自体外周血来源的PBMC诱导分化为iPSCs结合NGF/Coll-H复合支架修复兔喉返神经损伤

目的 利用对自体外周血来源的PBMC进行重编程为诱导多能干细胞(iPSCs),探讨在此基础上与NGF/Coll-H复合支架相结合修复兔喉返神经损伤的可能性.方法 新西兰大白兔随机分为5组:喉返神经单纯端-端吻合组、神经端端吻合-Coll-H支架治疗组、端端吻合-Coll-H-NGF治疗组、端端吻合-Coll-H-NGF-iPSCs治疗组以及假手术组.对比分析复合支架植入到喉返神经损伤部位的修复效果.结果 多项指标表明iPSCs/NGF/Coll-H复合支架的修复效果要显著高于其他组.结论 自体外周血来源的PBMC诱导的iPSCs与NGF/Coll-H复合支架相结合更有利于治疗喉返神经手术带来的损伤.     

冰冻切片制作方法的改良

目的探讨使用7.5%明胶-15%蔗糖(w/v)代替OCT包埋剂对冰冻切片技术的改良。方法4.0%的多聚甲醛固定组织后,7.5%明胶-15%蔗糖代替OCT包埋剂包埋,经-80℃冰箱冷冻后,冰冻切片机进行切片。结果使用7.5%明胶-15%蔗糖代替OCT包埋组织后可以顺利的进行冰冻连续切片。结论实验结果证实,7.5%明胶-15%蔗糖替代OCT包埋剂后切片可以打破冰冻切片不能连续切片的常规,大大缩短了制片时间及节省了实验材料,并且切片效果良好、组织切片完整、厚薄均匀、不易形成皱折。     

医学本科生创新性实验计划管理模式初探

国家大学生创新性实验计划是培养学生创新能力和提升综合素质的有效途径。计划实施6年来已成为高校科研活动的有效补充形式。阐述了指导教师对实验计划顺利实施的有效管理方法,即将项目分割为若干技术环节,并固化为流程,建立高效、科学、注重细节的项目管理模式,介绍了从实际工作中获得的收获和体会,并提出有待解决的问题。     

胚胎心肌干细胞体外的分化※

目的鸡胚原肠胚形成期含有心肌干细胞（cardiac stem cell, CSC）的生心区原条组织离体后体外培养,使其增殖分化成具有舒缩功能的心肌组织。方法 改良滤纸鸡胚胎整体培养法取胚,37℃孵箱孵育,待胚胎发育到原肠胚的HH4期,无菌环境内选择性离体胚胎生心区原条组织（原条组织的前25%～40%）于10%FBS DMEM-F12培养基中培养,2 ～5 d后得到局部跳动的细胞组织,通过原位杂交、免疫组织化学、DiI示踪和细胞的超微结构鉴定是否分化为心肌组织。结果 FGF8特异性表达于心管和神经管;N-cadherin特异性表达于心管、神经管和体节;DiI标记的细胞迁移参与心管的形成;细胞的超微结构显示心肌组织特有的结构--闰盘。结论 CSC体外培养可以定向分化发育成心肌组织,为进一步研究心肌细胞的发育分化和生理药理学实验提供了良好的平台。     

PTEN在胚胎早期心脏发育过程中的作用

目的通过过表达PTEN,探讨胚胎早期原肠胚形成期PTEN表达及在早期心脏发生发育过程的作用和意义。方法用改良滤纸鸡胚胎整体培养法取胚,37℃孵箱孵育待其发育到HH4期,对鸡胚心肌干细胞(Cardiac Stem Cell)进行PTEN电转染,转染成功后一部分鸡胚37℃孵箱继续培养30 h,待其发育形成心管,观察过表达PTEN对心管发生的影响;另一部分鸡胚在超净台内完成心肌干细胞的离体,体外培养使其分化发育成心肌组织,主要研究PTEN在细胞增殖、分化和凋亡过程中的作用。结果 30 h后鸡胚整体的免疫组织化学(N-cadherin)结果显示,PTEN-WT组和PTEN-G129E组鸡胚心管出现了反向环化、多囊化等畸形,GFP组和PTEN-C124S组心管发育受到的影响较小;转染后离体培养得到的心肌组织的跳动频率与GFP组下降的速度加快,且维持时间缩短,GFP组与PTEN-WT组差异有显著性(P<0.05),PTEN-WT组与PTEN-C124S组、PTEN-G129E组差异无显著性(P>0.05)。结论 PTEN蛋白酯酶可能参与早期胚胎心肌干细胞之间黏附分子的表达从而调节细胞迁移、分化发育,并加速了心肌组织的衰老...     

