高能冲击波对肿瘤细胞的作用

一般认为,肿瘤细胞声阻抗变异性虽小于钙,但大于正常细胞。据报告,高能冲击波对肿瘤细胞具有细胞毒作用,但对其抗肿瘤作用则了解甚少。为此,作者应用高能冲击波,观察对某些癌细胞株的抗肿瘤作用,以确认能否应用高能冲击波治疗肿瘤。材料和方法:培养细胞株:(1)泌尿膀胱癌细胞株HT-1197;(2)慢性髓性白血病细胞株K-562;(3)非洲绿龟正常肾细胞株Vero。先将细胞(5×10~5)放入适当培养液内(K-562和Vero细胞株为RPMI1640培养基,HT-1197细胞株用EAGLE-MEM培养基),然后将三     

ERCC1在鼻咽癌组织中的表达及其与顺铂化疗敏感性的关系

目的: 用自制的改良细胞冻存液冻存树突状细胞（dendritic cells,DCs）,观察冻存复苏后DCs的细胞存活率及体外诱导CIK(cytokine induced killer cell)对肿瘤细胞的杀伤作用。方法：从外周血分离、培养获得DCs,分别用3种冻存液冻存:（1）含10%二甲基亚砜(DMSO)、20%牛血清的RPMI 1640培养液;（2）日本ZENOAQ公司的Cellbanker细胞冻存液;（3）自制细胞冻存液（含DMSO、羟乙基淀粉及细胞稳定剂）。每组DCs分6管,于-80 ℃和-196 ℃各冻存3管,分别于冻存后第30、60和180 d复苏,用锥虫蓝染色法测定细胞存活率,用MTT法检测冻存复苏后DCs活化的CIK对K562细胞的杀伤活性。结果：每组3种冻存液冻存的DCs随着冻存时间的延长,冻存复苏DCs的存活率和活性均有轻度下降,但经统计学分析3种冻存液的冻存效果无明显差别。结论：自制的改良细胞冻存液能够替代传统冻存液和进口冻存液用于DCs的冻存,有良好的推广前景     

罗格列酮对肝癌HepG2细胞周期和凋亡的影响

目的研究罗格列酮对人肝癌HepG2细胞周期和凋亡的影响。方法设不同浓度罗格列酮组(10、25、50.0、100.0μg/ml)、2‰二甲基亚砜的RPMI1640培养基加细胞为阴性对照组。应用MTT法检测罗格列酮对肝癌HepG2细胞的增殖抑制和生长活性,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。结果罗格列酮对肝癌HepG2细胞具有较强的体外毒性,48 h IC50为41.6μg/ml。肝癌HepG2细胞活性随着用药剂量和作用时间的增加而不断下降,出现剂量-效应和时间-效应的关系。罗格列酮作用48 h后,肝癌HepG2细胞G_0/G_1期比例显著升高,S期细胞比例有所降低,到G_2/M期细胞的比例明显下降,并呈明显的剂量依赖性。罗格列酮对HepG2细胞作用48 h后可以诱导肿瘤细胞产生凋亡,并且呈剂量依赖性。结论罗格列酮能抑制肝癌HepG2细胞生长并促进其凋亡。     

MDR1基因稳定表达的人肝癌多药耐药细胞株的建立

目的 建立多药耐药基因(MDR1)稳定表达的人肝癌Bel-7402耐药细胞株，为应用RNA干扰技术逆转肿瘤多药耐药基因的表达提供实验模型。方法 应用阿霉素(ADM)长期培养筛选建立Bel-7402耐药细胞株，应用MTT法、流式细胞仪(FCM)及逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)对该细胞株相关特性(耐药范围、致死剂量、p-糖蛋白功能及其表达阳性率、MDR1基因检测)进行比较研究。结果 经MTT法检测，耐药细胞株耐药性明显增高，FCM检查发现从敏感细胞到耐药细胞，其阿霉素潴留功能由77．7％降至25．1％，P-糖蛋白(P—gp)阳性率由1．4％升高至54．0％，RT-PCR检查显示该细胞中MDR1 mRNA呈高表达。结论 成功建立了稳定表达MDR1基因的人肝癌Bel-7402耐药细胞株，该细胞中P—gp呈高表达，稳定性好。     

