生物衍生骨与骨髓间充质干细胞复合修复兔桡骨大段缺损

背景：生物衍生支架材料具备与自身骨相似的结构和微环境,具有较好的应用前景。 目的：探讨生物衍生骨复合成骨诱导的骨髓间充质干细胞修复兔桡骨的节段性骨缺损的可行性,并与单纯生物衍生骨进行比较。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2007-01/2008-01在南华大学生命科学院实验室完成。 材料：同种异体骨经脱脂、脱蛋白、部分脱钙和冻干等方法处理后制备生物衍生骨支架材料,与自体骨髓间充质干细胞复合制备组织工程骨支架材料。 方法：25只健康成年新西兰大白兔双侧桡骨制备中段15 mm的骨缺损,随机取其中20只兔右侧桡骨为实验组植入组织工程骨,左侧为对照组植入单纯生物衍生骨,不做内外固定;另5只兔双侧骨缺损处不植入任何材料作为空白组。 主要观察指标：应用X射线放射学检查及组织学观察比较3组骨缺损修复的能力。 结果：X射线显示随时间延长骨折处骨痂逐渐增多, 实验组8周基本愈合,12周塑形完成;对照组骨痂少,愈合时间推迟;空白组术后12周骨缺损未见骨性修复,最后形成骨不连。术后2,4,8,12周实验组放射学检查评价新骨生成优于对照组 (P < 0.05)。组织学检查显示实验组术后4周时材料开始吸收,8周基本降解吸收被新生骨取代,12周完全修复;对照组明显推迟,新骨生成速度、生成量低于实验组(P < 0.05);空白组各时点均无新骨形成,最后缺损由纤维组织充填。 结论：成骨诱导的间充质干细胞／生物衍生骨复合构建组织工程化骨植入修复兔桡骨缺损能够加速新骨形成,其修复能力明显优于单纯生物衍生骨。     

海藻酸钠-明胶共混体系/成骨细胞凝胶修复兔颅骨极限缺损的CT评估

背景：利用组织工程学技术将各种凝胶系统作为支架材料对骨缺损进行修复日益受到重视，在骨修复过程中需要选择相对准确、方便的检测方式，以明确体内成骨过程。 目的：利用螺旋CT和三维重建监测海藻酸钠-明胶共混体系/成骨细胞凝胶修复兔颅骨缺损的愈合过程。 设计、时间及地点：材料学体内动物实验，于2007-10/2008-03在北京世纪坛医院和北京大学医学部组织胚胎学教研室完成。 材料：清洁级2月龄新西兰纯种大白兔15只，由北京海淀区兴隆实验动物养殖场提供。海藻酸钠干粉为美国Sigma公司产品，明胶干粉为河北绿岛公司产品，螺旋CT为德国SIEMENS公司产品。 方法：将15只兔编号后抽取骨髓，密度梯度离心法分离骨髓基质干细胞，加入成骨细胞诱导液进行体外培养，诱导分化的成骨细胞经传代增殖为107数量级。制备海藻酸钠与明胶质量比为2∶3的透明粉红色胶状液体，引入兔成骨细胞，细胞终密度为5×109 L-1，与CaCl2溶液混合，形成果冻样海藻酸钠-明胶共混体系/成骨细胞凝胶。15只兔颅骨均制备直径1.5 cm的极限缺损，1周后植入凝胶复合体0.5 mL进行修复。 主要观察指标：缺损修复后4，8，12周利用CT进行薄层扫描和三维重建检查，采用苏木精-伊红染色和Mallory三色染色观察骨组织愈合情况。 结果：修复后4周，冠状位CT显示颅骨缺损区可见骨痂形成，三维重建仍显示有缺损；标本苏木精-伊红染色显示缺损为纤维结缔组织，并有软骨样组织形成，Mallory三色染色标本呈淡蓝色。修复后8周，冠状位CT显示缺损边缘圆钝，与凝胶材料有骨性突起连接，缺损处密度增高明显，三维重建显示缺损范围较之前有所减小；标本苏木精-伊红染色后缺损部可见大量含血管成分的纤维结缔组织，有骨样组织结构形成，Mallory三色染色显示有褐红色成熟骨组织形成，其旁边有淡蓝色软骨样组织。修复后12周，冠状位CT显示缺损区基本被骨痂填满，三维重建示缺损基本修复；缺损区域和周围骨组织形成骨性结合，骨小梁粗大，哈弗氏系统成熟。 结论：海藻酸钠-明胶共混体系/成骨细胞凝胶以软骨化骨的形式成功修复了兔颅骨极限缺损。在修复过程中，CT冠状位扫描可准确反映出各阶段成骨的过程，但三维重建有一定的局限性，对成骨的判断会产生一定的误差。     

