EZH2抑制剂联合顺铂对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨EZH2抑制剂UNC1999联合顺铂对肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响。方法传代培养人肺癌A549细胞系,取生长良好的传代细胞分为对照组、联合用药组、顺铂组和UNC1999组。所有组均给予RPMI 1640培养液及10%的胎牛血清培养,对照组不加药液,联合用药组分别加入10、20、40、80、160 nmol/L UNC1999药液及2.5、5、10、20、40μg/ml顺铂药液;顺铂组分别加入2.5、5、10、20、40μg/ml顺铂药液;UNC1999组分别加入10、20、40、80、160 nmol/L的UNC1999药液;采用MTT比色法检测各组细胞增殖抑制率中IC50及联合指数(CI)。Western印迹法检测各组相关凋亡蛋白及细胞外调节蛋白激酶(ERK)及p-ERK的表达水平。流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果与对照组相比,UNC1999组、顺铂组、联合用药组细胞增殖均受到不同程度抑制(P0.05)。各组细胞增殖抑制作用存在剂量-时间依赖关系,且UNC1999与顺铂存在协同作用。UNC1999组、顺铂组、联合用药组与对照组比较细胞凋亡差异显著(P0.05)。UNC1999组、顺铂组、联合用药组中凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达明显升高,p-ERK蛋白表达明显降低,联合用药组Bcl-2表达低于对照组(P0.05)。结论 EZH2特异性抑制剂UNC199可能通过抑制MAPK-ERK细胞通路起到抑制肺癌A549细胞增殖,促进其凋亡,与顺铂单药或联合均具有协同效应。     

顺铂对人舌鳞状细胞癌细胞Tca8113细胞凋亡与自噬的影响

目的 探讨顺铂对人舌鳞状细胞癌细胞Tca8113细胞凋亡与自噬的影响.方法 体外培养人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞,给予不同浓度的顺铂(CDDP),通过MTT检测细胞增殖率;Western印迹检测CDDP对Tca8113细胞凋亡以及自噬相关蛋白表达水平的影响.结果 与对照组相比,CDDP可以明显降低Tca8113细胞增殖率(P＜0.05);Western印迹结果显示,CDDP可以明显增加凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3,Cleaved PARP以及Cytochrome C的表达水平;同时,自噬相关蛋白LC3,Beclin 1和p62表达水平也发生明显的自噬性改变.结论 CDDP可以明显抑制Tca8113细胞增殖,其增殖抑制作用可能来源于凋亡,同时CDDP可以诱导Tca8113细胞发生自噬.     

蟾蜍灵联合奥沙利铂对胃癌MGC803细胞增殖抑制及凋亡的影响

目的 研究蟾蜍灵联合奥沙利铂诱导人胃癌细胞株MG C803凋亡及对凋亡因子Bax、Bcl-2的影响.方法 应用MTr法检测不同浓度蟾蜍灵及奥沙利铂单药及联合对胃癌细胞MGC803增殖抑制作用;流式细胞术分析细胞凋亡和周期阻滞;Western印迹法检测Bax、Bcl-2蛋白的表达.结果 (1)蟾蜍灵及奥沙利铂单药均抑制MGC803细胞增殖,呈剂量时间依赖效应,且联合用药的细胞增殖抑制率高于单药组,差异有统计学意义.24、48 h及72 h联合指数(CI)分别为0.693、0.596、0.481;(2)药物作用细胞24h,流式细胞仪检测10 nmol/L蟾蜍灵及10 μg/ml奥沙利铂凋亡率分别为2.9％及4.3％,联合用药组为14.13％,与单药组对比有统计学差异;(3)Western印迹结果显示,蟾蜍灵、奥沙利铂单用于胃癌细胞24h后,Bax及Bcl-2表达无明显变化,而联合组Bax蛋白表达上调到对照组145.94％,Bcl-2蛋白下调到对照组57.14％.结论 蟾蜍灵联合奥沙利铂协同诱导胃癌MGC803细胞凋亡,且可能与下调Bcl-2、上调Bax蛋白有关.     

