miR-181a、miR-181b在人胃癌细胞和组织中的表达

目的:研究miR-181a、miR-181b在不同分化程度人胃癌细胞株和胃癌组织中的表达情况,探索其在胃癌发生发展过程中的作用.方法:体外培养3种不同分化程度的胃癌细胞株(AGS,SGC-7901、MGC-803)及正常胃黏膜细胞GES-1,收集28例胃癌患者手术切除的癌组织及正常组织样本,通过实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerasechain reaction,qRT-PCR)方法检测上述细胞和组织中miR-181a、miR-181b的表达量,比较胃癌细胞与正常胃黏膜细胞、胃癌组织与正常胃组织中miR-181a,miR-181b表达的差异性.结果:经qRT-PCR方法检测发现,AGS、S GC-7901、MGC-803 3种胃癌细胞中miR-181a及miR-181b的表达量均高于GES-1细胞中的表达量(P0.05),而AGS,SGC-7901、MGC-803 3种胃癌细胞之间miR-181a及miR-181b的表达量差异均无统计学意义(P0.05).与正常胃组织相比,miR-181a,miR-181b在胃癌组织中的表达量显著升高(P0.05).Ⅲ/Ⅳ期组胃癌组织中miR-181a,miR-181b的相对表达量高于Ⅰ/Ⅱ期组(P0.05).有淋巴结转移组胃癌组织中miR-181a,miR-181b的相对表达量高于无淋巴结转移组(P0.05).miR-181a,miR-181b的相对表达量与年龄、性别、胃癌的分化程度无明显关系(P0.05).结论:miR-181a、miR-181b在胃癌细胞和组织中高表达,两者的表达水平与胃癌的分期、淋巴结转移相关,可能在胃癌的发生发展中发挥癌基因的作用.     

MicroRNA-129通过靶向调控HMGA2抑制胃癌细胞增殖、侵袭

背景:越来越多的研究表明microRNA在胃癌发生、发展中起重要作用。有研究表明miR-129在胃癌组织中表达异常,但其对胃癌细胞增殖、侵袭的作用仍不明确。目的:探讨miR-129在胃癌组织和胃癌细胞株中的表达及其影响胃癌细胞增殖和侵袭的机制。方法:收集82例胃癌组织及其相应癌旁组织,培养人胃黏膜上皮细胞株和不同的胃癌细胞株,以q PCR法检测miR-129表达。将miR-129 mimic或miR-NC转染胃癌SGC-7901细胞后,转染HMGA2过表达质粒。以克隆形成实验观察细胞增殖情况,Transwell小室法检测细胞侵袭情况,Pearson相关分析评估miR-129表达与HMGA2表达的相关性,荧光素酶实验检测荧光素酶活性,q PCR和蛋白质印迹法分别检测miR-129、HMGA2 mRNA和蛋白表达。结果:与癌旁组织相比,胃癌组织中miR-129表达明显下降(P0.05);与人胃黏膜上皮细胞株GES-1相比,各胃癌细胞株中miR-129表达明显下降(P0.05)。与miR-NC组相比,miR-129 mimic组SGC-7901细胞增殖、侵袭能力均明显下降(P0.05)。胃癌组织中HMGA2 mRNA表达明显增加(P0.05),并与miR-129表达呈负相关(r=-0.543 9,P0.01)。野生型miR-129 mimic组荧光素酶活性显著低于miR-NC组(P0.05);转染miR-129 mimic后HMGA2 mRNA和蛋白表达显著降低(P0.05)。与miR-129+阴性对照组相比,miR-129 mimic+HMGA2组细胞增殖、侵袭能力明显升高(P0.05)。结论:miR-129在胃癌组织和细胞中低表达,其可通过下调HMGA2抑制SGC-7901细胞的增殖和侵袭。     