可注射性骨组织工程载体海藻酸钠-明胶共混体系的致畸突变试验**

背景：利用组织工程学技术将各种凝胶系统作为支架材料对骨缺损进行修复日益受到重视。所选择的支架材料必须具有无毒、无致畸的特点。 目的：观察海藻酸钠-明胶共混体系/成骨细胞凝胶修复兔颅骨缺损的愈合过程中对染色体畸变的影响。 设计、时间及地点：材料学体内动物实验,于2007-10/2008-03在北京世纪坛医院和北京大学医学部组织胚胎学教研室完成。 材料：清洁级2月龄新西兰纯种大白兔12只,随机分为2组：实验组8只,雌性4只,雄性4只,对照组4只均为雌性。海藻酸钠干粉为美国Sigma公司产品,明胶干粉为河北绿岛公司产品。 方法：将12只兔编号后抽取骨髓,密度梯度离心法分离骨髓基质干细胞,加入成骨细胞诱导液进行体外培养,诱导分化的成骨细胞经传代增殖为107数量级。制备海藻酸钠与明胶质量比为2∶3的透明粉红色胶状液体,引入兔成骨细胞,细胞终浓度为5×109 L-1,与CaCl2溶液混合,形成果冻样海藻酸钠-明胶共混体系/成骨细胞凝胶。12只兔颅骨均制备直径1.5 cm的极限缺损,1周后实验组植入凝胶复合体0.5 mL进行修复,对照组不植入任何材料。 主要观察指标：缺损修复后3个月取心脏血观察细胞遗传学的变化。 结果：①每只实验动物观察100个中期分裂细胞,均未见染色体型畸变。对照兔在400个中期分裂相中见4个,单体畸变率为1%。实验兔在800个中期分裂相中见12个,单体畸变率为1.5%。两组均在正常范围内。②每只实验动物做2个染色体核型分析,染色体数目2n=44,对照兔核型为44,XX,正常雌性;雄性实验兔为44,XY,未见异常;雌性实验兔为44, XX,未见到异常。 结论：海藻酸钠-明胶共混体系/成骨细胞凝胶在细胞遗传学角度上是安全的。 关键词：骨组织工程;颅骨缺损;成骨;染色体型畸变;染色体单体型畸变     

新型双相钙磷陶瓷复合骨形态发生蛋白及碱性成纤维细胞生长因子修复兔骨缺损

摘要 背景：细胞因子能启动、促进并维持软骨和骨生成,但需要合适的载体才能发挥其生物学活性。 目的：验证复合骨形态发生蛋白及碱性成纤维细胞生长因子的新型双相钙磷陶瓷(1∶1)促进骨缺损修复的作用。 方法：27只兔,造成兔两侧股骨中下段4 mm×4 mm×12 mm的缺损,随机分为3组：骨形态发生蛋白+ 碱性成纤维细胞生长因子+双相钙磷陶瓷组、骨形态发生蛋白+双相钙磷陶瓷组、双相钙磷陶瓷组。于4,8,12周取材,通过苏木精-伊红染色,X射线以及计算机图像分析,比较各组缺损的修复情况。 结果与结论：骨形态发生蛋白+碱性成纤维细胞生长因子+双相钙磷陶瓷组及骨形态发生蛋白+双相钙磷陶瓷组在软骨诱导、小梁骨的形成数量、骨缺损修复等方面均明显优于双相钙磷陶瓷组。骨形态发生蛋白+碱性成纤维细胞生长因子+双相钙磷陶瓷组又优于骨形态发生蛋白+双相钙磷陶瓷组,在8周时编织骨小梁逐渐改建为成熟的板层骨及髓腔结构,骨缺损基本修复。12周时完全修复。结果提示：①双相钙磷陶瓷复合骨形态发生蛋白及碱性成纤维细胞生长因子在体内有较强的成骨活性,可以促进骨缺损的修复。②碱性成纤维细胞生长因子与骨形态发生蛋白合用可以加快新骨的形成。③新型双相钙磷陶瓷是一个吸附细胞因子的良好缓释载体,它的降解吸收和新骨的形成是一个相互促进过程。 关键词：双相钙磷陶瓷;骨缺损;诱导成骨;骨形态发生蛋白;成纤维细胞因子 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.42.001     