Beclin-1表达对舌癌细胞 Tca8113顺铂敏感性的影响

目的：观察自噬基因Beclin-1表达对舌癌细胞Tca8113顺铂敏感性的影响。方法分别构建过表达和干扰Beclin-1的真核表达载体，并建立稳定表达和稳定干扰Beclin-1的Tca8113细胞模型，RT-PCR和Western blotting法检测Beclin-1表达，MTT法检测上述细胞模型对顺铂的敏感性。结果成功建立稳定表达Beclin-1的细胞模型Tca8113/pLEX-Beclin-1，其与对照细胞系对顺铂的半数抑制浓度（IC50）分别为（11．99±0．34）、（5．03±0．16） mg/L，P＜0．01；成功建立干扰Beclin-1表达的细胞模型Tca8113/pRNAT-Beclin-1-sh1，其与对照细胞系对顺铂的IC50分别为（2．76±0．09）、（5．01±0．18）mg/L，P＜0．01。结论下调Beclin-1表达可增加舌癌细胞Tca8113对顺铂的敏感性。     

大蒜素对卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV-3/DDP增殖的影响及机制

目的探讨大蒜素对卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV-3/DDP凋亡的影响及机制。方法将SKOV-3/DDP细胞随机分为四组,大蒜素组加入40μg/mL的大蒜素,顺铂组加入40μg/mL的顺铂,联合组加入大蒜素和顺铂各40μg/mL,对照组不干预。各组分别培养24、48 h。采用MTT法检测各组细胞增殖抑制率;RT-PCR法测定Bax、Bcl-2mRNA表达;Western blot法测定Bax、Bcl-2蛋白表达。结果顺铂组、大蒜素组、联合组各时点(24 h、48 h)增殖抑制率明显高于对照组,联合组明显高于大蒜素组、顺铂组,P均<0.05。顺铂组、大蒜素组、联合组各时点Bax mR-NA和蛋白水平明显高于对照组,大蒜素组、联合组Bcl-2 mRNA和蛋白水平明显低于对照组,P均<0.05;顺铂组48 h Bcl-2蛋白明显高于对照组,P<0.05;联合组各时点Bax mRNA和蛋白水平明显高于、Bcl-2 mRNA和蛋白水平明显低于对照组,P均<0.05。结论大蒜素诱导SKOV-3/DDP凋亡作用优于顺铂,两者联合具有协同作用,其机制可能为上调Bax表达和下调Bcl-2表达有关。     

毛兰素对人肝癌细胞系HEPG2增殖、迁移、凋亡和上皮间质转化的影响及其机制

目的 观察毛兰素对人肝癌细胞系HEPG2增殖、迁移、凋亡和上皮间质转化的影响，并探讨其机制。方法取对数生长期HEPG2细胞分为对照组、毛兰素组、毛兰素+pc-DNA组、毛兰素+pc-Snail组：对照组仅为HEPG2细胞，毛兰素组加入40 nmol/L的毛兰素，毛兰素+pc-DNA组转染空白对照质粒pc-DNA并加入40 nmol/L的毛兰素，毛兰素+pc-Snail组转染Snail过表达质粒pc-Snail并加入40 nmol/L的毛兰素。各组细胞继续培养24 h后，采用平板克隆法观察各组细胞增殖能力，以细胞克隆个数表示；采用Transwell小室法观察各组细胞迁移能力，以细胞迁移个数表示；采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率；采用Western blotting法检测各组细胞Snail蛋白、凋亡相关蛋白（Bax、Bcl-2）、间质转化相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin）。结果 对照组、毛兰素组、毛兰素+pc-DNA组、毛兰素+pc-Snail组细胞克隆个数分别为（109.17±6.98）、（47.50±5.04）、（41.67±4.92）、（82.3...     

