3种截短的泡球蚴Em18基因原核表达质粒的构建、表达及鉴定

目的构建3种截短的泡球蚴18(Em18)基因的原核表达质粒,获得高效表达、有生物活性的3种重组蛋白,并对其进行初步鉴定。方法DNAman软件设计引物,PCR法扩增并构建3种截短的pET41a-Em18.1、Em18.2和Em18.3原核表达质粒,测序鉴定插入序列正确性;IPTG诱导、表达和纯化rEm18.1-GST、rEm18.2-GST和rEm18.3-GST重组蛋白,SDS-PAGE电泳及Western blot进行初步鉴定。结果成功构建了3种截短的pET41a-Em18.1、Em18.2和Em18.3重组表达质粒;SDS-PAGE检测表明rEm18.1-GST、rEm18.2-GST、rEm18.3-GST重组蛋白得到成功表达,在分子质量单位为41、45.5和45.5ku处有表达条带;Western blot显示3种重组蛋白均能被AE病人血清识别。结论成功构建了截短的pET41a-Em18.1、pET41a-Em18.2和pET41a-Em18.3原核表达质粒,表达的3种重组蛋白均具有良好的抗原性,为Em18抗原表位分析奠定了基础。     

泡球蚴Em18重组蛋白的表达及其抗原性检测的研究

目的　构建泡球蚴18(Em18)基因的原核表达质粒,获得高效表达、有生物活性的Em18重组蛋白,为包虫病诊断试剂的研制奠定基础。　方法　用DNAman软件设计引物,分别在引物5′端和3′端添加EcoRⅠ和 XhoⅠ酶切位点,以pMD18 T/Em18原核表达质粒为模板,PCR扩增Em18基因片断,经酶切,克隆入原核表达载体 pET 41a(+),构建原核表达质粒 pET41a Em18;转化大肠埃希菌BL21(DE3),酶切、PCR及测序鉴定其插入序列的正确性。经 IPTG诱导表达 rEm18 GST重组蛋白和GST重组蛋白,用谷光甘肽 Sepharose 4B亲合层析柱分别进行纯化,通过 SDS PAGE和Western blot试验分析鉴定。　结果　测序表明构建的 pET41a Em18 原核表达质粒均为正确连接,插入 Em18 基因片断为486 bp。SDS PAGE检测表明Em18基因以 rEm18 GST重组蛋白的方式得到成功表达,在相对分子质量单位 50ku处有表达条带;Western blot分析显示,rEm18 GST重组蛋白能被泡型棘球蚴病人阳性血清识别,具有良好的抗原性。　结论　成功构建了 pET41a Em18原核表达质粒,获得的 rEm18 GST重组蛋白具有生物活性和抗原性,有望应用于泡型包虫病诊断试剂的研制。     

3种截短的泡球蚴Eml8基因原核表达质粒的构建、表达及鉴定

目的 构建3种截短的泡球蚴18（Eml8）基因的原核表达质粒，获得高效表达、有生物活性的3种重组蛋白，并对其进行初步鉴定。方法 DNAman软件设计引物，PCR法扩增并构建3种截短的pET41a-Eml8．1、Eml8．2和Eml8．3原核表达质粒，测序鉴定插入序列正确性；IPTG诱导、表达和纯化rEml8．1-GST、rEml8．2-GST和rEml8．3一GST重组蛋白，SDS-PAGE电泳及Westernblot进行初步鉴定。结果 成功构建了3种截短的pET41a—Eml8．1、Eml8．2和Eml8．3重组表达质粒；SDS-PAGE检测表明rEml8．1-GST、rEinl8．2-GST、rEml8．3-GST重组蛋白得到成功表达，在分子质量单位为41、45．5和45．5ku处有表达条带；Westernblot显示3种重组蛋白均能被AE病人血清识别。结论 成功构建了截短的pET41a-Eml8．1、pET41a-Eml8．2和pET41a—Eml8．3原核表达质粒，表达的3种重组蛋白均具有良好的抗原性，为Eml8抗原表位分析奠定了基础。     