脱钙骨支架与诱导培养的脂肪基质细胞复合修复兔胫骨缺损*

背景：脂肪基质细胞经诱导后具备成骨活性已被实验证实，因此，脂肪基质细胞修复骨缺损的研究已成为目前的热点，但脂肪基质细胞修复负重骨缺损修复的相关实验报道较少。 目的：通过兔脂肪基质细胞诱导培养为成骨细胞，并与牛脱钙骨复合培养，对兔胫骨骨缺损修复情况的观察，探讨脂肪基质细胞修复骨缺损的可行性。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2008-01/09在天津市第三中心医院动物实验室完成。 材料：取新生小牛四肢长骨干干骺端的松质骨置于脱钙液中脱钙、脱脂、去细胞、去抗原和去蛋白等程序处理制备成脱钙骨支架。 方法：选取健康成年新西兰大白兔12只，随机选取1只提取腹腔内脂肪组织15 mL，体外分离培养脂肪基质细胞并行诱导培养证实为成骨细胞后，以1×109 L-1浓度种植于脱钙骨支架上，继续培养1周，制成组织工程骨。将12只新西兰大白兔手术制成双侧胫骨骨缺损模型，左下肢植入单纯脱钙骨作为对照组，右下肢植入组织工程骨作为实验组。 主要观察指标：X射线、CT检查观察骨缺损处骨痂形成情况，取材后行大体、组织学观察骨缺损处修复情况。 结果：大体观察及X射线显示实验组术后12周骨缺损区缺损消失，已骨性愈合，对照组术后12周骨缺损区缺损仍存在，未见完全愈合。组织学观察显示实验组术后12周可见新生骨小梁形成，对照组术后12周未见新生骨小梁形成。测量CT值行配对t检验显示实验组明显优于对照组(P < 0.05)。 结论：脂肪基质细胞经诱导培养具备成骨活性，与细胞支架复合具备修复骨缺损的能力。 关键词：脂肪基质细胞；诱导培养；脱钙骨；骨缺损     

动物源性骨软骨支架复合骨髓间充质干细胞/软骨细胞修复兔膝关节骨软骨复合缺损

摘要 背景：以往支架材料修复骨软骨的实验大都存在骨软骨耦合界面修复不良的情况。 目的：观察骨髓间充质干细胞/软骨细胞复合动物源性骨软骨支架修复兔膝关节骨软骨复合缺损的可行性。 方法：将新西兰大白兔随机抽签分为实验组、对照组、空白组,制作单侧膝关节骨软骨复合缺损后,实验组于骨缺损处植入自体骨髓间充质干细胞/诱导分化的软骨细胞与同种异体动物源性骨软骨复合支架,对照组于骨缺损处植入同种异体动物源性骨软骨支架、空白组未植入任何材料。术后4,8,12周行大体观察、苏木精-伊红染色、甲苯胺蓝染色。 结果与结论：实验组大体观察见复合缺损区完全修复,局部无凹陷,新生组织和周围组织融合,苏木精-伊红染色和甲苯胺蓝染色见软骨缺损区由新生的透明软骨样组织修复,细胞柱状排列,极性好,软骨陷窝明显,骨缺损区由骨样组织修复,新生软骨和软骨下骨以及宿主骨界面耦合良好,甲苯胺蓝染色阳性率和组织学评分优于对照组、空白组(P < 0.05)。说明诱导分化的自体软骨细胞和骨髓间充质干细胞共培养复合动物源性骨软骨支架所构建的细胞-支架复合体能成功修复兔膝关节软骨和软骨下骨的复合缺损,是一种理想的骨软骨复合缺损修复方法。 关键词：动物源性;支架;骨髓间充质干细胞;软骨细胞;修复;缺损 中国组织工程研究与临床康复, 2011,15 (12): 2265-2269.     