土贝母制剂联合热疗诱导Tca8113细胞凋亡及其对细胞周期的影响

目的 探讨土贝母制剂联合热疗诱导Tca8113细胞(人舌癌细胞株)增殖抑制率及其对细胞周期各时相的影响,以确定联合方案是否具有协同效应.方法 应用MTT比色法检测Tca8113细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期各时相的变化,电子显微镜观察亚细胞结构改变.结果 单纯土贝母组与联合热疗组相比,Tca8113细胞增殖抑制率明显升高(P＜0.01),且Tca8113细胞周期进程发生明显改变(G1期细胞增多,S期细胞减少,凋亡率升高);电子显微镜下可见细胞染色质趋边凝集、线粒体肿胀,可见凋亡小体.结论 土贝母制剂联合热疗可提高Tca8113细胞增殖抑制率,抑制Tca8113细胞G1期向S期转化进程,细胞凋亡率升高及亚细胞结构改变.     

LY294002对舌鳞状细胞癌Tca8113 细胞生长及凋亡的影响

目的 观察PI3k/Akt抑制剂LY294002对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞生长及凋亡的影响. 方法 用不同浓度LY294002作用于Tca8113细胞.MTT法检测Tca8113细胞抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,透射电镜观察细胞形态. 结果 经LY294002作用后,Tca8113细胞凋亡率增加;40μmol/L的LY294002作用72 h后,Tca8113细胞呈典型的凋亡改变;Tca8113的抑制率和凋亡率均与LY294002浓度和作用时间呈正相关(r分别为0.509、0.412,P均<0.01). 结论 LY294002抑制Tca8113生长并促进其凋亡.     

苯乙酸钠诱导人舌癌细胞株细胞周期进程的实验研究

目的 探讨苯乙酸钠（sodium phenylacteate,NaPA）对Tca8113细胞（人舌癌细胞株）增殖抑制率及细胞周期各时相的变化.方法 应用MTT（噻唑蓝）比色法和流式细胞仪检测NaPA对Tca8113细胞增殖抑制率的时间效应和浓度效应及细胞周期的变化.结果 NaPA对Tca8113细胞增殖有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性,流式细胞仪分析G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多.结论 NaPA能够抑制Tca8113细胞的增殖,抑制G1期细胞向S期细胞转化进程,促进Tca8113细胞凋亡.     

雌二醇影响MCA-38细胞增殖及雌激素受体表达的实验研究

目的研究雌二醇（E2）影响小鼠结肠腺癌细胞系MCA-38细胞增殖与凋亡及雌激素受体（ER）表达变化的特点与机制。方法将MCA-38细胞分为5个实验组（分别含E2浓度为0.01 nmol/L、0.1 nmol/L、1 nmol/L、10 nmol/L、100 nmol/L的培养液培养）和空白对照组,体外培养24 h。检测各组肿瘤细胞E2处理前后ERα和ERβ表达（Western blot法）、细胞增殖（MTT法）以及caspase-3表达（Western blot法）变化。结果 MCA-38细胞表达ERα、ERβ,后者是其主要ER。不同剂量的E2均影响ERα和ERβ表达,E2上调ERα蛋白表达,0.01 nmol/L、0.1 nmol/L、1 nmol/L浓度范围的E2作用最明显,与对照组相比分别使ERα蛋白表达量增加了4.7%、5.5%和5.9%（P〈0.05）。E2则使ERβ表达下降,0.1 nmol/L、1 nmol/L组最明显,分别使ERβ蛋白表达量下降了10.2%和3.9%（P〈0.05）;与对照组相比,0.01 nmol/L、0.1 nmol/L、1 nmol/L、10 nmol/L浓度E2使MCA-38细胞数目分别增加了20.47%、25.29%、37.59%和30.95%（P〈0.05）;经E2处理,MCA-38细胞的caspase-3蛋白表达量明显下降,其中以0.1 nmol/L和1 nmol/L组最为明显,分别降低20.2%和32.9%（P〈0.05）。结论 E2对MCA-38细胞的ERα和ERβ表达、细胞增殖及凋亡均产生影响,MCA-38细胞增殖和凋亡分别与ERα和ERβ表达变化密切相关。     

