中国大陆钉螺种群遗传学研究 Ⅰ.种群遗传变异

用采自34个现场螺点的钉螺进行水平淀粉凝胶电泳,并进行13种酶系统染色.结果17个等位基因中,7个为多态基因位点.种群间遗传距离的变化范围0.03—0.27.UPGMA、Fitch-Mar-golish最小方差法、最大相似性聚类分析图显示,聚类的组别与形态学或/和地理分布相一致.各分析指标提示,肋壳钉螺种群显著地不同于光亮钉螺种群,两组间的遗传距离为0.15.     

日本血吸虫中间宿主钉螺的种群遗传变异研究

以采自中国湖北、江苏、四川省三地现场钉螺和饲养在泰国玛希伦大学实验室的菲律宾钉螺为研究种群,用水平淀粉凝胶电泳方法研究各种群间的遗传变异.实验共观察7个酶中的14个等位点,并以杂合子、多态位点百分比和每位点平均等位基因数衡量遗传变异,结果表明中国大陆钉螺种群的变异程度较高.湖北省钉螺与菲律宾钉螺间的遗传距离最大,为0.44,湖北省与江苏省钉螺间遗传距离最小,为0.03.以UPGMA相似性聚类分析而构建的分校图谱显示中国大陆钉螺存在多亚种.     

中国大陆钉螺种群遗传学研究 Ⅱ.钉螺易感性与等位基因频率间的关系

为了探讨钉螺易感性与遗传变异间的相互关系,本研究应用Logistic回归方程模型分析中国33个地点钉螺易感性与等位基因频率间的关系。逐步回归分析结果显示,只有一个变量(Mdh—2基因频率)显著性地进入模型,回归系数为13.7069,常数为-8.7409。所建立的模型拟合原始数据完好,且种群的分类正确率达93.9％,表明Mdh—2基因位点与钉螺易感性相关。     

中国大陆日本血吸虫品系的研究 Ⅶ.五地隔离群的遗传变异及分化

本文列出了中国大陆安徽、湖北、广西、四川、云南5地日本血吸虫自然隔离群体中多态位点上的等位基因频率和杂合度。根据9个基因位点计算了中国大陆5地日本血吸虫的遗传距离(D)为0.001—0.039,遗传一致性(I)为0.962—0.999。平均基因杂合度(H)为0.332。说明它们的基因结构基本相似,亲缘关系密切。从遗传距离作出的树状图形象地表示了各地自然群体的相对进化关系。     

中国大陆钉螺种群遗传学研究 Ⅳ.钉螺等位基因酶谱

本研究采用水平淀粉凝胶电泳,对中国大陆7个地区钉螺的12个等位基因酶酶谱进行了分析。结果:在17个等位基因位点中10个为无变异的单态位点:Aldh、Ao、G6pd、Gpdh、Hbdh、Ldh、Sdh、Est-2、Est-3和Est-6;7个为变异的多态位点:Est-4、Est-5、Xdh、Mdh、Idh、Got和Ap。在检测的13个酶中,检得6个多态位点酶:EST、XDH、MDH、IDH、GOT和AP,占所测酶数的46.15％,结果提示:7地钉螺间存在着一定的亲缘关系,但其基因水平发生了变异,7个呈多态性的等位基因位点可能为影响中国大陆钉螺遗传变异较为重要的等位基因位点。     

湖北钉螺指名亚种三种群等位基因酶变异的研究

本项工作对湖北钉螺指名亚种三个地理种群的酯酶等8种酶进行了等位基因电泳图象的比较研究。结果表明8种酶系统在钉螺三个地理种群内均具有活性,表现11个基因位点。三种群间遗传距离(D)分别为0.005432,0.015428和0.005686。     

应用同工酶技术研究我国湖北钉螺(腹足纲:麂眼螺超科:圆口螺科)不稳定螺群内的遗传变异(续)