氧化铝羟基磷灰石修复兔桡骨节断性缺损的组织学观察

背景：前期的实验已经证明，氧化铝羟基磷灰石可以修复兔股骨腔隙性缺损，该材料具有良好的生物相容性和骨传导性。 目的：观察氧化铝羟基磷灰石修复兔桡骨节段性缺损的效果。 设计、时间及地点：随机对照动物实验。氧化铝羟基磷灰石复合陶瓷人工骨实验材料于2006-05在瑞典斯德哥尔摩大学阿伦尼乌斯实验室烧结成形。动物实验于2006-06/2007-06在宁夏医科大学中医学院实验室完成。 材料：放电等离子烧结技术制备氧化铝羟基磷灰石人工骨。 方法：新西兰兔12只，制备15 mm长的桡骨节段性骨缺损模型。随机分为3组，人工骨植入实验组6只植入氧化铝羟基磷灰石人工骨材料。空白对照组3只骨缺损处旷置，不植入材料。自体骨植入对照组3只截骨后，将截下的自体骨用生理盐水冲洗后，再植入原截骨处。于术后24周截取实验段桡骨。 主要观察指标：①大体解剖观察。②界面成骨观察。③材料被膜观察。 结果：人工骨植入实验组材料两端及材料尺骨面骨痂向材料中部延伸生长，骨组织将人工骨材料完全包绕，材料与周围骨组织完全修复骨缺损区。空白对照组有少量骨痂修复缺损区，但骨缺损仍然存在。自体骨植入对照组缺损区完全修复。人工骨植入实验组24周不脱钙骨磨片直接显微镜观察：材料与周围新生骨组织界面镶嵌样紧密结合，骨组织长入材料表面融合为一体。再将不脱钙骨磨片苏木精-伊红染色可见骨细胞呈层样排列，形成板层状骨，哈佛氏系统骨。材料两端界面骨脱钙片苏木精-伊红染色，冠切面与纵切面均见骨细胞呈环形排列骨单位形成。材料段冠切面脱钙片可见骨原细胞排列于材料表面，骨髓腔形成。材料被膜观察可见较多胶原纤维和骨原细胞。 结论：采用放电等离子烧结技术制备的氧化铝羟基磷灰石人工骨可以修复兔桡骨节段性缺损，其修复过程完全呈现了界面成骨过程。     

β-磷酸三钙/聚磷酸钙纤维/聚左旋乳酸支架复合骨髓基质细胞修复节段性骨缺损

背景：组织工程β-磷酸三钙/聚磷酸钙纤维/聚左旋乳酸支架材料具有良好的生物相容性。 目的：评估骨髓基质细胞与β-磷酸三钙/聚磷酸钙纤维/聚左旋乳酸复合体修复兔桡骨大段骨缺损成骨的效果。 方法：取新西兰大白兔40只,建立桡骨双侧大段骨缺损模型,其中35只右侧植入自体骨髓基质细胞与β-磷酸三钙/聚磷酸钙纤维/聚左旋乳酸复合物作为实验组,左侧植入β-磷酸三钙/聚磷酸钙纤维/聚左旋乳酸支架材料作为对照组;另5只作为空白对照不作任何处理。植入后4,8,12,16周拍摄X射线片观察骨缺损修复情况。 结果与结论：实验组术后2周可见缺损处有散在的、少量模糊状骨痂生成,术后4周可见明显骨生成影像,成云雾状,均匀分布在骨缺损区,术后8周整个缺损区均可见骨痂生成,成骨现象更加明显,部分髓腔已通,术后12~16周,缺损区已完全被新生骨组织充填,骨髓腔已完全再通,修复区较正常桡骨细,骨缺损修复效果明显优于对照组与空白对照组(P < 0.01)。说明自体骨髓基质细胞与β-磷酸三钙/聚磷酸钙纤维/聚左旋乳酸复合移植可较完全修复大节段骨缺损。     

藻酸钙/骨髓基质成骨细胞复合物修复兔颅骨缺损实验研究

目的：在兔颅骨缺损中区植入组织工程骨，观察其成骨和对骨缺损的修复作用。方法：取兔髂骨，获取骨髓基质干细胞，体外扩增培养，将获得的骨髓基质成骨细胞与藻酸盐复合，制备成盘状组织工程骨，植入兔颅骨缺损区，单纯藻酸盐植入作为对照组，8周后行X线和组织学检查，观察其成骨和对骨缺损的修复作用。结果：骨髓基质成骨细胞/藻酸钙复合物植入组，有明显的新骨形成，而对照组无骨形成。结论：藻酸钙/骨髓基质成骨细胞复合物可用于修复非受力区、范围较小的骨质缺损。     