人脐带血清培养癌细胞的新方法

作者探讨用人的脐带血清(HCS)替带小牛血清(FCS)做癌细胞培养。材料 (1)HCS制取:HCS取自健康妊娠妇女。对照用市场所售小牛血清。 (2)实验细胞:用T-24,HeLa和Vero细胞,将细胞加用5％FCS在RPMI1640培养基中维持传代。方法 (1)增殖培养细胞数目的探讨:实验细胞放在加入10％HCS或FCS的RPMI1640培养基中,用96穴平底微孔板37℃,二氧化碳孵箱培育120小时后,用结晶紫染色,测定其吸光     

MicroRNA对肿瘤细胞活性的影响

MicroRNA(miRNA)是一类非编码蛋白的短序列RNA片段,长度大约为21～23个核苷酸。它是通过结合到目标mRNA上抑制该mRNA翻译,起着调控基因功能的作用。本试验将4种miRNA的反义寡核苷酸(antisenseoligonucleotide ofmiRNA,AMR)转染至不同的肿瘤细胞后,用MTT法测定细胞活性来检测miRNA对肿瘤细胞活性的影响。1材料与方法1.1肿瘤细胞人胃癌细胞株MGC803、人胶质瘤细胞株U373、人上皮样宫颈癌细胞株HeLa、人结肠癌细胞株SW620均来自本中心细胞室。1.2主要试剂RPMI1640培养基(Gibco,美国);胎牛血清(中国医学科学院血液研究所);胰…     

人外周血γδ T细胞的可溶性anti-TCR γδ抗体扩增及其培养和保存的条件

目的:比较人外周血γδ T细胞不同的制备方法,摸索适于临床应用的培养和保存条件.方法:分离人外周血单个核细胞,分别以固相化和可溶性anti-TCRγδ抗体进行刺激,以添加小牛血清或人AB血浆的RPMI 1640培养液或AIM V无血清培养液进行培养,采用锥虫蓝染色法检测γδ T细胞存活率,采用免疫荧光染色法考察γδ T细胞的纯度和亚型,采用乳酸脱氢酶(lacate dehydrogenase,LDH)法检测γδ T细胞对不同肿瘤细胞系的杀伤作用.结果:添加15%小牛血清和添加5%人AB血浆的RPMI 1640培养液对γδ T细胞的培养效果接近,均优于AIM V无血清培养液.可溶性抗体与固相化抗体扩增外周血γδ T细胞的效果相似;可溶性抗体扩增的γδ T细胞受体(T cell receptor,TCR)库容完整,同时具有TCR Vδ1和Vδ2两种亚型;对肺癌、肝癌和卵巢癌细胞系均有体外杀伤活性.这些γδ T细胞在含1%人AB血浆或0.25%人血白蛋白的生理盐水中、4 ℃条件下保存12 h,细胞存活率仍达95%以上.结论:可溶性anti-TCR γδ抗体和含有人AB血浆的RPMI 1640培养液可以用于人外周血γδ T细胞的体外扩增,扩增得到的γδ T细胞在含有血浆或白蛋白的生理盐水中稳定性较好.     

人小细胞肺癌(SCLC)del_3p(14—23)是非随机染色体异常

为了检测小细胞肺癌(SCLC)是否有特殊的染色体变化,作者从6例未经治疗和10例系统接受治疗的SCLC 患者采集原发肿瘤细胞、骨髓、胸膜渗出液,转移结节和皮下肿瘤的标本建立16株细胞株.其方法是将细胞悬液和小细胞聚集物放入RPMI1680培养基内,加入10%热灭活胎牛血清,把约有1×10细胞培养物放入75cm 培养瓶内,在5% CO_2 内,37℃下孵育,生长4—6个月.作者分析了16株SCLC 组     

体外培养人肺腺癌细胞液氮冻存及复苏培养

将离体细胞在实验室中进行长期培养,建立体外实验模型的组织培养技术,已广泛应用于基础医学科学的研究。培养细胞的保种则是细胞株/系建立后的一个重要问题。组织培养中常用传代培养法和低温冻存法。比较而言,前者不仅耗费了大量人力、物力、而且难以避免微生物污染等意外,甚至发生细胞生物学特征的改变。为此,我们对几个细胞系进行液氮低温(—196℃)冻存。现将液氮中成功冻存4年的高转移性人肺腺癌 Anip—973细胞系的冻存及复苏培养情况简介如下。     