[目的 ]研究我国湖北钉螺 (腹足纲 :麂眼螺超科 :圆口螺科 )不稳定螺群内的遗传变异及作为不稳定螺群在哈笛 -温伯期望值中的变化。 [方法 ]同工酶用微量水平淀粉胶电泳进行研究。两次采集于同一地点的同工酶数据按实验时间平均分成 4部分 ,每个部分研究 34个位点 ,每个位点研究 72～ 180个钉螺。 [结果 ]4个部分每个位点的等位基因数平均 1.5～ 1.9个 ;多态位点率 38.2 %～ 17.6 %。平均杂合率低 :0 .0 33～ 0 .0 49与哈笛 -温伯期望值差异无显著性意义。去除第一部分的 10个位点 11个等位基因 ,多态位点数从 19个降至 10个。5个有数量较多等位基因的位点与哈笛 -温伯期望值有显著性差异。Nei氏与 Wright氏的遗传距离分别为 0 .0 0 3± 0 .0 0 1和 0 .0 5 4± 0 .0 0 6。 [结论 ]1在早期实验 ,最初的结果记录中有差错。此差错不能重复。2早期的差错发生在记录位点和较少出现的交互位点上。但这些差错对遗传距离无影响。3Wright氏遗传距离用于相对比较接近的群体的研究。4个部分间 ,Nei氏遗传距离差异无显著性意义 ;两次采集的螺群 Wright氏遗传距离差异具有显著性意义。原因是长江每年的洪水引起不同地点的钉螺混杂。4主要多态位点不在哈笛 -温伯期望值中 ,与预期的不稳定螺群模型一致。5研究种群遗传     

湖北钉螺指名亚种三种群等位基因酶变异的研究

本项工作对湖北钉螺指名亚种三个地理种群的酯酶等８种酶进行了等位基因电泳图象的比较研究。结果表明８种酶系统在钉螺三个地理种群内均具有活性，表现１１个基因位点，三种群间遗传距离分别为０．００５４３２，０：０１５４２８和０．００５６８６。     

肾素-血管紧张素系统三个关键基因与2型糖尿病肾病发病关系的研究

目的：了解肾素－血管紧张素系统（RAS）中三个关键基因血这紧张素I转换酶（ACE）,血管紧张素原（AGT）及I型血管紧张素受体（AGTR1）基因的4个多态位点是否与中国人2型糖尿病及其合并的糖尿病肾病（DN）的发生有关联。方法：在173例上海地区中国汉族人中用PCR基因扩增,内切酶消化或同位素标记放射自显影等方法进行基因分析。比较DN组及其亚组和对照组各组间的基因频率,并用logistic回归分析各基因多态位点和其他因素对DN发病风险的影响。结果：DN组的ACE基因等位基因D和DD型频率增高（P分别为0．022和＜0．001）,按病程划分,＜5年及≥5年亚组与DN（－）组比较亦可见等位基因频率差异,但进一步按DD型和非DD型分组,并经连续校正试验发现其阳性主要表现在病程＜5年与DN（－）组比较中,DN组的AGT－M235T多态位点基因型和等位基因频率与未合并DN的糖尿病组比较有显著意义（P分别为0．018和0．004）,表现为等位基因T与TT型增多,且仅表现于病程＜5年亚组,不同病期DN亚组间的基因频率无显著变化。ACE,AGT及AGTR1基因四个多态位点与合并的高血压,冠心病等因素经logistic回归分析后提示ACE基因及AGT－M235T为DN,尤其病程＜5年亚组的发病风险因素,结论：RAS中ACE基因I／D和AGT基因M235T多态位点与2型糖尿病合并的肾病发生相关联,前者的DD型和等位基因D以及后者的TT型和等位基因T可能参与较早起病DN的发病。     

中国大陆钉螺等位基因位点研究

检测安徽、上海、江苏、浙江、江西、湖南、湖北、四川、云南９省（市）的９地代表性钉螺的ＡＡＴ、ＡＣＰＨ、ＡＫ、ＡＯ、ＡＰＨ、ＣＫ、ＥＳＴ、ＧＤＨ、ＧＰＩ、Ｇ６ＰＤ、ＨＢＤ、ＩＳＤＨ、ＬＡＰ、ＬＤＨ、ＭＥ、ＭＤＨ、ＭＰＩ、ＮＡＤＤ、ＯＣＴ、ＰＧＭ、６ＰＧＤ、ＳＤＨ、ＳＯＤ、ＸＤＨ２４种酶。检得４０个等位基因位点，１１７个等位基因；其中变异最大的位点是ＧＰＩ和ＰＧＭ－Ⅰ。２２个位点的等位基因在３个以上。多态位点酶有１４个，占所测酶的５８．３３％。表明中国大陆钉螺存在遗传多态现象。同时发现ＰＧＭ、ＭＤＨ酶是中国大陆钉螺及日本血吸虫共有的多态位点酶，为虫、螺两者相互关系的研究提供新的线索。     

