脑组织切片免疫组化技术中防止脱片制作方法

在做人脑组织病检及小鼠、大鼠等小动物要取材脑组织的实验中,因为脑组织本身的组织结构,化学组成等因素,按常规取材、固定、脱水方式,做成组织切片再做免疫组织化学染色时,切片经抗原修复和缓冲液的长时间浸泡后,往往会部分或全部从载玻片上脱落,严重影响实验操作的进行与染色结果的判断~([1-3]).经过查阅资料多次摸索,本技术组总结出一套脑组织切片制片方法,可以有效防止脑组织切片免疫组化技术中组织切片脱片的发生.     

牙和骨切片的粘片剂防脱片效果及应用方法探讨

牙和骨切片HE尤其是免疫组织化学染色需多次更换试剂、改变温度、反复水洗,经常造成切片易皱褶、卷曲、与载玻片分离（脱片）。目前尚无理想的防止牙和骨切片染色脱片的方法,亦未见防止牙和骨切片染色脱片的报道。以下是我们探讨牙和骨切片的氨醛酸乙基硅（APES）、多聚-L-赖氨酸（PLLS）两种粘片剂的防脱片效果和应用方法。     

制备硅化玻片技术方法的改进

防止组织切片或细胞涂片在染色过程中组织或细胞脱落 (简称脱片 )是免疫组织化学及原位分子杂交技术中的重要环节。为此 ,通常采用载玻片涂胶或硅化处理后再裱贴组织切片的方法来防止脱片。在众多的玻片涂胶和硅化方法当中 ,我们对一些方法进行了改进和探讨 ,总结出一种使玻片处理的操作更加简单 ,防止脱片效果更好的方法。一、材料与方法1.材料 :普通载玻片 ,3 氨丙基三乙氧基硅烷(3 Ａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｉｔｒｉｅｔｈｏｘｙｓｓｉｃａｎｅ ,ＡＰＥＳ)试剂 ,为美国Ｓｉｇｍａ公司产品 ,多聚赖氨酸 (ｐｏｌｙ ｌｙｓｉｎ)和免疫组织化学试…     

地高辛标记的cRNA探针在胰岛素mRNA原位分子杂交中的应用

采用雄性成年Wistar大鼠胰腺,用地高辛标记的cRNA探针进行原位分子杂交,以检测胰岛B细胞的胰岛素基因表达产物mRNA;同时用免疫组织化学PAP法显示相邻切片胰岛素免疫反应阳性细胞,进行原位比较。1.标本制备:大鼠经4%多聚甲醛灌流固定,取胰尾,入Bouin液固定20h,常规石蜡包埋,切片厚6μm,裱在用铬矾明胶处理的载片上。2.探针标记:用RNA标记试剂盒(Boehringer Mannheim     

乳白胶作为粘片剂的应用

在病理HE制片及免疫组织化学制片工作中,经常遇到组织切片与载玻片粘合不牢而脱片的情况。既影响工作质量和速度,又造成试剂的浪费。尤其是在免疫组化染色中,因抗体试剂昂贵,若经常脱片,不仅影响病理诊断;也会降低经济效益。因此,使用好粘片剂以减少脱片提高制片质量是病理技术     

一种用APES处理载玻片防止免疫组化染色掉片的方法

无论是石蜡切片,还是冰冻切片,在进行常规H-E染色、组织化学染色、原位杂交、免疫组织化学染色时,都存在着掉片现象。特别是在需要连续冰冻切片时,如果在免疫组化染色的过程中,掉片就带来重复取材、切片、染色,因而影响整     

冰冻切片制作方法的改良

目的探讨使用7.5%明胶-15%蔗糖(w/v)代替OCT包埋剂对冰冻切片技术的改良。方法4.0%的多聚甲醛固定组织后,7.5%明胶-15%蔗糖代替OCT包埋剂包埋,经-80℃冰箱冷冻后,冰冻切片机进行切片。结果使用7.5%明胶-15%蔗糖代替OCT包埋组织后可以顺利的进行冰冻连续切片。结论实验结果证实,7.5%明胶-15%蔗糖替代OCT包埋剂后切片可以打破冰冻切片不能连续切片的常规,大大缩短了制片时间及节省了实验材料,并且切片效果良好、组织切片完整、厚薄均匀、不易形成皱折。     

同时显示大鼠中枢神经系统神经元和神经纤维的全程连续切片方法

目的　探索一种简便易行并能同时显示大鼠中枢神经系统 (CNS)神经元和神经纤维的全程连续切片方法。　方法　经过灌流固定的CNS组织低温冰箱速冻后连续冰冻切片和改良的苏木精染色方法。　结果　大鼠全程CNS连续切片各断面上神经元呈蓝黑色 ,神经纤维呈蓝色 ,背景淡黄色。　结论　运用低温速冻、连续冰冻切片、改良的苏木精染色方法可制作同时显示CNS神经元和神经纤维的全程连续切片。     

铬矾明胶加速DAB反应物褪色的观察

为防止组织切片从载玻片上脱落,目前一般使用铬矾明胶帖片.最近,我们发现免疫组织化学反应后的组织切片,用铬矾明胶帖片,经常规脱水、透明、封片后,其阳性反应产物随着时间的推移而发生褪色,影响到切片的保留和结果的观察.为此,本文用大鼠下丘脑的组织切片,在进行抗摧产素的免疫组织化学反应和硫酸镍铵加强的二氨基联苯胺(DAB)呈色,分别用单纯明胶或含不同浓度的铬矾明胶贴片,观察阳性产物消褪情况.     

肥大细胞中前列腺素合成酶的组织化学观察

用正常成年豚鼠20只、大鼠10只,颈椎脱臼或重击头部处死后,立即取胸腺、淋巴结和小肠,部分材料投入-70℃液氮速冻,部分材料入10%甲醛和纯甲醇固定,石蜡切片,HE和肥大细胞特殊染色;肠系膜铺片经氮气吹干后,与液氮速冻的组织块一并置-70℃低温冰箱保存。可随时取出做恒冷箱切片,部分冰冻切片及肠系膜铺片用Janszen和Nugteren前列腺素合成酶组织化学法显示,以此法同步显示家兔肾脏。每种切片均用酶的特异抑制剂消炎痛作对照。部分连续冰冻切片,做HE和肥大细胞特殊染色。结果表明,前列腺素合成酶活性存在于肥大细胞的胞质内,颗粒和胞核为阴性。家兔肾脏集合管恒为阳性。消炎痛抑制反应极弱。确证前列腺素合成酶的组织化学方法可靠并且具特异性。前列腺素合成酶阳性反应的细胞,见于大鼠和豚鼠的小肠粘膜及粘膜下层、胸腺被膜和胸腺隔的结缔组织以及胸腺髓质、淋巴结被膜和小梁结缔组织及深皮质区;散布于肠系膜铺片上的细胞多呈椭圆形。以上所示酶活性细胞的分布,与肥大细胞的其他特殊染色结果相符。证明酶反应确是在肥大细胞内。本文用组织化学技术,证实肥大细胞内存在前列腺素合成酶,此酶是衡量前列腺素合成的敏感指标,可考虑用此方法研究肥大细胞的生理和病理。