幽门螺杆菌致T细胞凋亡：Fas/FasL介导的T细胞无反应性

目的 评价幽门杆菌（Hp）致T细胞死亡的方式和机制,探讨这种作用与Hp感染致宿主产生免疫耐受的关系。方法 应用AnnexinV染色流式细胞术检测Hp致T细胞死亡的方式;应用细胞毒实验（JAM技术）和FasIgG抗体、caspase8抑制剂组断实验评价T细胞凋亡与Fas/FasL作用的关系,并通过流式细胞术直接检测Hp对T细胞FasL表达的上调作用及其与T细胞产生凋亡的时效关系。结果 AnnexinV染色和JAM技术证实H致T慢以凋亡方式进行的。这种细胞凋亡能被抗Fas抗体和caspase8抑制剂阻断,因而是Fas依赖,TH2细胞较TH1样T细胞对这种作用更敏感。由于Hp能直接上调T细胞的FasL且其发生时间与凋亡出现时间吻合,证实Hp是通过凋节T细胞之间Fas/FasL相互作用而致其凋亡的。Hp能通过调节Fas/FasL作用而负调节T细胞的生长,这可能是Hp感染致宿主发生T细胞耐受的机制之一。     

Fas与FasL的分子及细胞生物学研究进展

Fas是Ⅰ型膜蛋白,属TNF受体家族成员,许多细胞表达Fas。而Fas配体(FasL)只在激活T淋巴细胞表达,是Ⅱ型膜蛋白,属TNF家族成员,当FasL与Fas结合时,Fas可向细胞传递“死亡信号”,细胞在数小时内凋亡,Fas-FasL介导的细胞调亡在免疫调控及免疫病理中,可能有重要作用。     

Fas/FasL系统、杀伤性DC与免疫耐受

免疫应答不仅受到细胞增殖和分化的调节 ,而且受到程序性细胞死亡 (凋亡 )的调节。有研究认为 ,Fas FasL系统可能在调节DC的凋亡中起作用。然而现在大多数研究者持相反的观点 ,认为刺激DC表面的Fas即触发DC表面的Fas信号可以使DC发生表型成熟和功能活化 ,因而在FasL转染的DC(杀伤性DC)对它本身的影响和诱导免疫耐受的作用方面也存在争议。本文就Fas FasL系统的免疫学特点、Fas FasL系统与DC的关系和杀伤性DC诱导免疫耐受的研究等方面作一综述。     

Fas／FasL系统、杀伤性DC与免疫耐受

免疫应答不仅受到细胞增殖和分化的调节，而且受到程序性细胞死亡(凋亡)的调节。有研究认为，Fas／FasL系统可能在调节DC的凋亡中起作用。然而现在大多数研究者持相反的观点，认为刺激DC表面的Fas即触发DC表面的Fas信号可以使DC发生表型成熟和功能活化，因而在FasL转染的DC(杀伤性DC)对它本身的影响和诱导免疫耐受的作用方面也存在争议。本文就Fas／FasL系统的免疫学特点、Fas／FasL系统与DC的关系和杀伤性DC诱导免疫耐受的研究等方面作一综述。     

白介素12诱导T细胞凋亡时Fas/FasL表达和信号转导的研究

目的:为了解和探讨白介素12(IL-12)作用于T细胞,活化T细胞表面的IL-12受体β1/β2复合物,调节Th1/Th2平衡,诱导T细胞凋亡时对Fas/FasL表达和信号传导的作用。方法:用AnnexinV的方法流式细胞仪检测细胞凋亡;用半定量PCR的方法测定在不同抑制剂作用下对Fas/FasL信号传导的影响。结果:IL-12诱导人TIB-152、HTB-176和正常T细胞的凋亡;IL-12可上调T细胞的FasLmRNA表达。在IL-12作用6h后FasL的表达明显升高,表达的高峰值在24h。HA100抑制剂能促进T细胞的凋亡,PKC抑制剂是IL-12诱导T细胞凋亡信号传导的负性调节因子;AG490抑制剂不抑制IL-12上调的FasLmRNA表达作用,说明其阻断的Jak2通路不参与IL-12对FasL表达的信号传导过程;HA1004不影响T细胞表达FasLmRNA。结论:IL-12能诱导TIB-152、HTB-176和正常人T细胞的凋亡。FasL作为介导分子参与此过程,IL-12对T细胞FasLmRNA表达信号传递与PKC通路有关。而Jak2及PKA通路不参与此过程.     