γ拟钉螺等位基因的研究

目的：探讨γ拟钉螺分类演化的遗传学基础。方法：用微量平面淀粉胶电泳法，检测浙江省开化及淳安县６个螺群宋氏γ拟钉螺和１个螺群中国γ拟钉螺的２４种等位基因酶谱。结果：共测得２９个位点，宋氏γ拟钉螺多态位点所占比例为６．９％－１３．８％；中国γ拟钉螺全部为单态位点。宋氏γ拟钉螺的种内Ｎｅｉ氏遗传距离（Ｎｅｉ＇ｓＤ）小于０．１２；但宋氏γ拟钉螺与中国γ拟钉螺两者种间Ｎｅｉ＇ｓＤ为０．７３。结论：在等位基因水平显示γ拟钉螺种内变异不明显，种间差异显著。     

趋化因子CX3C受体1基因rs3732378多态性与急性冠状动脉综合征的相关性

目的探讨趋化因子CX3C受体1(CX3CR1)基因rs3732378单核苷酸多态性与急性冠状动脉综合征(ACS)的相关性。方法连续收集中国北方汉族人群951例,其中男性520例,女性431例,年龄35~75岁。根据冠状动脉造影(CAG)结果分为2组:(1)病例组(n=512):ACS患者;(2)对照组(n=439):非冠心病患者。病例组根据CAG检查血管病变支数分为3个亚组。采用测序法测定CX3CR1基因rs3732378单核苷酸多态位点的基因型。用多因素Logistic回归分析CX3CR1基因rs3732378多态性与ACS发病风险的关系。应用酶联免疫吸附法检测血浆中趋化因子CX3C配体1(CX3CL1)表达水平。结果两组CX3CR1基因rs3732378的基因型及等位基因的分布频率无显著性差异(P0.05)。rs3732378多态位点与ACS发病风险的总体和分层分析结果表明,CX3CR1基因rs3732378多态位点的3种基因型TT、TC和CC均不能增加ACS的发病风险(P0.05)。亚组分析显示,rs3732378多态位点的基因型和等位基因与冠状动脉血管病变支数无相关性(χ2=0.135,P=0.998;χ2=0.026,P=0.987)。病例组和对照组血浆中CX3CL1表达水平在rs3732378三种基因型无差异(P0.05)。结论 CX3CR1基因rs3732378多态位点不是ACS的易感基因,rs3732378多态性没有增加中国北方汉族人群ACS的风险。     

中国大陆日本血吸虫随机抗增多态DNA（RAPD）的初步研究

目的 对中国大陆浙江、安徽、江西、湖北、湖南、四川、云南７省日本血吸虫种群进行遗传变异研究。方法 应用随机扩增多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）技术，对５条寡核苷酸随机引物扩增。结果 获得３２条ＤＮＡ片断，１７个基因位点，长度在１００ｂｐ￣２６００ｂｐ之间。各种群多态百分率（Ｐ）为５２．９￣７０．６，平均杂合性（Ｈ）为０．２６９￣０．３６３。中国大陆湖区日本血吸虫各种群间遗传距离（Ｄ）为０．０００￣０．０２３     

中国大陆日本血吸虫随机扩增多态DNA(RAPD)的初步研究

目的对中国大陆浙江、安徽、江西、湖北、湖南、四川、云南7省日本血吸虫种群进行遗传变异研究。方法应用随机扩增多态DNA（RAPD）技术，对5条寡核苷酸随机引物扩增。结果获得32条DNA片断，17个基因位点，长度在100bp～2600bp之间。各种群多态百分率（P）为52．9～70．6，平均杂合性（H）为0．269～0．363。中国大陆湖区日本血吸虫各种群间遗传距离（D）为0．000～0．023．山区种群间为0．155，湖区种群与山区种群间遗传距离为0．036～0．139。同时，P235-930bp，P293－910bP分别为四川种群和云南种群特异性DNA片断，P256－720bp为日本血吸虫雌虫特异性DNA片断。对中国大陆日本血吸虫虫株复合性和系统发生作简要讨论。     