DNA甲基转移酶在胃癌中的表达及其意义

背景:DNA甲基化在胃癌发生、发展中起重要作用,但DNA甲基化需要DNA甲基转移酶(DNMTs)的修饰。目的:探讨DNMTs在胃癌发生、发展中的作用及其临床意义。方法:采集80例胃癌组织及其癌旁正常组织,以免疫组化法检测DNMT1、DNMT3a、DNMT3b蛋白表达,并分析其与胃癌临床病理特征的关系。采用qRT-PCR和蛋白质印迹法分别检测4种胃癌细胞株和正常胃黏膜上皮细胞株中DNMT1、DNMT3a、DNMT3b mRNA和蛋白表达。结果:与癌旁组织相比,胃癌组织中DNMT1阳性表达率显著升高(68.8%对10.0%,P0.01)。胃癌组织中DNMT1阳性表达率显著高于DNMT3a和DNMT3b(68.8%对38.8%、40.0%,P0.05),而癌旁组织中DNMT1阳性表达率显著低于DNMT3a和DNMT3b(10.0%对60.0%、52.5%,P0.05)。DNMT1阳性表达与胃癌浸润深度、淋巴结转移以及TNM分期明显相关(P0.05),而DNMT3a和DNMT3b与胃癌临床病理特征均无关。与正常胃黏膜上皮GES-1细胞相比,胃癌细胞株中DNMT1 mRNA和蛋白表达明显增加,而DNMT3a和DNMT3b mRNA和蛋白表达明显降低。DNMT1表达与胃癌细胞分化程度有关(P0.05)。结论:DNMT1可能在胃癌的发生、发展中起有重要调节作用。     

miR-638对胃癌细胞侵袭和迁移的影响及其分子机制

目的探讨miR-638是否可通过直接调控靶向性别决定区Y框蛋白(SOX)2抑制上皮-间质转化(EMT)相关通路从而抑制胃癌细胞的侵袭迁移。方法 qRT-PCR检测miR-638在100对胃癌组织及癌旁组织中的表达、检测miR-638在7株胃癌细胞系及1株正常胃黏膜细胞中的表达。Transwell和Wound Healing实验验证分别转染miR-638模拟物(miR-638 mimics)及其无关对照寡核苷酸序列(scramble)到胃癌细胞AGS中时对细胞的侵袭和迁移能力的影响。Target Scan软件预测miR-638的靶基因、将野生型或突变型SOX2的3'-UTR区域克隆到荧光素酶报告基因的下游(SOX2-wt或SOX2-mut)并分别与miR-638 mimics或scramble共转染,荧光素酶报告基因实验验证所预测的靶基因为SOX2,qRT-PCR和Western印迹分别检测转染miR-638 mimics和scramble后SOX2的mRNA和蛋白表达的及EMT相关蛋白表达。结果 miR-638在胃癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织,同时miR-638在胃癌细胞系中的表达水平也显著低于正常胃黏膜细胞系。转染miR-638后,胃癌细胞AGS的侵袭和迁移能力显著低于scramble组(P<0.05)。在共转染miR-638或scramble和SOX2-wt的两组中,共转染miR-638和SOX2-wt组的荧光素酶活性强度降低了约43.1%(P<0.05)。转染miR-638后,SOX2的mRNA和蛋白表达水平均显著下调;EMT相关的上皮标志物钙黏附蛋白E(E-cadherin)的表达显著增加,而EMT相关的间质标志物神经钙联素(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达则显著降低(P<0.05)。结论 miR-638可通过靶向调控SOX2而影响EMT,抑制胃癌细胞AGS的侵袭和迁移。     

miR-596在老年胃癌组织中的表达及临床意义

目的分析miR-596在老年胃癌组织中的表达及临床意义。方法选取90例老年胃癌患者作为研究对象,检测对比患者胃癌组织和癌旁正常组织中的miR-596表达水平,对比分析miR-596高表达水平与低表达水平患者的临床特征,利用CCK-8实验与Transwell穿孔实验分析AGS细胞的增殖与侵袭能力。结果患者胃癌组织中的miR-596平均表达水平为(1.31±0.14),显著低于癌旁正常组织中的(2.21±0.44,P0.05)。90例患者中miR-596高表达水平患者42例,低表达水平患者48例,两组患者的性别、肿瘤细胞分化程度差异无统计学意义(P0.05),老年胃癌患者的miR-596表达水平和患者的淋巴结转移情况、TNM分期及肿瘤直径具有显著的相关性(P0.05);正常胃癌细胞的相对OD值为(1.01±0.08),显著低于转染miR-596胃癌细胞(0.57±0.04,P0.05),miR-596具有显著的抑制胃癌细胞增殖的作用;Transwell穿孔实验中,正常胃癌细胞的相对细胞数为(1.02±0.17),显著低于转染miR-596胃癌细胞(0.59±0.10,P0.05),miR-596对于胃癌细胞的侵袭具有显著的抑制作用。结论老年胃癌组织中的miR-596表达水平与癌旁组织具有显著差异,并且与患者的病情病症具有显著相关性,通过miR-596表达水平能够对老年胃癌进行科学监测分析,并且miR-596具有显著的抑制胃癌细胞增殖与侵袭的作用。     