人外周血γδ T细胞的可溶性anti-TCRγδ抗体扩增及其培养和保存的条件

目的:比较人外周血γδ T细胞不同的制备方法,摸索适于临床应用的培养和保存条件。方法：分离人外周血单个核细胞,分别以固相化和可溶性antiTCRγδ抗体进行刺激,以添加小牛血清或人AB血浆的RPMI 1640培养液或AIM V无血清培养液进行培养,采用锥虫蓝染色法检测γδ T细胞存活率,采用免疫荧光染色法考察γδ T细胞的纯度和亚型,采用乳酸脱氢酶（lacate dehydrogenase,LDH）法检测γδ T细胞对不同肿瘤细胞系的杀伤作用。结果：添加15%小牛血清和添加5%人AB血浆的RPMI 1640培养液对γδ T细胞的培养效果接近,均优于AIM V无血清培养液。可溶性抗体与固相化抗体扩增外周血γδ T细胞的效果相似;可溶性抗体扩增的γδ T细胞受体（T cell receptor,TCR）库容完整,同时具有TCR Vδ1和Vδ2两种亚型;对肺癌、肝癌和卵巢癌细胞系均有体外杀伤活性。这些γδ T细胞在含1%人AB血浆或0.25%人血白蛋白的生理盐水中、4 ℃条件下保存12 h,细胞存活率仍达95%以上。结论：可溶性antiTCR γδ抗体和含有人AB血浆的RPMI 1640培养液可以用于人外周血γδ T细胞的体外扩增,扩增得到的γδ T细胞在含有血浆或白蛋白的生理盐水中稳定性较好。     

人肝癌细胞株HepG2和BEL-7402对放射敏感性的体外实验研究

目的　采用体外实验方法探讨人肝癌细胞株HepG 2和BEL -740 2对放射的敏感性。方法　对人肝癌细胞株HepG2和BEL -740 2进行体外培养 ,应用集落形成法和MTT法测定 6MVX线不同剂量照射后细胞的存活率 ,计算 2株细胞放射敏感性参数 (D0 )。结果　HepG 2的D0 值为 1.5 ,SF2 为 (0 .45± 0 .0 5 ) ;BEL -740 2的D0 值为 1.6,SF2 为 (0 .63± 0 .0 5 )。MTT法与集落形成法相关性较好 (γ =0 .946,P <0 .0 5 )。结论　HepG2具有较高的放射敏感性 ,BEL -740 2的放射敏感性较低 ;MTT法可替代集落形成法作细胞放射敏感性的快速测定。     

肿瘤坏死因子诱导HL60细胞凋亡时核基质的改变及意义

已知核基质的功能与细胞的分化、增殖等生命活动过程有关,且与细胞的癌变和凋亡有关[1],我们比较了肿瘤坏死因子诱导HL60细胞凋亡前及凋亡时核基质的改变,并分析了核基质蛋白在HL60细胞凋亡过程的可能作用及其意义。材料与方法1．HL60细胞的培养的准备：HL60细胞为本实验室冻存复苏,细胞培养用RPMI1640液、小牛血清10％、青霉素100u／ml、链霉素ug／ml,培养条件：温度37℃、湿度100％、CO25％。2．肿瘤坏死因子诱导HL60细胞调亡：参照文献Voelkd．Johnson等［’j介绍的方法,用还原反应测定肿瘤细胞存活率,细胞DNA的提取及琼…     

