凝胶电泳考马斯亮蓝微波染色

不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS- PAGE)后的考马斯亮蓝 R2 5 0染色常用于观察蛋白质分离效果和定量分析 ,染色时间通常为 1～ 4 h,脱色需 8～ 12 h,笔者尝试将微波技术应用于蛋白质凝胶考马斯亮蓝的染色和脱色。1　材　料1.1　微波炉 1台 75 0 W (NN- 5 6 5 2 S,日本松下公司 ) ,分高、中、低火等六档。1.2　洗液 A　甲醇 4 5 m L 和等量双蒸水混合后加冰醋酸10 m L。1.3　洗液 B　无水酒精 75 m L和冰醋酸 2 5 m L混合后加双蒸水至 10 0 0 m L。1.4　考马斯亮蓝染液的配制　考马斯亮蓝 0 .2 5 g溶液于洗液 A10 0 m L。2　方　法2 …     

考马斯亮蓝检测血清粘蛋白

<正> 用考马斯亮蓝(CBB)G250测定体液中的蛋白质,具有灵敏度高、稳定性好的优点,笔者作了改进,用于测定血清中的粘蛋白,方法简单,结果满意、可靠,兹介绍如下。     

考马斯亮蓝染色评价哺乳动物精子顶体反应发生的效果

精子获能是正常受精的前提,形态学表现为顶体反应(Acmsome reaction,AR)。目前,对AR评价尚缺乏简单、有效的方法,有报道考马斯亮蓝可用于小鼠精子顶体反应发生的检查,但尚未见其他哺乳动物的研究报道。本实验以小鼠、猪、牛、羊精子为材料,通过与台盼蓝-姬母萨枪查方法的比较,评价考马斯亮蓝在哺乳动物精子顶体检查上的准确性和可靠性。     

聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质快速染色

聚丙烯酰胺凝胶电泳 ( polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)是以聚丙烯酰胺凝胶作为载体的一种区带电泳 ,这种凝胶由丙烯酰胺 ( acrylamide,Acr)和交联剂 N,N-叉基 (亚甲基 )双丙烯胺 ( N,N- methy/ ene- bis- acrylamide,Bis)聚合而成。聚丙烯酰胺凝胶具有机械强度好、弹性大、透明、化学稳定性高、无电渗等特性。在盘状电泳过程中有 3种物理效应 :1样品的浓缩效应 ;2凝胶的分子筛效应 ;3一般电泳分离的电荷效应。由于这 3种物理效应 ,使样品分离效果好 ,分辨率高。如人血清用醋酸纤维膜电泳 ( p H8.6)可分成 5～ 7个成分 ,而用…     

聚丙烯酰胺凝胶电泳在异常血红蛋白研究中的应用

1949年 Pauling 等氏报告镰刀状贫血是由于 HbS 引起以后,异常 Hb 的研究引起各方面的重视。早年工作,多选用淀粉凝胶法分离异常 Hb;随着电泳技术的发展,目前多数使用醋酸纤维素薄膜(CAM)法。国外使用聚丙烯酰胺凝胶电泳(下简称PAGE)分离 Hb,巳有十多年。近年来,一些国外厂商已有成套 HbPAGE 检查药箱供应。由于多年来,PAGE 在分离异常 Hb     

考马斯亮蓝微盘比色法测定蛋白质含量

目的 建立快速、灵敏的测定蛋白质的方法。方法 以考马斯亮蓝作为显色剂,用酶联免疫测定仪微盘比色测定牛血清白蛋白和小鼠肝组织匀浆的蛋白含量,并与常量比色法进行了比较,结果 考马斯亮蓝微盘比色法与常量法相比,对样品的测定结果相近,而前者样品用量少（只需几微升）,简便、快速、检测极限低（0.63ug)。结论 考马斯亮蓝微盘比色法是一种简单、快速、灵敏的蛋白质测定方法,尤其适用于大批量、微量样品的蛋白质含量测定。     

用聚丙烯酰胺凝胶电泳银染色改良法检测膜蛋白

聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)一般采用考马斯亮蓝染色,这种染色步骤简单但敏感度低,样品中一些微量的蛋白质组分往往不能显示。为了提高检测蛋白质的能力,也有用放射性同位素标记蛋白质,再结合放射自显影;此法检测的灵敏度高但手续繁杂、过程很长。1979年Switzer介绍一种银染色法,其灵敏度虽可与放射自显影媲美;但操作繁杂、较难掌握且硝酸银用量大。为此我们对PAGE银染色法作了改进,使其操作简化、重复性好,并节省80％以上的硝酸银用量;对检测细胞膜蛋白的灵敏度,远高于考马斯亮蓝染色法。     