GFPT2在胃癌中的表达及作用的研究

目的通过检测胃癌和癌旁正常组织以及5种细胞株中谷氨酰胺果糖-6-磷酸转氨酶2(GFPT2)mRNA和蛋白的表达水平,探讨GFPT2表达与胃癌发生、转移的关系及意义。方法利用实时荧光定量PCR及Western blotting法检测GFPT2在33例患者配对的新鲜胃癌组织和癌旁正常组织(距离肿瘤边缘5 cm)标本、5种细胞株GES、MGC803、MKN45、BGC823及AGS中的表达情况,并利用免疫组织化学技术检测GFPT2在82例患者配对的胃癌及癌旁正常组织石蜡标本中的表达情况。结果 GFPT2 mRNA和蛋白在81.82%(27例)胃癌中呈高表达,且其在伴有肝转移的胃癌组织中的表达水平明显高于不伴有肝转移者。正常胃黏膜上皮细胞株GES中GFPT2 mRNA的表达水平明显低于胃癌细胞株MGC803、MKN45、BGC823和AGS(P0.05);胃黏膜上皮细胞株GES中GFPT2蛋白表达水平低于胃癌细胞株MGC803、MKN45、BGC823(P0.05),但与胃癌细胞株AGS中GFPT2蛋白表达水平差异无统计学意义。高转移潜能细胞株MKN45和BGC823中GFPT2的表达水平明显高于低转移潜能细胞株AGS及MGC803(P0.05)。GFPT2表达水平与胃癌分化程度呈负相关,与远处转移呈正相关(P0.05)。结论 GFPT2在胃癌组织中的表达上调,且与其转移密切相关,推测GFPT2可能具有促进胃癌转移的作用。     

miR-29对胃腺癌细胞侵袭力的影响

目的探讨miR-29对胃腺癌细胞侵袭力的影响,以期为胃癌的转移、侵袭机制提供线索。方法采用实时荧光定量PCR技术检测46例患者胃腺癌标本及癌旁组织中miR-29表达,分析与患者临床病理特征的关系。结果 PCR反应检测结果显示miR-29a、miR-29b、miR-29c在胃癌组织中相对含量分别为14.13±5.78、9.81±1.95、16.77±2.04,在癌旁组织中分别为31.64±10.26、26.88±5.03、52.57±8.02,胃癌组织中的miR-29相对含量明显低于癌旁组织(P0.05);将胃癌组织标本与癌旁组织标本中的miR-29相对含量计算比值(C/P),患者不同性别、年龄、TNM分期、浸润深度、分化程度时C/P值相比,差异无统计学意义(P0.05);存在淋巴结转移时miR-29a C/P值明显低于无淋巴结转移时(P0.05),存在远处转移时miR-29b、miR-29c C/P值明显低于无远处转移时(P0.05)。结论胃腺癌组织中miR-29表达明显低于癌旁组织,miR-29a在淋巴结转移及miR-29b、miR-29c在远处转移患者胃腺癌组织中表达降低,提示其可能与胃癌的侵袭及转移有关。     

miR-33a对胃癌细胞生物学功能的影响

目的探究miR-33a对胃癌细胞生物学功能的影响。方法收集胃癌患者胃癌组织标本40例,同时收集相应癌旁正常组织40例,采用实时定量PCR检测各组织中miR-33a相对表达量。以脂质体为载体将miR-33a模拟物转染于人胃癌细胞株SGC-7907(miR-33a mimics组),以转染脂质体的SGC-7907细胞为阴性对照组(miR-NC组),未转染的SGC-7907细胞为对照组(Control组)。采用CCK-8法检测各组细胞孵育不同时间后的增殖能力,Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭,并检测各组粘附细胞数随孵育时间的变化。结果胃癌组织中miR-33a相对表达量明显低于癌旁正常组织(P 0. 01)。随着孵育时间延长,各组细胞增殖能力增强,且miR-33a mimics组增殖细胞数高于miR-NC组及Control组(P 0. 05)。miR-33a mimics组细胞迁移数及侵袭数均少于miR-NC组及Control组(P 0. 05),其粘附细胞数少于miR-NC组(P 0. 01)。结论胃癌组织低表达miR-33a,提升miR-33a表达量能明显抑制胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭及粘附能力。     

