叶酸缺乏对乳腺癌化疗疗效和毒性的影响

目的 :检测叶酸缺乏时化疗药物对人乳腺细胞株HBL 1 0 0和人乳腺癌细胞株MCF 7敏感性的影响。　方法 :将HBL 1 0 0和MCF 7在正常培养液和叶酸缺乏培养液中加入化疗药物 ,培养 3天 ,用四唑蓝 (MTT)法检测化疗药物对HBL 1 0 0和MCF 7的杀伤作用。　结果 :MCF 7对阿霉素 (ADM)、顺铂 (DDP)、氟尿嘧啶 (5 FU)、丝裂霉素(MMC)和甲氨蝶呤 (MTX)等化疗药物均不敏感。将 5 FU、MMC和MTX分别加入实验组和对照组培养液后 ,对照组中MCF 7细胞数减少 ,光密度值降低。ADM和DDP对MCF 7生长的抑制作用在两种培养液中无显著差异。ADM、DDP、5 FU、MMC和MTX等化疗药物 ,在两种培养液中 ,对HBL 1 0 0光密度值的影响无显著差异。　结论 :叶酸缺乏可以降低某些化疗药物如 5 FU、MMC和MTX对MCF 7的杀伤作用 ,但不改变ADM、DDP、5 FU、MMC和MTX等化疗药物对HBL 1 0 0的毒性作用     

E1A基因对人乳腺癌细胞化疗药物敏感性的影响

目的探讨E1A基因对人乳腺癌细胞化疗药物的增敏作用及相关机制。方法通过脂质体介导到将E1A基因导入人乳腺癌细胞系MCF-7,经G418筛选获得稳定表达E1A的转染细胞（MCF-7-E1A）。用不同浓度的表阿霉素、泰素帝及5-氟尿嘧啶等化疗药物处理细胞,通过MTT法测绘细胞存活曲线,观察E1A基因对表阿霉素、泰素帝和5-氟尿嘧啶等化疗药物敏感性的影响;用同一浓度的泰素帝和5-氟尿嘧啶处理细胞,观察E1A基因在不同时间对癌细胞存活率的影响。结果转染E1A基因的人乳腺癌细胞（MCF-7-E1A）对表阿霉素和泰素帝的敏感性显著增加,与MCF-7和MCF-7-vect细胞系比较,MCF-7-E1A细胞对表阿霉素和泰素帝的敏感性分别增加了11倍和15倍;对5-氟尿嘧啶的增敏作用不明显。结论E1A基因能显著增加人乳腺癌细胞对表阿霉素和泰素帝等化疗药物的敏感性。该作用可能与E1A基因抑制该细胞的HER-2/neu基因的表达有关,使人乳腺癌细胞周期再分布,出现S期抑制和G2/M期阻滞,为恶性肿瘤上化疗和基因治疗联合应用的可能性提供实验依据。     

ATP—TCA法对乳腺癌常用化疗药物体外作用的评价

目的建识以三磷酸腺苷生物发光法肿瘤化疗药物敏感试验（ATP—TCA）法对乳腺癌常用化疗药物的体外作用评价方法。方法采用ATP—TCA法,对4组不同乳腺癌常用化疗药物选择相同规格、不同厂家共8种品规药品,同时检测对5株乳腺癌细胞株的杀伤效果,以比较同种乳腺癌细胞对同一品种、规格不同抗肿瘤药品的敏感性。结果4种药物对乳腺癌细胞株的敏感性顺序为紫杉醇（PTX）〉长存瑞滨（NVB）〉阿霉素（ADM）〉丝裂霉素（MMC）;同一种肿瘤细胞株对于不同厂家生产的同一种化疗药物的敏感性基本上具有一致性,但是也有个别具有差异性。结论ATP—TCA法可以作为评价不同厂家抗肿瘤药品体外作用的方法。     

MTT法检测Hela细胞对化疗药物敏感性的研究

目的:分析宫颈癌Hela细胞对化疗药物顺铂的体外敏感性。方法:采用MTT法测定宫颈癌Hela细胞对4种不同浓度顺铂的体外敏感性。结果:不同浓度的顺铂对宫颈癌Hela细胞的生长均有一定的抑制作用。结论:MTT法检测有助于指导临床选择化疗药物剂量,提高化疗效果,减少副作用,具有重要的临床应用价值。     