两种克隆方法在3种截短的泡球蚴Em18原核表达载体构建中的比较

目的比较3种截短的泡球蚴Em18基因聚合酶链反应(PCR)扩增产物经TA克隆和直接酶切2种方法,在原核表达质粒构建中的运用。方法PCR扩增带有EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点的3种截短的泡球蚴Em18基因,经2种方法构建3种截短的Em18原核表达质粒：①PCR扩增产物与T载体连接构建T-Em18,重组质粒经EcoRⅠ/XhoⅠ酶切,电泳分离、纯化目的片段,再与经过EcoRⅠ/XhoⅠ酶切的原核表达载体pET41a( )连接；②PCR扩增产物经EcoRⅠ和XhoⅠ酶切,电泳、纯化,直接与经过相同限制性内切酶酶切的pET41a( )连接。结果先经TA克隆,再经酶切构建3种截短的泡球蚴Em18原核表达载体获得成功。而采用直接酶切PCR扩增产物的构建方法未获得成功。结论TA克隆可用于对直接酶切效果不好的PCR扩增片段与表达载体的连接构建,方法简便高效,可提高带有限制性酶切位点的PCR扩增片段克隆人原核表达载体的效率。     

大鼠Sirt1基因原核表达质粒的构建及融合蛋白表达

目的构建大鼠Sirt1基因重组原核表达质粒pET41-Sirt1,表达其重组蛋白,为进一步研究Sirt1在哺乳动物细胞内的作用奠定基础。方法根据GenBank中大鼠Sirt1基因序列设计引物,用RT-PCR扩增得到含BamHI/XhoI酶切位点的Sirt1片段,克隆至pGEM-Teasy载体后亚克隆至原核表达载体pET41,测序鉴定后,转化宿主菌进行表达、蛋白纯化,SDS-PAGE鉴定。结果从大鼠脑的mRNA中扩增出特异Sirt1基因片段长506bp,经酶切鉴定及DNA序列测定,证实pET41-Sirt1重组质粒构建正确,表达融合蛋白分子量约为48kD。结论成功构建重组原核表达质粒pET41-Sirt1,并能表达融合蛋白,其分子量大小与预期一致。     

细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因的表达及抗原性分析

目的在原核系统表达并初步鉴定细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(EgTPx)基因重组蛋白的抗原性。方法对已构建的重组质粒pMD-18T-EgTPx进行限制性酶切,获取目的基因片段后连接到表达质粒载体pET30a,构建重组表达质粒pET30a-EgTPx,转化大肠杆菌DH5α。筛选阳性克隆,经限制性酶切分析、PCR及测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达产物,对表达产物纯化后用Western-blot方法和ELISA鉴定重组EgTPx蛋白的抗原性。结果构建的重组表达质粒pET30a-EgTPx阳性克隆经PCR与双酶切鉴定,与预期结果一致,测序鉴定无基因突变,开放阅读框正确;含有pET30a-EgTPx重组表达质粒的大肠杆菌BL21(DE3)诱导后得到了高效表达,SDS-PAGE显示表达产物分子量约为27 kDa,而且主要以包涵体形式存在;Western-blot和ELISA结果表明EgTPx重组抗原可以被棘球蚴感染羊阳性血清特异性识别。结论成功构建了pET30a-EgTPx表达质粒,EgTPx重组蛋白得到了高效表达,表达产物具有良好的抗原性。     

多房棘球蚴LDH基因的克隆表达及免疫原性研究

目的克隆表达青海省多房棘球蚴(Echinococcus multilocularis,Em)乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)基因,鉴定EmLDH重组蛋白的免疫原性,初步评价其免疫诊断价值。方法采用RT-PCR方法克隆EmLDH基因,将其连接入pET15b表达载体中,构建重组表达质粒pET15b-EmLDH,转化至E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞进行诱导表达。通过SDS-PAGE检测重组蛋白的表达形式,Ni-IDA树脂亲和层析纯化重组蛋白。通过Western blotting法鉴定EmLDH重组蛋白的免疫原性,ELISA法检测泡型包虫病患者(57例)、囊型包虫病患者(33例)和正常人(50例)血清,初步评价EmLDH重组蛋白的免疫诊断效果。结果成功克隆了EmLDH基因并表达纯化出相应的重组蛋白。Western blotting结果显示,EmLDH重组蛋白可被泡型和囊型包虫病患者血清识别,而不被正常人血清识别。ELISA结果显示,EmLDH重组蛋白对泡型和囊型包虫病患者血清的诊断敏感性分别为84.21%和84.85%。结论 EmLDH重组蛋白具有较高的免疫原性,对包虫病具有较好的免疫诊断价值。     