LINC00963通过miR-146a-5p/NFE2L1轴调控胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

背景长基因间非编码RNA 00963(long intergene noncodingRNA00963,LINC00963)在肿瘤表达上调,但LINC00963在胃癌中的功能和作用机制并未阐明.Starbase预测显示微小RNA(microRNA,miR)-146a-5p可能是LINC00963的靶基因,核因子类红细胞2相关因子1(nuclear factor erythroid-2 like 1, NFE2L1)可能是miR-146a-5p的靶基因.本研究假设LINC00963可能通过调控miR-146a-5p/NFE2L1轴表达影响胃癌细胞增殖、迁移和侵袭.目的探讨LINC00963对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制.方法选取42例胃癌患者的癌组织及癌旁组织,实时定量PCR(RT-qPCR)检测胃癌组织中LINC00963表达水平;RT-qPCR检测胃癌细胞系SNU-1、AGS、HS-746T中LINC00963、miR-146a-5p和NFE2L1mRNA的表达水平;将胃癌细胞SNU-1分为正常对照(NC)组、siLINC00963组、si-NFE2L1组、si-NC组、miR-146a-5p组、miR-NC组、si-LINC00963+pcDNA-NC组、siLINC00963+pcD NA-NFE2L1组; CCK-8检测细胞活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告实验检测LINC00963、miR-146a-5p、NFE2L1之间的靶向关系.结果胃癌组织及胃癌细胞系SNU-1、AGS、HS-746T中LINC00963表达水平升高,胃癌细胞系中miR-146a-5p表达水平降低, NFE2L1 mRNA表达水平升高(P0.05).LINC00963、NFE2L1低表达或miR-146a-5p高表达,胃癌细胞SNU-1的活性降低,细胞迁移和侵袭数量减少(P0.05).高表达NFE2L1可以逆转LINC00963低表达对SNU-1细胞的作用. LINC00963靶向调控miR-146a-5p; miR-146a-5p靶向调控NFE2L1.结论LINC00963低表达通过调控miR-146a-5p/NFE2L1轴抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭.     

miR-191在胃癌组织中的表达及其靶基因的预测

目的:分析胃癌组织中miR-191的表达及预测其靶基因,并检测靶基因在胃癌组织中的表达.方法:胃癌及配对癌旁正常组织标本50例,应用基于SYBRGreenⅠ的实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-191的表达情况,后用2-??CT方法进行相对定量分析.利用生物信息学软件对miR-191进行靶基因预测.用免疫组织化学检测靶基因在胃癌组织中的表达情况,并分析其与miR-191表达情况的关系.结果:miR-191在胃癌组织中的表达显著高于癌旁正常组织[0.0314(0.0037-0.4924)vs0.0240(0.0037-0.1593),P<0.05],miR-191与临床病理特征(性别、年龄、病理组织分型、淋巴结转移和TNM分期)无显著相关性.对miR-191预测得到磷脂酶C-delta1(phospholipaseC-delta1,PLCD1)、SOX4等9个靶基因,其中SOX4和NDST1被证明是miR-191的靶基因.PLCD1在胃癌组织中的表达显著低于癌旁正常组织(56.7%vs96.7%,P<0.01),且其与miR-191在胃癌中的表达呈负相关(90%vs30%,r=-0.639,P<0.01).结论:miR-191在胃癌组织中呈高表达,可能通过调控PLCD1对胃癌的发病起重要作用.     