益智防呆方对Aβ1—40诱导大鼠海马神经元凋亡相关基因表达的影响

目的观察益智防呆方对Apl-40诱导大鼠海马神经元凋亡相关基因表达的影响。方法大鼠随机分为空白组、模型组、中药小、中、大剂量组及安理申组,双侧侧脑室注射Aβ1-40复制AD大鼠模型。给药4w后提取脑内海马神经元总RNA,RT—PCR测定Caspase-3、Bcl-2、Bax及p53表达。结果与空白组比较,模型组海马神经元Bcl-2表达明显减少妒〈0．01）,Caspase-3、Bax、p53表达明显增加俨〈0．01）;与模型组比较,益智防呆方能上调海马神经元Bcl-2表达俨〈0．01）,下调Caspase-3、Bax、p53表达俨〈0．01）。结论益智防呆方对改善学习记忆障碍的机制可能与上调海马神经元Bcl-2基因表达,下调Caspase-3、Bax、p53基因表达有关。     

新VEGFR2靶向抑制剂筛选及其抗肿瘤生物学活性检测

目的从8种新合成血管内皮细胞生长因子受体2（vascularendothelialgrowthfactorreceptor2,VEGFR2）靶向抑制剂中筛选有效抑制VEGFR2的药物,并检测其抗肿瘤效果。方法8种VEGFR2靶向抑制剂（标记为1—8号）各配成6种浓度分别作用于人脐静脉血管内皮细胞（humanumbilicalveinendothelialcells,HUVEC）和舌癌细胞株（Tea8113）细胞,同时设置5-氟尿嘧啶（5-FU）为阳性对照组,无药物组为空白对照组。用噻唑蓝（MTT）法检测细胞生长情况,免疫细胞化学法检测饱和浓度VEGFR2抑制剂组和空白对照组细胞VEGFR2表达,以验证抑制剂对VEGFR2的作用效应。结果与空白对照组相比,阳性对照组能显著抑制这两种细胞的生长增殖（P〈0．05）,不同浓度各VEGFR2靶向抑制剂组对这两种细胞生长增殖的差异均无统计学意义（P〉0．05）。免疫细胞化学结果显示,空白对照组Tca8113细胞和HUVEC细胞膜上VEGFR2高表达;与空白对照组相比,饱和浓度不同抑制剂组的Tca8113细胞中只有6号试剂组可以显著下调细胞膜上VEGFR2表达（P=0．000）,而HUVEC各组VEGFR2表达差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论这些VEGFR2靶向抑制剂对人脐静脉血管内皮细胞和舌癌细胞生长增殖无抑制作用,其中只有6号抑制剂能显著下调舌癌细胞VEGFR2表达,可以作为进一步研究的候选药物。     

氨溴索对大鼠胃内容物吸入性肺损伤细胞凋亡的影响

目的研究细胞凋亡在胃内容物吸入性肺损伤中的作用机制,并初步探讨氨溴索对肺损伤发生后细胞凋亡的影响。方法 30只健康Sprague-Dawley大鼠随机分为3组:对照组、损伤组、氨溴索组。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Bc12(B cell lymphoma/lewkmia-2)蛋白、Bax(Bc12 associated x protein)蛋白及Caspase-3蛋白表达;DNA原位末端标记(TUNEL)法测定肺组织细胞凋亡指数。结果与对照组比较,损伤组中Bax蛋白、Caspase-3蛋白表达增多,细胞凋亡指数增高;Bc12蛋白表达减少;差异均显著(P<0.05)。与损伤组比较,氨溴索组Bax蛋白、Caspase-3蛋白表达减少,细胞凋亡指数降低;Bc12蛋白表达增高;差异均显著(P<0.05)。结论细胞凋亡参与了胃内容物吸入后肺损伤发病过程,氨溴索在吸入性肺损伤组织中发挥抗细胞凋亡作用,可能机制在于调控死亡信号通路中Bax/Bc12蛋白表达相关。     

