PPAR-γ在肺癌中的表达及在肺癌凋亡中的作用研究(英文)

目的研究过氧化物酶体增生物激活受体(PPAR-γ)的表达与肺癌临床病理之间的关系,并探讨 PPAR-γ的激动剂对肺癌细胞生长的影响以及诱导其凋亡的机制。方法以免疫组化的方法分别检测15例非癌肺组织和64例肺癌组织中 PPAR-γ的表达,并通过图像分析测各组的平均吸光度值。采用 RT-PCR 和 Western blot 分析肺癌细胞株上 PPAR-γ的表达,细胞经 PPAR-γ的激动剂处理后,以 TUNEL 法测凋亡,并以caspase-3活性检测试剂盒测其活性变化。结果 PPAR-γ在肺癌组织的表达较非肺癌组织为高;各型肺癌中 PPAR-γ表达从高到低依次为小细胞肺癌、鳞癌、大细胞肺癌、腺癌;PPAR-γ的表达与肿瘤的分化程度、术后 TNM 分期有关,而与肺癌淋巴结转移无关;肺癌细胞株上有 PPAR-γ的表达,且经其激动剂作用后 caspase-3的活性明显增加并能诱导细胞凋亡。结论 PPAR-γ与肺癌的临床病理及肺癌细胞的凋亡密切相关,活化后的 PPAR-γ可使细胞 caspase-3的活性增强,从而使细胞更易发生凋亡,PPAR-γ有可能成为未来肺癌诊断和治疗的一个新靶点。     

PPAR-γ在肺癌中的表达及在肺癌凋亡中的作用研究

背景与目的 过氧化物酶体增生物激活受体（PPAR-γ）是对机体代谢过程起重要调节作用的一种核激素受体。研究表明肿瘤（包括肺癌）组织及细胞可表达PPAR-γ且经其配体活化后可影响肿瘤细胞的分化、增殖及凋亡。本研究的目的是分析PPAR-γ的表达与肺癌临床病理特征之间的关系，并探讨PPAR-γ的配体对肺癌细胞生长的影响及其诱导凋亡的机制。方法 采用免疫组化法检测15例非癌肺组织和64例肺癌组织中PPAR-γ的表达．并通过图像分析测定各组的平均吸光度值。采用RTPCR和Westernblot检测肺癌细胞株中PPAR-γ表达。细胞经PPAR-γ的配体处理后，采用TUNEL法检测凋亡，并用caspase-3活性检测试剂盒检测其活性变化。结果 PPAR-γ在肺癌组织中的表达显著高于非癌肺组织。PPAR-γ的表达与肿瘤病理类型、细胞分化程度、术后TNM分期有密切关系。肺癌细胞株中有PPAR-γ的表达，且经其配体活化后，caspase-3的活性明显增加，并能诱导细胞凋亡。结论PPAR-γ表达与肺癌的临床病理特征密切相关。活化后的PPAR-γ可使肺癌细胞caspase-3的活性增强，从而使细胞更易发生凋亡。PPAR-γ有可能成为未来肺癌诊断和治疗的一个新靶点。     

Bax在PPAR-γ激动剂诱导的肺癌细胞凋亡中的表达分析

目的探讨Bax表达变化与PPAR-γ激动剂诱导的肺癌细胞凋亡的关系.方法以RT-PCR和Western blot分别检测肺癌细胞株上PPAR-γ的表达,并通过TUNEL法检测经PPAR-γ的激动剂(配体)诱导的细胞凋亡,经原位分子杂交技术和免疫组织化学方法检测诱导凋亡前、后Bax的mRNA和蛋白水平表达的变化.结果肺癌细胞上有PPAR-γ的表达,且PPAR-γ的激动剂能抑制肺癌细胞生长并诱导细胞凋亡,Bax在诱导调亡后表达较前增加,且与诱导凋亡的程度呈正相关.结论 Bax作为一种促凋亡因子,在PPAR-γ的激动剂诱导的肺癌细胞调亡中起作用.     