鼠疫耶尔森杆菌蛋白YPO1996的融合表达与鉴定

目的在比较蛋白质组结果的基础上选择并构建pET32a-ypo1996,表达鼠疫耶尔森杆菌（Yersinia pestis）特异的假想蛋白YPO1996重组蛋白（rYPO1996）,为新鼠疫耶尔森杆菌诊断试剂的研究提供备选抗原。方法根据鼠疫菌CO92株全基因组序列设计引物,用PCR方法扩增目的基因YPO1996,将其定向插入表达载体pET32a（＋）上,转化至大肠埃希菌BL21（DE3）,用IPTG诱导,使重组质粒在工程菌中稳定高效地表达带组氨酸标签的融合蛋白,并亲和纯化该目的蛋白。通过SDS-PAGE方法对表达的蛋白产物进行初步分析,并用Western blot分析其抗原性。结果单、双酶切鉴定及DNA测序显示,目的基因YPO1996成功连接到表达载体pET32a（＋）上,SDS-PAGE显示表达产物分子质量单位约为53.11 ku,与预期值相符。重组蛋白经Western blot鉴定,能被兔抗免疫鼠疫菌EV株血清识别。结论成功构建了pET32a-ypo1996重组基因原核表达系统,表达的重组蛋白rYPO1996具有较好的可溶性及抗原性,可作为研发新型鼠疫耶尔森杆菌诊断试剂的备选抗原。     

空肠弯曲菌CadF蛋白的原核表达与产物分析

目的构建空肠弯曲菌cadF基因重组表达质粒pET30a(+)-cadF,分析其在大肠埃希菌中的表达情况及其融合蛋白的抗原性。方法用PCR方法扩增cadF基因,构建重组克隆质粒和表达质粒,经菌落PCR、双酶切和测序鉴定后在E.coli(DE3)原核表达系统中诱导表达,SDS-PAGE和飞行时间质谱鉴定表达蛋白,Western blot分析其抗原性。结果含重组表达载体pET-30a(+)-cadF中的cadF基因序列经测序证实与出发菌株cadF基因序列100%同源,并成功诱导表达CadF蛋白,Westernblot显示该CadF融合蛋白能被抗空肠弯曲菌多克隆兔血清识别。结论成功构建了空肠弯曲菌cadF基因重组表达载体,表达产物具有抗原性。     

鼠疫耶尔森杆菌YPO0388蛋白的原核表达与鉴定

目的构建表达鼠疫耶尔森杆菌(Yersinia Pestis)的假想蛋白YPO0388的重组质粒,为鼠疫耶尔森杆菌的诊断方法的发展提供支持。方法用PCR方法扩增出ypo0388基因,将其克隆到表达载体pET32a(+)中转化到大肠杆菌(E.co-liBL21(DE3)),用IPTG诱导目的基因表达,用SDS-PAGE方法对表达产物进行分析,用WesternBlot鉴定其免疫原性,并纯化出目的蛋白。结果根据单、双酶切鉴定和DNA测序结果显示,目的基因ypo0388已成功连接到表达载体pET32a(+)上,SDS-PAGE结果显示表达产物rYPO0388相对分子质量约为69.71kDa。重组蛋白经Western blot鉴定,能被兔抗鼠疫菌EV株血清识别。结论成功克隆并构建了pET32a-ypo0388重组基因原核表达系统,所表达的重组蛋白rYPO0388具有较好的可溶性与抗原性,有可能做为研制新型鼠疫耶尔森杆菌诊断试剂的备选抗原。     