Wnt-5a基因在胃癌中的表达及意义

目的:探讨Wnt-5a基因在胃癌发生发展过程中的表达及意义.方法:采用实时定量RT-PCR方法对10例胃癌和癌旁组织Wnt-5a mRNA进行检测;免疫组织化学SP法检测84例胃癌、癌旁组织及20例正常胃黏膜Wnt-5a和β-catenin蛋白的表达.结果:胃癌和癌旁组织中Wnt-5a mRNA表达的相对含量分别为5.9194±1.869和1.281±0.744(P<0.05);Wnt-5a蛋白在胃癌和癌旁组织的表达阳性率分别为40.54%(34/84)和14.29%(12/84),差异具有统计学意义(P<0.01),肿瘤中Wnt-5a上调表达相关于高的TNM分期和淋巴结转移(P<0.0 1).β-catenin在胃癌及癌旁组织中异常表达率分别为70.23%(59/84)、38.1%(32/84),两者差异表达具有统计学意义(P<0.01),癌组织中β-catenin的异常表达相关于肿瘤的TNM分期和淋巴结转移(P<0.05).胃癌中Wnt-5a和β-catenin蛋白表达呈负相关关系(P<0.05).结论:Wnt-5a在胃癌中可能发挥癌基因样作用,其异常活化可能部分参与了胃癌发生的始动过程,并可能相关于肿瘤差的预后.Wnt-5a与β-catenin在胃癌发生过程可能经由不同的信号途径在胃癌进展中发挥作用.     

胃癌组织中miR-200a、miR-92a表达变化与患者临床病理参数和预后的关系

目的 探讨胃癌组织中微小RNA(miR)-200a、miR-92a表达变化及与患者临床病理参数和预后的关系.方法 选择104例胃癌患者,采用RT-qPCR法检测胃癌及癌旁正常胃组织中miR-200a、miR-92a表达.分析miR-200a、miR-92a表达与胃癌患者临床病理参数的关系.Kaplan-Meier生存分...     

miRNA181a在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的探讨miR-181a基因表达与肝细胞癌发生发展以及肿瘤病理学特征之间的关系。方法提取30例肝细胞癌组织及癌旁组织和10例肝血管瘤患者的肝脏组织的总RNA,用Real time-PCR法检测miR-181a在上述组织中的表达情况。结果肝细胞癌组织中miR-181a表达与癌旁组织相比差异无统计学意义(P>0.05);与正常肝脏组织相比,miR-181a在肝细胞癌组织中的表达水平显著低于正常对照组织,差异有统计学意义(P<0.01);miR-181a表达下调与肝细胞癌分化程度、临床分期和合并肝硬化明显相关(P<0.05),与肝细胞癌的大小、血AFP浓度、HBV感染均无明显相关性(P>0.05)。结论 miR-181a表达下调参与肝细胞癌的发生发展过程,miR-181a异常表达与肝细胞癌的肿瘤分化程度、临床分期和合并肝硬化相关。     

microRNA-146a基因多态性与胃癌的相关性分析

目的分析microRNA-146a基因多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)及miR-146a表达水平与胃癌的关系。方法纳入胃癌患者86例设为胃癌组,取胃癌及自身正常胃癌旁组织,另取正常胃黏膜42例作对照设为对照组。使用基因测序方法确定单核苷酸多态性的等位基因,分析不同基因型与胃癌发生及转移的关系。使用RT-PCR方法检测并比较不同基因型胃黏膜组织中miR-146a表达量;对比癌组织与自身正常组织中miR-146表达量;同时比较转移患者以及未转移患者癌组织miR-146表达量。结果胃癌组与对照组miR-146a基因型分布不同,Logistic回归显示GG及GC是胃癌发病危险因素;对照组中GG及GC基因型携带者miR-146a表达量较胃癌基因型携带者低;胃癌患者中癌组织miR-146a水平较其自身正常组织低。转移患者及未转移患者基因型分布亦有所不同,前者GG基因型比例较高,miR-146a表达量则降低,显示GG是胃癌转移的危险因素之一。结论 miR-146a多态性中的G等位基因是胃癌发病和转移的危险因素之一,可能与其导致的较低miR-146a表达量有关。     

胃癌和正常胃黏膜上NAG-1表达的比较

目的探索NAG-1在胃癌、癌旁正常组织和正常胃黏膜上的表达情况及在胃癌发生发展中的作用。方法采用免疫组化SP法、RT-PCR法检测胃癌组织、癌周正常组织及正常胃黏膜上NAG-1蛋白及mRNA的表达。结果 NAG-1蛋白在癌旁正常组织表达较强,高于正常胃黏膜及胃癌NAG-1蛋白表达量,NAG-1蛋白在正常胃黏膜表达量高于胃癌;NAG-1mRNA在癌旁正常组织的表达量高于正常胃黏膜及胃癌,NAG-1mRNA在正常胃黏膜表达量高于胃癌;NAG-1蛋白在中高分化胃癌表达量高于低分化胃癌;相关性分析发现:NAG-1蛋白表达与胃癌的浸润程度、TNM分期及肿瘤大小无明显相关性。结论 NAG-1在胃癌的发生发展中可能扮演抑癌基因的角色,其表达的减弱或缺失可能导致胃癌发生。     