沉默PPAR-γ通过上调bcl-2表达抑制A549细胞凋亡

背景与目的 肺癌耐药是肺癌患者死亡的主要原因,PPAR-γ可促进细胞凋亡,逆转肺癌耐药.本实验旨在探讨PPAR-γ表达下调对人肺癌A549顺铂耐受性和细胞凋亡的影响.方法 构建siRNA沉默PPAR-γ的A549细胞系[A549/PPAR-γ(-)],应用MTT法检测顺铂对PPAR-γ沉默A549细胞增殖的影响,应用流式细胞术检测顺铂对PPAR-γ沉默A549细胞周期的影响,Western blot法检测磷酸化Akt(p-Akt)、caspase-3和bcl-2/bax的变化,最后以RT-PCR检测bcl-2的转录水平.结果 成功构建出两个A549/PPAR-γ(-)细胞克隆,经RT-PCR和Western blot检测其PPAR-γ的水平明显下降.PPAR-γ沉默后,两个克隆A549细胞对顺铂的耐受性分别增加了1.29倍和1.60倍,肿瘤细胞的凋亡减少.Western blot检测显示Akt的磷酸化水平和bcl-2/bax水平升高,caspase-3表达降低,RT-PCR进一步显示bcl-2的转录水平升高.结论 抑制A549中PPAR-γ的表达后,肿瘤细胞获得对顺铂药物更高的耐受性,其机制与升高Akt磷酸化水平和bcl-2表达水平,抑制细胞凋亡有关.PPAR-γ下调是临床肿瘤产生耐药性的可能机制之一.     

前列腺癌组织PPAR-γ及其配体表达和作用机制的研究

目的:研究人前列腺癌组织及前列腺癌细胞中PPAR-γ的表达及其配体曲格列酮对前列腺癌细胞生长的影响,探讨曲格列酮抑制前列腺癌的机制.方法:免疫组化法检测成人前列腺组织、前列腺增生组织和前列腺癌组织PPAR-γ蛋白表达.不同浓度的曲格列酮处理人前列腺癌PC-3细胞,采用MTT法观察细胞增殖抑制作用;Annexin V/PI法流式细胞仪检测细胞凋亡;免疫组化法检测前列腺癌细胞PPAR-γ蛋白表达.结果:PPAR-γ在前列腺癌组织中的表达高于成人前列腺组织和前列腺增生组织;PPAR-γ的表达与细胞分化程度、TNM分期有密切关系.PC-3细胞存在PPAR γ表达,曲格列酮作用PC-3细胞后PPAR-γ表达呈剂量依赖性上调趋势:曲格列酮对PC-3细胞增殖有明显的抑制作用,并呈剂量和时间依赖性;曲格列酮呈剂量依赖性加速细胞凋亡.结论:PPAR-γ表达与前列腺癌的临床病理特征密切相关.曲格列酮通过激活PPAR-γ能在体外抑制肿瘤细胞生长并诱导其凋亡,提示PPARγ可能是前列腺癌治疗的一个新的分子靶点.     

非小细胞肺癌中ARL4C的表达及其在EGFR-TKI耐药中的作用

目的 探讨非小细胞肺癌中ARL4C的表达及其与临床病理特征的关系以及在EGFR-TKI耐药中的作用。方法 收集63例NSCLC患者的癌组织和癌旁组织，qRT-PCR法检测ARL4C的表达并分析其与临床病理特征之间的关系。qRTPCR和Western blot法检测ARL4C在各细胞株中的表达，MTS检测细胞活性及IC50的变化，Transwell侵袭实验检测ARL4C表达变化对细胞侵袭能力的影响。结果 非小细胞肺癌组织中ARL4C表达水平低于癌旁组织（P<0.05），其表达水平与淋巴结转移、TNM分期和肺膜侵犯密切相关（P<0.05）。TKI耐药细胞株HCC827/ER中ARL4C在mRNA以及蛋白表达水平相较对照细胞株HCC827显著下调（P<0.05）；ARL4C过表达细胞株HCC827/ER/ARL4C-OEIC50显著下降（P<0.05），Transwell分析结果显示过表达ARL4C后肺癌细胞的侵袭能力受到抑制（P<0.05）。结论 ARL4C异常表达与非小细胞肺癌淋巴结转移、TNM分期和肺膜侵犯密切相关。过表达ARL4C能提高非小细胞肺癌细胞对EGFR-TKI药物的敏感度并抑制非小细胞肺癌细胞的侵袭能力。     