SARS冠状病毒M蛋白全长基因的克隆、表达与纯化

目的克隆SARS冠状病毒M蛋白基因编码序列，构建原核重组表达质粒pET23a-M，并在大肠杆菌BL21（DE3）中进行表达、纯化。表达产物用Western Blot检测其抗原性。方法RT-PCR扩增M编码基因目的片段，胶回收纯化，插入克隆载体pMD-18T载体并转化大肠杆菌DHSa。序列测定后亚克隆至表达质粒载体pET23a，构建重组体pET23a-M，转化大肠杆菌DH5α。筛选阳性克隆，以限制性酶切分析鉴定后，转化大肠杆菌BL21（DE3）以异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）进行诱导表达。用SDS-PAGE与免疫印迹分析表达产物。结果PCR扩增出约675bp的特异性片段，与预期片段大小相符，测序鉴定无有义突变；所构建的pET23α-M重组体阳性克隆经PCR与双酶切鉴定，与预期结果一致；SDS-PAGE显示表达产物约27kD；表达产物经金属螯和层析纯化；免疫印迹表明表达产物能被混合的SARS病人恢复期血清识别。结论成功克隆了SARS冠状病毒M蛋白基因编码序列，构建了pET23α-M表达质粒，诱导表达并纯化出了SARS冠状病毒M蛋白，并以免疫印迹鉴定。本研究的成功为进一步进行SARS病毒诊断试剂与疫苗的开发奠定了基础。     

细粒棘球绦虫AgB8／1-AgB8／2重组嵌合抗原表达系统的构建

目的构建pET32a—AgBS／1-AgBS／2原核表达载体,并对其重组蛋自进行原核细胞表达。方法从细粒棘球绦虫原头蚴中提取总RNA,反转录生成cDNA,以此cDNA为模板,用基因特异性引物分别扩增EgAgBS／1和EgAgBS／2基因编码其分泌型多肽的片段,经测序后,以此两条基因片段为依据,人2r-合成EgAgBS／1-EgAgBS／2嵌合抗原编码核酸序列,将其克隆至pUCm—T载体,测序鉴定其正确性。通过对pUCm—T／AgBS／1-AgBS／2重组质粒进行双酶切,将获得的AgB8／1-AgBS／Z嵌合抗原编码核酸序列用定向克隆技术克隆至原核表达质粒pET32a上,测序鉴定插入片段E-确后,转化至E.coli BL21（DE3）Lys S,IPTG初步诱导表达pET32a-AgBS／1-AgBS／2重组嵌合蛋白。用SDS—PAGE电泳分析鉴定重组蛋白的表达水平。结果测序表明,AgBS／1-AgBS／2嵌合抗原编码核酸序列正方向插入至pET32a质粒。SDS-PAGE电泳分析显示,IPTG诱导后重组嵌合蛋白得到成功表达,在相对分子量约38kD处有表达条带。结论成功构建了pET32a—AgBS／1-AgBS／2原核表达质粒,并初步诱导表达出AgBS／1-AgBS／2嵌合重组蛋白,为进一步研究其免疫学特性奠定了基础。     

旋毛虫抗原基因Ts43原核表达及重组蛋白鉴定

目的原核表达旋毛虫相对分子质量(Mr)43 000抗原基因(Ts43)并对重组蛋白进行抗原性鉴定。方法将旋毛虫抗原基因Ts43克隆入原核表达载体pET30a(+),构建重组表达质粒pET30a(+)-Ts43,经测序分析正确后转化大肠埃希菌BL21,以异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹分析(Western blotting analysis)鉴定重组蛋白的抗原性。结果SDS-PAGE结果显示表达产物为Mr 41 000的重组融合蛋白,IPTG诱导4 h时表达量最大,薄层凝胶光密度扫描显示表达的融合蛋白占菌体蛋白总量的14.7%。Western blotting结果显示该重组蛋白可被旋毛虫、乡土旋毛虫及纳氏旋毛虫感染小鼠血清及旋毛虫病患者血清识别,与人芽囊原虫、微小隐孢子虫感染小鼠和正常小鼠血清和正常人血清无交叉反应,但与棘球蚴病、囊尾蚴病、日本血吸虫病、并殖吸虫病及华支睾吸虫病患者血清均有交叉反应。结论旋毛虫Ts43基因的重组蛋白具有较好的抗原性,但与某些寄生虫病患者血清有交叉反应。     