复发性自然流产患者主动免疫治疗前后外周血淋巴细胞Fas/FasL表达水平的研究

目的研究复发性自然流产(RSA)患者外周血淋巴细胞Fas/FasL表达水平,探讨Fas/FasL系统与RSA的发病关系以及主动免疫治疗对RSA患者外周血淋巴细胞Fas/FasL表达水平的影响。方法收集2009年6月至2010年4月在汕头大学医学院附属粤北人民医院妇产科门诊就诊的早孕期RSA患者12例,未孕期RSA患者15例作为研究组,采用荧光标记流式细胞分析技术分别检测主动免疫治疗前后外周血淋巴细胞Fas、FasL表达水平,选择同期正常早孕妇女15例,正常未孕妇女15例作为对照组,比较各组Fas、FasL表达水平的差异。结果 (1)未孕组中,RSA患者外周血NK细胞和CD8+T细胞Fas的表达水平均比正常妇女高,NK细胞FasL表达水平比正常妇女低(P<0.05),CD8+T细胞FasL、CD4+T细胞Fas、FasL的表达水平两组相比无明显差异(P>0.05);(2)早孕组中,RSA患者外周血NK细胞Fas、FasL的表达水平均比正常妇女低,CD8+T细胞Fas表达水平比正常妇女高(P<0.05),CD8+T细胞FasL、CD4+T细胞Fas、FasL的表达水平两组相比则无明显差异(P>0.05);(3)主动免疫治疗后RSA患者(早孕组和未孕组)外周血NK细胞和CD8+T细胞的Fas表达水平均较治疗前下降,FasL表达水平均较治疗前上升,差异有统计学意义(P<0.05),CD4+T细胞Fas、FasL的表达水平与治疗前相比无明显差异(P>0.05)。结论 (1)外周血NK细胞和CD8+T细胞Fas表达升高,FasL表达不足是导致RSA发生的重要免疫学因素之一。(2)主动免疫治疗可能通过改变RSA患者外周血NK细胞和CD8+T细胞的Fas/FasL表达水平,改善细胞凋亡状态而取得疗效。     

Fas,FasL与Ⅰ型糖尿病

Fas和FasL是细胞表面的两种跨膜蛋白.当一个细胞的Fas与另一个细胞的FasL结合时,可诱导表达Fas的细胞凋亡;胰岛中浸润的T淋巴细胞表达FasL可以使表达Fas的胰岛β细胞发生凋亡.Fas诱导的胰岛β细胞凋亡可能在1型糖尿病的发生发展中起重要作用.     

Fas,FasL与1型糖尿病

Fas和FasL是细胞表面的两种跨膜蛋白.当一个细胞的Fas与另一个细胞的FasL结合时,可诱导表达Fas的细胞凋亡;胰岛中浸润的T淋巴细胞表达FasL可以使表达Fas的胰岛β细胞发生凋亡.Fas诱导的胰岛β细胞凋亡可能在1型糖尿病的发生发展中起重要作用.     

Fas、FasL和Caspase-3在人胚早期脊髓发育中的分布

目的观察Fas、FasL和Caspase-3在人胚早期脊髓发育的表达。方法收集早期人胚35天,52天和60天标本9例,用4%多聚甲醛固定后制作8μm厚的石蜡切片。间隔取片分组,分别用Fas(效价1:250,Santa Cruz)、FasL(效价1:250,Santa Cruz)、Caspase-3(效价1:500,Sigma)抗体对5例人胚标本的10张切片行免疫组织化学ABC法染色。观察Fas、FasL和Caspase-3在人胚早期脊髓发育中的分布以及亚细胞定位。DAB棕色反应呈色。结果Fas免疫反应阳性的神经元主要分布在室管膜层、中间层和边缘层,可见胞浆和细胞核内染色。FasL免疫反应阳性产物主要分布在室管膜层和套层,可见细胞膜、胞浆和细胞核染色。Caspase-3免疫反应阳性产物主要分布在神经管的室管膜层和中间层,可见细胞核染色。结论在人胚发育早期,Fas、FasL和Caspase-3分布于脊髓,提示这些因子参与人胚早期脊髓的发育,参与神经元凋亡信号的传递。     

