结核分支杆菌rpoB基因突变与耐利福平的临床应用

目的：研究结核分支杆菌耐利福平（RFP）分离株rpoB基因突变情况并评价其应用价值。方法：采用聚合酶链反应一单链构象多态性（PCR—SSCP）方法对355株结核分支杆菌临床分离株（其中敏感株109株，耐RFP或含耐RFP株246株）rpoB基因进行检测，并对其中17株耐药株用双氧末端终止法进行测序分析。结果：以结核分支杆菌H37RV为对照，109株药物敏感株的rpoB基因均无突变，特异性100％；246株耐药株中，225株rpoB基因SSCP图谱异常，其敏感性91．5％。17株耐药株（其中SSCP异常11株，正常6株）PCR扩增产物经测序证实，11株在531位密码子TCG-TTG，4株在526位密码子CAC-TAC，1株在516位密码子GAC—GTC，1株未改变。结论：rpoB基因突变是耐RFP结核分支杆菌耐药性的主要分子机制；其最常见的突变位点是531位色氨酸和526位组氨酸，应用PCR—SSCP技术可快速检测结核分支杆菌对RFP的耐药性。     

土壤环境基因组技术及其在新药发现中的应用

土壤是微生物最重要的生境，土壤微生物具有极大的多样性。然而传统培养技术只能得到约1％的微生物纯培养，其余都是未被纯培养微生物。利用土壤环境基因组技术，可以把未被纯培养微生物的基因克隆到载体中并在宿主中进行表达，获得比已培养微生物丰富的代谢产物多样性，这为我们发现新颖结构先导化合物以及新药开辟了新的道路。本文介绍应用环境基因组技术构建土壤DNA文库的思路和方法。     

SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR测定猴免疫缺陷病毒RNA拷贝数方法的建立

.学者论坛·在动物实验中解决临床难题···························，·······································································……顾玉东(3)基因〕:程     

考马斯亮蓝染色在聚丙烯酰胺凝胶电泳中的应用

在研究医学媒介节肢动物与宿主相互关系过程中，经常用到聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，以分析功能成分的变化及作用关系，通过分析蛋白凝胶电泳后的色带图谱，可识别不同的蛋白，或用凝胶电泳法分析DNA，其中的关键显色技术是考马斯亮蓝染色法。本文结合实际研究的经验，介绍一种快速显色的技术，供相关人员参考使用。本实验流程仅需三小时，且具有快速、安全、染色及观察（色带）简便等优点。     

贲门失弛缓症（AC）临床研究荟萃精彩导读

烧心在AC患者中较常见；AC有多种病理组织学改变；原发性AC患者食管黏膜活检的DNA分析；AC患者血清改变了胃底肌间神经丛表型和NO介导的运动；磁共振透视检查可评价食管动力失调；腹腔镜肌层切开术治疗AC。     

慢性乙型肝炎患者基因型以及其病毒载量前C区突变的研究

乙型肝炎病毒是引起慢性病毒性肝炎的重要病原之一，并可导致肝硬化和肝癌发生，严重危害人类健康。根据HBV基因组DNA序列差异〉8％为判断标准，HBV被分为A-G八个基因型，而且其分布有地域性差异。基因型是影响病毒复制，抗病毒治疗疗效以及病毒变异的重要因素，基因型且与疾病的预后、治疗药物的选择等均有一定关系。作通过实时荧光定量PCT、多引物对巢式PCR技术和DNA序列分析，分别测定142例慢性乙肝患血清中HBV DNA的病毒载量、乙肝病毒的基因型以及其前C区（G1896A）突变，旨在探讨浙江部分地区的HBV基因型的分布情况以及各基因型之间的病毒及前C区的突变的差异。为以后选择抗病毒药物治疗打下理论基础；现报告如下。     

HBsAg阳性近洋船员乙肝二对半模式DNA载量与肝功能异常相关性分析

目的：为进一步了解舟山市近洋船员HBsAg携带者的感染状况，掌握其本底资料，制定相应的乙肝防治对策。方法：对437例HBsAg阳性的舟山籍近洋船员的血清采用乙肝二对半、HBV DNA载量及肝功能相关性检测。结果：共出现7种不同的组合模式，最常见的为1、2、3号模式。其中1号大三阳为强传染性模式，占总模式的24．94％（109／437）；与HBV DNA阳性吻合率为97．24％（106／109），肝功能异常吻合率为62．38％（68／109）。而3号小三阳模式为HBV的主要感染模式，占总模式的61．10％（267／437）；其与HBV DNA阳性及肝功能异常检出吻合率分别为41．20％（110／267）和23．97％（64／267）。结论：结果表明，近洋船员中1号模式传染性间接指标与传染性直接指标呈高度吻合，与肝功能关系伴随密切；而3号模式HBV DNA阳性率与肝功能异常率虽明显低于1号模式的检出率，但由于HBV突变株的存在，其HBV复制并非完全终止。此外2、4、6号模式携带者，同样是传播HBV的潜在危险传染源。因此，近洋船员HBsAg阳性而HBeAg阴性的携带者，最好增加HBV DNA载量相关性检测，以观察血清HBV DNA动态变化及提供抗病毒治疗效果评价，同时建议海事等有关部门进一步加强和规范对近洋船员现有传染病的监测项目及对HBV感染者的重点管理，是降低HBV感染率和发病率的关键。     

中国汉坦病毒H82O5株G2糖蛋白基因的克隆及在真核细胞中的瞬时表达

从感染病毒乳鼠脑组织提取总RNA，采用RT－PCR和分子克隆技术将扩增到的G2糖蛋白基因插入含CMV启动子的pcDNA3.1/His质粒载体中，通过脂质体介导转染COS－7细胞，用SDS－PAGE、Western-blot及IFIA方法分别测定表达产物的相对分子量及特异性。结果证明获得正向插入的G2－pcDNA3.1/His重组表达质粒，表达产物的相对分子量为56ku，与理论预期大小一致，并且可与汉坦病毒H8205株的腹水抗体起特异反应。表明构建的G2－pcDNA3.1/His重组质粒所表达的蛋白为中国汉坦病毒株特有，能在哺乳动物细胞中表达并具有抗原性，重组质粒可应用于汉坦病毒的DNA疫苗研究。     

白血病细胞p16基因突变分析

目的探讨ｐ１６基因突变在白血病发生中的作用及基因突变的机制。方法利用点突变检测仪、水平和垂直板电泳对ｐ１６基因的外显子１、外显子２的ＰＣＲ扩增产物作缺失和点突变分析。结果在白血病３５例临床标本中有２２例发生缺失突变，６例发生点突变，突变率约８０％。在２２例缺失突变病例中，有１０例为不完全缺失突变即有低于外显子５０９ｂｐ的扩增产物。结论ｐ１６基因含有“ＧＣ”ＤＮＡ重复顺序，易发生ＤＮＡ重组及易位和重排。在白血病发生中起重要作用