聚碳酸亚丙酯/壳聚糖纳米纤维三维多孔支架复合骨髓间充质干细胞修复兔骨缺损

摘要 背景：骨组织工程细胞移植技术是近年来的研究热点,支架材料是其重要组成部分,同时也是三大要素中最有望取得突破性进展的环节,随着组织工程材料工艺的革新,有望为更好地修复骨缺损带来新的希望。 目的：评价聚碳酸亚丙酯/壳聚糖纳米纤维(propylene carbonate/chitosan nanofibers,PPC/CSNF)三维多孔支架复合骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSCs)修复兔股骨髁部骨缺损的能力。 方法：二次相分离法制作PPC/CSNF复合三维多孔支架,将第3代的BMSCs 种植到复合材料上。36只新西兰大白兔右侧股骨髁制作直径6 mm深10 mm骨缺损,于缺损处实验组植入复合BMSCs的PPC/CSNF多孔支架,对照组植入单纯PPC/CSNF多孔支架,标准组于兔髂后上棘取自体松质骨移植于缺损部位,空白组不做处理。术后第4,8,12周取材,通过大体观察、放射学检查和组织学检查等方法评价其修复缺损情况。 结果与结论：实验组放射学评价与标准组无显著差异,两组结果均优于对照组(P < 0.05);实验组大体标本与标准组基本一致;实验组组织学检查新骨生成速度、生成量优于对照组(P < 0.05);空白组不能自行修复骨缺损,最后缺损由纤维组织充填。结果显示PPC/CSNF多孔支架具有较好的细胞和组织相容性,复合兔BMSCs能加速新骨形成,可用于修复兔股骨髁部骨缺损。 关键词：聚碳酸亚丙酯;骨髓间充质干细胞;骨缺损;壳聚糖;纳米纤维 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2011.16.010     

锶盐与模拟失重大鼠骨细胞的凋亡

摘要 背景：模拟失重促进成骨细胞、骨细胞凋亡,而锶能降低失重状态下骨组织中成骨细胞、骨细胞凋亡率,促进骨形成。 目的：观察锶盐对失重状态下骨组织中细胞凋亡的防治效应。 方法：5周龄SD大鼠建立失重动物模型,在悬吊前3 d或悬吊时开始以锶盐灌胃。建模后7 d,使用全自动生化仪检测大鼠血清中钙、磷、碱性磷酸酶水平,放射免疫分析法测定骨钙素质量浓度,原位细胞凋亡检测技术检测骨组织中细胞凋亡,免疫组化方法检测骨组织中Fas蛋白水平。 结果与结论：模型组大鼠血清中碱性磷酸酶、骨钙素水平均显著低于相应对照组(P < 0.05),但血钙,磷浓度均较相应对照组升高(P < 0.05),骨组织中成骨细胞、骨细胞及骨髓间充质细胞凋亡指数、骨组织中Fas抗原水平均高于相应对照组(P < 0.01)。悬吊前3 d始及悬吊时始锶盐灌胃组碱性磷酸酶,骨钙素水平均显著高于模型组(P < 0.05),而血钙、骨组织中成骨细胞、骨细胞及骨髓间充质细胞凋亡指数、骨组织中Fas抗原水平均显著低于模型组(P < 0.05)。说明尾部悬吊模拟失重增加骨组织中Fas蛋白表达,从而增加大鼠骨组织中成骨细胞、骨细胞及骨髓间充质细胞凋亡,而锶盐可降低失重状态下大鼠骨组织Fas蛋白表达,从而降低成骨细胞、骨细胞及骨髓间充质细胞凋亡。     