缺氧对肝癌BEL7402细胞周期及放射敏感性的影响

目的:研究肿瘤细胞在缺氧及放射情况下细胞周期的改变及细胞存活的情况。方法:将贴壁培养的肝癌细胞株BEL7402分成对照组、缺氧24h组、缺氧48h组、缺氧加照射组和单纯照射组。应用流式细胞仪检测细胞周期的改变,同时应用成克隆分析法观测细胞存活情况。结果缺氧24h与48h组的肝癌细胞株BEL7402存活分数变化不明显,加照射后的实验组则明显下降而缺氧加放射组与单纯放射组比较细胞存活分数明显升高。肝癌细胞株BEL7402细胞缺氧培养后随着缺氧时间的延长(0～48h)S期细胞逐渐减少,而凋亡细胞逐渐增多;G1期和G2/M期细胞变化不明显;单纯放射组可以看到明显的G2/M期细胞阻滞;而在缺氧加放射组看不到明显的G2/M期细胞阻滞,但凋亡细胞明显增高。结论缺氧(1%氧浓度)对肝癌细胞株BEL7402的存活无明显影响;但能保护肝癌细胞株BEL7402使其免受放射线的损伤;缺氧通过影响射线对G2/M期细胞阻滞降低了肝癌细胞株BEL7402对射线的敏感性。     

不同培养基与血清的培养体系对细胞因子诱导杀伤细胞增殖和功能的影响

目的：探讨不同细胞培养基及血清的培养体系对细胞因子诱导杀伤（cytokine-induced killer,CIK）细胞的增殖和功能的影响。方法：采集6例肺癌患者外周血,分离获得单个核细胞,按照不同血清与培养基分为8组：GT-T551培养基+患者自体血清组、GT-T551培养基+健康人血清组、GT-T551培养基+FBS组、GT-T551培养基组、RPMI 1640培养基+患者自体血清组、RPMI 1640培养基+健康人血清组、RPMI 1640培养基+FBS组及RPMI 1640培养基组。采用CFSE染色法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测CIK细胞CD3+CD8+T细胞及CD3+CD4+T细胞颗粒酶B、IFN-γ、穿孔素的分泌情况及以白血病NB4、K562细胞为靶细胞时CD3+CD56+ T细胞、CD3+CD4+ T细胞及CD3+CD8+ T细胞表面CD107a的表达。结果：GT-T551培养基加入患者自体血清组CIK细胞的增殖指数显著高于其他各组（ P <0.05）。GT-T551培养基或RPMI 1640培养基中加入患者自体血清组CD4+T细胞颗粒酶B的分泌水平均显著高于加健康人血清组\[(22.85±3.50）% vs （13.28±1.75）%,(22.57±3.45）% vs （15.37±4.08）%,均 P <0.01\],而且GT-T551+患者自体血清组CD8+T细胞分泌IFN-γ的能力显著高于加健康人血清组（ P <0.05）。以白血病细胞系NB4和K562细胞作为靶细胞时,检测CD3+CD56+NKT细胞表面CD107a的表达,GT-T551培养基中加入患者自体血清组优于加健康人血清组\[（7.10±1.94）% vs （2.73±0.79）%,（8.00±1.82)% vs (3.03±0.78)%, P <0.01\],同时优于RPMI1640+患者自体血清组\[（4.45±1.96）%、（3.30±1.47)%, P <0.01\]。结论：GT-T551培养基加患者自体血清的培养体系更有利于CIK细胞的增殖、细胞因子分泌及发挥杀伤功能,可推荐作为CIK细胞最佳培养体系。     

苦参碱对肝癌细胞HepG2增殖的影响及端粒酶活性调控的体外研究

[目的]探讨苦参碱（Ma)对肝癌细胞株HepG2增殖的影响及其端粒酶活性，端粒酶逆转录酶（hTERT)表达的调控作用。[方法]将不同浓度的Ma加入肝癌细胞株HepG2细胞，MTT试验测定用药后细胞存活率和增殖情况。同时以TRAP-ELISA方法检测其端粒酶活性；采用Lipofect脂质体转染法将携带hTERT启动子和报告基因的质粒转染至肝癌细胞株HepG2细胞，2h后加入不同浓度的Ma，孵育48h后，分别检测其报告基因萤虫素酶活性。[结果]500μg/ml以上浓度可抑制HepG2的生长；750μg/ml浓度的Ma可抑制端粒酶活性，并下调hTERT启动子的表达。[结论]Ma可抑制肝癌细胞株HepG2细胞增殖，同时可调控hTERT的表达并影响端粒酶活性。     