miR-133b、Bcl-w在老年食管鳞癌中表达及相关机制

目的 探讨microRNA(miR)-133b、B细胞淋巴瘤(Bcl)-w在老年食管鳞状细胞癌中的表达及对食管鳞状细胞癌细胞的影响。方法 使用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测30例老年患者食管鳞状细胞癌组织及其对应癌旁组织中miR-133b及Bcl-w mRNA表达。将miR-133b mimics及阴性对照转染至食管鳞状细胞癌ECA109细胞株，检测转染效率。检测转染后ECA109细胞的增殖和凋亡情况，使用TargetScan和miRDB软件预测miR-133b的靶基因，并通过双荧光素酶报告实验方法验证，Western印迹检测靶基因Bcl-w蛋白表达。结果 食管鳞状细胞癌中miR-133b mRNA表达量明显低于癌旁组织(P<0.001),而食管鳞状细胞癌中Bcl-w蛋白表达量明显高于癌旁组织(P<0.001),miR-133b与Bcl-w表达呈负相关(r=-0.792,P<0.01)。miR-133b mimics转染能明显上调ECA109细胞中的miR-133b水平，并明显降低其增殖能力，明显促进其凋亡(P<0.001)。miR-133b与B...     

非甾体抗炎药物活化基因-1的表达水平与胃癌发生发展的相关性研究

[目的]研究正常黏膜、癌旁正常组织、胃癌上非甾体抗炎药物活化基因-1(NAG-1)的表达情况及胃癌的发生发展与NAG-1的关系。[方法]测定正常胃黏膜、癌旁组织正常黏膜及胃癌组织上的mRNA及NAG-1的表达情况,可分别采用RT-PCR、免疫组化SP法测定。[结果]NAG-1蛋白在正常胃黏膜组织、癌旁正常组织、胃癌组织上的表达水平均不同,其中在癌旁正常组织的表达水平最高,明显高于其他2种组织中NAG-1蛋白的表达水平(P<0.01)。其次为正常黏膜的NAG-1蛋白的表达水平;而胃癌组织中的NAG-1蛋白的表达水平是最低的。同时NAG-1mRNA的表达水平也具有相同的规律,NAG-1mRNA在癌旁组织中表达最高,在正常组织黏膜中次之,而在胃癌黏膜上的表达最低。NAG-1mRNA在分化水平不同的胃癌组织中的表达水平也是不同的,在低分化胃癌中的NAG-1表达要低于高分化胃癌组织(P<0.01)。且可发现,NAG-1蛋白质表达与肿瘤大小,胃癌的浸润程度、TNM分化无明显的关联(P>0.05)。[结论]胃癌的发生发展过程中NAG-1起着重要的作用,其正常水平的表达可能对癌细胞的增殖起着抑制的作用,而NAG-1表达减弱或丢失会使其抑癌作用减弱或者丧失。     

hsa＿circ＿0000069通过靶向miR-548c-3p调控胃癌细胞增殖、细胞周期和凋亡

目的 研究hsa＿circ＿0000069靶向miR-548c-3p在胃癌进展中的功能。方法 RT-qPCR检测胃癌组织、癌旁组织、胃癌细胞(SNU-1、AGS、HS-746T)、人正常胃黏膜上皮细胞GES1中hsa＿circ＿0000069、miR-548c-3p表达情况。将SNU-1细胞分为对照(NC)组、si-NC组、si-hsa＿circ＿0000069组、miR-NC组、miR-548c-3p组、pcDNA组、pcDNA-hsa＿circ＿0000069组、si-hsa＿circ＿0000069+anti-miR-NC组、si-hsa＿circ＿0000069+anti-miR-548c-3p组。流式细胞术检测细胞凋亡和周期分布；CCK-8法分析细胞活力。hsa＿circ＿0000069和miR-548c-3p的靶向关系通过双荧光素酶报告实验来验证。结果 胃癌组织中hsa＿circ＿0000069表达水平显著高于癌旁组织，miR-548c-3p表达水平显著低于癌旁组织(均P<0.05)。SNU-1、AGS、HS-746T细胞中hsa＿circ＿0000069表达水平显著...     