湖北钉螺数量性状研究Ⅲ种群间形态性状变异及其空间相关分析

目的 探讨湖北钉螺种群间形态性状变异及其空间相关性。方法 采集10个省的27个现场螺点的钉螺种群标本,分别测量螺壳的形态学指标及钉螺采集点之间的地理距离,分析钉 螺种群间形态性状变异及其与地理距离的相关性。结果20个指名亚种（包括1个广西钉螺种群）钉螺种群间欧氏距离的中位数为3. 24（95% CI:2. 88～3.81）;不包括广西钉螺种群时,中位数为 3.15 (95% CI: 2.86～3.76)。6个滇川亚种钉螺种群间欧氏距离的中位数为1.69 (95% CI：1.33～ 2. 27)。无论指名亚种是否包括广西钉螺种群,滇川亚种钉螺种群间的欧氏距离均明显低于指 名亚种种群(P<;0.05)。16个肋壳钉螺种群间欧氏距离的中位数为2. 86(95% CI：2.56～3, 23);11 个光壳钉螺种群间欧氏距离的中位数为2. 24（95% CI：2.00～2.43）,明显低于肋壳钉螺种群间的 欧氏距离(P<0.05)。指名亚种包括广西钉螺种群时γ为0. 265 5 (P<0. 01),不包括时γ为0．256 7(P<0.01),肋壳钉螺种群的γ为0．312 1(P<0．01)。结论 湖北钉螺指名亚种种群间的形态性状变异大于滇川亚种,肋壳钉螺种群间的形态性状变异大于光壳钉螺。我国大陆分布的肋壳钉螺种群间的表型变异具有明显的空问结构。     

NKX2—5基因与先天性心脏病的关系

目的：探讨NKX2—5基因与先天性心脏病（congenital heart disease,CHD）的关系。方法：收集130例无血缘关系的CHD患者的临床资料和血标本,以100名无血缘关系的健康者为对照。应用聚合酶链反应扩增CHD候选基因NKX2—5的全部外显子和外显子两侧的部分内含子,采用双脱氧核苷链末端合成终止法对全部扩增片段进行测序。将所测的序列与GenBank数据库中公布的NKX2—5基因序列进行比对以识别出NKX2—5基因变异。比较识别出的NKX2—5基因多态在CHD患者和健康对照者间的频率分布差异。结果：在CHD患者的NKX2—5基因识别出2个单核苷酸多态,一个是NKx2—5基因编码序列第63位的腺嘌呤（A）变为鸟嘌呤（G）,即c．63A〉G多态;另一个是NKx2—5基因编码序列第606位的G变为胞嘧啶（C）,即c．606G〉C多态。在NKX2—5基因第606位点的等位基因G、C及其构成的3种基因型GG、GC、CC在CHD患者和健康对照者间的频率分布有显著性差异（等位基因频率比较：X^2=4．125,P=0．042;基因型频率比较：X^2=4．279,P=0．039）。但在NKX2—5基因第63位点的等位基因A、G及其构成的3种基因型AA、AG、GG在CHD患者和健康对照者间的频率分布无显著性差异（等位基因频率比较：X^2=0．704,P=0．402;基因型频率比较：X^2=0．626,P=0．429）。结论：NKX2—5基因c．606G〉C多态可能与CHD有关,等位基因606C携带者可能对CHD的易感性增加。     

中国南方汉族人群中SCN5A基因多态位点和病态窦房结综合征的关联性

目的 中国南方汉族人群中SCN5A基因多态位点C5457T(D1819D)与病态窦房结综合征（SSS）的相关性。方法 选取南方汉族SSS患者108例为病例组,以南方健康汉族人群123例为对照组,采用限制性片段长度多态性分析(RFLP),对SCN5A基因C5457T(D1819D)的多态位点进行基因型鉴定,并随机挑选样本进行测序,检验其可靠性。结果 SCN5A基因C5457T(D1819D)多态位点在中国南方汉族人群 SSS组和正常组比较,在年龄和性别上无显著性差异;基因型频率符合Hardy-Weinberg平衡定律;D1819D多态的基因型频率在两组间差异有统计学意义（P<0.05）,SSS组T等位基因高于正常组;CC为保护基因型,CC基因型对病窦有明显影响(P<0.05)。结论 中国南方汉族人群中D1819D多态位点可能和SSS发生相关;C等位基因可能是SSS的保护基因;T等位基因可能是SSS发病的易患基因。     

