起HUVEC细胞活力下降呈时间与剂量依赖性,综合时间与剂量考虑,10^-1μg·ml^-1刺激12h或24h与10^-2μg·ml^-1刺激24h可致理想的HUVEC细胞凋亡模型。     

碱性成纤维细胞生长因子对体外培养人羊膜间充质干细胞增殖的影响

目的观察不同浓度碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对体外培养人羊膜间充质干细胞（HAMSCs）增殖的影响,以探索体外培养HAMSCs的最适条件。方法分离、培养HAMSCs,选取第3代细胞进行鉴定及检测。实验组将bFGF分为0.1、0.5、1、5、10、20、40、80ng/ml共8个浓度组;阴性对照组只加HAMSCs,不加bFGF;空白对照组只加培养基。各组孵育48h后加入Am-Blue试剂,继续孵育,待培养基由靛青蓝色开始变成粉红色时取出用酶标仪测量各组的吸光度（OD）,重复3次实验。结果 0.5、1、5、10、20、40、80ng/ml浓度组与对照组相比,差异均有统计学意义（P〈0.05）;10ng/ml组与0.5、1、5ng/ml组相比,差异均有统计学意义（P〈0.05）;10ng/ml组与40、80ng/ml组相比,差异无统计学意义（P=0.067）,表明bFGF促增殖作用最强的最小浓度为10ng/ml。结论 bFGF能够促进HAMSCs增殖,且促增殖作用最强的最小浓度为10ng/ml。     

川芎水煎液对离体蟾蜍心功能的影响

目的：观察川芎水煎液对蟾蜍离体心脏收缩性、自律性和心输出量的影响。方法：采用八木氏法蛙心灌流标本，分别灌流不同浓度的川芎水煎液。结果：1μg·m^-1、10μg·ml^-1。的川芎水煎液几乎不改变心缩力，而100μg·ml^-1、500μg·ml^-1、1000μg·ml^-1。川芎水煎液呈现明显的负性变力作用，心缩力与浓度显著负相关（r=-0．792，P〈O．01）；心输出量与心缩力平行改变；不同浓度川芎水煎液对心自律性改变，差异未达统计意义（P〉O．05）。结论：川芎水煎液降低离体蛙心的心缩力和心输出量，且有明显量效关系。     

烧伤残余创面局部应用四环素眼膏治疗的临床观察

目的观察四环素眼膏在烧伤残余创面治疗中的临床效果。方法 84例烧伤残余创面的患者根据创面应用药物不同分为3组,创面应用四环素眼膏治疗的患者归入四环素眼膏组(简称眼膏组)、创面应用重组人表皮生长因子的患者归入rhEGF凝胶组(简称凝胶组)和创面应用传统碘伏油纱换药治疗的患者归入碘伏油纱组(简称油纱组),观察创面愈合时间、疼痛度、治疗费用、1年后随访效果和创面细菌培养的结果。结果 (1)眼膏组和凝胶组治疗烧伤残余创面的愈合时间均短于油纱组,平均提前3～5d(P0.01),眼膏组与凝胶组的愈合时间差异无统计学意义(P0.05)。(2)眼膏组平均疼痛度评分为(2.56±0.14)分,与凝胶组疼痛度评分(2.61±0.07)分比较差异无统计学意义(P0.05);碘伏油纱组疼痛度评分为(4.23±0.26)分,与眼膏组和凝胶组比较差异有统计学意义(P0.01)。(3)治愈每1%残余创面所需敷料和药物费用眼膏组费用最低:(121.35±1.16)元,油纱组次之:(269.17±3.6)元,凝胶组较为昂贵:(449±17.2)元。(4)1年后对部分患者随访,根据相应评价指标进行评分,预后眼膏组(5.23±0.26)分和凝胶组(6.13±0.32)分明显优于油纱组(3.98±0.46)分,P0.01,眼膏组与凝胶组比较差异无统计学意义(P0.05)。(5)创面分泌物细菌培养72h可见凝胶组细菌阳性率最高(42.31%),油纱组72h细菌培养阳性率(16.13%)明显低于凝胶组,眼膏组细菌培养阳性率(3.70%)又明显低于油纱组。结论四环素眼膏治疗烧伤残余创面对比于重组人表皮生长因子和碘伏油纱,能有效控制感染,缩短愈合时间,减轻患者疼痛度,同时降低治疗费用,效果确切、预后良好。