结核分枝杆菌Rv1512基因的特异性和克隆表达

目的鉴定结核分枝杆菌Rv1512基因的特异性,克隆表达该基因并获得其重组蛋白。方法设计Rv1512基因的特异性引物,并鉴定其特异性。构建pET30a（＋）：Rv1512重组质粒,阳性克隆转化入大肠杆菌BL21。经Ni＋-NTA层析柱纯化融合蛋白,通过SDS-PAGE鉴定该蛋白及其纯度。结果结核分枝杆菌Rv1512基因的特异性被证实;经测序分析证实Rv1512原核表达质粒构建正确,SDS-PAGE结果显示在40 kD处呈现单一蛋白条带。结论结核分枝杆菌Rv1512基因具有较好的特异性;成功构建表达载体pET30a（＋）：Rv1512并获得重组蛋白,为辅助诊断结核分枝杆菌的感染奠定基础。     

多房棘球绦虫重组质粒pGEX-EmⅡ/3-Em14-3-3在大肠埃希菌BL21(DE3)表达效率的研究

目的研究多房棘球绦虫(Em)重组质粒pGEX-EmⅡ/3-Em14-3-3在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达效率。方法通过PCR扩增EmⅡ/3和Em14-3-3抗原编码基因,然后采用基因拼接法(gene SOEing)剪接EmⅡ/3和Em14-3-3,得到EmⅡ/3-Em14-3-3融合基因;将该融合基因定向克隆于含有谷胱甘肽-S-转移酶(GST)基因的高效原核表达载体pGEX-1λT,经酶切鉴定后以IPTG诱导表达EmⅡ/3-Em14-3-3/GST融合蛋白;SDS-PAGE及Western blot对表达产物进行鉴定。结果PCR成功扩增出2 554 bp的EmⅡ/3-Em14-3-3融合基因;双酶切证实EmⅡ/3-Em14-3-3融合基因插入pGEX-1λT中,成功构建了pGEX-EmⅡ/3-Em14-3-3重组质粒;SDS-PAGE及Western blot分析显示重组质粒转化宿主菌在IPTG诱导下高效表达了能被活动性泡球蚴病鼠血清识别的EmⅡ/3-Em14-3-3/GST融合蛋白,分子质量单位119 ku。结论多房棘球绦虫EmⅡ/3-Em14-3-3融合基因在大肠埃希菌中获得了高效融合表达,表达出的EmⅡ/3-Em14-3-3重组蛋白具有特异的抗原性。     

人类8型疱疹病毒开放读码框73C基因原核

目的构建人类8型疱疹病毒（HHV-8）基因开放读码框（ORF）73c重组原核表达质粒并诱导表达，获得HHV-8潜伏态相关核抗原重组蛋白，并对其免疫活性进行初步鉴定。方法软件设计引物，分别在引物两端添加特异的酶切位点，以pGEM-Teasy／ORF73质粒为模板，聚合酶链反应（PCR）扩增ORF73C基因序列，克隆人原核表达载体pET-28a（＋），构建原核表达质粒pET28a-ORF73c；转化E.coli DH5α，经酶切、测序鉴定其插入序列的正确性，转入E.coli BL21（DE3），并诱导表达，以多聚组氨酸亲合层析柱纯化，凝胶蛋白电泳、Western印迹方法行表达蛋白的分析和抗原特异性免疫鉴定。结果测序结果表明构建的pET28a-ORF73C原核表达质粒连接正确，插入的ORF73c基因片段为453bp。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）表明ORF73c基因成功表达，在相对分子质量20000处有表达条带；Western印迹分析显示重组蛋白能被卡波济肉瘤患者阳性血清识别，具有良好的抗原性。结论成功构建了pET28a-ORF73C原核表达质粒，获得的纯化HHV-8潜伏态相关核抗原蛋白与卡波济肉瘤患者血清具有特异性识别，显示其作为检测抗原的可能，但其敏感性和特异性则有待进一步的验证。     