ICA、PJA逆转人高转移肺癌细胞Fas/FasL途径免疫逃逸机制的研究

目的：研究ICA、PJA对人高转移肺癌细胞PG细胞免疫逃逸的逆转作用。方法：MTT法检测ICA、PJh对PG细胞增殖的影响以及对CD3AK杀伤敏感性的影响。流式细胞仪检测细胞表面分子Fas、FasL表达水平和细胞凋亡。应用PG细胞与Jurkat T细胞其培养的方法体外研究FasL诱导T淋巴细胞凋亡的作用。结果：PG细胞高表达FasL，低表达Fas，对CD3AK细胞杀伤敏感性较低，并在与Jurkat T细胞共培养中诱导高表达Fas的Jurkat T细胞凋亡。：ICA、PJA对PG细胞有明显的增殖抑制作用。ICA可明显提高PG细胞Fas的表达率。ICA、PJA可明显降低PG细胞FasL的表达率。ICA、PJA可使PG细胞与Jurkat T细胞共培养中，降低Jurkat T细胞的凋亡率。ICA、PJA可提高CD3AK细胞对PG细胞的杀伤活性。结论：ICA、PJA可逆转人高转移肺癌细胞PG通过Fas／FasL途径逃避机体免疫活性细胞的攻击。     

IL-12诱导T细胞凋亡对Fas/FasL和TNFR/TNFα表达的影响

目的:探讨白介素12(IL-12)诱导T细胞凋亡过程中对T细胞的Fas/FasL和TNFR/TNFα表达的影响作用.方法:dUTP缺口末端标记法和Annexin V法;用FITC标记TNFR1,PE标记CD95,生物素标记FasL, 流式细胞仪检测3种T细胞(人淋巴瘤T细胞株HTB176、人急性白血病T细胞株TIB152和正常人T细胞)的百分率;用半定量PCR的方法检测FasL和TNFα的mRNA的表达作用.结果:HTB176和TIB152的细胞在IL-12处理1 h,生物素标记FasL百分率和FasL的mRNA表达率开始增加,24 h达到高峰,但正常T细胞在24 h后才有反应;正常T细胞经IL-12处理1 h内细胞FasL百分率和FasL的mRNA表达率开始增加,在以后的试验期 6、12、24 h始终保持恒定水平;但3种T细胞在IL-12作用下不促进细胞CD95和TNFR1及TNFα的表达.结论:IL-12诱导T细胞凋亡中有许多调节因子的协调作用,但作用机制是不同的.     

HDV/HBV感染树鼠句肝组织中的肝细胞凋亡

目的探讨HDV/HBV感染树鼠句肝组织中Fas/FasL、Bcl2/Bax和ICE表达与HDV感染之间的关系,以及Fas/FasL、Bcl2/Bax和ICE在丁型肝炎肝细胞凋亡中的作用.方法采用免疫组化技术对HDV/HBV感染树鼠句肝组织中Fas/FasL、Bcl2/Bax和ICE的表达进行检测;应用原位末端标记技术对肝细胞凋亡进行检测.结果HDAg表达与Fas/FasL、Bcl2/Bax和ICE表达之间关系密切(P＜0.05),HDAg表达越强,Fas、FasL、Bax和ICE表达也越强,而Bcl2表达则越弱.Fas/FasL、Bcl2/Bax和ICE表达与肝细胞凋亡之间关系密切(P＜0.05),Fas、FasL、Bax和ICE表达越强,凋亡细胞越多;相反,Bcl2表达越强,凋亡细胞越少.结论肝细胞内HDAg表达可诱导Fas、FasL、Bax和ICE表达,但对Bcl2表达无明显诱导作用;Fas/FasL、Bcl2/Bax和ICE在肝细胞凋亡中起重要作用.     

Fas/FasL途径介导的人肺癌细胞免疫逃逸

目的：观察在3种人肺癌细胞（A549、EBC-1、LCSC）和人T细胞(Jurkat) Fas/FasL表达情况，探讨人肺癌细胞免疫逃逸及反杀伤作用与Fas/FasL途径的关系。 方法： 用FACScan、RT-PCR方法检测Fas/FasL蛋白及mRNA表达；以荧光染色法观察细胞调亡；用台盼蓝拒染法检测细胞存活。 结果： 3种人肺癌细胞及T-细胞系(Jurkat)均表达 Fas及 FasL；肺癌细胞与Jurkat细胞共培养时，肺癌细胞可导致Jurkat细胞生长抑制(P<0.05)及凋亡；在共培养体系中加入FasL中和性抗体NOK1，可封闭肺癌细胞对Jurkat细胞的生长抑制作用(P>0.05)。 结论： Fas/FasL途径可介导上述3种人肺癌细胞对Jurkat细胞的生长抑制及致凋亡作用；中和性抗体可有效阻断Fas信号转导途径，抑制肿瘤细胞的反杀伤作用，有效保护免疫系统。     