Bcl—2反义核酸增强三氢化二砷诱导NCI—H69肺癌细胞凋亡

目的：探讨Bcl-2反义核酸对三氧化二砷(As2O3)诱导NCI-H69肺癌细胞株凋亡的影响。方法：合成Bcl-2反义核酸(ASON)，导入NCI-H69肺癌细胞。Western—blot法检测Bcl-2蛋白的表达；FTIC-TUNEL流式细胞仪检测导入ASON的NCI—H69肺癌细胞凋亡的变化；Western-blot法检测As2O3；作用后多聚ADP核糖聚合酶(PARP)裂解片段。结果：1)导入Bcl-2反义核酸后NCI-H69肺癌细胞(ASON—NCI-H69)的Bcl-2基因表达受抑制，Bcl-2蛋白的合成减少；2)随As2O3浓度增加，肺癌细胞的凋亡指数逐渐上升，ASON—NCI-H69细胞凋亡指数明显高于NCI-H69细胞；3）As2O3诱导后从ASON-NCI-H69肺癌细胞PARP的89KD裂解片段检测呈强阳性，NCI-H69肺癌细胞则呈弱阳性。结论：三氧化二砷可诱导肺癌细胞株NCI-H69凋亡；Bcl—2反义核酸通过阻断Bcl-2基因表达，增强了As2O3诱导NCI-H69细胞凋亡。     

CTGF对肝癌细胞生物学行为的影响及其与PPAR-gamma关系的探讨

 目的 探讨结缔组织生长因子（CTGF/CCN2）对肝癌细胞生物学行为的调控作用,及其与PPAR-γ在肝癌中的相互关系。 方法 免疫组织化学法检测HepG-2细胞中CTGF及PPAR-γ蛋白的表达。经不同浓度、不同时间的CTGF抗体封闭处理人肝癌细 胞HepG-2后,MTT法测定细胞活力,博依登小室测定细胞侵袭及迁移特性的改变。经PPAR-γ激动剂(rosiglitazone,罗格列酮)处 理HepG-2细胞后, RT-PCR 检测CTGF mRNA表达的改变。 结果 HepG-2细胞表达CTGF及PPAR-γ蛋白。肝癌细胞经CTGF抗体处理后,其增殖受抑制,且呈时间和剂量依赖性,同时细胞的 侵袭、迁移能力也受到抑制。HepG-2 细胞经罗格列酮处理后,其CTGF mRNA的表达下降。 结论 CTGF可以调控肝癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力。PPAR-γ调控肝癌细胞的生长,部分是通过改变CTGF的表达来实现的。      

气管、肺

原发性气管肿瘤与大气道阻塞的外科治疗,人肺癌细胞株化疗敏感性与基因表达的关系,组织微陈列方法分析晚期非小细胞肺癌者HER2蛋白表达及其临床意义,PPAR-γ在肺癌中的表达及在肺癌凋亡中的作用研究     

长链非编码 RNA MEG3在非小细胞肺癌中的表达与功能

目的：探讨长链非编码 RNA MEG3在非小细胞肺癌中的表达情况及其分子机制。方法：采用 qRT -PCR 方法检测肺癌组织中 MEG3的相对表达量,分析其与临床病理资料的相关性。将 MEG3转染到肺癌A549细胞后,应用 qRT - PCR 检测 A549细胞中 MEG3的表达;MTT 检测细胞转染后肿瘤细胞增殖的变化;并用 Western blot 检测转染后细胞中凋亡相关蛋白（BCL -2和 BCL - XL）表达。结果：肺癌组织中 MEG3的相对表达水平显著低于正常肺组织（P <0.05）。各肺癌细胞株中 MEG3的表达水平均低于肺上皮细胞株（P <0.05）。MEG3的表达水平与肿瘤大小、临床分期以及淋巴结转移之间有显著相关性（P <0.05）。MEG3转染A549细胞48h 和72h 后,A549细胞的增殖率明显低于空白对照组和阴性对照组（P <0.05）。其 BCL - XL 蛋白表达水平相较于空白对照组和阴性对照组表达明显下调（P <0.05）。结论：MEG3在 NSCLC 肿瘤组织中表达下调,可能部分通过下调 BCL - XL 的表达而抑制肺癌细胞的增殖。     