可注射性纳米羟基磷灰石/壳聚糖复合骨髓间充质干细胞促进骨缺损的修复

背景：可注射性纳米羟基磷灰石/壳聚糖复合材料是清华大学利用仿生学原理制备的一种较理想的组织工程新型材料,经过前期体外实验证明其具有良好的生物相容性和骨传导性。 目的：观察骨髓间充质干细胞复合可注射性纳米羟基磷灰石/壳聚糖材料在促进骨缺损修复中的作用。 方法：用梯度离心和贴壁培养法收集兔骨髓间充质干细胞,分离、培养至第3代,然后与纳米羟基磷灰石/壳聚糖复合。24只新西兰大白兔双侧股骨外侧髁钻孔,制备骨缺损模型。所有兔右侧股骨外侧髁缺损以骨髓间充质干细胞-纳米羟基磷灰石/壳聚糖局部植入作为实验组,其中20只兔左侧股骨外侧髁缺损以单纯纳米羟基磷灰石植入治疗作为对照组,4只兔左侧股骨外侧髁缺损旷置为空白组,于第12周末,分别行大体、影像学观察、组织形态学、观察该复合材料对兔骨缺损的修复效果。 结果与结论：术后12周实验组植入体已与骨缺损处骨性愈合,明显见新生骨生成,骨缺损能够完全修复,对照组骨缺损处部分修复,部分骨皮质不连续。空白组缺损区尚未见修复,纤维结缔组织填充。术后12周,实验组见骨形成细胞较多,材料内见新生骨小梁相互连接成片;对照组少量骨细胞形成,骨量少,部分纤维组织填充。空白组未见骨形成细胞,纤维组织较多。结果表明,骨髓间充质干细胞-纳米羟基磷灰石/壳聚糖复合材料具有骨缺损修复能力,其疗效优于单纯纳米羟基磷灰石材料。 关键词：纳米羟基磷灰石/壳聚糖;骨髓间充质干细胞;骨缺损;兔;可注射 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.34.003     

负载转基因成肌细胞和骨形态发生蛋白组织工程化骨修复骨缺损

背景：近年来有报道提出了睫状神经营养因子能够抑制成肌细胞体外成肌分化,可保持成肌细胞去分化状态的理论。两者可通过基因工程技术结合为组织工程化骨的构建提供种子细胞,联合骨形态发生蛋白在一定条件下促进骨缺损的修复。 目的：探讨转染睫状神经营养因子基因成肌细胞与骨形态发生蛋白通过透明质酸钠凝胶载体结合修复兔桡骨节段性缺损的效果。 方法：新西兰大白兔制备左侧桡骨中段造成1.0 cm的节段性骨缺损,缺损处以1.4 cm硅胶管桥接固定,管内植入负载骨形态发生蛋白与转睫状神经营养因子基因成肌细胞的透明质酸凝胶(实验组)、仅复合骨形态发生蛋白的透明质酸凝胶(对照组)或仅植入透明质酸凝胶(空白组)。 结果与结论：动物体内实验表明实验组的X射线阻射密度、大体标本以及病理组织学观察情况均优于对照组和空白组,对照组也优于空白组。说明应用透明质酸钠凝胶复合转基因成肌细胞和骨形态发生蛋白因子作为膜内填充物构建组织工程化骨具有可行性,其应用于修复兔桡骨节段性缺损效果理想。     

模拟失重与骨组织的细胞凋亡★

背景：空间骨丢失主要表现为成骨细胞、骨细胞活性减弱，而包括Fas蛋白在内的诸多因素可调节成骨细胞、骨细胞的增殖和分化并最终调控骨形成。 目的：观察失重对骨组织中细胞凋亡的影响。 方法：5周龄SPF级雄性SD大鼠36只，随机分为尾吊模拟失重组及对照组。建立大鼠尾吊模拟失重模型，建模后7，14，21 d，使用自动生化仪检测大鼠血清中钙、磷、碱性磷酸酶含量，放射免疫分析法测定骨钙素含量，原位细胞凋亡检测技术检测骨组织中细胞凋亡，免疫组化方法检测骨组织中Fas蛋白含量。 结果与结论：尾吊模拟失重组大鼠血清中碱性磷酸酶、骨钙素含量均显著低于对照组(P < 0.05)，但血钙、磷浓度均较相应对照组升高，骨组织中成骨细胞、骨细胞及骨髓间充质细胞凋亡指数、骨组织中Fas抗原含量均高于相应对照组(P < 0.01)。说明尾部悬吊模拟失重增加骨组织中Fas蛋白表达，从而增加大鼠骨组织中成骨细胞、骨细胞及骨髓间充质细胞凋亡。 关键词：尾吊；模拟失重；生化；骨钙素；细胞凋亡；Fas蛋白     