不同化疗药物对三阴乳腺癌亚型的作用效果研究

目的探究不同化疗药物对不同三阴乳腺癌(Triple negative breast cancer,TNBC)亚型的作用效果。方法培养人三阴乳腺癌MDA-MB-231、MDA-MB-468、SKBR-3、HCC1937细胞株,MTT法测定各株细胞在不同化疗药物(表柔比星、紫杉醇、5氟尿嘧啶、顺铂、环磷酰胺)作用下的增殖抑制,经流式细胞仪分析各细胞株中ALDHhiCD44+CD24-/low干细胞的含量以及在不同药物作用后其含量的变化,Western印迹检测不同细胞株内ERCC1、TOPOIIα、TS、β3-tubulin等耐药相关蛋白的表达情况。结果体外实验中,不同三阴乳腺癌亚型细胞株对不同的化疗药物反应性不同,细胞株中ALDHhiCD44+CD24-/low细胞含量不同,耐药相关蛋白表达存在差异。结论不同化疗药物对三阴乳腺癌亚型的作用效果存在差异,这种差异体现在干细胞含量、蛋白表达水平等多个层面上。     

MTT法体外测定脑胶质细胞瘤对化疗药物的敏感性

目的 探讨运用MTT法测定脑胶质细胞瘤体外对化疗药物的敏感性。方法 采用改良的MTT法测定50例胶质细胞瘤标本对8种化疗药物的体外敏感性。结果 50例胶质细胞瘤细胞对化疗药物的敏感性从高到低依次为威猛、二氯乙基亚硝脲、顺铂、长春新碱、环磷酰氨、甲氨喋呤、5-氟脲嘧啶、阿霉素。结论 MTT法检测脑胶质细胞瘤细胞对化疗药物的敏感性有助于指导临床选择肿瘤敏感性的化疗药物，提高化疗效果，具有重要的临床应用价值。     

高温联合化疗药对人乳腺癌细胞杀伤作用研究

目的:探讨高温联合化疗药物诱导人乳腺癌细胞株(MDA-MB-435S)凋亡和细胞周期各时相变化的分子机理。方法:应用43℃水浴箱高温诱导MDA-MB-435S细胞株,并联合使用5-Fu进行细胞杀伤,通过MTT比色法和流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期各时相的变化。结果;高温组、高温联合5-Fu组细胞凋亡率及细胞周期时相变化与对照组差异显著(P<0.01)。结论:高温联合5-Fu可提高乳腺癌细胞凋亡率、可抑制乳腺细胞周期G1期向S期的进程,S期细胞减少、G2M期细胞相对增高。     

ERK通路参与调控胰腺癌细胞吉西他滨化疗抵抗

目的 检测ERK蛋白在胰腺癌细胞株产生吉西他滨（GEM）化疗抵抗前后的表达,分析ERK通路在化疗抵抗中的作用.方法 通过浓度梯度递增诱导法建立对不同浓度吉西他滨化疗抵抗的胰腺癌细胞株模型 应用免疫组化检测各个化疗抵抗浓度细胞株ERK的表达 使用ERK通路阻断剂和激活剂分别作用于化疗抵抗最低和最高浓度,再检测ERK的表达 运用MTT法检测各因素对细胞耐药的影响,计算IC50值.结果 经过吉西他滨化疗诱导后,ERK的表达随着化疗抵抗浓度的增加而升高 ERK通路特异性阻断剂作用于最低及最高浓度的化疗抵抗细胞株后,ERK蛋白的表达降低,细胞的IC50值降低,细胞对化疗药物的敏感性增强 ERK通路激活剂作用后,ERK蛋白的表达增强,细胞的IC50值升高,细胞对化疗药物的敏感性增强.结论 ERK通路参与调控胰腺癌细胞吉西他滨化疗抵抗.     