哺乳动物精子顶体反应检测考马斯亮蓝染色法

顶体反应(acrosomereaction,AR)是精子在受精过程中经历的重要环节之一。在AR机理研究中,检测精子是否发生AR是生殖生物学和生殖医学中常用的研究手段。目前已建立了十多种较实用的AR检测技术,但由于精子及其顶体存在种间差异性,使许多方法在应用上都存在一些局限。近年来Moller[1]和Aarons[2,3]等报道采用考马斯亮蓝染色法来检测小鼠精子AR,作者等人先前已将此法移用于人精子AR的检测中[4],方法简便、经济。本研究目的是为了推广考马斯亮蓝染色的适用范围,建立一种哺乳动物精子AR检测较通用简便的技术。1　材料与方法1.1　材料1.1.1…     

聚丙烯酰胺凝胶电泳新技术

1.园盘电泳玻管封底法:最简便的办法是剪一块较玻管直径每侧大2cm左右的parafilm(American Can Company)包在玻管下端后,再用手掌鱼际或指端掌面处紧压端部使其紧贴即可。由于国内尚无parafilm成品出售,如无此材料时,可用塑料薄膜代替,包住玻管下端后,剪一段长约2—3mm     

尿蛋白定量考马斯亮蓝染料结合法的探讨

本文对尿蛋白定量CBBG染料比色法测定的影响因素进行探讨,略加改进,并比较目前普遍应用的尿蛋白定量法。结果发现:本法因试剂来源、操作、温度、实验室条件不同,检测结果出现差异,但通过改变CBBG浓度及操作方法便可避免;本法较其他方法具有较多优点,可作为微量尿蛋白定量的常规方法。     

尿蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳在肾脏疾病中的意义

<正> 临床上长期以来即认识蛋白尿是肾脏病的重要表现。迄今,测定尿蛋白的方法有多种,但不够灵敏。近年来,利用十二烷基磺酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行尿蛋白分型已有报道。我科自1988年9月～1988年12月对52例肾脏疾病患儿和10例正常对照儿采用SDS-PAGE法进行尿蛋白分析,发现对肾脏疾病的鉴别诊断、指导治疗和推测预后以及判断尿中微量蛋白的性质方面颇有参考价值。     

聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳技术

随着泳动距离增加而丙烯酰胺浓度也逐渐增加的梯度聚丙烯酰胺凝胶,目前已广泛用来代替单一浓度的凝胶。浓度梯度胶随浓度增加而孔径逐渐变小,这将对蛋白质组成的分析更为细致,同时能获得更清晰的蛋白质区带。现将我们用梯度胶和单一浓度胶对同一蛋白质组分进行比较的实验报告如下。     

微量考马斯亮蓝G－250显色法测定尿蛋白

微量考马斯亮蓝Ｇ－２５０显色法测定尿蛋白侯林浦，施为红（检验科）以９６孔聚苯乙烯微孔板作容器将考马斯亮兰Ｇ－２５０检测尿蛋白法改进为微量法，不仅操作简单、快速、节省试剂，而且解决了比色过程中染料挂杯现象，与常规法相比其结果呈高度相关，可替代常规法，有...     

考马斯亮蓝法检测胆石、胆汁蛋白含量

本文报告一种新的胆石、胆汁蛋白定量方法。测定的线性范围可达1000mg/L。棕色胆石蛋白批内X±SD;14.22±0.35mg％,CV％ 2.46％;批间X±SD:14.20±0.37mg％,CV2.6％;平均回收率100.88％(97.22～106.98％)。胆固醇石蛋白批内X±SD:2.99±0.10％,CV％3.34％;批间X±SD 2.95±0.15mg,CV％ 5.08％。黑色胆石蛋白批内X±SD 14.70±0.50mg％,CV％ 3.40％;批间X±SD: 14.86±0.76mg％,CV％ 5.11％。胆汁蛋白批内1854.8±35.4mg/L,CV％:2.86％;批间1860.9±90.1mg/L,CV％:4.88％。显色反应在几分钟内完成,且1.5小时内显色稳定。干扰因素少。本法具有简便快速、稳定可靠、灵敏、干扰少等优点,适用于科研及临床的胆石、胆汁蛋白质定量。     

非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳在大鼠海马组织蛋白分离中的应用

目的：探索应用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离大鼠海马组织蛋白的最佳条件。方法：选用不同pH的正极缓冲液和样品蛋白上样量，应用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离大鼠海马组织蛋白质。结果：在其它条件不变的情况下，pH9.0的正极电泳缓冲液以及40～60μg／孔样品蛋白上样量时，可得到分辨率高、条带多而清晰的电泳图谱。结论：应用pH9．0的正极电泳缓冲液和样品上样量为40～60μg／孔时，进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，可成功地分离大鼠海马组织蛋白。