再生障碍性贫血患者Fas+/CD8+细胞减少

再生障碍性贫血(aplstic anemia,aa)是一组以全血细胞减少和骨髓低增生为特征的综合征,其确切的发病机制尚未明确,但免疫异常特别是T淋巴细胞数量和功能的异常在发病中的作用却越来越受到重视。在正常的免疫反应中,淋巴细胞会在不同的阶段全部死亡,而Fas／FasL系统在T淋巴细胞的清除过程中发挥着主导性作用。     

IFNγ调控人肺癌A549细胞Fas／FasL表达对T淋巴细胞生长的影响

为探讨IFNγ调控有肺癌细胞Fas/FasL表达对T细胞生长的影响，分别采用FACScan,RT-PCR方法检测Fas/FasL蛋白质及mRNA表达；以荧光染色及FACScan法观察细胞凋亡；用苔酚兰排除实验分析细胞生长。结果表明，人肺癌细胞A549及T－细胞系（Jurkat)均有Fas及FasL表达；IFNγ可引起A549Fas表达上调，且与剂量相关，并增加了A549细胞凋亡诱导的敏感性；A549细胞与Jurkat细胞共培养实验证明：人A549细胞通过Fas/FasL介导导致Jurkat细胞生长抑制及凋亡诱导；IFNγ处理A549细胞后，减少了其对Jurkat细胞的生长抑制。上述结果提示：Fas/FasL途径介导了A549细胞与Jurkat细胞之间的凋亡，IFNγ通过对人肺癌细胞Fas/FasL系统表达调控，使A549细胞自身对凋亡诱导的敏感性增加，并对T细胞生长的抑制作用减弱，提示IFNγ在防止肿瘤细胞逃避免疫监控有一定作用。     

血必净对活化诱导T细胞凋亡的调节

目的 观察活化诱导对脾脏T淋巴细胞凋亡、凋亡相关基因mRNA表达及caspase3活性的影响,以及活血化瘀中药的调节作用.方法 提取BALB/c小鼠脾脏T淋巴细胞并培养,以Con A+IL-2诱导T细胞活化凋亡,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR检测Fas、FasL、Bcl-2、Bax、IL-2 mRNA表达水平,分光光度法测定caspase3酶活性,并观察活血化瘀中药对上述各项指标的影响.结果 活化T淋巴细胞于诱导18h后凋亡率明显增加,于诱导6h时未见FasL、Bax mRNA表达,Fas、Bcl-2 mRNA表达无明显变化;于诱导18 h后Fas、FasL、Bax mRNA表达升高,Bel-2 mRNA表达下降,caspase3活性增高.活血化瘀中药可降低T细胞凋亡,并可分别降低Fas、FasL、Bax mRNA表达,提高Bcl-2 mRNA表达,减轻easpase3酶活性.在活化诱导早期(6 h)促进T淋巴细胞内IL-2 mRNA表达,在晚期(18 h)减少IL-2 mRNA表达.结论 过度活化是脾脏T淋巴细胞异常凋亡的诱发因素,而凋亡的发生与Fas、FasL、Bax、Bcl-2 mRNA表达的改变有关.活血化瘀中药可通过调节IL-2及凋亡相关基因mRNA表达而减轻脾脏T淋巴细胞凋亡,同时可以促进T淋巴细胞的增殖活性.     

Graves病和桥本甲状腺炎患者外周血T细胞表面及血清中Fas/FasL的表达特点

目的探讨Graves病(GD)和桥本甲状腺炎(HT)患者外周血中Fas+、FasL+细胞占总T淋巴细胞的比例(Fas%、FasL%)以及血清中sFas、sFasL、TGAb、TPOAb等指标的变化及意义。方法选择GD患者36例、HT患者32例、对照组20例。用流式细胞术检测外周血T细胞表面Fa(sCD95)、FasL(CD178)的表达特点,用双抗体夹心法(ELISA)测定血清中可溶性Fas及FasL的含量,用化学发光法测定相关抗体TGAb、TPOAb的含量。结果 GD及HT患者外周血Fas%均高于对照组(P<0.05),且以HT组更为显著,而各组均未检测到FasL的表达;GD及HT患者血清中sFas含量均高于对照组,尤以GD组显著;各组间均可检测到sFasL,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Fas及其配体介导的凋亡在GD和HT的自身免疫反应过程中起着重要的作用。流式细胞术的应用,可为探讨AITD的发病机制提供新的方法。     