人骨形态发生蛋白2基因活化纳米骨浆的成骨能力***☆

背景：纳米骨浆在骨缺损修复过程中仅起支架和骨传导作用，不具备骨诱导能力。 目的：观察人骨形态发生蛋白2(human bone morphogenetic protein -2，hBMP-2)基因活化纳米骨浆的异位诱导成骨能力和修复骨缺损效果。 时间及地点：实验于2006-06/2007-03在华中科技大学同济医学院分子生物中心实验室和协和医院骨科实验室完成。 材料：将纳米骨浆与hBMP-2基因真核表达质粒相复合，形成hBMP-2基因局部释放系统。 方法：实验一：昆明种小鼠24只右侧大腿后群肌袋注射纳米骨浆+hBMP-2质粒作为实验侧，其中12只小鼠左侧大腿后群肌袋注射纳米骨浆+空白质粒为对照侧1，另12只左侧注射纳米骨浆为对照侧2。实验二：新西兰白兔54只，其中6只作左桡骨中段骨缺损，不植入材料，为空白对照；另48只制成双侧桡骨中段15 mm骨缺损模型，随机分成3组，缺损处分别植入 hBMP-2+纳米骨浆、空白质粒+纳米骨浆、纳米骨。 主要观察指标：实验一：采用放射学、分子生物学和组织形态学等方法检测成骨基因hBMP-2表达和诱导成骨效应。②实验二：取桡骨标本作影像学检查、组织学观察和生物力学检测。 结果：实验一：小鼠术后2，4周实验侧有hBMP-2表达。实验侧术后2周出现大量软骨组织和呈岛状散在分布的骨组织，术后4周可见大量成骨组织，新生骨相互融合生长并形成较为成熟的板层骨和骨小梁结构；对照侧未见骨组织形成。实验侧碱性磷酸酶活性明显高于对照侧(P < 0.01)。实验二：术后12周空白对照组骨缺损无愈合，其余3组骨缺损均修复。植入hBMP-2+纳米骨浆组的碱性磷酸酶水平、成骨速度及新生骨力学强度均明显优于植入空白质粒+纳米骨浆或纳米骨组（P < 0.05）。 结论：经组织学、影像学及生物力学的综合检测验证，纳米骨浆复合hBMP-2质粒后，具有一定的骨诱导作用，植入体内后成骨速度、质量及力学强度较单纯的纳米骨浆明显增强，能够有效修复骨缺损。     

长期多代饮奶近交BALB/C小鼠的骨代谢模型

背景：现有的研究结果大多是反映短期饮奶或单代饮奶对骨代谢的影响,而反映长期多代饮奶对骨代谢影响的研究较少。 目的：观察长期多代饮奶对近交BALB/C小鼠骨代谢的影响。 设计、时间及地点：完全随机设计,实验于2005-03/2006-03在郑州大学公共卫生学院实验室完成。 材料：取4周龄近交BALB/C小鼠60只,雌雄各半,随机分为实验组和对照组,每组30只。红星牌全脂甜奶粉由黑龙江红星集团股份有限公司生产(批号20050412),每7.43 g加入13 mL烧开的去离子水,还原为浓缩4倍的牛奶。 方法：实验组每日给予牛奶灌胃(0.083 mL/g体质量),对照组每日给予相同剂量去离子水灌胃,连续灌胃6周。到小鼠发情期(约70 d左右)后,同组小鼠雌雄合笼交配,交配成功后将雌性小鼠分笼喂养,直到产下第2代。第2代小鼠到断奶期时(3周左右)断母乳,各组第2代继续分别用牛奶和去离子水灌胃,重复上述步骤得到第3代,断母乳后继续用牛奶和去离子水灌胃,第3代出生后17周左右实验结束。 主要观察指标：每代在其子代出生后1个月,每组取20只剪尾取血,采用全血干化学免疫浓缩法测定特异性骨碱性磷酸酶活性;3 d后再去眼球取血,离心取血清,采用邻甲酚肽络合酮比色法(终点法)测定血清钙浓度和血清碱性磷酸酶活性。采用磷钼酸比色法测定血清磷质量浓度。采用放射免疫分析法测定血清骨钙素质量浓度。 结果：①血清钙、磷水平：实验组各代之间、对照组各代之间、各代中实验组和对照组之间,差异均无显著性意义(P > 0.05)。②血清碱性磷酸酶活性：第3代实验组碱性磷酸酶活性低于对照组(P < 0.05)。实验组第3代碱性磷酸酶活性低于前2代(P < 0.05)。③特异性骨碱性磷酸酶活性：第2代、第3代实验组特异性骨碱性磷酸酶活性低于对照组(P < 0.05)。实验组第3代的特异性骨碱性磷酸酶活性低于第1代(P < 0.05)。④血清骨钙素水平：在实验组3代之间有明显升高趋势,每两代之间差异均有显著性意义(P < 0.05)。第2代、第3代实验组骨钙素质量浓度高于对照组(P < 0.05)。 结论：长期多代饮奶可增强BALB/C小鼠成骨细胞活性,促进骨骼生长发育。     