MTT快速比色法用于鼻咽癌细胞药敏试验的研究

目的建立鼻咽癌化疗药敏药物的体外筛选方法。方法利用MTT法体外药敏试验检测了48例鼻咽癌(NPC)对7种临床化疗药物的敏感性。结果NPC细胞对顺铂(DDP),5氟-脲嘧啶(5-FU),长春新碱(VCR),环磷酰胺(CTX),博来霉素(BLM),HHA(高三尖杉酯碱),鬼臼噻吩甙(VM-26)的敏感性存在明显个体差异,其敏感率分别为52%、56%、61%、48%、48%、35%、74%。结论MTT可应用于NPC临床筛选药物。     

乳腺癌耐受蛋白的表达与5-氟尿嘧啶耐受的相关性研究

目的 筛选乳腺癌耐受蛋白(BCRP)介导的耐受药物,探讨BCRP的表达与耐受药物的相关性.方法 采用已成功建立的BCRP表达细胞模型,经细胞存活实验(MTr法)筛选出BCRP介导的耐受药物,并利用高效液相色谱法(HPLC)测定细胞内残留耐受药物的相对含量;运用荧光定量逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学方法(IHC)检测140例临床乳腺癌组织标本中BCRP的表达,同时利用MrIT法研究临床组织标本对耐受药物的化学敏感性;采用单项方差统计学检验方法分析临床乳腺癌组织中BCRP的表达与药物耐受的相关性.结果 MTT实验结果显示,细胞对5.氟尿嘧啶(5-Fu)的耐药指数随着BCRP表达的升高而增加,达到10.58倍(P＜0.05,n=3).HPLC实验证实BCRP的表达与细胞内残留的5-Fu呈显著的负相关性(r=-0.897,P＜0.05).140例临床乳腺癌组织标本中,BCRP阳性表达率为33%(47/140).BCRP阳性表达的乳腺癌组织对5-Fu的耐药指数是正常癌旁组织的7-12倍,BCRP的表达与5-Fu的耐受具有正相关性(R2=0.8124,P＜0.01).结论 BCRP的表达与5-Fu的药物耐受具有显著的相关性,研究结果有助于BCRP阳性;表达的乳腺癌病人化疗方案的制订和优化.     

FTY720对人乳腺癌MCF-7细胞、喉癌Hep-2细胞增殖的影响

目的:探讨FTY720抑制人乳腺癌MCF-7细胞和喉癌Hep-2细胞增殖作用。方法:将人乳腺癌MCF-7细胞和喉癌Hep-2细胞用不同浓度FTY720作用48 h,MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测其对细胞周期及凋亡率的影响。结果:MTT结果显示,FTY720对乳腺癌MCF-7细胞和喉癌Hep-2细胞增殖均有抑制作用,而且对喉癌Hep-2细胞抑制作用的浓度依赖性高于对乳腺癌细胞的作用;流式细胞术检测结果显示,FTY720可将乳腺癌MCF-7细胞阻滞于G1期,将喉癌Hep-2细胞阻滞于G2/M期,并明显促进乳腺癌MCF-7细胞凋亡。结论:一定浓度的FTY720能明显抑制体外培养的乳腺癌和喉癌细胞增殖,调节其细胞周期,诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡。     

全反式维甲酸与PD98059联合应用抑制结肠癌细胞的增殖

目的本实验拟通过阐明全反式维甲酸(ATRA)与MEK1/2的特异性抑制剂PD98059联合作用对结肠癌细胞增殖的影响。方法实验分组:未加药对照组,ATRA加药组,ATRA与PD98058联合加药组。MTT法检测PD98059联合ATRA对结肠癌细胞株LS174T的增殖抑制作用。流式细胞仪检测结肠癌细胞凋亡情况。结果 MTT法显示PD98059联合ATRA应用引起细胞抑制效果明显优于单个药物作用的效果。流式细胞仪检测也表明两种药物联合应用引起结肠癌细胞凋亡效果明显优于任一单个药物。结论 ATRA与PD98059联合应用可通过引起结肠癌细胞凋亡,从而抑制癌细胞增殖。     