孕期咖啡因暴露影响神经嵴细胞表达致先天性心脏病的机制

目的胚胎早期心脏发生的过程中过量咖啡因暴露,由于第二生心神经嵴细胞(CNCC)受到影响而导致心脏发育畸形。方法利用鸡胚为实验模型,在鸡胚心管发生发育的关键时期-HH9,按照正常组(PBS)、0.5μmol/egg组、1.0μmol/egg组、1.5μmol/egg组,连续3 d给予咖啡因暴露,至胚胎发育到12 d时获取胚胎用95%酒精固定2 d,对胚胎的心脏流出道(out flow tract,OFT)发育状态进行观察记录;,咖啡因暴露3 d后获取胚胎对CNCC进行检测,更深入研究其对心脏流出道发育机制的影响。结果胚胎早期心脏形成过程中,过量咖啡因暴露影响了CNCC的增殖、迁移,从而影响了心脏的正常发育,1.0μmol/egg组、1.5μmol/egg组分别出现心脏OFT的主动脉、肺动脉等发育畸形,并且有剂量依赖性。结论孕期大量咖啡因暴露通过影响第二生心区的CNCC的增殖和迁移路径导致心脏发育畸形,初步探究咖啡因暴露对胚胎早期心脏的发生发育影响的机制。     

鸡胚发育过程中角膜神经的分布和变化

背景 了解动物或人的角膜神经分布和发育过程对于角膜疾病的临床和基础研究具有重要意义,目前关于动物角膜神经发育和特异性定位的研究结果已有发表,但是有关胚胎发育阶段角膜神经纤维的分布规律和角膜神经纤维的定量研究结果尚少见. 目的 了解鸡胚发育过程中角膜神经纤维的分布,并定量评价随着鸡胚龄增长其角膜神经纤维长度和密度的变化规律. 方法 选取胚胎期6 ～20 d(E6～E20)的鸡胚作为角膜胚胎发育模型,获取相应胚期的带有角膜缘的完整鸡角膜,使用β-tubulinⅢ抗体进行角膜免疫荧光染色,以标记角膜神经,将角膜上皮面朝上做角膜上皮的放射状切开,制备全角膜铺片,用含DAPI抗荧光淬灭缓冲甘油封片.利用正置荧光显微镜拍摄获取整个角膜的神经纤维图像,使用Photoshop CS4测量不同胚龄的鸡胚角膜表面积和神经纤维束数量,采用Imaris x64 7.4.2软件测量不同胚龄的鸡胚角膜神经纤维总长度和密度.结果 全角膜铺片显示,鸡胚E6 ～ E8可见神经束从颞侧巩膜进入角膜缘,E9 ～ E10时神经纤维在角膜缘呈环状分布,E11～ E15时延伸进入角膜中央,E16 ～ E20时角膜形成神经纤维丛.E6～E20期间,鸡胚角膜表面积、角膜神经纤维长度、角膜神经纤维密度均随着胚龄的增长而逐渐增加,总体比较差异均有统计学意义(F=127.007、227.051、67.748,均P＜0.01),鸡胚角膜表面积与角膜神经纤维长度间呈强正相关(r=0.863,P＜0.01).鸡胚角膜神经纤维束从E13开始出现,为(59.00±1.14)/mm2,此后缓慢增加,至E18达到高峰,数量为(576.75±29.16)/mm2,至E20时角膜神经纤维束数量减少,为(299.67±25.46)/mm2,不同胚龄期鸡胚角膜神经纤维束数量的总体比较差异有统计学意义(F=13.759,P=0.000).结论 鸡胚角膜神经发育从E9开始,随着发育鸡胚角膜表面积、角膜神经纤维总长度及密度均快速增加.     