顺铂对胃癌细胞Bax和Bcl-2表达的影响

目的通过研究顺铂对人胃癌BGC-823细胞Bax和Bcl-2的影响,探讨顺铂对人胃癌BGC-823细胞增殖和凋亡的影响及可能的机制。方法用化疗药物顺铂以不同浓度、不同时间处理对数期生长的人胃癌BGC-823细胞,采用MTT法检测顺铂对BGC-823细胞增殖抑制率的影响,采用免疫印迹和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测Bax及Bcl-2蛋白和mRNA的表达。结果顺铂对人胃癌细胞BGC-823生长增殖具有明显抑制作用,其效应成浓度和时间依赖性（P〈0．05）。不同浓度的顺铂处理BGC-823细胞24小时后,Bax蛋白和mRNA水平成浓度依赖性增加（P〈0．05）,而Bcl-2蛋白和mRNA水平成浓度依赖性减少。结论经顺铂处理的人胃癌BGC一823细胞,不论是在转录水平还是在翻译水平均上调了Bax的表达,同时使Bcl-2表达下调,此途径可能为顺铂所诱导肿瘤细胞凋亡的机制之一。     

调控自噬对H9c2心肌细胞缺氧／复氧损伤的影响

目的探讨调控自噬水平对H9c2心肌细胞缺氧／复氧（H／R）损伤的影响及意义。方法将H9c2心肌细胞缺氧2h／复氧4h,建立H／R损伤模型。以3-甲基腺嘌呤（3-MA）为自噬特异抑制剂和雷帕霉素为自噬增强剂,试验随机分为四组：正常对照组（C组）、H／R组、H／R＋100mol／L3-MA组（M＋H／R组）、H／R＋100nmol／L雷帕霉素（R＋H／R组）,应用MTT法检测细胞活力,透射电镜检测心肌细胞自噬小体,流式细胞技术检测细胞凋亡比例,Westernblot法检测自噬相关蛋白LC3、Beclin1,凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及下游活性片段Caspase-9、Caspase-3蛋白表达。结果H／R组明显诱导H9c2心肌细胞自噬发生、细胞活力下降、凋亡增加（P〈O．01）．Westernblot检测发现,Bax、Caspase-9、Caspase-3活性片段蛋白表达明显增加,Bcl-2表达明显抑制,Bax／Bcl-2比值、活化蛋白Caspase-3、Caspase-9表达增加（P〈O．01）;M＋H／R组H／R损伤作用明显减弱,线粒体凋亡通路及下游蛋白表达抑制（P〈O．01）;而R＋H／R组线粒体凋亡通路进一步激活,促进细胞凋亡发生（P〈O．01）。结论自噬在H9c2心肌细胞H／R损伤中起到致命性作用,抑制自噬可保护心肌细胞H,R氧化应激损伤,其机制与抑制线粒体凋亡通路有关。     

牡蛎活性肽对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨牡蛎活性肽BPO G50—Ⅱ对人舌鳞癌Tea8113细胞增殖和凋亡的影响。方法不同浓度BPO G50-Ⅱ作用于体外培养的人舌鳞癌Tea8113细胞,作用24、48、72h时计数拒染活细胞数,计算生长抑制率（IR）和IC50采用光镜、电镜观察48h后细胞形态及超微结构变化;荧光染色法观察BPOG50-Ⅱ作用后的凋亡情况。结果BPOG50-Ⅱ作用后IR明显降低,呈剂量与时间依赖性;24、48、72h的IC50分别为1．50、0．57、0．20g／L;电镜观察细胞出现明显凋亡,荧光显微镜下见细胞出现凋亡改变。结论牡蛎活性肽对人舌鳞癌细胞株Tea8113体外增殖具有抑制作用,可引起细胞形态学改变并能诱导其发生凋亡。     