40001/间充质干细胞修复兔关节软骨缺损的组织学研究

背景：大块软骨损伤目前临床上尚无方法治疗,干细胞技术出现后为解决这一难题提供了理论支持。采用新型的支架材料“壳聚糖-胶原蛋白”结合干细胞诱导分化移植给动物模型是一种较新的尝试。 目的：观察壳聚糖-胶原凝胶复合骨髓间充质干细胞修复兔关节软骨缺损的组织学变化。 方法：体外培养扩增兔骨髓间充质干细胞。采用软骨诱导分化培养基对P2代细胞进行成软骨诱导。同时制备“壳聚糖-胶原蛋白”支架和兔关节软骨缺损模型。缺损用含有骨髓间充质干细胞的壳聚糖-胶原凝胶填充,另一条关节用没有细胞的支架或不做处理。其中12个关节作为实验组(接受骨髓间充质干细胞+支架),8个关节作为空白对照组(不做处理),8个关节作为单纯支架组(未植入细胞)。造模后于2,4,8,16周进行组织学评分并处死动物行组织学染色。 结果与结论：造模后16周移植的细胞一致分化为软骨细胞,大部分软骨缺损区被新生软骨修复,组织学评分实验组关节修复良好。提示应用骨髓间充质干细胞结合“壳聚糖-胶原蛋白”复合物可以修复关节软骨缺损。 关键词：壳聚糖-胶原凝胶;兔;骨髓间充质干细胞;软骨缺损;组织学变化 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.25.006     

雌激素受体调节剂联合游泳运动干预去卵巢大鼠骨生化指标的变化*

背景：研究发现运动和雌激素联合作用对去卵巢大鼠松质骨骨量的丢失有预防作用,但有关运动与选择性雌激素受体调节剂联合作用对骨代谢的影响方面的研究较少。 目的：通过对去卵巢大鼠血液生化指标的比较,探讨游泳运动与选择性雌激素受体调节剂联合作用对去卵巢大鼠骨代谢的影响。 方法：将50只雌性SD大鼠随机分为5组：假手术组仅手术不切除卵巢,其余各组去卵巢造模,运动组、药物组及运动+药物组分别在去卵巢的基础上进行游泳训练和(或)灌胃选择性雌激素受体调节剂雷洛昔芬。8周后,比较各组大鼠血液生化指标的变化。 结果与结论：卵巢摘除的早期对大鼠进行运动干预可抑制大鼠体质量的快速增加。与模型组比较,运动组、药物组、运动+药物组大鼠血磷及碱性磷酸酶水平明显升高(P < 0.05或P < 0.01),血清抗酒石酸酸性磷酸酶水平显著降低(P < 0.05),均以运动+药物组效果最明显,但各组间血钙水平差异无显著性意义(P > 0.05)。说明游泳运动和(或)选择性雌激素受体调节剂均可在一定程度上改善骨代谢的血液生化指标,延缓骨丢失,抑制高转换型骨代谢率,以选择性雌激素受体调节剂和运动联合作用效果最佳。     

软骨源形态发生蛋白基因转染自体骨髓间充质细胞修复关节软骨缺损

背景：以支架或干细胞在一定程度上能够修复软骨缺损,但是研究中发现较大块的缺损修复效果还达不到令人满意的程度。基因转染后的干细胞能够不断的释放生长因子有可能够为软骨缺损研究带来突破。 目的：进一步验证软骨源形态发生蛋白转染的骨髓间充质干细胞是否会促进体内兔软骨修复。 方法：从兔骨髓内分离获得骨髓间充质干细胞,脂质体感染的方法将软骨源形态发生蛋白基因转染到骨髓间充质干细胞中。实验组移植转染后的细胞;单纯骨髓间充质干细胞组移植未转染的骨髓间充质干细胞;空白对照组缺损区不移植细胞。术后行组织学检测及组织学评分分析修复情况。 结果与结论：体内修复过程中,软骨源形态发生蛋白转染的骨髓间充质干细胞促进了软骨再生。透明软骨填充了软骨缺损区,并且深部区域显示了软骨下成骨。透明软骨的重建区域优于单纯骨髓间充质干细胞移植组。组织学评分实验组高于骨髓间充质干细胞对照组和空白组。提示转染软骨源形态发生蛋白基因的骨髓间充质干细胞能够促进和提高关节软骨的改建和修复。