CIK细胞对A549肺癌细胞株的诱导凋亡作用的研究

目的研究多种细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine-induced killer cells,CIK）对A549肺癌细胞株诱导凋亡作用,并探讨其作用机制。方法应用末端脱氧核苷酸转移酶﹙TdT﹚介导的脱氧核苷酸缺口末端标志（TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL）法检测CIK细胞诱导凋亡的情况;通过免疫组织化学染色法检测A549细胞中凋亡相关基因p53、Fas、caspase-3,caspase-8,caspase-9、survivin蛋白,细胞增殖相关蛋白Ki-67的阳性表达率。结果 （1）TUNEL法检测结果：效靶细胞混合培养后,起初随时间延长凋亡细胞逐渐增多,5-14小时凋亡率明显上升,14-24小时凋亡率下降;（2）免疫组织化学染色结果表明,CIK实验组p53、Ki-67、survivin蛋白随作用时间延长而均下降,Fas、caspase-3、caspase-8、caspase-9蛋白表达上调,与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0.01）。结论 （1）CIK细胞对A549肺癌细胞具有抗增殖及诱导凋亡作用;（2）CIK细胞对A549肺癌细胞的抗增殖作用机制可能与下调Ki-67蛋白的表达,使癌细胞处于静止期有关;（3）CIK细胞对A549肺癌细胞的诱导凋亡作用机制可能与下调p53、survivin蛋白的表达,上调Fas、caspase-3、caspase-8、caspase-9蛋白的表达有关,经由细胞凋亡的死亡受体和线粒体通路完成凋亡的启动和执行;（4）CIK细胞是一种新型高效具有较强杀伤体外肺癌细胞的免疫活性细胞,有可能用于临床上晚期肺癌的过继性免疫治疗。     

放射线诱发Lewis肺癌细胞凋亡的分子机制

我们的前期研究工作已经证明 ,在一定的剂量范围内 ,60 Ｃｏγ射线能诱导Ｌｅｗｉｓ肺癌细胞发生凋亡 ,且与照射剂量和培养时间有密切的关系[1] 。为研究放射线诱发Ｌｅｗｉｓ肺癌细胞凋亡的分子机制 ,我们对受照射后的Ｌｅｗｉｓ肺癌细胞的小鼠移植瘤组织进行了免疫组化染色和免疫电镜观察 ,以探讨放射线对Ｌｅｗｉｓ肺癌细胞凋亡相关基因表达的影响及其与细胞凋亡的关系。1　材料与方法1.1　标本资料Ｌｅｗｉｓ肺癌细胞株的培养、60 Ｃｏ照射以及小鼠接种方法参照文献[1] 。取 8Ｇｙ剂量照射后、培养 12ｈ的Ｌｅｗｉｓ肺癌细胞的小鼠移植…     

PPAR-γ通路在尼美舒利抑制胃癌小鼠癌细胞生长中的作用

[目的]研究尼美舒利(NIM)是否通过过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPAR-γ)途径影响胃癌细胞体内生长。[方法]通过培养人胃癌SGC-7901细胞,建立裸鼠胃癌移植瘤模型。设立GW9662+NIM组、生理盐水组、GW9662组、NIM组共4组。3周后测量各组裸鼠移植瘤体积,并采用免疫组化法检测裸鼠移植瘤组织PPAR-γ表达。[结果]NIM组裸鼠移植瘤体积较生理盐水组明显小,而GW9662+NIM组较NIM组移植瘤体积大,各组之间差异有显著性(P<0.05)。GW9662+NIM组与NIM组相比,移植瘤组织的PPAR-γ蛋白表达降低。[结论]尼美舒利在体内能抑制胃癌细胞的生长,PPAR-γ通路可能在此过程中发挥重要作用。     