tBHQ对无机砷诱导HaCaT细胞凋亡中的保护作用

目的观察tBHQ对内源性线粒体凋亡通路和凋亡相关蛋白Bel-2等蛋白表达的影响,探讨tBHQ在无机砷诱导HaCaT细胞凋亡过程中的作用。方法采用分光光度法检测Caspase-3蛋白活力;Westernblot法分析细胞内Caspase-3、CytC、Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果NaAsO2单独作用于HaCaT细胞24h,线粒体中CytC蛋白表达降低,而胞浆中CytC蛋白表达则随染砷剂量的增加而明显升高。tBHQ预处理12h后再分别暴露于NaAsO2,线粒体中CytC蛋白表达明显恢复,胞浆中CytC蛋白表达则随tBHQ剂量的增加而明显回落。此外,NaAsO。单独作用于HaCaT细胞24h,Procaspase-3蛋白表达降低,而Caspase-3活化程度均显著高于对照组（P〈0．01）,tBHQ预处理12h后再暴露于NaAsO2,Procaspase-3蛋白表达均明显高于相同浓度砷单独作用组,而且Caspase-3酶活力得到明显抑制,差异均具有统计学意义（P〈0．05）。NaAsO：单独作用于HaCaT细胞24h,与对照组相比Bcl-2蛋白表达降低,而Bax蛋白表达明显升高。tBHQ预处理12h后再分别暴露于NaAsO2,Bcl-2蛋白表达明显恢复,而Bax蛋白表达则随tBHQ剂量的增加而减少。结论tBHQ能够影响线粒体凋亡途径拮抗NaAsO2诱导的人皮肤角质细胞凋亡;tBHQ能够诱导调控凋亡相关蛋白Bcl-2／Bax从而发挥抗凋亡作用。     

超声辐照载紫杉醇微泡对大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的 探讨超声辐照载紫杉醇微泡对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的影响及其作用机制.方法 将体外培养的大鼠胸主动脉VSMCs用血小板衍生生长因子-BB刺激后分组如下:对照组(A组)、超声辐照+微泡组(B组)、超声辐照+载紫杉醇微泡组(C组)、单纯载紫杉醇微泡组(D组)和紫杉醇组(E组).采用频率1MHz、声强0.3W/cm2的连续波超声辐照VSMCs 120s,用流式细胞仪、Annexin V/PI染色和免疫细胞化学技术检测各组细胞周期、细胞凋亡以及凋亡相关蛋白表达的变化.结果 与A组比较,各组S期细胞比例均显著降低(P＜0.01),B组G0/G1期细胞比例显著增高(P＜0.01),D组和E组G2/M细胞比例显著增高(P＜0.01),C组G0/G1期细胞比例和G2/M细胞比例均显著增高(P＜0.01).与A组比较,B组和C组VSMCs凋亡率显著增高(P＜0.01),Bax蛋白表达显著上调、而Bcl-2蛋白表达则显著降低(P＜0.01).结论 超声辐照载紫杉醇微泡可诱导VSMCs凋亡,其机制可能是微泡介导的超声空化效应,致Bax蛋白表达上调及Bcl-2蛋白表达下调.     

大黄素体外逆转口腔鳞癌耐药细胞株KBV200的机制初步探讨

目的初步探讨大黄素（EM）体外逆转口腔鳞癌耐药细胞株KBV200的机制。方法用MTT法测定EM对KBV200细胞的逆转作用及量效关系。Western blot法、免疫细胞化学法分别检测单用长春新碱（VCR）和EM联合VCR处理KBV200后,细胞中耐药相关蛋白P-gp、肺耐药相关蛋白（LRP）的量,GST-π、TOPO-Ⅱ的活性,以及肿瘤细胞凋亡蛋白P53、Bcl-2/Bax比值的变化。结果0.7、1.0和1.4μg/ml的EM及5.0μg/ml维拉帕米（VRP）分别联合VCR对KBV200的逆转倍数依次为1.44、2.87、1.76和1.83倍。与单用VCR组相比,EM联合VCR组上调P53的表达（P〈0.01）,增强TOPO-Ⅱ的活性（P〈0.01）,下调P-gp的表达（P〈0.01）;下调LRP的表达量及Bcl-2/Bax比值（P〈0.01）。结论EM有逆转人口腔鳞癌细胞KBV200多药耐药性的作用,其机制可能与提高肿瘤细胞内药物的累积量,促进肿瘤细胞的凋亡有关。