对曲古抑菌素A敏感的人肺腺癌细胞株的初步筛选

目的初步筛选不同p53表达型肺癌细胞株对曲古抑菌素A（TSA）敏感性不同的影响因素。方法分别以体外药物敏感试验（MTT法）、流式细胞术观察TSA处理3种肺癌细胞株（H1299为p53缺失型,H322为p53变异型,A549为p53野生型）后,其生长抑制情况以及细胞周期、细胞凋亡等指标的变化;用Western blot法检测3种细胞的人类表皮生长因子受体2（HER2）表达水平。结果TSA对3种细胞均有抑制作用,在96h时对A549的IC50抑制作用明显低于对H1299和H322的IC50（P〈0.05）,A549细胞凋亡也明显多于H1299和H322的细胞凋亡（P〈0.05）。3种细胞株HER2蛋白表达水平由高到低依次为H322、A549和H1299,与TSA的IC50值之间无相关性。结论TSA对p53不同表达型人肺腺癌细胞株均有生长抑制作用,肺腺癌细胞株p53的不同表达型可能对TSA的敏感性产生影响,而HER2的表达强度不影响TSA的敏感性。     

对曲古抑菌素A敏感的人肺腺癌细胞株的初步筛选

目的初步筛选不同p53表达型肺癌细胞株对曲古抑菌素A（TSA）敏感性不同的影响因素。方法分别以体外药物敏感试验（MTT法）、流式细胞术观察TSA处理3种肺癌细胞株（H1299为p53缺失型,H322为p53变异型,A549为p53野生型）后,其生长抑制情况以及细胞周期、细胞凋亡等指标的变化;用Western blot法检测3种细胞的人类表皮生长因子受体2（HER2）表达水平。结果TSA对3种细胞均有抑制作用,在96h时对A549的IC50抑制作用明显低于对H1299和H322的IC50（P〈0.05）,A549细胞凋亡也明显多于H1299和H322的细胞凋亡（P〈0.05）。3种细胞株HER2蛋白表达水平由高到低依次为H322、A549和H1299,与TSA的IC50值之间无相关性。结论TSA对p53不同表达型人肺腺癌细胞株均有生长抑制作用,肺腺癌细胞株p53的不同表达型可能对TSA的敏感性产生影响,而HER2的表达强度不影响TSA的敏感性。     

Caspase-6诱导肾癌细胞株GRC-1细胞凋亡的研究

目的　探讨 Caspase- 6在肾癌细胞株 GRC- 1中的表达及其对肾癌细胞的凋亡诱导作用。方法　应用 RT- PCR方法检测了肾癌细胞株 GRC- 1中 Caspase- 6基因的表达水平 ;以腺病毒 adv5作载体 ,构建了含 Caspase- 6基因的转基因载体 ,用脂质体包裹法转染 GRC- 1细胞株 ,用 RT-PCR方法检测转染后 GRC- 1细胞中 Caspase- 6基因的表达。 MTT法检测转染 Caspase- 6对GRC- 1细胞株生长的影响。结果　肾癌细胞株 GRC- 1中未检出 Caspase- 6表达。 RT- PCR法证实转染 Caspase- 6后 GRC- 1中 Caspase- 6表达明显 ,MTT检测显示对 GRC- 1细胞的生长有抑制作用 ,通过形态学观察及 DNA电泳证实这种作用主要是通过促进细胞凋亡而实现的。结论　 Cas-pase- 6对肾癌细胞的生长有抑制作用 ,并可诱导肾癌细胞凋亡。     

胃癌CyclinD1、PTEN表达及与化疗药物耐药性关系的研究

目的探讨胃癌组织中CyclinDl、PTEN蛋白的表达和与化疗药物敏感性的关系。方法取胃癌手术标本84例,用免疫组化检测CyclinDl、PTEN蛋白在胃癌组织中的表达。并用MTT比色法观察胃癌原代培养细胞在体外对化疗药物HCPT、CDDP、5-Fu、ADM和MMC的敏感性。结果胃癌组织中CyclinDl和PTEN蛋白的阳性率分别为67.86%和46.43%。胃癌细胞对不同化疗药物敏感性不同:5-Fu、MMC和DDP对胃癌细胞的抑制率显著高于ADM和HCPT(P<0.05)。CyclinDl阳性者对5-Fu、HCPT的敏感性显著高于阴性者(P<0.05)。PTEN蛋白表达与五种化疗药物的体外耐药无相关性(P>0.05)。结论CyclinDl蛋白与胃癌对化疗药物敏感性相关,检测其表达对选择化疗药物有实用价值。     