TOP2A在非小细胞肺癌中的高表达促进肿瘤细胞的增殖和侵袭能力

目的:探讨编码拓扑异构酶Ⅱα的基因TOP2A在非小细胞肺癌组织中的表达情况及其生物学功能。方法:采用荧光定量PCR方法检测102例非小细胞肺癌及其癌旁组织中TOP2A的mRNA表达水平,Western blot检测其中5对组织中TOP2A蛋白表达水平,分析TOP2A 表达与非小细胞肺癌主要临床病理特征的相关性。干扰非小细胞肺癌细胞株A549和HCC827中TOP2A的表达,MTT法检测其表达对肿瘤细胞增殖的影响,Transwell法检测TOP2A表达下调对肿瘤细胞侵袭能力的影响。应用流式细胞术检测TOP2A敲降后细胞的凋亡率和细胞周期。结果:TOP2A在非小细胞肺癌组织中的表达水平相较癌旁组织明显上升（P<0.05）,干扰TOP2A的表达会抑制非小细胞肺癌细胞的增殖和侵袭。流式细胞凋亡率实验结果显示转染siTOP2A后的非小细胞肺癌细胞早期凋亡率增加;流式周期分析显示siTOP2A转染后的细胞S期发生阻滞抑制细胞增殖。同时,TOP2A表达水平与非小细胞肺癌的肿瘤分期、淋巴结转移密切相关（P<0.05）。结论:TOP2A在非小细胞肺癌中表达上调,与肿瘤增殖和侵袭等生物学行为密切相关。     

lncRNA MAGI2-AS3在非小细胞肺癌组织中的表达及生物学作用

目的:评价lncRNA MAGI2-AS3 在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）组织中的表达及生物学作用。方法:收集63例非小细胞肺癌患者癌组织及其癌旁组织,检测lncRNA MAGI2-AS3在癌与癌旁组织中的相对表达量并分析其与患者临床特征的关系;在A549细胞中过表达lncRNA MAGI2-AS3,分析其与NSCLC细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移能力之间的关系。结果:lncRNA MAGI2-AS3 在NSCLC组织中呈现低表达状态,与正常肺组织相比,差异具有统计学意义;lncRNA MAGI2-AS3 在NSCLC组织中低表达,与患者的年龄、病理类型、肿瘤大小、临床分期、吸烟指数有关;lncRNA MAGI2-AS3 能够抑制肺癌细胞的增殖、侵袭和迁移。结论:检测lncRNA MAGI2-AS3 与NSCLC病理类型、临床分期有一定的相关性,可以作为一种潜在的肺癌标志物指导临床诊断。lncRNA MAGI2-AS3 能够抑制肺癌细胞的增殖、侵袭和迁移,有可能成为肺癌治疗的潜在靶点用于临床。     

CyclinL2在化疗药物诱导肺癌细胞凋亡中的作用

目的：探讨cyclinL2基因在化疗药物顺铂（DDP）、长春瑞滨（NVB）和多西紫杉醇（DOC）诱导的肺癌细胞凋亡中的作用．方法：用肺腺癌A549细胞株进行培养传代，MTT试验检测DDP、NVB和DOC不同药物浓度对肺癌细胞生长的抑制作用．以及CyclinL2转染后对该细胞生长的抑制作用的影响。，同时利用流式细胞术定量检测细胞凋亡．结果：不同浓度DDP、NVB和DOC对肺癌细胞生长均有明显的抑制作用，并有浓度的依赖性。细胞凋亡率和CyclinL2基因表达率成正相关、结论：CyclinL2基因在化疗药物诱导肺癌细胞凋亡中起重要作用，     

奥沙利铂诱导人小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡的研究

目的：研究奥沙利铂对人肺癌细胞株NCI-H446生长抑制及诱导凋亡的作用并探讨其机制。方法：以不同浓度的奥沙利铂作用于NCI-H446细胞,应用采用噻唑蓝（MTT）法检测奥沙利铂对NCI-H446细胞生长的抑制作用。Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡形态学变化;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;分光光度法检测caspase-3、caspase-8、caspase-9的活性。结果：奥沙利铂可抑制NCI-H446细胞的生长并具有时间和剂量依赖性,Hoechst 33258荧光染色可见典型的细胞凋亡特征,流式细胞仪检测到细胞阻滞于S期和sub-G1峰。经过奥沙利铂诱导,caspase-3、caspase-9活性被上调,较对照组明显升高（P〈0.05）,caspase-8活性未见明显改变（P〉0.05）。结论：奥沙利铂具有抑制肺癌细胞株NCI-H446增殖及诱导凋亡作用,此作用可能通过激活内源性凋亡途径实现。     