细粒棘球蚴重组14-3-3基因的表达、纯化及免疫学鉴定

目的 构建细粒棘球蚴14-3—3基因的重组质粒并原核表达、纯化该重组蛋白，对其免疫学特性进行初步鉴定。方法 从重组质粒pGEM—T／Eg14-3—3中获取14—3—3基因，亚克隆于表达载体pET28a构建基因丁程菌株，并表达、纯化重组蛋白，经Westernblot、ELISA对该蛋白的免疫学特性进行初步研究。结果 成功构建含目的片段14—33的基因工程菌株；ELISA检测显示，用表达、纯化的重组蛋白免疫小鼠，诱导产生了特异性抗体，Westernblot鉴定该抗体能识别重组抗原及原头蚴、囊液、囊壁抗原。结论构建的pET28a／Eg14—3—3菌株能高效表达14—3—3蛋白，初步鉴定该重组蛋白具有较好的抗原性和免疫原性。     

细粒棘球蚴特异性抗原基因P-29的原核表达及免疫学鉴定

目的对细粒棘球蚴P-29基因进行克隆、表达和免疫反应性分析。方法以细粒棘球蚴总RNA为模板,反转录PCR扩增P-29基因,将其克隆至原核表达载体pET44a(+)中,构建重组原核表达载体pET-P-29,转入大肠埃希菌BL21(DE3)中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)观察重组蛋白的表达情况,用蛋白纯化试剂盒纯化蛋白,蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白与细粒棘球蚴病患者血清的免疫反应性。结果PCR、双酶切和DNA测序结果表明,重组质粒pET-P-29构建成功。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白Nus-P-29的相对分子质量(Mr)约为93000,纯化后的蛋白浓度为0.78mg/ml。重组蛋白Nus-P-29能被细粒棘球蚴病患者血清识别。结论细粒棘球蚴P-29基因表达成功,纯化后的重组蛋白Nus-P-29具有较强的免疫反应性。     

GFP-Rv2626c融合蛋白表达载体的构建及表达纯化

目的构建含Rv2626c基因的原核表达载体,获得GFP-Rv2626c融合蛋白,为今后开发鉴别结核感染的血清学诊断试剂打下基础。方法以结核杆菌H37Rv基因组DNA为模板,经PCR法扩增得到Rv2626c基因DNA片段。将扩增片段克隆到pGM-T载体中测序,并进一步将Rv2626c亚克隆到pET28a-GFP中,构建原核重组表达载体pET28a-GFP-Rv2626c。将pET28a-GFP-Rv2626c转化E.coli BL21(DE3),用IPTG诱导目的基因表达,经SDS-PAGE和Western-blot分析和纯化该表达产物。结果经核苷酸序列测定和酶切鉴定,成功构建了重组质粒pET28a-GFP-Rv2626c。用IPTG诱导该质粒转化的E.coliBL21后,获得分子量约46kD的GFP-Rv2626c融合蛋白。经Ni-NTA Agarose试剂盒进行蛋白纯化,获得纯化的GFP-Rv2626c融合蛋白。结论成功制备出重组GFP-Rv2626c融合蛋白,为开发鉴别结核感染的血清学诊断试剂打下了基础。     

结核分枝杆菌rv3873基因原核表达载体的构建、表达和纯化

目的构建结核分枝杆菌（M.tb）rv3873基因原核表达载体并进行表达。方法用PCR扩增MTB rv3873基因，并克隆入pGEM-T Easy质粒。测序正确后，再亚克隆入pET30a（＋）质粒，构建pET30a（＋）：rv3873重组体。结果以重组体分别转化DH5α和BL21（DE3）菌后，经0．4mM异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导，pET30a（＋）：rv3873表达出分子量为47000左右的重组蛋白。SDS-PAGE分析显示，IPTG诱导4h重组蛋白的表达量最高。表达蛋白以包涵体形式存在于胞质中，表达量占全菌蛋白质的50％，Western blot证实其具有良好的抗原性。经Ni—NTA柱纯化，获得纯度为90％的重组蛋白。结论成功地构建原核表达载体pET30a（＋）：rv3873，并获得PPE68重组蛋白，为辅助诊断结核菌的感染奠定了基础。