let-7a在胃癌组织中的表达及其临床意义

[目的]观察let-7a在胃癌组织、癌旁组织及远端正常胃黏膜组织中的表达情况,探索let-7a在胃癌发生发展过程中的相关生物学机制。[方法]收集11例胃癌根治术后患者的胃癌组织、癌旁组织和远端胃黏膜组织,固定并行石蜡包埋,采用原位杂交技术检测3种组织中let-7a的表达情况。[结果]let-7a在正常胃黏膜组织、癌前病变组织和胃癌组织中的表达量分别为(165.45±77.64)%、(83.64±39.31)%、(41.36±39.06)%,3组比较,差异有统计学意义(P0.05)。[结论]在正常胃黏膜组织、癌旁胃癌癌前病变组织和胃癌组织中,let-7a的表达呈显著递减趋势,表明let-7a可能作为一种抑癌因子参与胃癌的发生发展过程。     

CMTM3在胃癌中的表达及其生物学功能研究

背景胃癌(gastric cancer,GC)是消化系统常见的恶性肿瘤之一,预后较差.晚期患者5年生存率低,同时大部分患者发现时已发展为远处转移的晚期或局部晚期,丧失了手术机会.然而,GC发生发展及侵袭转移的确切分子机制仍不完全明晰.目的在本研究中,我们采用生物信息分析结合细胞实验方法探讨CMTM3基因在GC中的表达、生物学功能及其潜在的分子调控机制.方法首先在GEO和TCGA数据库中分析CMTM3基因的差异表达情况,并比较CMTM3基因高低表达与GC患者预后的关系.在正常胃上皮细胞(GES-1)和多个GC细胞系(HGC-27,BGC-823和MKN45)中比较CMTM3基因的表达情况.在MKN45细胞中转染外源性小干扰RNA(sh-CMTMM)下调细胞中CMTM3基因表达后,采用MTT实验和划痕实验,评价下调前后细胞增殖和迁移能力有无改变.GEO数据库中筛选GC组织vs胃正常组织中差异表达的microRNA谱,并根据m icro RN A在线预测软件Targ ets c an预测CMCT3上游靶基因miR-125b-5P.选取我院收治的15例GC患者,采用q-P C R方法检测癌组织和癌旁组织中CMTM3和miR-125b-5P表达水平.双荧光素酶报告实验验证miR-125b-5P与CMTM3靶向调控关系.转染外源性miR-125b-5P-mimic,评价MKN45细胞增殖和迁移能力的变化.结果在GC患者,癌组织中的CMTM3基因mRNA表达水平明显高于癌旁正常胃组织(P0.05).CMTM3基因高表达GC患者总生存(overall survival,OS)和无疾病进展生存(disease free survival,DFS)均低于低表达患者.外源性小干扰RNA(sh-CMTM3-1)可显著下调MKN45 GC细胞中CMTM3基因表达(P0.05).shCMTM3-1下调MKN45 GC细胞中CMTM3基因表达后,细胞的迁移能力明显减低(P0.05).MTT实验显示,sh-CMTM3-1下调CMTM3表达后,MKN45 GC细胞增殖能力明显下降(P0.05).筛选出CMTM3上游靶基因miR-125b-5P.miR-125b-5P在正常胃黏膜细胞系中表达水平明显高于GC细胞系(P0.05),GC患者癌组织中miR-125b-5P表达水平明显低于癌旁正常组织(P0.05).CMTM3基因在GC组织中的表达水平明显高于癌旁组织(P0.05).GC组织中CMTM3与miR-125b-5P表达呈负相关(r_(Pearson)=-0.58,P0.05).MKN45细胞中。miR-125b-5可显著下调CMTM3基因表达(P0.05).双荧光素酶报告实验显示miR-125b-5P基因与CMTM3基因3'UTR靶向结合.转染miR-125b-5Pmimic下调CMTM3表达后GC MKN45细胞增殖能力和迁移能力明显减低(P0.05).结论 miR-125b-5P靶向调控CMTM3基因表达影响GC增殖和迁移能力,并有望成为GC预后的分子标志物和潜在治疗靶点.