PPAR-γ配体降低137Cs照射诱导的PAI-1高表达

目的观察大鼠肾小球膜细胞137Cs照后PAI-1基因的表达情况,以及PPAR-γ配体Piogitazone对照射诱导的PAI-1表达的影响.方法10Gyγ线照射±10 mmol/LPioglitazone处理大鼠肾小球膜细胞,用RT-PCR方法证明PPAR-γ基因表达,用Northern blot、Westem blot方法观察PAI-1基因表达,用Gel-shift方法观察AP-1基因的活性变化(由于PAI-1基因启动子区存在AP-1结合位点,加之AP-1介导某些炎性因子的产生且AP-1是照射诱导的早期表达基因之一,因此观察照射在大鼠肾小球膜细胞能否诱导AP-1活性的升高,并进一步观察Pioglitazone对照后AP-1活性的影响).结果RT-PCR方法证明了大鼠肾小球膜细胞表达PPAR-γ基因.10Gy照后Northern blot结果显示照后24hPAI-1 mRNA的表达增加,不同剂量照后24h PAI-1 mRNA的高表达呈照射剂量依赖性.10 mmol/L Pioglitazone+10Gy照后24h的Northern blot和48 h的Western blot结果表明,Pioglitazone使照射诱导的PAI-1基因高表达在mRNA水平和蛋白水平均明显降低.Gel-shift结果发现放疗后2 h AP-1活性开始升高,4 h最高,加入Pioglitazone后明显被抑制.结论PPAR-γ配体Pioglitazone使照射诱导的肾小球膜细胞PAI-1基因高表达降低,其机制可能是通过降低AP-1活性来调节PAI-1的表达.Pioglitazone可能具有预防或降低放射性肾损伤的作用,这将有待于动物实验的进一步证实.     

Caspase活化的细胞凋亡在非小细胞肺癌组织中的表达

目的：观察非小细胞肺癌（NSCLC）组织中Caspase活化的癌细胞凋亡与临床病理特征的关系。方法：对手术切的NSCLC组织标本50例（其中鳞癌24例，腺癌26例），采用Caspase特异的单克隆抗体－M30 CytoDEATH免疫组化染色方法 显示凋亡细胞，计算凋亡指数（AI），结果：28．0％（14／50）的肺癌组织标中中可见不同程度的M30表达，其中肺鳞癌组织的M30阳性表达率（41．7％）明显高于肺腺癌（15．3％），有显著性差异（P＜05），肺鳞癌组织的AI亦高于腺癌，有显著性差异（P＜0．05），低分化NSCLC 组织的AI高于中，高分化的NSCLC组织，有显著性差异（P＜0．05），低分化鳞癌组织的AI明显高于中高分化的鳞癌，有显著性差异（P＜0．05），M30的表达与其它临床病理学特征无相关性。结论：非小细胞肺癌组织中存在Caspase活化的自发性癌细胞凋亡控制，且Caspase的表达与组织类型及组织分化程度有关。     

奥沙利铂诱导人小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡的研究

目的:研究奥沙利铂对人肺癌细胞株NCI-H446生长抑制及诱导凋亡的作用并探讨其机制。方法:以不同浓度的奥沙利铂作用于NCI-H446细胞,应用采用噻唑蓝(MTT)法检测奥沙利铂对NCI-H446细胞生长的抑制作用。Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡形态学变化;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;分光光度法检测caspase-3、caspase-8、caspase-9的活性。结果:奥沙利铂可抑制NCI-H446细胞的生长并具有时间和剂量依赖性,Hoechst 33258荧光染色可见典型的细胞凋亡特征,流式细胞仪检测到细胞阻滞于S期和sub-G1峰。经过奥沙利铂诱导,caspase-3、caspase-9活性被上调,较对照组明显升高(P<0.05),caspase-8活性未见明显改变(P>0.05)。结论:奥沙利铂具有抑制肺癌细胞株NCI-H446增殖及诱导凋亡作用,此作用可能通过激活内源性凋亡途径实现。