白藜芦醇增加乳腺癌细胞对阿霉素化疗敏感作用研究

目的研究白藜芦醇对乳腺癌MDA-MB-231阿霉素(adriamycin,ADR)耐药细胞株化疗敏感性的影响。方法建立阿霉素耐药细胞株MDA-MB-231/ADR。MTT法检测白藜芦醇作用对MDA-MB-231、MDA-MB-231/ADR细胞阿霉素化疗敏感性的影响,统计半数细胞死亡药物浓度(IC50值)。流式细胞术检测白藜芦醇对阿霉素诱导MDA-MB-231/ADR细胞凋亡的影响,Western blot法检测Bcl-2、Bax、cleaved-caspase3、肝细胞生长因子受体CMet、P-糖蛋白(P-glycoportein,P-gp)的表达。结果成功建立阿霉素耐药株MDA-MB-231/ADR,其IC50值为8.79±0.96μg/ml,较MDA-MB-231细胞IC50值(0.24±0.03μg/ml)有显著差异,P0.01。5μM、15μM白藜芦醇对MDA-MB-231细胞阿霉素敏感性没有影响,但显著增强MDA-MB-231/ADR细胞阿霉素敏感性,15μM组IC50值下降为3.46±0.58μg/ml,有显著性差异,P0.01。5μM、15μM白藜芦醇均增加阿霉素诱导MDA-MB-231/ADR的细胞凋亡;15μM白藜芦醇处理组,Bcl-2表达显著降低,Bax、cleaved-caspase3表达显著升高。5μM、15μM白藜芦醇处理显著降低耐药基因C-Met、P-gp的表达。结论白藜芦醇增加阿霉素耐药株MDA-MB-231/ADR对阿霉素的敏感性,可能的作用机制为降低耐药基因C-Met、P-gp的表达。     

墓头回提取液对小鼠宫颈癌U14细胞株抑制增殖的实验研究

目的:探讨墓头回提取液对小鼠宫颈癌U14细胞株体外生长的影响。方法:以不同药物浓度和不同时间作用于宫颈癌U14细胞株后,采用MTT法检测其对细胞增殖的影响,并通过倒置显微镜观察细胞形态学变化。结果:墓头回提取液对宫颈癌U14细胞有一定的抑制作用,其抑制率与药物浓度、作用时间有关系;倒置显微镜观察细胞胞体变长,颗粒感增强,细胞浆减少,细胞质减少,细胞脱落呈悬浮状,可见细胞碎片。结论:墓头回提取液可抑制小鼠宫颈癌U14细胞株的增殖。     

PTEN抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231体外增殖及其机制的探讨

目的:观察PTEN对乳腺癌细胞MDA-MB-231体外增殖和迁移的影响,进一步探讨其可能机制.方法:选用人乳腺癌细胞MDA-MB-231并体外培养,质粒转染技术建立过表达PTEN的稳定细胞株MDA-MB-231/PTEN作为实验组,空载体细胞株MDA-MB-231/pcDNA3.1作为阴性对照组,以未转染细胞为正常对照组,RT-PCR检测各组细胞PTEN的表达水平,MTT法检测各组MDA-MB-231细胞的增殖能力,Transwell小室迁移实验检测各组MDA-MB-231细胞的迁移能力.结果:PTEN在MDA-MB-231/PTEN细胞中表达稳定,且其表达量明显高于阴性对照组和正常对照组,而阴性对照组和正常对照组PTEN表达量差异无统计学意义.转染PTEN基因可显著抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖和迁移能力.结论:PTEN与乳腺癌的增殖和迁移有关,对乳腺癌细胞的体外增殖和迁移能力起到抑制作用.     

全反式维甲酸与PD98059联合应用抑制结肠癌细胞的增殖

目的本实验拟通过阐明全反式维甲酸（ATRA）与MEK1／2的特异性抑制剂PD98059联合作用对结肠癌细胞增殖的影响。方法实验分组：未加药对照组,ATRA加药组,ATRA与PD98058联合加药组。MTT法检测PD98059联合ATRA对结肠癌细胞株LS174T的增殖抑制作用。流式细胞仪检测结肠癌细胞凋亡情况。结果MTT法显示PD98059联合ATRA应用引起细胞抑制效果明显优于单个药物作用的效果。流式细胞仪检测也表明两种药物联合应用引起结肠癌细胞凋亡效果明显优于任一单个药物。结论AT1KA与PD98059联合应用可通过引起结肠癌细胞凋亡．从而抑制癌细胞增殖。