乙型肝炎肝组织Fas，FasL和HBV抗原的表达

目的 评价Fas和FasL介导细胞凋亡在乙型肝炎肝损伤中的作用及其与HBV抗原的关系。方法 应用免疫组化方法检测了62例乙型肝炎患者肝组织内的Fas、FasL和HBsAg、HBcAg,并以6例下正常肝组织为对照。结果 Fas/FasL在正常肝组织内无表达;Fas主要在乙型肝炎患者肝细胞质内表达,58例阳性（93．5％）;FasL在肝内浸润的单个核细胞和肝细胞质内均见到,37例阳性（59．7％）。结论 Fas/FasL的表达程度与肝组织活动性炎症程度密切相关;Fas/FasL介导的细胞凋亡可能在乙型肝炎时肝损伤中起重要作用;Fas/FasL表达程度与肝内HBV抗原HBsAg、HBcAg无明显相关性。     

SLE患者外周血T细胞亚群凋亡特点及其相关机制的研究

目的:研究系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血CD3+、CD4+、CD8+T细胞亚群的凋亡特点及其相关的凋亡机制。方法:采用三色荧光流式细胞术检测高活动性SLE患者、低/非活动性SLE患者以及正常对照者外周血T细胞亚群的百分比例、T细胞亚群膜表面Fas/FasL的表达率、T细胞亚群早期凋亡(AV+PI-)的情况;采用ABC-ELISA法测定各组SLE患者和正常对照者血清IL-10水平;对10例血清IL-10水平异常升高的高活动性SLE患者进行体外PBMCs培养实验,其中分别加入抗FasL抗体和抗IL-10抗体,48小时常规培养后分别检测PBMCs中T细胞亚群百分比例、T细胞亚群膜表面Fas/FasL的表达率、T细胞亚群早期凋亡的变化。结果:SLE患者外周血T细胞凋亡异常增多,其中以高活动性SLE患者CD4+T细胞亚群的凋亡尤为显著(P0.05),CD4+T细胞的异常凋亡与CD4+和CD8+T细胞膜表面表达增高的Fas/FasL密切相关(P0.05);各组SLE患者外周血血清IL-10水平均明显升高(P0.01),高活动性SLE患者更为明显,血清IL-10水平升高不仅与SLE主要临床检验指标相关,而且与CD4+/CD8+比值减少、CD4+T细胞高表达FasL相关(P0.05);随访研究显示,随着SLE病情好转、稳定,血清IL-10水平下降明显、T细胞亚群Fas/FasL的表达率明显减少、T细胞亚群凋亡逐渐减少,以上变化均在CD4+T细胞亚群中体现得最为明显(P0.05)。结论:SLE患者T细胞活动性异常升高,尤其是CD4+T细胞亚群凋亡增加,是SLE疾病发展的重要病理机制,IL-10作为能诱导T细胞高表达Fas/FasL的重要调节因子,参与了SLE患者CD4+T细胞凋亡的免疫调节,SLE患者异常增高的IL-10很可能通过Fas/FasL途径促进了T细胞尤其是CD4+T细胞亚群的凋亡。     

三七总皂甙对肺缺血再灌注损伤时细胞凋亡及Fas/FasL的影响

目的：探讨细胞凋亡与肺缺血再灌注损伤的关系以及三七总皂甙的作用及机制。 方法: 健康日本大耳白兔84只，随机分为对照组、肺缺血再灌注1、3、5 h组和三七总皂甙干预1、3和5 h组。复制肺缺血再灌注损伤模型。采用原位缺口末端标记（TUNEL）法观测肺组织细胞凋亡指数，免疫组化和原位杂交技术检测肺组织细胞Fas/FasL系统蛋白和基因表达的变化。 结果: 肺缺血再灌注组肺组织细胞凋亡指数和Fas/FasL蛋白及基因表达均显著高于对照组（均P<0.01）。三七总皂甙干预组Fas/FasL mRNA及其蛋白质的表达显著低于缺血再灌注组（P<0.01），肺组织细胞凋亡指数也显著低于缺血再灌注组（P<0.01）。肺组织细胞凋亡指数分别与Fas/FasL蛋白和Fas/FasL mRNA之间均呈显著正相关（r分别=0.540,0.658,0.668,0.686;均P<0.01）。 结论: Fas/FasL系统活化启动的肺组织细胞凋亡可能参与了肺缺血再灌注损伤的发生。三七总皂甙可能通过抑制Fas/FasL系统的激活，阻遏肺组织细胞凋亡，从而减轻肺缺血再灌注损伤。