血管紧张素原基因和血管紧张素转换酶基因多态性与高血压

目的　研究中国人群中血管紧张素原 (AGT)基因单核苷酸多态性 (SNP)及血管紧张素转换酶 (ACE)基因插入 /缺失多态与高血压病的关系。方法　在 3 4 5例高血压病患者与 2 0 6名血压正常人中采用PCR RFLP法检测AGT基因A 2 0C ,A 6G和M 2 3 5T的多态性 ,用PCR法检测ACE基因 16内含子Alu片段插入 /缺失多态 ,同时用EM算法进行两位点连锁不平衡分析。结果　在M 2 3 5T和A 2 0C ,M 2 3 5T和A 6G ,A 2 0C和A 6G位点观察到了连锁不平衡 (P <10 - 4)。病例 对照检验显示T2 3 5等位基因频率在高血压组中高于对照组 ,且高血压病患者中ACE (DD +ID) +AGT TT2 3 5基因型频率高于对照组。结论　受检人群中AGT基因各多态频率处于两两连锁不平衡 ,但AGT基因即T2 3 5位点以隐性作用方式与高血压关联 ,T2 3 5等位基因与ACE D等位基因在高血压病发生中具协同作用     

湖北钉螺种群内AFLP分子标记遗传变异分析

目的 探讨湖北钉螺种群内的遗传变异及其程度。方法 采用扩增片段长度多态性(AFLP)分子标记技术对9省(云南、四川、广西、福建、湖南、湖北、江西、安徽、江苏)13种群湖北钉螺基因组DNA进行扩增,分析钉螺种群内的遗传变异。结果湖北钉螺13种群AFLP扩增片段位点数为403~472,江西星子钉螺种群内遗传多样性较高,多态位点频率、Nei’s基因多样性指数和Shannon’s信息指数分别为93.2%、0.345和0.510,而广西宜州钉螺种群内遗传多样性较低,以上3指标分别为55.8%、0.191和0.287;广西宜州钉螺种群内的相似性较大,相似系数(中位数)为0.904,而江苏丹徒钉螺种群内的相似性较低,相似系数(中位数)为0.748;13种群内的遗传变异差异显著(P<0.01)。结论 我国广泛分布的湖北钉螺,种群内存在一定程度的遗传变异。不同地区湖北钉螺种群内遗传变异程度不同,有的相差较大。     

湖南汉族人群脂联素基因多态性分布及其与动脉粥样硬化性脑梗死和相关危险因素的关系

目的探讨脂联素基因45T/G和276G/T多态位点在湖南地区汉族人群中的分布及其与动脉粥样硬化性脑梗死和相关危险因素的关系。方法收集163例正常对照者和161例动脉粥样硬化性脑梗死患者的血标本,聚合酶链反应限制片长多态性分析法检测脂联素基因45T/G和276G/T多态性在动脉粥样硬化性脑梗死组和正常对照组的基因频率,同时检测研究对象的血脂和血压水平。结果中国湖南地区汉族人群脂联素基因45T/G和276G/T位点等位基因频率分别是0.783/0.217和0.697/0.303。脂联素基因45T/G多态位点等位基因和基因型分布频率两组相比差异无统计学意义(P>0.05);动脉粥样硬化性脑梗死组脂联素基因276G/T多态位点TT基因型频率和T等位基因频率明显高于对照组(P<0.05),且TT基因型亚组甘油三酯水平较GG基因型亚组显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论脂联素基因45T/G多态性可能与中国湖南汉族人群动脉粥样硬化性脑梗死的发生无关;276G/T多态性可能参与中国湖南汉族人群动脉粥样硬化性脑梗死的发生,且可能影响血脂水平,276TT型者可能具有较高水平的甘油三酯。