改良鸡胚尿囊膜肿瘤实验动物模型及其生物学行为观察

目的利用鸡胚尿囊膜建立人移植瘤模型并观察其生物学行为和组织学形态已有报道。但是,在实际工作的过程中仍存在不少的问题。因此,通过改良的方法,获得简单,快捷,可重复的动物模型。方法将人胶质瘤SWO-38细胞滴加到鸡胚尿囊膜上,观察影响鸡胚的存活和成瘤的可能因素、移植瘤的生长特性和形态学特征。结果利用改良的方法成功建立胶质瘤鸡胚尿囊膜的模型;肿瘤组织能够诱导血管生成,镜下形态符合恶性胶质瘤的形态学特征。结论该模型简单,快捷,易于建立。便于观察肿瘤组织的生物学行为,可用于抗肿瘤的药物筛选。     

Acute and Sub-chronic Toxicity of Tetrandrine in Intravenously Exposed Female BALB/c Mice

Objective: To evaluate the acute and sub-chronic toxicity of intravenously administered tetrandrine(TET) in female BALB/c mice. Methods: The median lethal dose(LD_(50)) of intravenously administered TET was calculated in mice using Dixon's up-and-down method. In the acute toxicity study, mice were intravenously administered with TET at a single dose of 20, 100, 180, 260 and 340 mg/kg, respectively and were evaluated at 14 days after administration. In the sub-acute toxicity study, mice were intravenously administered various doses of TET(30, 90 and 150 mg/kg) each day for 14 consecutive days. Clinical symptoms, mortality, body weight, serum biochemistry, organ weight and histopathology were examined at the end of the experiment, as well as after a 1-week recovery period. Result: LD_(50) was found to be 444.67±35.76 mg/kg. In the acute toxicity study, no statistically significant differences in body weight, blood biochemistry, or organ histology were observed between the administration and control groups when mice were intravenously administered with single dose at 20, 100, 180, 260 and 340 mg/kg of TET(P0.05). In the sub-acute toxicity study, no significant changes in body weight, biochemistry and organ histology were observed with up to 90 mg/kg of TET compared with the control group(P0.05), however, in the 150 mg/kg administered group, TET induced transient toxicity to liver, lungs and kidneys, but withdrawal of TET can lead to reversal of the pathological conditions. Conclusions: The overall findings of this study indicate that TET is relatively non-toxic from a single dose of 20, 100, 180, 260 or 340 mg/kg, and that up to 90 mg/kg daily for 14 consecutive days can be considered a safe application dose.     

胚胎心肌干细胞体外的分化

目的 鸡胚原肠胚形成期含有心肌干细胞(cardiac stem cell, CSC)的生心区原条组织离体后体外培养,使其增殖分化成具有舒缩功能的心肌组织.方法 改良滤纸鸡胚胎整体培养法取胚,37℃孵箱孵育,待胚胎发育到原肠胚的HH4期,无菌环境内选择性离体胚胎生心区原条组织(原条组织的前25%～40%)于10%FBS DMEM-F12培养基中培养,2～5 d后得到局部跳动的细胞组织,通过原位杂交、免疫组织化学、DiI示踪和细胞的超微结构鉴定是否分化为心肌组织.结果 FGF8特异性表达于心管和神经管;N-cadherin特异性表达于心管、神经管和体节;DiI标记的细胞迁移参与心管的形成;细胞的超微结构显示心肌组织特有的结构--闰盘.结论 CSC体外培养可以定向分化发育成心肌组织,为进一步研究心肌细胞的发育分化和生理药理学实验提供了良好的平台.