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目的用巴斯德毕赤酵母系统表达人壳三糖酶,并进行亲和层析纯化,获得具有天然构象的人壳三糖酶。方法从pUC19-Chit融合载体中扩增编码人壳三糖酶基因,并将其克隆入真核表达载体pPIC9K,以电穿孔法转化酵母GS115。用MD平板筛选重组子,G418筛选高拷贝转化子,经甲醇诱导表达后,几丁质亲和层析法对表达上清进行纯化,并进行SDS-PAGE分析。结果构建了人壳三糖酶融合真核表达载体pPIC9K-Chit。SDS-PAGE显示人壳三糖酶分子量约为50000Da,表达量约为24mg/L,纯度为97%。结论人壳三糖酶在毕赤酵母中的成功表达和具有天然构象的人壳三糖酶获得为进一步研究其抗真菌作用提供了物质基础。 相似文献
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目的:克隆生殖器鲍温样丘疹病(Bowenoid papulosis of the genetalia)组织中人乳头瘤病毒16型L1基因并进行序列分析。方法:采用PCR法从10例生殖器鲍温样丘疹病标本中扩增获得人乳头瘤病毒16型(HPV16)的晚期基因L1,克隆人载体,并测序,分析其序列。结果:与HPV16 L1标准型比较,发现10例L1标本的序列存在若干变异,并由此引起所编码的氨基酸亦发生变化。结论:鲍温样丘疹病组织中HPV16 L1基因序列存在一定程度的变异,其变异的临床意义有待于进一步探讨。 相似文献
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目的:本文对角蛋白17的序列和辅助性T细胞抗原表位进行了分析预测,为一定遗传背景下T细胞介导的自身免疫紊乱引发银屑病这一观点提供了研究基础。方法:以氨基酸组成、疏水性和亲水性分析以及氨基酸替换和二级结构分析的结果为参考,以mADR限制性预测方法为主,进行K17的辅助性T细胞表位综合预测。结果:与HLADR7相关的T细胞辅助性表位可能在5~15肽段、150~190肽段、270~300肽段和315~355肽段;与HLA DR4相关的T细胞辅助性表位可能在1~10肽段、50~70肽段、110~170肽段、270~350肽段和400~420肽段。结论:本研究为下一步人工合成多肽或表达相应肽段筛选银屑病反应性辅助性T细胞表位打下了一定的理论基础。 相似文献
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目的 从半合成噬菌体抗体库中筛选人源性抗角蛋白单链抗体 (scFv)并进行鉴定。方法 以人表皮角蛋白为抗原 ,通过“吸附 洗脱 扩增”过程从噬菌体抗体库中筛选特异性抗角蛋白单链抗体 ,对其抗原结合活性、识别角蛋白的相对分子质量 (Mr)和序列进行分析鉴定。结果 经过筛选 ,获得 6株能与角蛋白特异性结合的阳性克隆 ,所识别角蛋白的Mr 相同 ,均在 5 6 0 0 0~ 5 70 0 0之间 ;序列分析显示 ,所获抗体克隆的可变区基因分别属于免疫球蛋白基因家族的不同亚群。结论 利用噬菌体抗体库技术可以不经免疫制备出高特异性的人源性抗角蛋白单链抗体 相似文献
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目的 通过对97例乳房外Paget病患者临床资料回顾性研究,分析其皮损部位及组织病理及免疫组化特点。方法 收集我科2003年9月—2011年12月收治的97例乳房外Paget病患者临床资料,对其皮损部位及组织病理特点进行回顾性分析。结果 乳房外Paget病男女均可发病,男性发病多于女性,平均发病年龄为63岁。皮损主要发生于顶泌汗腺分布较丰富的区域,如阴囊、阴茎、会阴、肛周、阴唇、阴阜等部位,少部分发生于腹股沟、腋窝、前胸、臀部。本病临床上易误诊。典型的组织病理表现为表皮内散在或成团块状分布的Paget细胞。免疫组化染色显示CEA、CDX2、CAM5.2(CK8/18)阳性,S-100蛋白、EMA等阴性,有利于鉴别,而CK7和CK20在不同部位的表达总分不一致。结论 对乳房外Paget病早期行组织病理检查有利于减少临床误诊。 相似文献
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目的 建立常见真菌的随机引物扩增多态DNA(RAPD)指纹图谱。方法 以标准株真菌的基因组DNA为模板,采用(AC)_(10),(GTG)_5,AP_3和M_(13)等4种RAPD引物扩增产物条带组合,建立特征性指纹图谱,并与常规真菌培养结果进行验证比较。结果 单独一种引物往往不能够产生特征性的基因指纹,但是4种产物的组合,却可以形成肉眼直观的、足以区分常见真菌型别的指纹图谱。此图谱与门诊真菌培养结果比较,一致率达95%。结论 皮肤科真菌RAPD指纹图谱的建立和不断扩大将有望成为传统真菌检测的一个快速、可靠的补充。 相似文献
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女阴黏膜白斑病的病因研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
女阴黏膜白斑病多见于中年以上妇女,自觉症状常为瘙痒,严重影响患者的身心健康.到目前为止,女阴黏膜白斑病的确切病因不明,研究发现其与遗传、内分泌失调、免疫功能紊乱、微生物感染以及癌基因的异常表达等因素有关. 相似文献