α-肿瘤坏死因子基因修饰人肝癌细胞经60Co辐射后细胞因子的持续分泌

α-肿瘤坏死因子(α-TNF)具有促肿瘤细胞自溶和增加肿瘤细胞的HLA抗原表达的作用,故将含信号肽的人α-TNFcDNA构建入可表达载体质粒pLXSN,体外包装成缺陷型逆转录病毒后感染人肝癌细胞株(HHCL),经筛选后得到HHCL-TNF细胞株。经不同强度的~(60)Co辐射后,测其24小时的TNF分泌量。观察~(60)Co辐射强度与TNF分泌量的关系及辐射后细胞存活期的差异。将上述辐射后细胞放入液氮冻存,复苏观察TNF分泌量的变化。经研究发现:(1)HHCL-TNF经过~(60)Co辐射后仍能持续分泌约四周,40～100G辐射强度间无显著差异;(2)HHCL-TNF细胞~(60)Co辐射后液氮冻存一段时间,复苏后仍能持续分泌TNF约三周。这些结果为进一步研究应用‘肿瘤疫苗’提供了一定的依据。     

CD3AK细胞对耐药白血病细胞的体外净化作用

目的 :观察CD3 AK细胞对耐药的白血病细胞系及慢性髓细胞白血病 (chronicmyelogenousleukemia ,CML)急变患者原代肿瘤细胞的体外净化作用。方法 :采用固化的抗CD3单克隆抗体联合小剂量IL 2诱导CD3 AK细胞 ;MTT法观察CD3 AK细胞对K5 6 2、HL6 0及其耐药株的细胞毒活性 ;肿瘤细胞集落培养 (tumorcolonyassay ,TCA)观察CD3 AK细胞对K5 6 2、HL6 0及其耐药株集落形成的抑制作用 ;流式细胞仪 (flowcytometry ,FCM)检测耐药的CML急变患者原代细胞经CD3 AK细胞净化后Pgp阳性细胞的比例变化。结果 :MT法显示CD3 AK细胞在体外对K5 6 2细胞、HL6 0细胞及其耐药株有相似的杀伤作用 ;集落培养观察CD3 AK细胞对HL6 0细胞株及其耐药株的集落形成均有较强的抑制作用 ;FCM结果显示耐药CML原代细胞经CD3 AK细胞净化后Pgp阳性细胞比例下降 2 3 2 0 %。结论 :CD3 AK细胞在体外对耐药白血病细胞株及耐药白血病原代细胞均有较强的净化作用。     

体外培养人体肝癌细胞液氮冻存7年及复苏培养

本文报告了体外培养的人体肝癌细胞系(QGY-7703)冻存于液氮。7年后复苏培养成功,分析细胞形态、增殖速度、有丝分裂和染色体计数等生物学特征无显著改变。因而证明,液氮冻存法是培养细胞长期保种的一个行之有效的方法。成败的重要因素在于选择好冻存用细胞,并掌握好冻存时缓慢降温和复苏时急速融化的速度。     

三氧化二砷对人肝癌细胞选择性抑制作用的实验研究

目的:明确三氧化二砷(As_2O_3)对人类肝癌细胞株和正常肝细胞株的体外抑制作用.方法:采用活细胞观察法、台盘兰拒拖染法和MTT比色法观察了As_2O_3对体外人肝癌细胞株QGY-7701、QGY-7703和正常人肝细胞株L-02生长的影响及其形态学变化.结果:As_2O_3能显著抑制人肝癌细胞QGY-7701和QGY-7703的生长,而对正常人肝细胞L-02无明显作用.As_2O_3作用48小时,对QGY-7701和QGY-7703细胞的IC50分别为1.537μg/ml和1.301μg/ml.结论:As_2O_3对人肝癌细胞有显著选择性抑制作用,而对正常肝细胞无明显影响,值得进一步探究其机理和临床应用价值.     

热疗对人喉癌Hep-2顺铂耐药细胞株生物学行为的影响

目的:探讨热疗对人喉癌Hep-2顺铂耐药（Hep-2/CDDP）细胞株生物学行为的影响和可能机制。方法:采用高浓度冲击联合浓度递增法诱导建立Hep-2/CDDP细胞株。采用细胞计数法检测Hep-2亲代细胞株组（未发生顺铂耐药的Hep-2细胞,采用无顺铂的RPMI 1640培养液培养）、Hep-2/CDDP细胞组、Hep...